Guia de Hematologia 2019 II

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3B-2
GUÍA DE PRÁCTICAS
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MÉDICA
LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA
HEMATOLOGÍA
2019-II
F-CV3-3B-1 Rev. marzo 2017

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PRACTICA Nº 1
EQUIPOS E INSTRUMENTOS EN EL LABORATORIO DE HEMATOLOGIA

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE HEMATOLOGIA
I. INTRODUCCION
La exactitud y precisión de un resultado no sólo dependerá de la aplicación
de una buena metodología, sino se complementa además con el
conocimiento, el uso adecuado y correcto de los distintos instrumentos y
equipos involucrados en el diagnóstico. Finalmente es de suma importancia
también las buenas prácticas de laboratorio y medidas de Bioseguridad que
empleadas adecuadamente reducen al máximo los accidentes.
II. COMPETENCIAS
 Reconoce, describe, emplea correctamente los instrumentos y
equipos y los aplica para el desarrollo de procedimientos.
 Identifica los factores de riesgo y aplica adecuadamente las medidas
de Bioseguridad.
III. METODOLOGIA
 Materiales
 Cámara de Neubauer
 Pipetas de Thoma para Hematíes y Leucocitos
 Tubos de Westergren, Tubos de Wintrobe
 Micropipetas de 10 – 100 ul, incluyen punteras
 Tubos capilares con y sin heparina sódica
 Tubos con sistema al vacío.
 Centrífuga para Hematocrito
 Microscopio óptico
1. Cámara de Neubauer:

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CUADRÍCULA DE LA CÁMARA DE NEUBAUER
La altura entre el cubreobjetos y la lámina portaobjetos es de 0,1 mm.

Cada cuadrícula mide 3 mm de lado y se divide en 9 cuadrados
grandes.
Cada uno de los cuales mide 1 mm2 de superficie, que se subdivide a
su vez en 16 cuadrados medianos. El cuadrado grande central se divide
en 25 cuadrados pequeños y cada uno de ellos en 16 cuadraditos.
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Cada cuadrado pequeño mide 0,2 mm de lado (0,04 mm2 de

superficie), y cada cuadradito mide 0,05 mm de lado (0,0025 mm2 de
superficie).
2. Lancetas de seguridad con activación de contacto:

Las lancetas de seguridad con activación de contacto poseen una
solución de estructura con diseño único que permite la activación de la
lanceta con una simple pulsación de la lanceta en el dedo.
 Medlance Plus®
  ergoLance

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3. Lancetas de seguridad con activación del botón pulsador:

Las lancetas de seguridad con activación del botón pulsador poseen
una solución de estructura con diseño único que permite la activación
de la lanceta con una simple pulsación del botón de activación, situado
en la parte superior de la lanceta.
 Acti-Lance®
 





 Medlance®

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4. Tubos capilares
Los tubos capilares para

microhematocrito se utilizan en la
toma y centrifugación de sangre.
Cerrar las pruebas y después del
relleno con cera y centrifugarlas.
Si no es posible, se recomienda
usar capilares heparinizados con
sodio para retrasar la coagulación
de la sangre. La heparinización
con sodio es aplicada como capa
fina y homogénea en el tubo. Esto favorece la disolución inmediata
de la heparina en la sangre e impide la coagulación.
 fabricados con vidrio de alta calidad
 longitud: aprox. 75 mm ± 0,5 mm
 espesor de la pared: aprox. 0,2 75 ± 0,025 mm
 heparinizados (Franja ROJA) con sodio (80 iu/ml ± 30 %) y no
heparinizados (Franja AZUL), ambos de uso único.
5. Tubos de extracción de sangre capilar

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Los tubos “Microtainer” están destinados a la extracción, transporte y

procesamiento de
muestras de sangre
capilar en neonatos,
niños, pacientes
geriátricos y pacientes
en estado crítico.
Cuando se trata de
obtener cantidades
mínimas de sangre, la
extracción de sangre
capilar es el método de elección en pediatría. Con frecuencia, la
extracción de sangre capilar se realiza para los análisis de gases
hemáticos o las determinaciones de glucemia. Con la extracción de
sangre capilar sólo se obtienen pequeñas cantidades de sangre. En
consecuencia, la cantidad de sangre obtenida no es suficiente para una
amplia serie de análisis en el laboratorio. Asimismo, se debe tener en
cuenta que, debido a la composición de la sangre, no se pueden realizar
análisis de coagulación. Tampoco se recomienda la extracción de
sangre capilar si el paciente se encuentra en estado de choque o
presenta hipotermia.
2. Tubos para hematocrito según Wintrobe

De vidrio sódico-cálcico, con reborde recto, fondo redondo, escala doble
numerada en rojo/blanco, (0 – 10 cm) 105 mm subdivididos en 1 mm.
Diámetro interno: 3 mm.
5. Pipetas para sedimentación de sangre según Westergren

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De vidrio claro, largo 300 mm, graduación blanca 0-200 mm

subdividida en 1 mm.
6.
MicrocentrÍfuga clínica:
- Capacidad 24 tubos capilares, plato duraluminio.
- Velocidad 15000 RPM. Motor estabilizado sobre balancines de jebe.
- Control de apagado automatico
- Control de velocidad de 0 a 12000 RPM
- Interruptor general y luz indicadora.
MIKRO 220

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7. Microscopio Óptico Compuesto
Sistema óptico
OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen
del objetivo.
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de
ésta.
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparación.
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Sistema mecánico
SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y
el brazo.
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.

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CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser

monocular, binocular,
REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al
girar, cambiar los objetivos.
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y
micrométrico que consigue el enfoque correcto.
8. Micropipetas
Se emplean para tomar s cantidades con exactitud y reproducibilidad.
En las prácticas de Hematología y Bioquímica los volúmenes de las
soluciones que se necesitan medir son del orden de microlitros (10 -6 L).
Se emplean las micropipetas, ya sean de volumen fijo o variable. Los
errores de medida que se pueden cometer dependen en gran medida
del usuario y no de la micropipeta en sí.

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Uso correcto de la pipeta automática.
Ángulo correcto de la Pipeta
TUBOS POR SISTEMA AL VACIO PARA OBTENER MUESTRAS

SANGUÍNEAS
• No alterar el tamaño de los hematíes.

• No producir hemólisis.
• Evitar al máximo la agregación plaquetaria.
• No alterar la morfología de los leucocitos.
La sangre tratada con anticoagulante debe procesarse lo antes posible, incluso
mantenida bajo refrigeración (4 º C) si no pasan de las 2 horas. El tiempo
máximo entre la extracción de la sangre y su procesamiento depende del
coagulante de elección y no debe ser más de 4 horas, a excepción del
anticoagulante EDTA (etilendiaminotetracético) que puede ser hasta 24 horas
(en refrigeración a 4 ºC).

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Los anticoagulantes pueden emplearse en forma sólida o líquida. Los primeros

están indicados para la determinación de los parámetros hematológicos, ya
que no producen, como los anticoagulantes líquidos, dilución de la sangre.

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9. BlooDroid Cell Counter App
Aplicación sencilla e intuitiva para el recuento de células sanguíneas. Cada botón

corresponde a un tipo de célula y produce un sonido distintivo de la guitarra. La
aplicación genera un efecto de sonido especial o vibración después de contar los
grupos celulares de tamaño definido por el usuario (por defecto 100 células). Una
visión general de la cuenta actual se encuentra disponible en una ventana
separada.
https://play.google.com/store/apps/details?id=com.appgraid.cellcounter&hl=es

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10. Contador de Células Sanguíneas Modelo CCS01
Los Contadores de Células KACIL fueron proyectados con el fin de sustituir los
antiguos modelos de contadores de células mecánicos, utilizando tecnología
digital de última generación.
Características:
o 11 teclas (9 teclas de conteo y 2 teclas de función).

o Visor digital.
o Registro de Leucocitos, informando el total general y los valores
correspondientes a cada tipo de célula.
o Totalizador de conteos diferenciales con capacidad para contar hasta 999
células.
o Conteo de ERITROBLASTOS en separado, sin afectar el totalizador de conteos
diferenciales.
o Alarma sonoro y bloqueo automático para cada 100 (cien) células contadas.
o Teclado de alta durabilidad, capaz de soportar una cantidad elevada de toques.
o Función TIMER con posibilidad de control de un tiempo cualquiera hasta el de 9
horas y 59 minutos.
o Cronometraje de hasta 9 minutos y 59 segundos.
o Alimentación 127/220V-60 Hz.
o Dimensiones aproximadas (sin embalaje): 188 x 110 x 48 mm.

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https://www.youtube.com/watch?v=1LI6-ot1QTk
11. AUTOMATIZACIÓN EN HEMATOLOGÍA

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Sistema automatizado de hematología Sysmex® serie XT
HISTOGRAMAS Y DISPERSOGRAMAS
El analizador hematológico informa en dispersogramas e histogramas para
revisión y tamizaje detallados de los resultados. Los dispersogramas son figuras
de los resultados de la celda de flujo para aquellos analitos analizados por
citometría de flujo (WBC/BASO, DIFF y RETI/PLT). Los histogramas son gráficos
producidos por información de la apertura de impedancia (RBC/PLT). Son de
mucha ayuda cuando se revisan y se interpretan los resultados de los pacientes.

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12. ME
DI
DA
S DE BIOSEGURIDAD

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Bioseguridad es un conjunto de medidas

preventivas de sentido común para proteger la
salud y la seguridad del personal de salud a
diferentes riesgos producidos por agentes
biológicos, físicos, químicos y mecánicos.
Conjunto de normas comportamientos y
procedimientos orientados a impedir la contaminación por microorganismos hacia
el personal de salud o hacia el usuario.
Para la obtención de muestras, el personal

involucrado en los diferentes procesos
para los exámenes hematológicos debe
aplicar las medidas de Bioseguridad.
Se debe controlar, sobre todo:
 Al personal que trabaja en el
laboratorio de hematología.
 El proceso de coloración en el que se debe
aplicar las medidas de bioseguridad correspondientes al uso y
manipulación de sustancias tóxicas.

