Disusun oleh:
Kelompok
UNIVERSITAS JEMBER
Juli, 2019
i
BAB I
PENDAHULUAN
2
3. Untuk mengetahui aktivitas biologi yang dapat dihasilkan dari senyawa alkaloid pada
tanaman
4. Untuk mengetahui cara ekstraksi dan isolasi senyawa alkaloid
5. Untuk mengetahui cara menganalisis senyawa alkaloid menggunakan KLT dan HPLC
3
BAB II
PEMBAHASAN
Alkaloid merupakan salah satu senyawa metabolit sekunder yang dihasilkan oleh suatu
kelompok tanaman tertentu dengan gugus nitrogen yang terdapat dildalamnya. Dengan
adanya nitrogen yang terkandung dalam tanaman tersebut, alkaloid dapat didefiniskan
sebagai senyawa basa pada tanaman, aktif secara farmakologis yang berasal dari asam
amino yang mengandung satu atau labih atom nitrogen heterosiklik. Sebagian besar metabolit
sekunder yang mengandung nitrogen dianggap alkaloid, kecuali jika mereka diklasifikan lain
seperti amina atau glukosinolat. kata alkaloid sendiri berasal dari bahasa arab, al-qali (bentuk
awal dai soda ash) (Leland J. Cseke, 2006).
4
Alkaloid selain diklasifikasikan berdasarkan struktur cicin aromatiknya, juga
diklasifikasikan berdasarkan asam amino besrta turunannya (Monika Waksmundzka-Hajnos,
2008), yaitu:
Pyridine dan piperidine — kelas ini merupakan kelas yang sebagian besar efeknya
mempengaruhi sistem saraf pusat, mengurangi nafsu makan, dan mengandung sifat-
sifat lain seperti diuretik. Jenis alkaloid yang termasuk kedalam golongan ini antara
lain adalah nikotin, lobeline, piperin, pilocarpine, sparteine, dan coniine (Monika
Waksmundzka-Hajnos, 2008).
Nikotin
Nikotin, merupakan obat adiktif, salah satu dari lebih dari 4000 bahan kimia
ditemukan dalam produk tembakau (Nicotiana tabacum), termasuk rokok.
Termasuk alkaloid cair yang relatif kecil, telah digunakan selama setidaknya 6000
tahun, dan struktur kimianya ditentukan pada tahun 1893 (Pinner, 1893) (Leland J.
Cseke, 2006).
2) Tropine group (golongan tropin)
Kelompok Tropin — Alkaloid ini ditandai dengan kandungan nukleus tropinnya. Jenis
alkaloid yang termasuk kedalam golongan in antara lain adalah Atropin, kokain,
hygrine, ecgonine, dan pelletierine (Monika Waksmundzka-Hajnos, 2008).
Atropine
5
Atropine, (Icon Health Publishers, 2004) adalah alkaloid parasimpatolitik dengan
sejarah panjang. Selama Renaissance, para wanita modis akan meneteskan
ekstrak belladonna (dari Atropa belladonna) ke mata mereka agar tambil lebih
menarik. Atropin dapat diberikan sesaat sebelum operasi, dan digunakan untuk
melebarkan pupil sebelum pemeriksaan mata. Ini digunakan untuk mengobati
paparan agen saraf kimia pada mata(Bajgar, 2004). Hingga akhirnya, atropin telah
menjadi alternatif yang diterima untuk penambalan mata untuk pengobatan
amblyopia (mata malas), yang mempengaruhi sekitar 2% anak-anak (Pediatric Eye
Disease Investigator Group, 2002) (Leland J. Cseke, 2006).
Kokain
Kokain, adalah alkaloid tropan yang terkenal sebagai stimulan sistem saraf pusat
yang poten dalam daun koka (Erythroxolon coca) (Flynn, 1991) (Leland J. Cseke,
2006).
3) Quinoline group (golongan kuinolin)
6
Strychnine
Strychnine, struktur kimianya ditentukan pada tahun 1945, merupakan racun yang
kuat, sumber utamanya adalah tanaman Strychnos nux vomica. Digunakan hari ini
sebagai pestisida, terutama untuk membunuh tikus (Leland J. Cseke, 2006).
