Materiales.

De vidrio.

Nombre Cantidad Capacidad

Matraz volumétrico
Pipeta volumétrica
Pipeta volumétrica
Embudo de separación
Matraz volumétrico
Pipeta volumétrica
General.
1 200 mL
1 4 mL
3 25 mL
2 125 mL
3 100 mL
1 2 mL

Nombre Cantidad Capacidad

Mortero 1 50 mL
Espátula de acero inoxidable 1 NA
Torundas de algodón 3 NA
Tubos para centrifuga 2 100 mL

Instrumentos

Nombre Marca/modelo # de inventario

Balanza Analítica.
Espectrofotómetro.

Equipo

Nombre Marca/modelo # de inventario

Agitador mecánico.
Centrifuga

Reactivos

Nombre Cantidad Codigo

Metanol 6 mL
SA de fosfatos pH 7.2 300 mL
Cloruro de metileno 200 mL
SRef-FEUM indometacina 12.5 mg
Preparación de la muestra.

1. Pesar 20 cápsulas.
2. Determinar su contenido neto promedio
3. Verter su contenido en un mortero.
4. Limpiar las cápsulas con aire corriente.
5. Pesarlas nuevamente.
6. Calcular su peso neto promedio.
7. Mezclar perfectamente la mezcla de polvo.
8. Pesar una cantidad de polvo equivalente a 25 mg de indometacina.
9. Colocar el polvo en un matraz volumétrico de 200 mL.
10. Agregar 4 mL de metanol.
11. Agitar mecánicamente por 10 minutos.
12. Llevar al aforo con solución amortiguadora de fosfatos pH 7.2.
13. Mezclar.
14. Pasar a un tubo de centrifugación 50 mL de la solución anterior.
15. Centrifugar durante 15 minutos.
16. Pasar una alícuota de 25 mL del sobrenadante a un embudo de separación de 125 mL.
17. Extraer con tres porciones de cloruro de metileno de 25 mL cada una.
18. Filtrar los extractos a través de una torunda de algodón.
19. Lavar el filtro de algodón con cloruro de metileno.
20. Recibir los extractos en un matraz volumétrico de 100 mL.
21. Llevar al aforo con cloruro de metileno.
22. Mezclar.

Preparación de referencia.

1. Pesar una cantidad equivalente de SRef-FEUM de indometacina a 12.5 mg.

2. Colocar en un matraz volumétrico de 100 mL.
3. Disolver con 2 mL de metanol.
4. Llevar al aforo con SA de fosfatos pH 7.2 y mezclar.
5. Pasar una alícuota de 25 mL de la solución anterior a un embudo de separación de 125
mL.
6. Extraer con 3 porciones de 25 mL de cloruro de metileno.
7. Filtrar los extractos con una torunda de algodón.
8. Recibir el filtrado en un matraz volumétrico de 100 mL.
9. Lavar el filtro con cloruro de metileno.
10. Llevar al aforo con el mismo disolvente.
11. Mezclar.

Lectura de las soluciones.

1. Obtener la absorbancia de la preparación de referencia a 318 nm con celdas de 1 cm y

cloruro de metileno como blanco de ajuste.
2. Obtener la absorbancia de la preparación de referencia a 318 nm con celdas de 1 cm y
cloruro de metileno como blanco de ajuste.
 3. Calcular los miligramos de indometacina en la porción de la muestra tomada, por la
siguiente formula:
𝐴𝑚
𝐶𝐷 ( )
𝐴𝑟𝑒𝑓

Donde:

C=Cantidad por mL de la preparación de referencia.

D=Factor de dilución de la muestra.

Am = Absorbancia obtenida con la preparación de la muestra.

Aref=Absorbancia obtenida con la preparación de referencia.

Parámetros a evaluar según la ICH Q2 (a).

 Exactitud

Objetivo: Verificar el grado de concordancia de los resultados analíticos con respecto del valor de
referencia.

Material

De vidrio.