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IV. APLICACIÓN PRACTICA

1. Describa y explique el funcionamiento correcto de principales los
equipos, instrumentos y materiales del Laboratorio de Hematología
V. EVALUACIÓN
1. Principios y fundamento del hemograma automatizado.
2. Explique el fundamento del dispersograma e histograma del hemograma
automatizado
3. Describir los parámetros de los dispersogramas.
VI. BIBLIOGRAFIA
 http://www.superior.de
 Instituto Nacional de salud. Manual de Procedimientos. Bioseguridad
en Laboratorios de Ensayo, Biomédicos y Clínicos. Comité de
Bioseguridad del INS.
 Muñoz Zambrano M. Manual de Procedimientos de Laboratorio en
Técnicas Básicas De Hematología. Lima: Instituto Nacional de Salud;
2005.
 Vives Corrons,j.Manual de técnicas de Laboratorio en Hematología.
3ra ed. Barcelona: Elsevier Masson.; 2006.
 Gomes Oliveira R. Hemograma. Como hacer e interpretar. 1ª ed. Sao
Paulo: Amolca; 2011.
 Henry J. El Laboratorio en el diagnóstico clínico. 20ª. Ed.Madrid:
Marbán Libros; 2007

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PRACTICA Nº 2
OBTENCIÓN DE MUESTRAS SANGUNEAS. PUNCIÓN VENOSA Y CAPILAR

FROTIS SANGUÍNEO. GOTA GRUESA. COLORACIONES EN HEMATOLOGÍA
I. INTRODUCCION
En la actualidad, es común la afirmación de que la fase pre analítica es la
responsable de cerca del 70% del total de los errores cometidos en los
laboratorios clínicos que cuentan con un sistema de control de la calidad
bien establecido. La fase pre analítica incluye la indicación de la prueba, la
redacción de la solicitud, la transmisión de eventuales instrucciones de
preparación del paciente, la evaluación de la atención a las condiciones
previas, procedimientos de extracción, acondicionamiento, conservación y
transporte de la muestra biológica hasta el momento de la realización
efectiva de la prueba.
II. COMPETENCIAS
Realizar los procedimientos de toma de muestra, identificación
conservación y transporte en el contenedor adecuado, en función de los
parámetros a determinar.

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III. CONTENIDOS
Elección de la zona para realizar la venopunción
La elección del lugar de realización de la punción representa una parte vital
del diagnóstico. Existen diversos lugares que pueden ser elegidos para la
venopunción, como mencionaremos a continuación. La zona más idónea
para las punciones venosas es la fosa antecubital, en la parte anterior del
brazo, frente y bajo el codo, donde se
localiza un gran número de venas,
relativamente próximas a la superficie de la
piel. Las venas de esta zona varían de
persona en persona, sin embargo, hay dos
tipos comunes de sistemas de distribución
venosa: Uno con forma de H y otro
parecido a una M. El patrón H se denominó
de este modo debido a las venas que lo
componen (cefálica, cubital mediana y
basílica) se distribuyen como si fuesen una
H, y representa alrededor del 70% de los
casos. En el patrón M, la distribución de las
venas más prominentes (cefálica, cefálica
mediana, basílica mediana y basílica) se
asemeja a la letra M.
Cuando las venas de esta región no están disponibles o no son accesibles,
las venas del dorso de la mano también pueden ser utilizadas para la
venopunción. Las venas de la parte inferior del puño no deben ser utilizadas
porque, al igual que ellas, los nervios y tendones están próximos a la superficie de la piel
en esa zona.

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IV. PROCEDIMIENTOS
Identificación del paciente
Se lleva a cabo mediante la comparación de la información contenida en la
solicitud de análisis del paciente y la identificación numérica, código de
barras, o cualquier otro criterio objetivo predeterminado.
Informe al paciente del procedimiento de extracción de sangre y verifique
las condiciones en las que acude a la extracción antes de la toma de
muestra.
Preparación del material para la extracción
Con anterioridad a la venopunción el personal debe tener a su disposición
el siguiente material:

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 Sistema de extracción: consta de aguja para extracción mediante

sistema al vacío, portatubos (holder o capuchón) y tubos de extracción
de sangre.
 Guantes estériles y desechables.
 Torundas de algodón estéril.
 Solución desinfectante o alcohol al 70%.
 Torniquete o ligadura.
 Contenedor de desecho.
Preparación del Paciente

El paciente debe encontrarse en posición estable (sentado o recostado)
desde, al menos, 5 - 10 minutos antes de la extracción.
 Coloque al paciente de manera que pueda extender el brazo elegido
hacia abajo.
 Solicite que apoye el brazo en el reposabrazos evitando que lo doble a
nivel del codo, formando así una línea recta entre el hombro y la
muñeca.
 A la hora de seleccionar el sitio de punción, las venas son más
prominentes si el paciente cierra el puño.
 Por el contrario, no debe pedirse al paciente que lo abra y cierre
(bombeo) ya que esto puede causar variaciones en la concentración de
algunos analitos.
 El brazo elegido debe estar extendido hacia abajo para evitar por un
lado el reflujo de sangre a la vía, y por otro lado la contaminación de los
tubos ya que de esta forma el aditivo no tocará el tapón ni la aguja que
lo perfora.
Aplicación del torniquete
El torniquete se utiliza para aumentar el llenado de las venas, lo cual hace
que éstas sean más prominentes y más fáciles de canalizar.
 Coloque el torniquete unos 10 cm por encima de la zona donde se va a
hacer la venopunción.

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 Aplique el torniquete suavemente de forma que todavía pueda sentir el

pulso.
 La duración de la aplicación del torniquete no debe exceder 1 minuto
ya que se produce un éxtasis local con hemoconcentración.
 Puede incluso ocurrir la infiltración de sangre en los tejidos de alrededor
si la presión es muy alta.
 Esto puede dar lugar a resultados erróneos:
 Concentraciones elevadas de parámetros proteicos.
 Hematocrito elevado.
 Trombocitopenias.
 Hemólisis.
Por tanto, debe soltarse el torniquete cuando la sangre comience a
fluir en el primer tubo.
Punción venosa
1. Palpar la vena (dar toques suaves a la vena elegida).
2. Colocar el torniquete, no debe exceder 1 minuto.
3. Desinfectar el área de punción con movimientos concéntricos de
adentro hacia afuera. Dejar secar.
4. Punción: enroscar la aguja en el portatubos (capuchón o holder) y
después introducirla en la vena del paciente aproximadamente. El brazo
del paciente debe permanecer en posición inclinada hacia abajo.
5. Con la mano libre, introducir el tubo al vacío en el portatubos.
Asegurarse que el tapón de goma se perfore completamente. Liberar el
torniquete ten pronto como la sangre empiece a fluir hacia el tubo hasta
que se agote el vacío del tubo.
6. Una vez que se llena el tubo, retírelo del portatubos manteniendo la
aguja en la vena, mezcle la sangre con el aditivo con cuidado,
invirtiendo suavemente el tubo 180° inmediatamente después de
llenarlo. El número de inversiones variará según el tipo de aditivo del
tubo.
7. Finalizado el proceso de extracción se coloca una torunda sobre la zona
de punción y se retira la aguja de la vena
8. Se debe presionar la zona de punción con un algodón durante 5
minutos para evitar la formación de hematoma y hasta que cese de salir
sangre. El brazo debe mantenerse hacia arriba en posición horizontal.

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(1) (2) (3) (4) (5)
Identificación de la muestra:
La muestra se identificará una vez realizada la extracción de sangre,
desechado de la aguja y homogeneización de la
misma con el aditivo. Deberá identificarse
correctamente, es decir:
 Con información completa.
 Sin borrones.
 Sin perder la identificación durante todo el
proceso.
 En caso de emplear códigos de barras,
debe dejarse siempre una ventana
visible en el tubo que permita observar
las condiciones en las que se recibe la
muestra en el laboratorio.
V. APLICACIÓN PRACTICA
El alumno se presentará con sus materiales completos y ejecutará la toma
de muestra capilar y venosa correctamente.
VII. PRODUCTO
Co la información, elaborar un protocolo de toma de muestra capilar y
venosa.
OBTENCIÓN DE SANGRE CAPILAR
Punción capilar del dedo
Materiales y equipos requeridos

 Torundas.
 Alcohol al 70%.
 Lancetas hematológicas.
 Capilares hematológicos con heparina (rojo) y sin heparina (azul).
 Tubos de extracción de sangre capilar.
 Cera para sellar tubos capilares o plastilina

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 Recipiente para descartar punzocortantes
Procedimiento
1. Lávese bien las manos y póngase guantes (no es preciso que sean
estériles) bien ajustados. Asegúrese de que todos los elementos para la
toma de muestra de sangre capilar y la realización de la prueba estén
disponibles y al alcance de la mano.
2. Seleccione el dedo anular, idealmente de la mano no dominante. El
paciente no debe usar un anillo en el dedo, ya que puede obstruir la
circulación sanguínea.
3. Asegúrese de que la mano del paciente esté caliente y relajada y que esté
cómodamente sentado. La punción debe hacerse ligeramente descentrada
desde la porción carnosa, cerca del costado de la yema del dedo.
4. Desinfectar (alcohol al 70%) y dejar secar completamente el sitio de
punción. El alcohol puede diluir la muestra.
5. Suavemente masajee el dedo hacia la punta para aumentar el flujo
sanguíneo. Evite pasar el primer nudillo.
6. Haga la incisión en el lado de la yema del dedo. Aplique sólo una ligera
presión hacia la yema del dedo hasta que aparezca una gota de sangre.
Puede tardar unos segundos después de la punción hasta que comience el
flujo de sangre.
7. Limpie las primeras 2-3 gotas y asegúrese de que haya un flujo de sangre
libre antes de llenar el tubo capilar o el tubo de extracción de sangre capilar.
Se debe presionar – soltar muy ligeramente para estimular el sangrado.
8. Llene el tubo capilar de una sola vez hasta aproximadamente hasta 1 cm
del extremo opuesto y/o el tubo de extracción de sangre capilar hasta el
volumen, según indique. Evite las burbujas de aire.
9. Selle el tubo capilar y/o cierre herméticamente el tubo de extracción de sangre capilar.
10. Coloque una torunda seca sobre la zona de punción o muy ligeramente
humedecida con alcohol al 70%.
11. Descarte las lancetas y torundas en los recipientes establecidos.

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Punción capilar del talón

 La punción debe hacerse en la porción más lateral de la superficie plantar
del talón.
 No debe exceder de 2.4mm de profundidad para evitar funcionar el hueso.
 No debe hacerse en la curvatura posterior del talón.
 No debe hacerse en sitios previamente puncionados, pues se consideran
 zonas potencialmente infectadas.

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La importancia del tiempo y el flujo sanguíneo

Un factor clave que influye en las pruebas como hemoglobina y hematocrito es
el flujo capilar. Típicamente para la hemoglobina, las primeras 1-3 gotas
después de la punción muestran un mayor grado de variabilidad de la
concentración de hemoglobina, independientemente del dispositivo analítico
utilizado para la prueba. Es por esta razón que estas primeras gotas de sangre
deben ser desechadas.
Generalmente la mayor precisión se alcanza a partir de la cuarta gota después
de la punción, cuando se consigue un buen flujo capilar durante un período de
30-45 segundos. La toma de sangre obtenida después de este tiempo puede
dar lugar a resultados de hemoglobina inexactos. El factor más importante
para reducir los errores pre-analíticos es la presencia de un flujo sanguíneo
espontáneo libre, especialmente puesto que ni el tamaño de la gota ni el
momento de la toma después de la punción están bien definidos y las
recomendaciones del fabricante sobre este tema varían.