4) Isoquinoline group (golongan isokuinolin)
Isoquinoline — Alkaloid yang berasal dari tirosin dan fenilalanin. Jenis alkaloid yang
termasuk kedalam golongan ini antara lain alkaloid opium: morfin, kodein, thebain,
papaverin, narkotin; selain alkaloid opium contoh lainnya dalam golongan ini yaitu
hidrastin dan berberin (Monika Waksmundzka-Hajnos, 2008).
Morfin
Morfin, adalah alkaloid utama dari opium poppy (Papaver somniferum), yang dapat
mengandung 9 hingga 14% berat opium, termasuk kedalam analgesik narkotika
7
kuat yang digunakan secara luas untuk pengobatan nyeri sedang hingga berat
(Bercovitch et al., 1999) (Monika Waksmundzka-Hajnos, 2008).
Papaverin
Berberin, adalah alkaloid yang relatif tidak beracun yang ditemukan di beberapa
tanaman, termasuk goldenseal (Hydrastis canadensis), barberry (Berberis
vulgaris), anggur Oregon (Berberis aquifolium), dan goldthread (Coptis trifolia),
paling sering digunakan sebagai agen antibakteri (Birdsall dan Kelly, 1997; Taylor
dan Greenough, 1989). Papaverine, digunakan sebagai vasodilator dengan nama
dagang ParaTime® SR dan digunakan secara oral untuk mengobati disfungsi
ereksi (Kalsi et al., 2002). Codeine, dikatakan sebagai narkotika alami yang paling
banyak digunakan dalam perawatan medis, berasal dari morfin tetapi memiliki efek
yang jauh lebih ringan (meskipun overdosis bisa berakibat fatal) (Lee et al., 2004)
8
dan juga biasanya digunakan untuk pengobatan nyeri dan sebagai penekan batuk
(Leland J. Cseke, 2006).
5) Indole-alkaloids (golongan alkaloid indole)
Alkaloid indole berasal dari triptofan, dan terlepas dari beberapa dengan efek
halusinogenik, indol seperti serotonin dan reserpin memiliki efek sedatif pada sistem
saraf pusat. Alkaloid ini dapat berfungsi sebagai sitostatik, antileukemik, atau mampu
bertindak berdasarkan rasio oksigen dan glukosa pada sel. Jenis alkaloid yang
termasuk kedalam golongan ini antara lain Serotonin, reserpine, dan tryptamine
(Monika Waksmundzka-Hajnos, 2008).
9
serangga, dan hewan. Mekanisme piperine dalam antimicrobial yaitu dengan
menghambat NorA efflux pump inhibitors sehingga dapat menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus (Ahmad dkk., 2012).
2.2.2 Berberin
Berberine chloride termasuk dalam zat beracun kelas 2. Level LD50 dalam kasus
intrakitoneal berjumlah 50 mg / kg untuk tikus, sedangkan untuk berberine 8
parameter ini sama dengan 22 mg / kg. Dihydroberberine 6 dan oxoberberine 10
menunjukkan tingkat toksisitas yang lebih rendah:
LD50 = 190 dan 240 mg / kg, masing-masing. Terlepas dari kenyataan bahwa
tanaman yang mengandung berberin telah menemukan aplikasi sebagai obat
antimikroba dan antibakteri, berberin sendiri menunjukkan aktivitas yang rendah
dalam hubungan ini. Jadi, zat ini tampak tidak efektif melawan bakteri gram
negatif. Fakta bahwa berberin dan turunannya menunjukkan aktivitas antimikroba,
antibakteri, antijamur, serta aktivitas hipemik pidemik dan antineoplastik
memungkinkan mempertimbangkan berberin sebagai objek yang menarik untuk
transformasi kimia dengan tujuan diarahkan memperkuat aktivitas biologis aslinya.
Mikrograf TEM menampilkan dinding sel yang rusak, sitoplasma pekat, kebocoran
konten sitoplasma, dan kematian sel. Tes SDS-PAGE dan DAPI mengungkapkan
bahwa berberin dapat menghambat sintesis DNA dan protein. Berberine
menghambat sintesis protein yang terkait dengan pertumbuhan dan pembelahan
bakteri, kemudian menghambat pembelahan dan pengembangan bakteri.
Senyawa ini akhirnya memicu pyknosis sitoplasma dan menyebabkan kematian
bakteri(Kang dkk., 2015).