Nombre Cantidad Capacidad

Matraz volumétrico
Pipeta volumétrica
Pipeta volumétrica
Embudo de separación
Matraz volumétrico
Pipeta volumétrica
General.
9 200 mL
1 4 mL
9 25 mL
9 125 mL
9 100 mL
1 2 mL

Nombre Cantidad Capacidad

Mortero 1 50 mL
Espátula de acero inoxidable 1 NA
Torundas de algodón 9 NA
Tubos para centrifuga 9 100 mL

Instrumentos

Nombre Marca/modelo # de inventario

Balanza Analítica.
Espectrofotómetro.

Equipo

Nombre Marca/modelo # de inventario

 Agitador mecánico.
Centrifuga

Reactivos

Nombre Cantidad Codigo

Metanol 36 mL
SA de fosfatos pH 7.2 1800 mL
Cloruro de metileno 900 mL
Indometacina 250 mg
Prosolv Easy tab 750 mg

Metodología.

1. Pesar 250 mg de indometacina Sref-FEUM.

2. Pesar 750 mg de Prosolv Easytab.
3. Mezclar en un mortero.
4. Se pesará 3 veces la cantidad de indometacina equivalente a su nivel de concentración
respectivo 20, 25 y 30 mg para los niveles 80, 100 y 120 respectivamente.
5. Cada pesada se colocará en un matraz de 200 mL respectivamente.
6. Agregar a cada matraz 4 mL de metanol.
7. Agitar los matraces por 10 min en el agitador mecánico.
8. Aforar los matraces con SA de fosfatos pH 7.2.
9. Mezclar.
10. Pasar de cada solución 50 mL a un tubo de centrifugación.
11. Centrifugar los tubos durante 15 minutos.
12. Pasar una alícuota de sobrenadante de cada tubo a un embudo de separación de 125 mL.
13. Extraer cada uno de los sobrenadantes con tres porciones de 25 mL de cloruro de
metileno.
14. Filtrar los extractos a través de una torunda de algodón respectivamente.
15. Lavar los filtros de algodón con cloruro de metileno.
16. Recibir los extractos en un matraz volumétrico de 100 mL respectivo a cada
determinación.
17. Llevar al aforo con cloruro de metileno.
18. Mezclar.
19. Leer en espectrofotómetro cada determinación a 318 nm con celdas de cuarzo de 1 cm.
20. Comparar las absorbancias con el de la solución de referencia para obtener el porcentaje
recuperado.

EXACTITUD DEL METODO

 % Contenido Peso total de la Absorbancia %R
Concentración teórico de muestra (mg) obtenida (abs)
indometacina
(mg)

80 20 80

80 20 80

80 20 80

100 25 100

100 25 100

100 25 100

120 30 120

120 30 120

120 30 120

El porcentaje recuperado se obtendrá utilizando la siguiente formula:

𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑟𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑑𝑎
%𝑅 = 𝑋100
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑑𝑖𝑐𝑖𝑜𝑛𝑎𝑑𝑎
El tratamiento estadístico de los porcentajes de recobro se realizará comparando la media
aritmética de estos con el 100% recuperador mediante el estadígrafo t:

𝑋̅ − 𝜇
𝑡= 𝑠
√𝑛
Donde:

t= valor del estadígrafo t de Student para la estimación de la media de los recobros.

𝑋̅=media aritmética de los porcentajes de recobro obtenidos.

µ = media poblacional aceptada como real para los porcentajes de recobro (100%)
 𝑠 = desviación estándar de las determinaciones de porcentaje de recobro.

𝑛 = número de observaciones utilizadas para el cálculo de t.

Probando las hipótesis siguientes

𝐻0 : 𝜇 = 100%
𝐻1 : 𝜇 ≠ 100%
Tomando en cuenta un nivel de confianza del estadígrafo t de 95%, si cada uno de los niveles se
encuentra en el área de no rechazo se puede decir que el método de cuantificación es exacto.

 Repetibilidad.

Objetivo: Determinar el grado de dispersión de los resultados analíticos bajo las mismas
condiciones de trabajo.

Material

De vidrio.