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REPARACIÓN DEL FROTIS SANGUÍNEO
I. INTRODUCCION
Podemos definir el frotis sanguíneo, o extensión sanguínea, como una fina
película de sangre extendida sobre un portaobjetos, de modo que las
células sanguíneas estén dispuestas en una capa. La finalidad de la
extensión sanguínea es la observación al microscopio óptico de las células
presentes en la muestra. Las extensiones sanguíneas se pueden realizar de
forma manual o de forma automática. En esta práctica se utiliza la técnica
manual del portaobjetos, también llamada técnica de los dos portaobjetos.
II. COMPETENCIAS
Elaborar correctamente un frotis sanguíneo para estudio microscópico
III. CONTENIDOS
Preparación del frotis sanguíneo
Preparación de gota gruesa.
IV. PROCEDIMIENTOS
Con la práctica, es fácil de preparar una buena muestra de sangre. Los

materiales que se requieren incluyen:
 Portaobjetos limpios, preferentemente con un extremo blanco rugoso
para el etiquetado (escribir el nombre y fecha de la muestra). Los
portaobjetos son a menudo bastante sucios (incluso si están
etiquetados "limpieza previa") y deben ser limpiados antes de ser
utilizados para el frotis.
 Una micropipeta o tubo capilar para colocar una gota de sangre en el

portaobjetos.
Los frotis de sangre se pueden preparar inmediatamente después de la

toma de la muestra, pero los coágulos de sangre se forman muy
rápidamente y es difícil preparar buenos frotis fuera del laboratorio. Más
comúnmente, la sangre utilizada para preparar los frotis, es recolectada en
un tubo que contiene el anticoagulante EDTA (tubos con tapón de color
púrpura). El frotis no necesita ser preparado inmediatamente, pero debe ser
realizado en el mismo día que se recoge la muestra de sangre. La sangre
debe mantenerse refrigerada, preferiblemente a 5 °C, hasta que se envíe al
laboratorio.

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Preparar un frotis de sangre:

1. Mezclar con cuidado (sin agitar) la muestra de sangre contenida en
el tubo antes de preparar el frotis. Sangre mal mezclada puede dar
lugar a una distribución anormal de las células.
2. Coloque una pequeña gota de sangre (de unos 10 ul ó 1 - 2 mm de

diámetro) sobre extremo de un portaobjetos limpio. El frotis no debe
ser demasiado grueso. Use una pequeña cantidad de sangre para
que en el extremo del frotis se forme un borde parecido a la punta de
una pluma ligeramente redondeada en el extremo más fino (cola).
Una gota muy grande forma un extendido muy largo o muy grueso.
3. Utilice un segundo portaobjetos para distribuir la gota de sangre y

extenderla sobre la superficie: mantenga el segundo portaobjetos en
un ángulo de 30 - 45o sobre la gota de sangre y mueve un poco hacia
atrás hasta tocar la gotita de sangre, dejado que la sangre se
extienda a todo el ancho del portaobjetos, a
continuación, empuje con rapidez y
suavemente hacia adelante, hasta el
extremo opuesto para crear el frotis,
extendiendo la gotita en forma constante y
uniforme para formar una película fina de
sangre bien distribuida sin agujeros ni
surcos.
4. Inmediatamente después de la preparación

del frotis de sangre, mover el portaobjetos
con la mano hacia uno y otro lado durante varios segundos para
secar rápidamente el frotis al aire.
5. Etiqueta el portaobjetos con un lápiz de grafito en lugar de un

lapicero o pluma.
Precauciones que se deben tener con esta técnica.
 El material debe estar completamente limpio y desengrasado. No es
una preocupación para el laboratorio clínico y biomédico de un gran
hospital, donde los portaobjetos se desechan. Pero para el laboratorio
de un centro de estudios, con presupuesto muy limitado, la limpieza y
reutilización de los portaobjetos está a la orden del día. Si un frotis
sanguíneo no es digno de ser fijado y teñido, el porta se echa a una
cubeta con una disolución de agua con lejía al 10% y unas gotas de
desengrasante.

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 Uso adecuado del portaobjetos. Esté recién limpio o nuevo a estrenar,

el portaobjetos se deberá manejar sujetándolo por los bordes. Los
guantes pueden tener suciedad, grasa o restos del material que estemos
usando. Si tocamos abiertamente la superficie del portaobjetos, es
posible que el frotis sanguíneo no salga correctamente aun cuando
ejecutemos la técnica debidamente. En el caso de no usar guantes, que
estaría doblemente mal hecho, si tocamos la superficie del portaobjetos,
éste se verá contaminado con la flora bacteriana de la piel y la grasa
presente en la epidermis.
 En una punción capilar se debe desechar la primera gota. Si se va a
realizar un frotis sanguíneo a partir de sangre capilar, es conveniente
desechar la primera gota.
 Sangre venosa anticoagulada con EDTA. Si la sangre procede de
una punción venosa debe estar anticoagulada con EDTA, ya que es el
anticoagulante que guarda mejor la morfología celular. El frotis
sanguíneo debe realizarse antes de dos horas desde el momento de la
extracción, debido a que el efecto del EDTA sobre los leucocitos puede
provocar hinchamiento nuclear con falso aumento de los neutrófilos
cayados y vacuolización citoplasmática.
Factores que determinan el grosor del frotis sanguíneo con la técnica del
portaobjetos
Existen una serie de factores que determinarán el grosor del frotis
sanguíneo sobre el portaobjetos:
 Cantidad de sangre: La cantidad de sangre que depositemos sobre el

porta, en forma de gota, es primordial. Si la gota es gruesa y con mucha
cantidad, la extensión será larga y con mayor espesor. En cambio, si la gota
es pequeña la extensión sanguínea será corta y fina.
 Hematocrito: Es la parte porcentual de la fracción hemática respecto a
la sangre total. En muestras con variaciones importantes de hematocrito es
posible que nos veamos obligados a modificar el ángulo de ejecución de la
técnica del portaobjetos.
 Ángulo de ejecución: Un ángulo mayor de 45º, entre el portaobjetos
esmerilado y el portaobjetos normal que se sitúa de forma horizontal,
supone un frotis sanguíneo más grueso y corto. En cambio, si el ángulo de
ejecución es menor de 45º el frotis sanguíneo estará formado por una
extensión fina y larga.
 Rapidez: La velocidad a la que ejecutamos la técnica también tiene mucho
que decir al respecto. Independientemente del resto de variables, la
velocidad de ejecución debe ser constante y adecuada. A mayor rapidez

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mayor grosor de la extensión, y a menor rapidez, la extensión será más

fina.
Características de un frotis sanguíneo

Un frotis sanguíneo ideal debe cumplir una serie de requisitos:
 No debe cubrir toda la superficie del portaobjetos.
 Su espesor debe ir disminuyendo desde el inicio hasta el final.
 La sangre debe ir dispuesta en una sola capa de tal modo que no queden
huecos a lo largo de la extensión sanguínea.
 Las bandas laterales deben ser lisas.
 Los bordes laterales de la extensión deben estar separados de los bordes
del porta 1-2 mm.
Un frotis sanguíneo realizado mediante la técnica del portaobjetos presenta tres
zonas claramente diferenciadas:
 Cabeza: Es la zona inicial de la extensión. Si atendemos a las
características que debe presentar un frotis sanguíneo ideal, la cabeza será
la zona con mayor grosor. De hecho, los hematíes pueden estar formando
más de una capa.
 Cuerpo: Es la zona intermedia de la extensión sanguínea y la más
adecuada para el estudio de las células. Existe una adecuada proporción
de leucocitos en esta zona.
 Cola: Es la zona final del frotis. En ella los hematíes se disponen en forma
de mosaico, deformados, y homogéneamente coloreados. Los leucocitos
dispuestos en esta zona suelen ser los más grandes (monocitos y
granulocitos).

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Extensiones sanguíneas fijadas y teñidas

Tipos de frotis sanguíneos defectuosos
Cuando la técnica del portaobjetos no se ha realizado correctamente, o no se han
tomado todas las precauciones posibles, nos podemos encontrar distintos tipos de
extensiones erróneas. Si atendemos al tipo y a su configuración, podremos
detectar qué hemos hecho mal y proceder a su corrección.
Este frotis sanguíneo alterna zonas con distintos grosores (aparecen bandas). La
causa es la velocidad de deslizamiento, que no ha sido uniforme durante el
proceso (se ha detenidos en fracciones de segundo). Esta extensión es típica en
el proceso de aprendizaje, en el que el portaobjetos extensor se desliza a
trompicones sobre el portaobjetos horizontal en el que se forma el frotis
sanguíneo.

35
En esta ocasión las causas son claras. El portaobjetos extensor ha sido levantado
antes de tiempo si la extensión es gruesa. Si el frotis sanguíneo es corto y fino,
significa que la cantidad de sangre de la gota era inferior a la adecuada.
A > ángulo: frotis corto y grueso
Este caso puede tener varias causas. Puede que el portaobjetos extensor esté
mellado en el borde que utilizamos para extender. También que la presión ejércida
sobre el portaobjetos no haya sido adecuada al final. O puede que simplemente el
portaobjetos extensor esté mal esmerilado -defectuoso- y no nos hayamos
percatado de ello.
Este frotis sanguíneo es característico de un portaobjetos con grasa debido a una

limpieza deficiente.

36
Puede ocurrir que el frotis sanguíneo llegue hasta el final y sea, o bien grueso, o
bien fino. Si es grueso significa que el primer error cometido ha sido poner una
gota con demasiada cantidad de sangre. Si la extensión es fina significa que no
hemos levantado cuando debíamos y hemos arrastrado el portaobjetos esmerilado
hasta el final.
A < ángulo: frotis largo y delgado
(1) (2)

37
(3) (4)
OBTENCIÓN DE GOTA GRUESA

El propósito de esta técnica es la detección de parásitos en la sangre: Parásito de
paludismo.
1. Sostenga la mano izquierda del paciente con la palma hacia abajo y
seleccione el tercer dedo a partir del pulgar o el dedo índice.
2. Realizar la asepsia de la zona de punción, dejar secar el alcohol y punzar la
yema del dedo con la lanceta estéril, con firmeza y rapidez.
3. Limpiar la primera gota de sangre con un pedazo de algodón seco.
Asegúrese que ninguna hilacha de algodón permanezca en el dedo, puede
mezclarse posteriormente con la sangre.
4. Gota gruesa: Una vez obtenida la muestra, realizar la gota gruesa de la
siguiente manera: utilizando uno de los ángulos de una segunda lámina
(lámina auxiliar) esparcir rápidamente la gota de sangre y extenderla
uniformemente hasta formar una gota gruesa de 1 cm de lado o de
diámetro. La sangre no debe ser excesivamente revuelta, es suficiente con
3 a 6 movimientos. De preferencia, realizar el homogeneizado de la
muestra.
5. Frotis: Utilizando la misma lámina auxiliar, ponerla en contacto con la
superficie de la lámina que contiene la gota central y hacerla correr
firmemente a lo largo de su borde en un ángulo de 45°. Asegúrese de que
ocurra un contacto parejo con la superficie de la lámina todo el tiempo que
la sangre esté siendo esparcida, de tal manera que el frotis sea homogéneo
y fino. Siempre manipular las láminas por los bordes o por una esquina para
realizar el frotis.
.