2.2.3 Quinoline
Banyak antibiotik dan antiinfeksi dari senyawa quinoline, seperti norfloxacin,
levofloxacin, dan lainnya. Dalam replikasi DNA, enzim yang menjadi target untuk
agen terapi, yaitu enzim topoisomerase. DNA girase adalah topoisomerase tipe II
yang ditemukan pada semua bakteri dan mengendalikan keadaan topologi DNA.
DNA girase terdiri dari dua subunit GyrA (875 asam amino) dan GyrB (804 asam
amino) dengan spesies aktifnya adalah heterotetramer A2B2. Studi mekanis
mengungkapkan langkah-langkah yang terlibat dalam reaksi supercoiling girase.
Proses ini melibatkan pembungkus DNA di sekitar kompleks A2B2, pembelahan
DNA, dan lewatnya segmen DNA melalui double strand break. Proses-proses ini
10
membutuhkan pengikatan dan hidrolisis ATP. Penghambatan DNA gyrase
menghambat relaksasi DNA superkoil, relaksasi menjadi syarat untuk transkripsi
dan replikasi. DNA girase adalah target selektif untuk agen antibakteri, seperti
antibiotik kuinolon dan kumarin yang paling banyak dipelajari. Obat kuinolon
misalnya Ciprofloxaci memengaruhi protein subunit, GyrA, dan kumarin (1-
benzopyran-2-ones) misalnya Novobiocin, clorobiocin bekerja pada GyrB (Ismail
dkk., 2013).
2.2.4 Tetrasiklin dan pirrolizidin
Tetrasiklin dan pirrolizidin efektif dalam menghambat pertumbuhan sel bakteri,
sedangkan solanin efektif dalam aplikasi antijamur. Spektrum antimikroba yang
berbeda disebabkan oleh variasi dalam struktur obat dan mode antimikroba
mereka. Sasaran obat antibiotik dibagi menjadi dua jenis. Dinding sel dan lipid
membran sitoplasma adalah target ekstraseluler antibiotik seperti nisin. Untuk obat
permeabel membran sel seperti kloromiketin dan tetrasiklin targetnya adalah tRNA
intraseluler, ribosom, atau zat antara metabolisme. Untuk BBR, target intraseluler
dari DNA, RNA, dan FtsZ. Tindakan antimikroba intraseluler BBR mirip dengan
obat kimia permeabel. Selain itu, jumlah target intraseluler BBR lebih dari obat-
obatan kimia yang memiliki target tunggal. Namun, EC50s BBR terhadap bakteri
jauh lebih tinggi daripada obat-obatan kimia, menunjukkan bahwa BBR lebih sulit
untuk meresap ke dalam sitoplasma terutama untuk bakteri. Hasil ini sesuai
dengan uji integritas membran sel. Efek antimikroba yang lebih lambat dan EC50
BBR yang lebih tinggi dianggap berasal dari non-kerusakan sitoplasma sel
dibandingkan dengan obat-obatan kimia (Li dkk., 2017).
2.2.5 Thiazole peptide
BMS-249524 (nocathiacin I) adalah prototipe antibiotik peptida trisiklik kelas
nosiheptide baru yang disebut nocathiacins dan diidentifikasi dari ekstrak produk
alami dengan galur ganda Enterococcus faecium yang resisten terhadap
antibiotik.
Cara kerja nocathiacins pada sintesis protein bakteri sangat erat kaitannya dengan
thiostrepton, karena antibiotik ini berikatan dengan 23S rRNA dari subunit ribosom
50S di tempat yang sama dengan protein ribosom L11. Ini mencegah transisi
konformasi normal yang terjadi dari interaksi 23S-L11 dan menghasilkan
penghentian terjemahan yang mempengaruhi langkah perpanjangan sintesis
protein bakteri. Meskipun memiliki aktivitas antibakteri dan mekanisme aksi yang
11
unik, sejauh ini belum dikembangkan untuk digunakan pada manusia karena
masalah farmakokinetik dan kelarutan.