Nombre Cantidad Capacidad

Matraz volumétrico
Pipeta volumétrica
Pipeta volumétrica
Embudo de separación
Matraz volumétrico
Pipeta volumétrica
General.
9 200 mL
1 4 mL
9 25 mL
9 125 mL
9 100 mL
1 2 mL

Nombre Cantidad Capacidad

Mortero 1 50 mL
Espátula de acero inoxidable 1 NA
Torundas de algodón 9 NA
Tubos para centrifuga 9 100 mL

Instrumentos

Nombre Marca/modelo # de inventario

Balanza Analítica.
Espectrofotómetro.

Equipo

Nombre Marca/modelo # de inventario

Agitador mecánico.
Centrifuga
Reactivos

Nombre Cantidad Codigo

Metanol 36 mL
SA de fosfatos pH 7.2 1800 mL
Cloruro de metileno 900 mL
Indometacina 250 mg
Prosolv Easy tab 750 mg

Metodología.

1. Pesar 250 mg de indometacina Sref-FEUM.

2. Pesar 750 mg de Prosolv Easytab.
3. Mezclar en un mortero.
4. Se pesará 3 veces la cantidad de indometacina equivalente a su nivel de concentración
respectivo 20, 25 y 30 mg para los niveles 80, 100 y 120 respectivamente.
5. Cada pesada se colocará en un matraz de 200 mL respectivamente.
6. Agregar a cada matraz 4 mL de metanol.
7. Agitar los matraces por 10 min en el agitador mecánico.
8. Aforar los matraces con SA de fosfatos pH 7.2.
9. Mezclar.
10. Pasar de cada solución 50 mL a un tubo de centrifugación.
11. Centrifugar los tubos durante 15 minutos.
12. Pasar una alícuota de sobrenadante de cada tubo a un embudo de separación de 125 mL.
13. Extraer cada uno de los sobrenadantes con tres porciones de 25 mL de cloruro de
metileno.
14. Filtrar los extractos a través de una torunda de algodón respectivamente.
15. Lavar los filtros de algodón con cloruro de metileno.
16. Recibir los extractos en un matraz volumétrico de 100 mL respectivo a cada
determinación.
17. Llevar al aforo con cloruro de metileno.
18. Mezclar.
19. Leer en espectrofotómetro cada determinación a 318 nm con celdas de cuarzo de 1 cm.
20. Comparar las absorbancias con el de la solución de referencia para obtener el porcentaje
recuperado.

REPETITIBILIDAD DEL METODO

% Contenido Peso total de la Absorbancia %R

Concentración teórico de muestra (mg) obtenida (abs)
indometacina
(mg)
 80 20 80|

80 20 80

80 20 80

100 25 100

100 25 100

100 25 100

120 30 120

120 30 120

120 30 120

El porcentaje recuperado se obtendrá utilizando la siguiente formula:

𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑟𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑑𝑎
%𝑅 = 𝑋100
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑑𝑖𝑐𝑖𝑜𝑛𝑎𝑑𝑎
Los porcentajes recuperados se analizarán con el coeficiente de variación el cual se calcula como
sigue:
𝑆𝑦
𝐶𝑉 = 𝑋100
𝑦̅
Donde:

CV=coeficiente de variación.

Sy=desviación estándar de las pruebas analíticas o de los porcentajes de recobro.

𝑦̅= promedio de las respuestas analíticas o de los porcentajes de recobro.

El coeficiente de variación de las respuestas analíticas en todos los niveles no debe sobrepasar el
2% para indicar que es repetible.

Precisión intermedia.

Objetivo: Medir el grado de dispersión de los resultados analíticos a partir de una misma muestra
homogénea variando las condiciones de operación.
De vidrio.

Nombre Cantidad Capacidad

Matraz volumétrico
Pipeta volumétrica
Pipeta volumétrica
Embudo de separación
Matraz volumétrico
Pipeta volumétrica
General.
6 200 mL
2 4 mL
6 25 mL
6 125 mL
6 100 mL
2 2 mL

Nombre Cantidad Capacidad

Mortero 1 50 mL
Espátula de acero inoxidable 2 NA
Torundas de algodón 6 NA
Tubos para centrifuga 6 100 mL

Instrumentos

Nombre Marca/modelo # de inventario

Balanza Analítica.
Espectrofotómetro.