38
GOTA GRUESA
IDENTIFICACIÓN CON
LÁPIZ

39
COLORACIONES EN HEMATOLOGÍA
I. INTRODUCCION
las coloraciones empleadas en Hematología, muestran bondades
policromatófilas permitiendo describir numerosas características en las
células, pero debemos igual establecer tiempos y equilibrios adecuados para
obtener los tonos adecuados que favorezcan la visualización de las células y
por ende el diagnóstico microscópico.
II. OBJETIVO
Aprender a usar adecuadamente los colorantes y establecer criterios de calidad
para evaluar el producto final coloreado.
III. COMPETENCIAS
 Realiza coloraciones sistematizando los tiempos para mejores
resultados.
 Realiza el control de calidad de los procedimientos.
 Aplica medidas de Bioseguridad.
IV. CONTENIDOS
1. Tipos de colorantes, fundamento y procedimiento de coloración.
2. Realizar el control da calidad.
V. METODOLOGIA

 Colorante Wright
 Colorante Giemsa
 Alcohol metílico (100 ml)
 Agua destilada
 Bandeja de coloración
 Láminas portaobjetos
 Tubos de ensayo 13x 100
 Gradillas
TINCIÓN CON COLORANTE DE WRIGHT

Fundamento
El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la
sangre y determinar las variaciones y anormalidades de estructura, forma y
tamaño de los eritrocitos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades de
40
coloración. La información obtenida de un frotis de sangre periférica depende

en gran parte de la calidad del extendido y la coloración.
Materiales
Colorante de Wright.
Solución amortiguada tamponada / agua destilada fresca
COLORANTE DE WRIGHT
Reactivos
Colorante de Wright …………………… 0,6 g
Metanol (CH3 OH) ………………… 100.0 ml
Buffer para Wright y Giemsa

Solución madre:
 Solución A: KH2PO4 ……………….. 9.4g
 Solución B: Na2HPO4 ……………………… 9.07 g
 Buffer pH.7.2 para Giemsa: mezclar 39.0 ml de solución A con 61.0 de

solución B y agregar 900.0 ml de agua destilada.
 Buffer pH 6.8 para Wright: mezclar 50 ml de solución A y 50 ml de

solución B y agregar 900.0 ml de agua destilada.
Procedimiento de coloración
el frotis en un soporte y se cubre con el colorante de Wright.
1. Inmediatamente se añade solución amortiguada

tamponada o agua destilada en partes iguales hasta
obtener un brillo metálico, se sopla suavemente para
mezclar ambas soluciones dejando 8-10 minutos. ( el
tiempo se determina con una coloración piloto)

41
2. Finalmente se lava con agua corriente, se limpia los residuos de

colorante y se deja secar.
3. Revisar con objetivo X100 y aceite de inmersión
Observación microsópica (Obj. X100)
TINCIÓN DE GIEMSA:
Reactivos
Colorante Giemsa (polvo)……………… 1.0 g
Glicerina calentada………………………66.0 ml (*50° C por 2 horas)
Alcohol metílico…………………………..66.0 ml
 Disolver el colorante com glicerol
 Adicionar el metanol, mesclar bien y dejar a temperatura ambiente 7 a
14 días (maduración)
 Filtrar antes de su empleo (conservar em frasco color caramelo)
Dejar madurar entre 7 a 14 días. Filtrar antes de usar.
Agua tamponada
Ortofosfato disódico anhidro (Na2HPO4) 4 g

42
Ortofosfato monopotásico (KH2PO4) 5 g

Tomar 1 g de la mezcla de las sales y disolver en 1 litro de agua destilada,
agitar y ajustar a pH 7,2
Recomendaciones
Las sustancias amortiguadoras actúan como un elemento químico inactivador
de cantidades variables de ácido o álcali. En términos generales la reacción de
los diluyentes que había dado mejores resultados se acercaba al punto de
neutralidad (pH 7,0). En la práctica, la escala oscila generalmente entre un pH
6,6 - 7,4 que es por coincidencia, la escala del indicador rojo de fenol.
El ortofosfato disódico y el ortofosfato monopotásico son las sales
amortiguadoras que se usan con más frecuencia. En la práctica, se puede
preparar rápidamente soluciones amortiguadoras eficaces agregando 1 g de
mezcla de sales de sodio y de potasio por cada litro de agua destilada en la
proporción de 4:5 ó en cualquier otra proporción que haya resultado
satisfactoria. Se mezclan perfectamente dichas sales en las proporciones
seleccionadas, se pesa el polvo homogéneo en lotes de un gramo y se puede
envolver en papel glasine o bien disolver en pequeñas cantidades de agua.
Preparación de colorante diluido
Procedimiento
Utilizar una probeta de vidrio para diluir el colorante.
Preparar la solución de trabajo diluyendo la solución "madre" 1/10, con agua
destilada o solución amortiguadora de pH 7,2 (puede ser reemplazada por
agua de Iluvia o agua hervida fría).
Solución "madre" giemsa 100 ml.

Agua destilada 900 ml.
Una forma sencilla de preparar la dilución es agregando 2 gotas de solución

"madre" por mililitro de agua destilada o solución amortiguadora
Coloración
1. Secar el frotis.
2. Fijar con alcohol metílico durante 3 minutos. En caso de que la preparación
del colorante ya posea metanol, este paso queda obviado.

43
3. Solución de trabajo: 1 volumen de colorante y 9 de agua Tamponada.

Se prepara antes de la coloración.
4. Sumergir en solución de Giemsa o cubrir el frotis
durante 10 minutos (en esta caso soplar para
mezclar correctamente).
5. Lavar con abundante agua y dejar

secar antes de observar al
microscopio.
Tinción de Gota gruesa (Hemoparásitos)

1. Cubrir con colorante Giemsa diluido 1:50 con agua tamponada pH7.0 por 45
minutos
2. Lavar con agua tamponada por 3 minutos y secar en posición vertical
Con esta técnica se destruyen los hematíes, observándose sólo los parásitos
teñidos, de citoplasma de color azulado y la cromatina rojiza.
Control de calidad de las coloraciones:
Una extensión de sangre bien teñida debe caracterizarse por una buena
diferenciación de las estructuras subcelulares en los leucocitos, una coloración
rosada de los hematíes y la ausencia de precipitados.
Los defectos más frecuentes observados en la tinción del frotis sanguíneo son:
Coloración excesivamente azul, debido a:
Frotis excesivamente grueso, Lavado insuficiente, Tinción muy prolongada,
Empleo de colorante excesivamente alcalino.
Coloración con una tonalidad rosada:
El colorante, el tampón o el agua de lavado tienen un pH demasiado ácido.
Presencia de precipitados:
se puede evitar con la filtración.
VI. APLICACIÓN PRÁCTICA
EVALUACIÓN

44
1. Indique las ventajas y desventajas en la obtención de muestra sanguínea

por punción venosa empleando jeringa, sistemas al vacío y punción capilar
2. Investigue el procedimiento a emplearse para la obtención de sangre
arterial, casos.
3. Práctica de coloración Wright y Giemsa. Evaluación de las coloraciones.
4. Evaluación de los procedimientos en busca de errores de procedimiento.
5. Realice un protocolo para el uso de anticoagulantes y para la tinción Wright
y Giemsa de acuerdo a la experiencia realizada.
VIII. BIBLIOGRAFIA
 San Miguel J. Hematología. Manual básico razonado. 3 ra ed. Barcelona:
Elsevier;
 Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos de Laboratorio en
Técnicas Básicas De Hematología. Versión en PDF.
PRACTICA Nº 3
HEMATOPOYESIS - ERITROPOYESIS
La Eritropoyesis está dirigida a la formación de hematíes, glóbulos rojos o
eritrocitos. Son células que carecen de núcleo y organelas pero que
contienen una elevada concentración de hemoglobina. El primer precursor
reconocible es el proeritroblasto que sigue un proceso de descenso
progresivo del tamaño celular, compactación nuclear, incremento de

45
contenido citoplasmático de hemoglobina pasando por los estadios de

eritroblasto basófilo, eritroblasto policromático y eritroblasto
ortocromático.
Al final con la expulsión del núcleo se obtiene un hematíe joven que aun
conserva ciertas organelas y que puede ser identificado con tinciones
especiales y recibe el nombre de reticulocito. En unos días se degrada
toda la maquinaria metabólica celular resultado un hematíe maduro.
ERITROBLASTO
ERITROBLASTO
ERITROBLASTO
PROERITROBLASTO
POLICROMATÓFILO
ORTOCROMÁTICO
BASÓFILO
46
GLÓBULOS ROJOS MADUROS
PRACTICA Nº 4
RECUENTO DE HEMATIES - VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR

I. INTRODUCCION
Los hematíes cumplen una función muy especial en el organismo: la
respiración celular. Para ello dependen del contenido de hemoglobina y del
número de células.
El recuento de hematíes adquiere entonces un valor especial ya que su
disminución afectará directamente en su función.
Si bien el procedimiento manual está expuesto a errores, éstos se pueden
superar mediante un conocimiento cabal del proceso que abarca la fase pre
analítica (obtención de la muestra, uso correcto de los instrumentos,
preparación de la dilución) y la fase analítica (conteo en cámara).
La sangre se diluye en un líquido que nos permite observar claramente los

hematíes, luego esta dilución se coloca en una cámara de Neubauer con la

47
ayuda de una pipeta automática o pipeta Pasteur y se cuentan en el

microscopio a un objetivo de 40x para calcular el número de glóbulos rojos
por mm3.
II. OBJETIVO
 Realizar el recuento de Hematíes en cámara de Neubauer y Velocidad de
sedimentación Globular
 La Velocidad de Sedimentación Globular es una sencilla prueba
empleada universalmente como índice de la presencia de enfermedades
activas de muchas clases, tiene por tanto un alto valor pronóstico.
III. COMPETENCIAS
 Emplea correctamente los instrumentos para la práctica
 Prepara las diluciones y realiza el recuento de hematíes
 Calcula el número de hematíes a partir de los valores obtenidos
 Interpreta los valores obtenidos
 Aplica medidas de Bioseguridad durante el proceso.
IV. CONTENIDOS
Preparación de las diluciones para el recuento de hematíes.
Recuento de hematíes en cámara de Neubauer.
Identificar los errores procedimentales y aplicar las correcciones del caso.
Prueba de Velocidad de Sedimentación globular.
V. METODOLOGIA
Materiales, Equipos y Reactivos requeridos

 Microscopio.
 Equipo de toma de muestra
 Tubos al vacío con EDTA
 Diluyente de Glóbulos rojos
Cloruro de Sodio al 0,9%:
Cloruro de Sodio………0.9 g
Agua destilada…………100 ml.
Diluyente de Hayem:
Cloruro mercúrico……. 0.5 g
Sulfato de sodio……. …5.0 g
48
Cloruro de sodio……….1.0 g
Agua destilada…………200 ml
Disolver y filtrar.
Procedimiento
1. Con la pipeta automática, se toma 10 ul (0.01 ml) de sangre total con
anticoagulante, o sangre capilar y se deposita en un tubo de 12 x 75 que
contenga 2 mL de solución de Hayem (dilución de 1:200).
2. Se homogeniza sin agitar y se deja reposar aproximadamente 5 minutos
para que las células sedimenten y se procede a cargar la cámara con la
misma pipeta usando 10ul.
3. Enfocar la cuadrícula a 10x, luego con el objetivo de 40x contar sobre el
cuadrado grande central de la cámara sólo en 5 cuadrados pequeños:
uno central y cuatro angulares (80 cuadraditos en total).
4. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por
fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadrado pequeño de
recuento y no se consideran los correspondientes a los límites inferior y
derecho del cuadrado que se está contando. Se hace el recuento en los
puntos ABCD y E.