Nocathiacins yang dimaksud yaitu prototipe BMS-249524 dan turunan yang lebih
larut dalam air BMS-411886 dan BMS461996, memiliki aktivitas in vitro yang kuat
terhadap bakteri gram positif, termasuk banyak patogen klinis yang resisten
terhadap antibiotik. Senyawa ini menawarkan potensi untuk pengembangan lebih
lanjut sebagai kelas baru antibiotik untuk infeksi gram positif yang serius (Pucci
dkk., 2004).
12
mengandung sekitar 0, 4% berat segar ). Namun. tes masih dapat dilakukan pada
umbi (kandungan solanin sekitar 0, 001%) jika jaringan lain ini tidak tersedia.
a. Isolasi
(I) Ekstrak di maserasi dengan asam asetat 5% (15-20 bagian) dan saring ekstrak
untuk menghilangkan kotoran seluler. Panaskan hingga 70 °C dan tambahkan NH40H
setetes demi setetes hingga pH 10.
(2) Centrifuge dan buang supernatan. Cuci endapan dengan 1% NH40H dan alat
penyaring.
(3) Kumpulkan, keringkan dan timbang solanin mentah yang diperoleh. Ini dapat
dimurnikan dengan melarutkan dalam metanol mendidih (di mana ia larut sedikit),
menyaring dan sampai alkaloid mulai mengkristal.
b. Penentuan
(1) Larutkan jumlah alkaloid mentah yang ditimbang dalam etanol 96% -H2S04 20% (1:
I) sehingga konsentrasi alkaloid antara 0,2 dan 3,0 mmol l-1.
(2) Larutan alkaloid (1 ml) dicampur tanpa pendinginan khusus dengan 5 ml H2S04
60% dan, setelah 5 menit, 5 ml larutan formaldehida 0,5% dalam H2S04 60%
ditambahkan. Diamkan selama 180 menit dan kemudian ukur absorbansi pada 565-
570 nm.
(3) Jumlah aktual alkaloid dalam isolat kasar kemudian dapat ditentukan dengan
mengacu pada pengukuran absorbansi pada larutan alkaloid murni yang diperlakukan
dengan cara yang sama dengan formaldehida dalam H2S04 1M.
Kemurnian solanin juga dapat diperiksa oleh PC dalam etil asetatepiridin-air (3: I: 3)
atau TLC pada silika gel G dalam asam asetat-etanol (1: 3) (RF46).
13
diberikannya ke jaringan. Senyawa ini mudah diisolasi oleh elektroforesis kertas dan
diukur dengan spektrofotometri.
Prosedur
(1) Ekstrak berberin ditimbang (5-10 g) dari jaringan Berberis yang berbeda (kayu,
batang, daun, bunga) dengan 100 ml asam etanol-asetat panas (9: 1). Ekstrak di rotary
evaporator dan buat masing-masing hingga volume (2-5 ml).
(2) Corak alikuot (mis. 0, 4 ml) dari ekstrak di sepanjang kertas Whatman 3 MM
menengah (25x13 cm) dan elektroforese dalam buffer asetat / format pH 2,2 pada 20 V
cm-1 selama 1,5 jam, menggunakan peralatan bertegangan rendah.
(3) Pita kationik kuning, yang bergerak sekitar 3,5 cm dipotong dan dielusi secara
terpisah dengan volume 5-10 ml asam etanolasetat (9: I). Ukur absorbansi pada 350 nm
dan dari pengukuran ini, dimungkinkan untuk menghitung jumlah relatif berberin pada
kayu, batang dan daun.
(4) Identifikasi isolat sebagai berberin dengan mengukur spektrum lengkap dalam EtOH-
HOAc; ada maks. pada 267, 340, maks. pada 350 dan maks lemah. pada 435 nm.
Akhirnya. co-chromatograph dengan sampel berberine dalam beberapa sistem. misalnya
pada gel silika memiliki Rf14 dalam metanol-NH40H (200: 3); pada pelat selulosa, ia
memiliki Rf 40 dalam asam asetat 15% berair dan Rf 67 dalam n-butanol-asam asetat-air
(4: I: 5)(Harborne, 1984).
14
untuk mencapai pengurangan interaksi ionik seperti: menggunakan fase gerak pada pH
rendah (penekanan ionisasi silanol); menggunakan fase gerak pada pH tinggi (penekanan
ion alkaloid); penambahan pereaksi pasangan ion ke fase gerak (pembentukan pasangan
ion non-polar, tidak bermuatan dengan analit); penambahan basa kuat relatif terhadap
eluen yang berperan penghambat silanol dan / atau penekan ionisasi alkaloid; memilih
fase diam.