Equipo

Nombre Marca/modelo # de inventario

Agitador mecánico.
Centrifuga

Reactivos

Nombre Cantidad Codigo

Metanol 48 mL
SA de fosfatos pH 7.2 2400 mL
Cloruro de metileno 1200 mL

Personal

Nombre Identificación Día de trabajo

Químico 1 Martes, Miércoles
Químico 2 Martes, Miércoles

Metodología

1. Pesar 250 mg de indometacina Sref-FEUM.

2. Pesar 750 mg de Prosolv Easytab.
 3. Mezclar en un mortero.
4. Pesar una cantidad de polvo equivalente a 25 mg de indometacina.
5. Colocar el polvo en un matraz volumétrico de 200 mL.
6. Agregar 4 mL de metanol.
7. Agitar mecánicamente por 10 minutos.
8. Llevar al aforo con solución amortiguadora de fosfatos pH 7.2.
9. Mezclar.
10. Pasar a un tubo de centrifugación 50 mL de la solución anterior.
11. Centrifugar durante 15 minutos.
12. Pasar una alícuota de 25 mL del sobrenadante a un embudo de separación de 125 mL.
13. Extraer con tres porciones de cloruro de metileno de 25 mL cada una.
14. Filtrar los extractos a través de una torunda de algodón.
15. Lavar el filtro de algodón con cloruro de metileno.
16. Recibir los extractos en un matraz volumétrico de 100 mL.
17. Llevar al aforo con cloruro de metileno.
18. Mezclar.
19. Leer la absorbancia a 318 nm con celdas de cuarzo de 1 cm.

Este proceso será llevado acabo por cada analista en los días seleccionados tomando de la misma
muestra homogénea sus muestras para llevar a cabo el análisis correspondiente.

Analista Día Resultados (absorbancias)

1 1
1 2
2 1
2 2

Las respuestas analíticas (absorbancias) serán analizadas por una ANDEVA de 2 factores cruzados y
en el dado caso que se requiera por 2 factores cruzados.

Descrita en la siguiente tabla para la ANDEVA de factores cruzados.

Fuente de Grados de Suma de Media de Fcalculada Ftablas

variación libertad cuadrados cuadrados
Analista (i-1) SCA MCA=(SCA/g.l.A) MCA/MCe (F(α/2,g.l.A.g.l.e-
F(1-α/2,g.l.A.g.l.e)
Día (j-1) SCD MCD=(SCD/g.l.D) MCD/MCe (F(α/2,g.l.A.g.l.e-
F(1-α/2,g.l.A.g.l.e)
Interacción (i-1)(j-1) SCAD MCAD=(SCAD/g.l.AD) MCAD/MCe (F(α/2,g.l.A.g.l.e-
Analista-Día F(1-α/2,g.l.A.g.l.e)
Error (k-1)(ij) SCe MCe=(SCe/g.l.e)
Y en la que sigue para la de factores anidados, dado el caso que se presente una interacción.

Fuente de Grados de Suma de Media de cuadrados Fcalculada Ftablas

variación libertad cuadrados
Analista (i-1) SCA MCA=(SCA/g.l.A) MCA/MCe (F(α/2,g.l.A.g.l.e-
F(1-α/2,g.l.A.g.l.e)
Día (j-1)(i) SCD(A) MCD(A)=(SCD(A)/g.l.D(A)) MCD(A)/MCe (F(α/2,g.l.D(A).g.l.e-
F(1-
α/2,g.l.D(A).g.l.e)
Error (k-1)(ij) SCe MCe=(SCe/g.l.e)

La precisión intermedia se confirma si cada uno de los factores se encuentra dentro de la región de
no rechazo calculada.

Metodología

 Precisión intermedia.
 Especificidad.
 Linealidad.
 Rango.