49
El recuento de hematíes se realiza en el cuadrado central, se eligen 5 de

los cuadrados que se encuentran subdivididos en 16 cuadrados pequeños,
como se muestra a continuación:
Causas de error en el recuento en cámara de Neubauer.

1. Errores de extracción: dilución o hemoconcentración. Coagulación parcial. Hemólisis.
2. Mala homogeneización por agitación insuficiente de la sangre.
3. Utilización de material sucio o húmedo.
4. Cámara cuentaglóbulos mal ajustada, sucia o mojada.
5. Llenado incompleto o mal llenado de la cámara (se requiere 10 ul)
6. Empleo de cubreobjetos común deformable, no rígido.
7. Errores del operador al realizar el recuento.
8. Errores al efectuar los cálculos.
Resultados
N° de g. rojos x mm3= N° de g. rojos en 5 cuadrados pequeños
Área contada x altura de la cámara x dilución de la sangre
= Glóbulos rojos contados
1/5 x 1/10 x 1/200
N° de glóbulos rojos x mm3 = N° de glóbulos rojos contados x 10,000

50
Valores de referencia
(Unidades convencionales: millones de células / mm3).
Hombres: 4’500,000 – 5’500,000

Mujeres : 4’000,000 – 5’000,000
Niños (4 años) 4’200,000 – 5’200,000
Lactantes (1 - 6 meses): 3’800,000 – 5’200,000
Recién nacidos 5’000,000 – 6’000,000
(Unidades Internacionales)
Edad Sexo Intervalo de referencia
Recién nacidos ambos 4,7x1012/L - 6,3x1012/L
Niños (2-12 años) ambos 4,0x1012/L - 5,3x1012/L
Adultos jóvenes (12-18 años) mujeres 4,1x1012/L - 5,1x1012/L
hombres 4,5x1012/L - 5,3x1012/L
Adultos jóvenes (19-60 años) mujeres 4,1x1012/L - 5,2x1012/L
hombres 4,6x1012/L - 5,9x1012/L
En consecuencia, en 1 mm3 (1ul) de sangre total habrá A x 104 eritrocitos. El número

(N) de eritrocitos que hay en un litro (L) de sangre total se calcula multiplicando A x
1010.
Histograma de hemograma automatizado
1. Breve descripción de los 8 parámetros del histograma

2. Explique la relación entre los 8 parámetros que muestran los resultados del
hemograma automatizado
3. interpretación de los resultados, tomando como referencia el rango para
cada caso.
4. Halle la relación matemática entre:

51
a. VCM
b. HVM
c. CHCM
Tomando como referencia los valores de RBC, BGG HCT.
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN (VSG)
Fundamento
El test de velocidad de sedimentación globular (VSG) mide la sedimentación de
eritrocitos en su plasma nativo.
VSG es un test no específico que puede ser utilizado para detectar un amplio
rango de enfermedades y para monitorear el curso evolutivo de ciertas
enfermedades crónicas como los procesos inflamatorios crónicos (artritis
reumatoide, tuberculosis) o la respuesta a la terapia. Sin embargo, en ocasiones
cuadros tan graves como neoplasias y la cirrosis pueden presentar una VSG
normal. Constituye uno de los test más utilizados como screening en el laboratorio
clínico. Se trata de un método sencillo para realizar y que requiere equipamiento
simple.
MÉTODO DE WESTERGREN
Es el método de referencia para medir la VSG. Fue propuesto como método de
referencia por el International Council for Standardization in Hematology (ICSH).
Materiales reactivos
2. Tubos de Westergren.
3. Soporte para tubos de Westergren.
4. Citrato trisódico 109 mM en solución acuosa. Si utiliza citrato trisódico
dihidratado (Na3C6H5O7.2H2O) prepare una solución acuosa de 32,08 g/l.
Procedimiento
1. La sangre se obtiene por punción venosa, evitando contaminación con
materiales utilizados para la higiene de la piel. La sangre se agrega en
proporción de 4 Vol de sangre a 1 Vol de solución de citrato de sodio, por
ejemplo 2 ml de sangre en 0,5 ml de anticoagulante. El test debe ser realizado
dentro de las 2 hs si la sangre es mantenida a temperatura ambiente, o dentro
de las 6 hs. si es mantenida a 4C.
2. Se vierte mediante una pipeta Pasteur o una jeringa de metal en el tubo de
Westergren, el cual tiene una graduación de 0 a 200 mm de arriba hacia abajo
presenta ambos extremos abiertos.
3. La sangre debe llenarse hasta la marca cero, se coloca en posición vertical
sobre una gradilla especial que obtura ambos extremos a temperatura
ambiente (18-25C), sin exposición a la luz del sol directa, libre de vibraciones
y corrientes de aire, manteniéndolo exactamente 60 min.

52
Resultados
Medir los milímetros descendidos de glóbulos rojos mediante la columna de
plasma por encima del paquete globular.
Valores De Referencia
· Recién nacidos: de 0 a 2 mm/h.

· Lactantes: hasta 10 mm/h.
· Hasta la pubertad: hasta 11mm/h.
· Hombres jóvenes: hasta 10 mm/h.
· Hombres adultos: hasta 12 mm/h.
· Hombres mayores: hasta 14 mm/h.
· Mujeres jóvenes: hasta 10mm/h.
· Mujeres adultas: hasta 19 mm/h.
· Mujeres mayores: hasta 20 mm/h
En la mujer embarazada se puede observar durante los primeros meses de
gestación una VSG elevada sin consecuencias patológicas
Factores de procedimiento capaces de modificar la VSG

Causas de aumento
 Desviación de verticalidad de la pipeta
 Incremento de la longitud y el diámetro de la pipeta
 Elevación de la temperatura ambiente
 Dilución de la sangre

Causas de disminución:
 Reducción del diámetro de la pipeta
 Utilización tardía de la sangre (espécimen envejecido)
 Cambio de anticoagulante
VI. APLICACIÓN PRACTICA

1. Identificar los errores procedimentales y proponer soluciones.
2. Realiza la VSG por ambos métodos y establezca las semejanzas y
diferencias de los resultados obtenidos
I. EVALUACIÓN

53
1. Explique el proceso del recuento de hematíes automatizado, establezca

los beneficios diferenciales con el método manual.
2. Explique os procedimientos de control de calidad en el recuento de
hematíes.
3. Explique el proceso de velocidad de sedimentación globular
automatizado, establezca los beneficios diferenciales con el método
manual.
VIII. BIBLIOGRAFIA
 Sonnenwirth, Alex. Métodos y Diagnóstico del Laboratorio Clínico. Buenos

Aires. 12ma edición. Editorial Panamericana. 2001.
 García Espinoza B. HEMATOLOGÍA 2. Hemostasia. Banco de Sangre.
Control de calidad. 4ta ed. Madrid: Paraninfo; 2004.
PRACTICA Nº 5
HEMATOCRITO – HEMOGLOBINA
1. INTRODUCCION
La anemia, entidad clínica de muy alta prevalencia en nuestro medio se

diagnostica empleando básicamente 2 parámetros: la determinación de
Hemoglobina y el Hematocrito. Con estos parámetros podemos establecer las

54
condiciones en que se encuentra el paciente. Además, aunado al recuento de

hematíes, se emplean para la determinación de los índices eritrocitarios que
permitirán a su vez clasificar morfológicamente las anemias.
2. OBJETIVO
Realizar la determinación de Hematocrito, Hemoglobina.
3. COMPETENCIAS
Describe, aplica y desarrolla los procedimientos para la determinación de
Hemoglobina, Hematocrito.
Identificar las posibles causas de error metodológico.
Interpreta los resultados.
Aplica medidas de Bioseguridad durante el desarrollo del trabajo.
4. CONTENIDOS
Determinación de Hematocrito.
Determinación de Hemoglobina por el método de Drabkin.
5. METODOLOGIA
1. DETERMINACIÓN de HEMATOCRITO
Mide la fracción que comprende a los glóbulos rojos (masa globular), respecto al
volumen total de la muestra de sangre venosa o capilar. Puede expresarse en
porcentaje o como valor decimal. Está directamente relacionado con la
concentración de hemoglobina, por lo que su determinación constituye el
procedimiento más simple para el diagnóstico de anemia. Así, un descenso del
Hto es indicativo de anemia, mientras que el aumento lo es de poliglobulia.
Hto = altura de la columna de glóbulos rojos

Altura de la columna de sangre total (glóbulos rojos más plasma)
MICROMÉTODO O MICROHEMATOCRITO
El método de referencia para la determinación del Hto es la centrifugación de
sangre total en tubo capilar (micrométodo),
Materiales y equipos requeridos:
 Capilares rojos (sangre capilar) o azules (sangre total) (75 mm x 1,5 mm).
 Plastilina.
 Microcentrífuga
Procedimiento:

55
1. Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del pulpejo del

dedo (Eliminar la primera gota después de la punción), o utilizar capilares
azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante. Debe llenarse
aproximadamente 70% - 80% del capilar (tres cuartas partes). No deberá
contener aire.
2. Sellar (tapar) el extremo del capilar por donde ingresó la sangre con plastilina.
3. Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de una centrífuga de
microhematocrito, con el extremo sellado adherido al reborde externo de la
plataforma.
4. Centrifugar por 5 minutos 12 000 rpm.
5. Tan pronto se detiene la centrífuga se extraen los capilares y se procede a su
lectura. Esta se puede realizar con los lectores de hematocrito, que nos darán
el resultado directamente, o con una regla milimetrada, aplicando la siguiente
regla de tres:
La
determinación del Hto debe realizarse por duplicado y la diferencia entre los
dos valores obtenidos no debe ser nunca superior a 0,01.
Resultados (lectura)
La lectura se realiza con una escala estandarizada que expenden en el comercio.
Uso de la escala:
1. Sostenga el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de
eritrocitos (no el extremo inferior del tubo) quede exactamente al mismo nivel
de la línea horizontal correspondiente al cero.