Alkaloid xantin berhasil dianalisis pada kolom RP dalam sistem eluen sederhana
yang hanya berisi pengubah organik dan air. Kafein, teofilin dan theobromine ditentukan
dalam sampel makanan oleh HPLC dalam sistem eluent yang mengandung MeCN dan
air atau MeOH dan air. Penggunaan monolitik kolom disediakan pemisahan yang sangat
baik dan cepat kafein dari komponen sampel endogen dan dari senyawa yang serupa
secara structural. Campuran dari MeOH dan buffer fosfat pada pH 7,0 diterapkan untuk
pemisahan alkaloid oksindol dari daun Mitragyna inermis. Sistem efluen mengandung
buffer pada pH 6,5 telah digunakan untuk analisis colchicine. Tambahan amonium
karbonat ke fase gerak karena sering digunakan untuk analisis alkaloid ergot. Pemisahan
senyawa ini dari Claviceps purpurea dilakukan pada kolom C18 dengan eluen yang
mengandung MeCN / air / (NH4) 2CO3 digunakan untuk analisis alkaloid ergot fase gerak
yang terdiri dari MeCN, air dan CH3COONH4 [169]. Alkaloid ergot juga dianalisis dengan
fase seluler yang mengandung MeCN / air / asam tartarat / amonium klorida. Amonium
asetat ditambahkan ke dalam campuran MeOH dan air untuk pemisahan nikotin dan
terkait alkaloid dalam plasma manusia. Nikotin juga dianalisis pada C18 kolom dengan
eluen multi komponen yang mengandung MeOH, buffer fosfat dan (NH4) 2SO4 [173].
15
Nikotin, kotinin dan alkaloid terkait ditentukan dalam urin manusia dan saliva oleh LC-MS
pada kolom C18 dengan MeOH dan larutan HCOONH4.
Alkaloid tropane dari Schizanthus grahamii berhasil dianalisis pada kolom karbon
grafit dengan eluen yang terdiri dari MeCN / air / HCOOH. Sistem eluen asam yang sama
diterapkan untuk pemisahan alkaloid tropane antimuskarinik dalam plasma. Bieri et al.
alkaloid yang terpisah dari tanaman yang sama dengan menggunakan kolom kapiler
karbon dan air asam fase gerak yang mengandung asetat, format atau trifluoroasetat
16
asam. Eluen dasar pada kolom yang berisi format amonium digunakan juga untuk
kuantitatif analisis hyoscyamines, fase diam C18 dan campuran yang mengandung MeOH
/ air / HCOOH. Buffer untuk pengasaman pH fase asam seluler jarang diterapkan. Alkaloid
tropane dalam plasma hewan dianalisis pada kolom C18 dengan eluen yang mengandung
dapar fosfat pada pH 3,1. Eluen asam dengan penambahan asam asetat atau TFA
digunakan untuk analisis colchicine. TFA ditambahkan ke fase seluler yang mengandung
MeCN / air untuk analisis fenalilamin alkaloid mescaline lain. Kolom C18 yang
dinonaktifkan yang diterapkan untuk analisis colchicine dengan eluen yang mengandung
MeOH / air / HCOOH. Sistem efluen dengan tambahan asam asetat juga telah digunakan
untuk pemisahan dan kuantifikasi alkaloid ergot. Alkaloid opium utama ditentukan pada
C18fase diam dengan MeOH / air CH3COOH. Asam fosfat ditambahkan ke pengasaman
ponsel fase untuk analisis alkaloid opium.
17
2.4.2 Kromatografi lapis tipis (KLT)
18
Metode KLT dilakukan dengan massa spektrometri (MS). Kombinasi KLT / MS
berpotensi memberikan deteksi tingkat rendah, sangat spesifik senyawa dan massa
molekul serta struktur yang ditargetkan penentuan yang tidak diketahui. KLT / MS
digunakan untuk analisis alkaloid xantin. Kafein dianalisis dalam ekstrak Ilex vomitoria
pada piring C18 dengan campuran MeOH dan air sebagai fase gerak oleh KLT / MS.