56
2. Desplace el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el

número 1,0 quede al nivel del tope de la columna de plasma. Vigile que el
fondo de la columna de eritrocitos continúe sobre la línea cero. El tubo debe
encontrarse completamente en posición vertical.
3. La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicará la
fracción de volumen de éstos. No considerar la capa de leucocitos y plaquetas.
VALORES DE HEMATOCRITO POR GRUPOS DE EDAD

GRUPOS DE EDAD Hematocrito % Fracción
HOMBRES 40- 50 % 0.4 – 0.50
MUJERES 37 – 42% 0.37 – 0.42
NIÑOS DE 5 AÑOS 38 – 44% 0.38 – 0.44
LACTANTES DE 3 MESES 35 – 40% 0.35 – 0.40
RECIEN NACIDOS 50 – 58% 0.50 – 0.58
Causas de error
 Las fugas de muestra al no quedar bien sellado los capilares producen una
disminución en el valor, al perderse mayor proporción de células que de
plasma.

57
 El uso de anticoagulantes líquidos provoca un error por dilución de la muestra.

 En muestras capilares no descartar la primera gota, produce una mezcla con
los líquidos tisulares que provoca hemodilución.
 En muestras de sangre venosa, el lazo colocado durante un cierto tiempo
produce hemoconcentración.
 La lectura no inmediata de los capilares, provoca que el sedimento de
hematíes vaya tomando forma de bisel si el capilar permanece en posición
horizontal.
DOSAJE DE HEMOGLOBINA
Significación clínica
El cuadro más comúnmente relacionado con la disminución de hemoglobina sérica
es la anemia, que en la mayoría de los casos ocurre como signo o complicación
de otra enfermedad, a veces no relacionada directamente con trastornos en el
sistema sanguíneo.
Existen situaciones en las que, por el contrario, la concentración de hemoglobina
se encuentra anormalmente elevada debido a una superproducción de glóbulos
rojos. La única condición natural y fisiológica que afecta los niveles de
hemoglobina es la altitud, puesto que frente a bajas presiones de oxígeno
atmosférico se produce una compensación mediante el incremento en el número
de glóbulos rojos y, por ende, en la concentración de hemoglobina circulante.
Fundamento del método
Este método tiene como fundamento la transformación previa de la hemoglobina
en cianmetahemoglobina (HiCN), que es muy estable y posee un color
característico cuya absorbancia a 540 nm es proporcional a la cantidad de
hemoglobina que contenga la sangre. Los distintos compuestos de hemoglobina,
excepto la sulfohemoglobina que casi nunca es significativa, se transforman en
HiCN según el siguiente proceso:
Hemoglobina + Ferricianuro potásico  metahemoglobina
Metahemoglobina + Cianuro potásico  cianmetahemoglobina

Materiales, equipos y reactivos
 Equipo de toma de muestra.
 Espectrofotómetro Estos instrumentos deben ser calibrados periódicamente
mediante la solución patrón de HiCN, preparada de acuerdo a las
especificaciones del International Committee for Standardization in
Haematology (ICSH)
 Tubos: 12 x 100 mm.
 Gradillas
 Sangre venosa total: anticoagulada con EDTA-K 3 (1,5 mg/ml) o con heparina
(10 UI/ml). Puede emplearse sangre capilar.
58
 Pipetas volumétricas: de vidrio y de 5 ml.

 Propipeta
 Pipetas automáticas: de 20 l, debidamente calibradas.
1. Reactivo de Cianmetahemoglobina + estándar de Hb:
Fuente: OMS
Causas de error en la determinación de la concentración de hemoglobina

59
La determinación de hemoglobina está sometida a posibles errores que deben ser

tenidos en cuenta. Algunos de ellos obedecen a características peculiares del
espécimen como la presencia de hiperlipemia o leucocitosis intensa (50 x 109/l).
No obstante, la mayoría de las veces los errores se deben a defectos técnicos en
la manipulación y el análisis del espécimen.
1. Errores en la obtención del espécimen de sangre:

1. Errores de extracción
2. Empleo de anticoagulantes no recomendados
3. Coagulación parcial de la sangre
3. Errores de dilución
1. Empleo de pipetas automáticas descalibradas u otras pipetas sucias o
húmedas
2. No eliminación del exceso de sangre adherida a las paredes externas del
capilar antes de introducirlo en el reactivo
3. Dilución incompleta de la sangre en el reactivo
4. Errores de la transformación de la hemoglobina en HiCN:

1. Empleo de reactivo de Drabkin mal preparado o vencido
2. Lectura antes del tiempo necesario para la completa transformación de la
Hb en HiCN
5. Errores de la determinación:
1. Empleo de instrumentos no calibrados
2. Cubetas sucias o deterioradas
3. Soluciones turbias de HiCN
6. Errores en la conservación del reactivo:
1. Congelación del reactivo, lo que produce transformación de K 3 Fe(CN) 6 en
K4 Fe(CN) 6 y una oxidación parcial de la Hb.
2. Conservación del reactivo en botellas de polietileno: se pierden grupos CN
con formación exclusiva de metahemoglobina, en vez de HiCN, con lo que
los valores de concentración de Hb obtenidos son inferiores a los reales.
APLICACIÓN PRACTICA
1. Realizar el hematocrito y Hemoglobina de los alumnos y comprobar las
posibles relaciones que existen entre ambos parámetros.
EVALUACIÓN
1. Explique el Fundamento y procedimiento para determinar Hb, Hto.
2. Explique el Fundamento y procedimiento para determinar Hb, Hto en
autoanalizadores hematológicos
3. Diagnóstico de anemia

60
IX. BIBLIOGRAFIA
Muñoz M. Morón C. Manual de procedimientos de laboratorio en técnicas
básicas de hematología. Lima, Instituto Nacional de Salud. Serie de Normas
Técnicas No 40.2005.
Vives Corrons, j. Manual de técnicas de Laboratorio en Hematología. 3 ra ed.
Barcelona: Elsevier Masson.; 2006.
 http://www.minsa.gob.pe/dgsp/documentos/Guias/RM028-2015-
MINSA_guia.pdf

PRACTICA Nº 6
DETERMINACIÓN DE CONSTANTES CORPUSCULARES
1. INTRODUCCION
Los índices eritrocitarios también se denominan como índices corpusculares.

Son una serie de parámetros que expresan diferentes características de los
hematíes.
Los tradicionales se calculan a partir de los valores obtenidos, previamente, del
número de hematíes (en millones por mm3), del hematocrito (en %) y de la
concentración de hemoglobina en la sangre (en g/dl).
Los autoanalizadores hematológicos son capaces de proporcionar los índices
tradicionales, y, además, suministran otros nuevos.
2. OBJETIVO
Realizar la determinación de Volumen corpuscular Medio, Hemoglobina
corpuscular medio y Concentración de Hemoglobina Corpuscular Medio.
3. COMPETENCIAS
Describe, aplica y desarrolla los procedimientos de Hemoglobina, Hematocrito
y Recuento de Hematíes para la determinación de las Constantes
corpusculares.
Interpreta los resultados y realiza la clasificación de las anemias de acuerdo a
los casos presentados.
Aplica medidas de Bioseguridad durante el desarrollo del trabajo.
4. CONTENIDOS
Determinación de Volumen corpuscular Medio, Hemoglobina corpuscular
medio y Concentración de Hemoglobina Corpuscular Medio.

61
5. METODOLOGIA
 Algodón.
 Alcohol al 70%.
 Ligadura o torniquete de 25 a 30 cm de largo.
 Tubos con anticoagulante EDTA.
 Gradillas
 Plastilina
 Tubos al vacío, Holders, con EDTA(K 3) Citrato
 Lancetas hematológicas
 Capilares hematológicos con y sin heparina
 Solución salina.
 Reactivo de Drabkin para hemoglobina.
 Espectrofotómetro.
 Cámara de Neubauer.
 Microcentrífuga.
 Micropipetas 10 y 100 ul
6. Constantes corpusculares
a. Volumen corpuscular medio (VCM):

Es el valor medio del volumen de los hematíes.
Se calcula a partir del hematocrito (HCT) y del recuento del número de
hematíes (RBC). Se utiliza la siguiente fórmula para su cálculo:
HCT
VCM = -------- x 10
RBC
Su valor normal está comprendido entre 80 y 100 m3 (1 m3 = 1 femtolitro =
10-15 litros).
Si es menor de 80 fl, se dice que hay una microcitosis, y si es mayor de 100 fl,
se habla de Macrocitosis.
La microcitosis se da en la ferropenia y en la talasemia, y la macrocitosis en
las carencias de B12 o ácido fólico, en las hepatopatías crónicas y en la
reticulocitosis.
b. Hemoglobina corpuscular media (HCM):

62
Es el valor medio del contenido en hemoglobina de los hematíes.

Se calcula a partir de la concentración de hemoglobina (Hb) y del número de
hematíes. Se utiliza la siguiente fórmula para su cálculo:
Hb
HCM = --------- x 10
RBC
Su valor normal está comprendido entre 27 y 31 picogramos (1 pg = 10-12g).
Si es menor de 27 pg, se dice que hay una hipocromía, y si es mayor de 31
pg, se habla de hipercromía relativa.
La hipocromía suele asociarse a la microcitosis y la hipercromía relativa a la
macrocitosis.
c. Concentración hemoglobínica corpuscular media (CHCM).

Es el valor de la cantidad de hemoglobina (en g) contenida en 1 dl de
hematíes.
Se calcula a partir de la concentración de hemoglobina y del hematocrito. Para
su cálculo se emplea la siguiente fórmula:
Hb
CHCM= ---------- x 100
HCT
Su valor normal está comprendido entre 32 y 36 g/dl. Si es mayor de 36 g/dl
se habla de hipercromía absoluta.
7. Nuevos índices eritrocitarios:

d. Índice de distribución de los hematíes (IDH) o (IDE)
También se denomina anchura de la distribución eritrocitaria o ADE (en inglés,
RDW) y como CV-GR.
Es el coeficiente de variación (CV) de los volúmenes de los glóbulos rojos
(GR).
El CV es un parámetro estadístico que expresa el grado de dispersión
existente entre los valores obtenidos (en este caso, entre los volúmenes de
los hematíes evaluados). Se calcula a partir de la desviación estándar (SD) y
de la media de los valores obtenidos.
Para su cálculo en porcentaje, se emplea la siguiente fórmula:
SD-GR
IDH = ----------------- x 100
VCM
Su valor normal debe ser igual o inferior al 15%. Indica la variación existente
entre los tamaños de los hematíes. Cuando ésta es muy grande, el IDH es
superior al 15% y se dice que hay una anisocitosis.