19
BAB III
PENUTUP
Kesimpulan
Alkaloid merupakan salah satu senyawa metabolit sekunder yang dihasilkan oleh
suatu kelompok tanaman tertentu dengan gugus nitrogen yang terdapat dildalamnya. Dengan
adanya nitrogen yang terkandung dalam tanaman tersebut, alkaloid dapat didefiniskan
sebagai senyawa basa pada tanaman, aktif secara farmakologis yang berasal dari asam
amino yang mengandung satu atau labih atom nitrogen heterosiklik. Sebagian besar metabolit
sekunder yang mengandung nitrogen dianggap alkaloid, kecuali jika mereka diklasifikan lain
seperti amina atau glukosinolat. kata alkaloid sendiri berasal dari bahasa arab, al-qali (bentuk
awal dai soda ash) (Leland J. Cseke, 2006).
Pada ekstraksi alkaloid dilakukan screening tanaman alkaloid dan . Isolasi dan
penentuan rif solanin dalam jaringan kentang pada malakah ini. Metode yang digunakan
yaitu Ekstraksi dengan menggunakan simplisia sebanyak 4 gram dari masing-masing
sampel dengan methanol. Dan Dalam analisis kromatografinya bisa menggunakan metode
HPLC dan juga KLT.
20
Daftar Pustaka
Ahmad, N., H. Fazal, B. H. Abbasi, S. Farooq, M. Ali, dan M. A. Khan. 2012. Biological role of
piper nigrum l . ( black pepper ): a review. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine.
2(3):S1945–S1953.
C. Müller, H.S. Klaffke, W. Krauthause, R. Wittkowski, Mycotoxin Research 22, 197 (2006)
Dr. I Wayan Wiraatmadja, M. (2016). Metabolik Primer dan Sekuder. Denpasar: UNUD Press.
Harborne, J. . 1984. Phytochemical Methods Second Edition. Chapman and Hall Ltd 11 New
Fetter Lane, London EC4P4EE.
Ismail, M. A., S. Al-shihry, R. K. Arafa, dan U. El-ayaan. 2013. Synthesis , antimicrobial activity
and molecular modeling study of substituted 5-aryl-pyrimido [ 5 , 4-c ]. 28(December
2011):530–538.
Kang, S., Z. Li, Z. Yin, dan R. Jia. 2015. Natural product research : formerly natural product letters
the antibacterial mechanism of berberine against actinobacillus pleuropneumoniae.
(April):37–41.
Leland J. Cseke, A. K. (2006). Natural Products from Plants Second Edition. London, New York:
Taylor & Francis Group, LLC.
Li, Y., Y. Yin, X. Wang, H. Wu, dan X. Ge. 2017. Evaluation of berberine as a natural fungicide :
biodegradation and antimicrobial mechanism evaluation of berberine as a natural fungicide :
Journal of Asian Natural Products Research. 6020(May):1–15.
21
Pucci, M. J., J. J. Bronson, J. F. Barrett, K. L. Denbleyker, L. F. Discotto, J. C. Fung-tomc, dan Y.
Ueda. 2004. Antimicrobial evaluation of nocathiacins , a thiazole peptide class of antibiotics.
48(10):3697–3701.
Y.D. Rattmann, M.R. Terluk, W.M. Souza, C.A.M. Santos, M.W. Biavatti, L.B. Torres, S. Mesia-
Vela, L. Rieck, J.E. da Silva-Santos, M.C.A. de Marques, J. Ethnopharmacol. 100, 268 (2005)
J. Wang, C. Machado, D.G. Panaccione, H.-F.Tsai, C.L. Schardl, Fungal Genet.Biol. 41, 189
(2004)
V. Fragoso, N.C. do Nascimento, D.J. Moura, A.C.R. Silva, M.F. Richter, J. Saffi, A.G. Fett-Neto,
Toxicology in Vitro 22, 559 (2008)
J.C.A. Tanaka, C.C. da Silva, I.C.P. Ferreira, G.M.C. Machado, L.L. Leon, A.J.B. de Oliveira,
Phytomedicine 14, 377 (2007)
W.-F. Fong, C. Wang, G.-Y. Zhu, C.-H. Leung, M.-S. Yang, H.-Y. Cheung, Phytomedicine 14, 160
(2007)
22
23