63
Hay anisocitosis en los períodos iniciales del tratamiento de las ferropenias y

también puede haberla en las fases inmediatas a la administración de
transfusiones.
e. Anchura de la distribución de la hemoglobina (ADH):
También se la conoce como HDW y como ET-Hb.
Es la desviación estándar de las concentraciones de hemoglobina de los
hematíes.
La desviación estándar es otro parámetro estadístico que también estima el
grado de dispersión de los valores obtenidos (en este caso, las
concentraciones de Hb de los hematíes evaluados). Para su cálculo, se
emplea la siguiente fórmula:
Su valor normal está comprendido entre 2,2 y 3,2 g/dl. La disminución del
ADH indica la presencia de hematíes hipocrómicos; el aumento del ADH
expresa la existencia de hematíes hipercrómicos.
La separación del ADH de sus valores normales es, por tanto, un signo de
anisocromía.
8. APLICACIÓN PRACTICA
1. Con los datos que se le brinda en clase halle las constantes
corpusculares e interprete los resultados.
2. Resuelva el caso clínico presentado
9. EVALUACIÓN
1. Establezca la relación entre el valor de hematíes, VCM y RDW-CV del
resultado adjunto.
2. Fundamente y explique los resultados de las constantes corpusculares
del caso presentado con las alarmas que presentan en relación a los
hematíes, excepto, Reticulocitos.
10. BIBLIOGRAFIA
 Vives, Joan. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología.
Barcelona. 4ta edición. Editorial Masson, 2006.

64

65
PRACTICA Nº 7
IDENTIFICACIÓN MICROSCÓPICA DE HEMATÍES NORMALES Y

PATOLÓGICOS EN SANGRE PERIFÉRICA. POIQUILOCITOSIS.
ANISOCITOSIS. HIPOCROMÍA. INCLUSIONES.
HEMOPARÁSITOS.
RECUENTO DE RETICULOCITOS
I. INTRODUCCION
La observación de los eritrocitos a partir de una extensión de sangre de
calidad es una exploración imprescindible en el estudio etiológico de toda
anemia. Así, la observación de la morfología eritrocitaria es de gran utilidad
diagnóstica en numerosas anemias, en las que se suelen presentar
alteraciones características (Esferocitosis hereditaria, anemia hemolítica
autoinmune y mecánica, Hemoglobinopatía S, Eliptocitosis congénita y
Acantocitosis). Asimismo, ante cualquier anemia de origen desconocido,
resulta útil valorar la intensidad de la Policromasia (índice de reticulocitosis), la
anisopoiquilocitosis con dacriocitosis y la presencia de algún Eritroblasto
circulante (metaplasma mieloide), punteado basófilo (saturnismo, talasemia) y
anillos de Cabot o cuerpos de Howell-Jolly (diseritropoyesis, esplenectomía).
La interpretación de las alteraciones morfológicas eritrocitarias se puede hacer
clasificándolas en cuatro grandes grupos: a) alteraciones del tamaño, b)
alteraciones de la forma, c) alteraciones del color y d) presencia de
inclusiones.
II. OBJETIVO
Identificación microscópica en el frotis de sangre periférica las alteraciones
morfológicas de los hematíes
III. COMPETENCIAS
a. Analiza microscópicamente las muestras e identifica las diferentes
alteraciones morfológicas de los hematíes.
b. Identifica parásitos hemáticos.
c. Relaciona las alteraciones morfológicas de los hematíes con diferentes
patologías.
IV. CONTENIDOS
1. Análisis microscópico de frotis de sangre periférica
2. Identificación de alteraciones morfológicas e inclusiones eritrocitarias.

66
3. Control da calidad del procedimiento.

V. METODOLOGIA
 Láminas portaobjetos teñidas con Wright.
 Aceite de inmersión
 Microscopio
 Agua destilada o desionizada
 Soporte para coloración
 Papel filtro
ALTERACIONES MORFOLÓGICAS DE LOS HEMATÍES
Dibujo del aspecto normal de los hematíes en el

frotis (comparar con las alteraciones morfológicas
eritrocitarias que aparecen a continuación). Estos
hematíes se consideran: normocíticos (tamaño
normal), normocrómicos (tinción normal) y sin
alteración de la forma.
ALTERACIONES EN EL TAMAÑO DE LOS HEMATÍES: ANISOCITOSIS
Anisocitosis: desigualdad en el tamaño de los

hematíes.
Microcitosis: hematíes de pequeño tamaño.

Diámetro inferior a 6 u. (Anemia por deficiencia de
hierro)

67
Macrocitosis: hematíes de mayor tamaño. Diámetro mayor a 9 u.(Deficiencias de

vit. B12 y Ácido fólico)
ALTERACIONES LA FORMA DE LOS HEMATÍES (POIQUILOCITOSIS):
Esquistocitos: hematíes fragmentados.

(Quemaduras graves, Anemia hemolítica con
eliptocitosis)
Dacriocitos: hematíes en forma de lágrima
Esferocitos: hematíes de forma esférica que

aparecen sin la zona central más clara. (anemia
hemolítica congénita y adquirida)
Ovalocitos: hematíes en forma de óvalo

.

68
Eliptocitos: hematíes en forma de elipse.

(Eliptocitosis. Frecuentemente se heredan con
carácter dominante. (Amemia mediterránea).
(Eliptocitosis, pueden estar presentes en sangre
normal
Drepanocitos: hematíes en forma de hoz.

(Hematíes falciformes). Aparecen en
presencia de hemoglobina S insoluble.
Dianocitos (Leptocitos): hematíes con aspecto de

diana por el aumento de la intensidad de tinción
central. (Anemias hemolíticas (A. falciforme,
Talasemia hemoglobinopatía C,
Estomastocitos: hematíes en forma de boca.

Procesos metabólicos provocando un defecto de
Membrana
 Cirrosis hepática
 Hepatopatía alcohólica
 Enfermedades hepáticas obstructivas
 Anemias hemolíticas

69
Equinocitos o hematíes crenados: hematíes espiculados. Cambios por

deshidratación, agentes hipertónicos
Hematíes en caso o keratocitos: hematíes en

forma de casco.
Acantocitos: hematíes en forma de espuela

(spur cells) Enfermedades hematológicas
congénitas.
Excentrocitos: anormalidad en la distribución

de la hemoglobina que se concentra en una de
los extremos de la célula. Anemia, Hemolítica,
déficit de G-6PDG, fármacos.
ALTERACIONES EN LA COLORACIÓN DE LOS HEMATÍES

70
Hipocromía: hematíes teñidos débil. Indican

escaso contenido de Hemoglobina.
Policromasia: hematíes jóvenes que se tiñen de

color grisáceo. Llamados también Eritrocitos
difusamente basófilos o policromatófilos.
INCLUSIONES INTRAERITROCITARIAS
Anillos de Cabot : estructura en forma de anillo o de ocho, vistas en anemias

megaloblásticas con reticulocitosis, se sugiere que se son microtúbulos que
quedan después de una mitosis anormal
Cuerpos de Howell-Jolly: son restos de cromatina. Suelen observarse después

de una esplenectomía o en el curso de una anemia megaloblástica en la que
constituyen un signo periférico de diseritropoyesis.

71
(A) punteado basófilo, (B) cuerpos Howell Jolly, (C) anillo de Cabot y (D) cuerpos
de Heinz
Parásitos: La forma más característica de parásitos intraeritrocitarios es el

paludismo o malaria con su característica forma anillada

1. Identificar microscópicamente poiquilocitosis.
2. Identificar microscópicamente Anisocitosis y Poiquilocitosis
3. Identifica las inclusiones eritrocitarias.
VII. EVALUACIÓN
1. Explique la relación de las diferentes alteraciones morfológicas de los
hematíes con patologías de la sangre.
2. Fundamente tres causas que explican la formación de células en diana.
3. Explique los pasos correctos en la evaluación microscópica del frotis
sanguíneo.

72
4. Fundamente la relación entre:

a. Estomastocitos y Reacciones a transfusión sanguínea.
b. Macrocitos y reticulocitos aumentados
c. Equinocitos y quemados
5. Explique a través de un esquema la formación de los cuerpos de Heinz
6. Mencione los criterios de calidad que optimicen el diagnóstico
microscópico.
VII. BIBLIOGRAFIA
Muñoz M. Morón C. Manual de procedimientos de laboratorio en técnicas
básicas de hematología. Lima, Instituto Nacional de Salud. Serie de Normas
Técnicas No 40.2005.
McDonald G. Atlas de Hematología.5ta ed. Barcelona: Panamericana; 2004.
 Rodak BF. Atlas de Hematología Clínica. Maryland. 3ra edición. Editorial
Panamericana. 2009.
PRÁCTICA N° 7-1
RECUENTO DE RETICULOCITOS
I. INTRODUCCION
Los reticulocitos, eritrocitos inmaduros, existen en la sangre en una proporción

de cinco a diez por mil hematíes. Su tamaño es el de los demás hematíes y se
caracteriza por contener una pequeña cantidad de ARN (ribosomas) formando
un retículo granulofilamentoso observable al ser teñido con colorantes llamados
vitales como son el azul de Cresil Brillante o el azul de metileno nuevo. La
cantidad de ARN es tanto menor cuanto más madura es la célula.
El recuento de reticulocitos es la técnica más simple actualmente disponible
para valorar la actividad eritropoyética de la médula ósea. Cuando una anemia
se acompaña de un elevado número de reticulocitos circulantes (reticulocitosis)
se considera regenerativa, mientras que cuando el número es normal o
disminuido se denomina arregenerativa.
En condiciones normales, los reticulocitos permanecen en la médula durante 2-
3 días y terminan su maduración en 24 horas, aproximadamente, una vez ya en
la sangre periférica.
El recuento de reticulocitos debe realizarse a partir de sangre total con
anticoagulante (EDTA) a ser posible, dentro de las 24 primeras horas de la
extracción cuando la sangre se conserva a temperatura ambiente. Si se
mantiene a 4º C, el recuento puede realizarse hasta 48 horas después de la
extracción.

73
II. OBJETIVO
Identificación y recuento de reticulocitos mediante coloración de Azul de Cresil
Brillante.
III. COMPETENCIAS
a. Aplicar correctamente la coloración supravital de Azul de Cresil brillante
para la identificación y recuento de Reticulocitos
b. Demuestra actitud crítica y reflexiva y orden durante el desarrollo del
procedimiento.
c. Aplica medidas de Bioseguridad.
IV CONTENIDOS
3. Tinción Supravital de Azul de Cresil Brillante
4. Interpretación de Resultados
5. Realizar el control da calidad de ambos procedimientos.
V. METODOLOGIA

 Láminas portaobjetos.
 Tubos de ensayos de 12 x 75 mm.
 Gradillas
 Parafilm
 Pipetas Pasteur con chupones / goteros.
 Solución de azul de cresil brillante (filtrada).
 Baño María
 Microscopio
Colorante:
 Azul de Cresil Brillante………………1.0 gr (* se puede emplear azul de metileno fresco)
 Solución salina (ClNa al 9%0)………100 ml
 Citrato de sodio……………………….0.4 gr
 Mezclar bien y filtrar antes de usar.
Procedimiento:
a) Colocar 3 gotas de colorante filtrado en un tubo

74
b) Añadir 3 gotas de sangre bien homogenizada. (En caso de valores muy

bajos de hematocrito debe colocarse doble cantidad de sangre total que, de
solución colorante).
c) Mezclar bien e incubar por 15´ a 37° C o a temperatura ambiente.
d) Realizar en láminas, frotices delgados y secar al medio ambiente.
e) Contar 1000 glóbulos rojos con objetivo de inmersión y contar los glóbulos
que contengan gránulos y filamentos como redes de color azul oscuro
(reticulocitos).
Resultados:
Reticulocitos % = Reticulocitos encontrados en 1000 glóbulos rojos

10
El recuento se efectúa contando en donde los eritrocitos estén distribuidos

homogéneamente. Se cuentan tantos campos como sean necesarios para
alcanzar la cifra de eritrocitos requerida, siendo 100-125 el número óptimo de
hematíes por campo de los cuales distinguimos cuales son reticulocitos para
luego expresar el
resultado como
porcentaje, siendo el
cien por ciento el
número total de
hematíes contado.
Este valor será válido si
se trata de una
concentración normal de
eritrocitos en sangre
total.
Por ello, cuando
disminuye el número de
eritrocitos como suele
suceder en la anemia, el
valor porcentual debe
corregirse según el hematocrito empleando la siguiente fórmula:
Reticulocitos corregidos (%) = reticulocitos observados (%) x Hto del paciente

Hto normal
(El hematocrito normal es el que le corresponde según edad y sexo).

75
En caso de anemia intensa, el número de reticulocitos circulantes suele ser

superior al que corresponde al grado de regeneración eritroblástica. Ello
obedece a que la anemia se acompaña siempre de un estímulo eritropoyético
compensador, que facilita una salida precoz de reticulocitos desde la médula a
la sangre periférica, y un acortamiento de su período de maduración
intramedular, lo que supone un aumento del período de maduración periférica.
Este fenómeno se caracteriza por la aparición en el examen morfológico de la
extensión de sangre de eritrocitos grandes (macrocitos) y tonalidad azulada
(policromasia)
Existe una relación inversa, aproximadamente lineal, entre el hematocrito y el
período de maduración periférica de los reticulocitos. De esta forma puede
calcularse otra magnitud de interés clínico denominada índice de producción
reticulocitaria (IPR) aplicando la fórmula siguiente:
IPR = Reticulocitos del paciente x Hto del paciente
Período de maduración en días x Hto normal
Un IPR >3 indica aumento de actividad eritropoyética medular (anemia
regenerativa), mientras que un IPR <2 indica escasa actividad eritropoyética
(anemia arregenerativa)
Relación entre la respuesta reticulocitaria y el grado de anemia
Hematocrito 45% 40% 35% 30% %25 20% 15%
Niveles de Hemoglobina (g/dl) 15.0 13.3 11.7 11.0 8.3 6.6 5.0
Recuento de reticulocitos (%) 1 2 5 10 15 20 30
Recuento de reticulocitos 1 1,8 4 7 8,3 9 10
corregido (%)
Tiempo de maduración estimado  1 día  2 día 3 días
Índice de reticulocitos 1 2 5 5 7,5 10 10
VALORES DE REFERENCIA
Valor relativo Valor absoluto

(%) (x109 /L)
Recién nacido (sangre de cordón) 3,2-6,0 110-330)
Niños y adultos jóvenes de 4 a 19 años 0,2-2,2 25-89

76
Adultos (20-50 años)

Mujeres 0,2- 2,5 25-86
Hombres 0,5-2,8 32-97

1. Realizar la tinción del Azul de Cresil Brillante.
2. Realizar el conteo y obtener el porcentaje y porcentaje corregido de
Reticulocitos según sea el caso.
3. Determina el Índice de producción reticulocitaria (IPR)
4. Interpretación de los resultados.
VII. EVALUACIÓN
6. Explique el procedimiento para realizar el recuento de Reticulocitos,
Reticulocitos corregido e IPR
7. Fundamente el probable resultado del recuento de reticulocitos,
reticulocitos corregidos e IPR en un paciente que padece de anemia
hemolítica por malaria, y recién nacido con cuadro eritroblatosis fetal.
8. Determine los errores detectados durante el procedimiento e indique las
correcciones aplicadas para cada caso.
11. BIBLIOGRAFIA
12. García B. Rubio F Carrasco M. Hematología I. 3 ra ed. Madrid: Thomson;
2007.
13. McDonald G. Atlas de Hematología.5ta ed. Barcelona: Panamericana; 2004.
PRACTICA Nº 9
ESTUDIO MICROSCÓPICO DE MÉDULA ÓSEA Y SANGRE PERIFÉRICA.

RECONOCIMIENTO DE LAS LÍNEAS CELULARES
LEUCOCITARIA Y MEGACARIOCÍTICA
I. INTRODUCCION
La médula ósea es el tejido donde se forma la sangre. La punción ósea tiene
como finalidad primordial realizar un examen morfológico de los elementos
celulares presentes en la médula ósea. Éste se realiza normalmente a partir
de una extensión del material medular obtenida por aspiración después de
practicada la punción en el hueso. La punción ósea suele realizarse casi

77
siempre a nivel del esternón (punción esternal), aunque a veces es preferible

realizarla en la tuberosidad posterior de la cresta ilíaca.
El estudio de la médula ósea puede realizarse a nivel morfológico y funcional.
En la presente práctica desarrollaremos el nivel morfológico que consiste en el
examen microscópico de los precursores hematopoyéticos.
Paralelamente se realizará el examen en sangre periférica para reconocer en
ella las formas maduras de las células que conforman la sangre.
II. OBJETIVO
Identificar en láminas coloreadas de médula ósea y sangre periférica las
diferentes líneas celulares de la sangre.
III. COMPETENCIAS
 Identificar, describe, diferencia los precursores celulares que conforman la
médula ósea normal.
 Ordena y clasifica las series: mieloide y eritroide.
 Identifica, describe, diferencia las células maduras en frotis de sangre
periférica.
IV. CONTENIDOS
6. Observación y reconocimiento microscópico de los precursores celulares en
frotis de médula ósea normal.
7. Observación y reconocimiento microscópico de células maduras en frotis de
sangre periférica.
V. METODOLOGIA
Materiales y equipos
 Laminas teñidas con Wright de médula ósea normal
 Láminas teñidas con Wright de sangre periférica normal.
 Microscopios
 Aceite de inmersión.
 Agua destilada
 Láminas portaobjetos.

78
Procedimiento:
 En una primera etapa la extensión del aspirado medular debe examinarse

mediante objetivo seco de poco aumento (X10).
 Ello permite apreciar la celularidad global.
 En una segunda etapa se procede al examen a gran aumento (X100), lo

que permitirá observar las características morfológicas de las diferentes
células.
FORMACIÓN DE PLAQUETAS (TROMBOPOYESIS):
La formación de las plaquetas comienza con el megacarioblasto que da
como resultado de procesos de duplicación sin división celular el
megacariocito. El megacariocito es una célula enorme que liberan
fragmentos de su citoplasma como protoplaquetas y plaquetas.

79
MIELOPOYESIS
FORMACIÓN DE GRANULOCITOS (GRANULOPOYESIS):

80
El mieloblasto es el estadio más precoz que se puede reconocer. Los

mieloblastos originas a los promielocitos, que se caracterizan por su
contenido en gránulos azurófilos primarios. Desde el estadio de mielocito,
la proporción relativa de gránulos primarios desciende mientras que se
incrementa la de gránulos específicos o secundarios. A partir del mielocito,
pasando por el metamielocito, el núcleo celular se segmenta
progresivamente hasta el segmentado maduro. La granulación secundaria o
específica es la responsable de que el granulocito sea un neutrófilo,
Eosinófilo o basófilo.
GRANULOCITOS:
Son leucocitos de 10-14 micras de diámetro. Su núcleo presenta diversas
lobulaciones, por esa razón también se conocen como polimorfonucleares,
y su citoplasma contiene granulación. En función del tipo de granulación se
diferencian los tres subtipos de granulocitos: neutrófilos (granulación fina
neutrófila), eosinófilos (granulación eosinófila: de color rosado oscuro) y
basófilos (granulación basófila: color azul oscuro). Los precursores
inmediatos se llaman cayados o bandas y se caracteriza por un núcleo
menos segmentado.
GRANULOCITOS SEGMENTADOS:
Según el tipo de granulación específica se identifican:

81
NEUTRÓFILOS: son células redondeadas, de tamaño entre 12 y 14 micras.

Su núcleo está segmentado en 2 a 5 lóbulos, unidos por unos finos puentes
cromatínicos. El citoplasma contiene numerosos gránulos neutrófilos que se
tiñen de color marrón con las coloraciones panópticas habituales, así como
cierto número de gránulos primarios o azurófilos difícilmente visibles al
quedar enmascarados por los neutrófilos.
EOSINÓFILOS: tienen un tamaño semejante a los neutrófilos, se
caracterizan por contener en su citoplasma gránulos acidófilos. Tienen
forma redondeada, ocupan todo el citoplasma de la célula y se tiñen de
color naranja o marrón anaranjado con las coloraciones panópticas. A
diferencia de los gránulos basófilos nunca se disponen por encima del
núcleo.
BASÓFILOS: son células redondeadas cuyo tamaño oscila entre 10 y
13micras. El núcleo de cromatina densa, posee generalmente dos o tres
lóbulos unidos por puentes cromatínicos, en ocasiones difíciles de visualizar
dada la presencia de las numerosas granulaciones basófilas propias de
esta célula. Los gránulos basófilos se disponen encima del núcleo. la
granulación basófila adquiere una coloración rojo-violácea oscura con las
tinciones panópticas y tiene una forma poligonal.
LINFOPOYESIS:
Durante el desarrollo de los linfocitos se reconocen los estadios de
linfoblasto y prolinfocito. La característica principal de la linfopoyesis es la
disminución progresiva del tamaño celular y el incremento de la relación
núcleo citoplasma. A diferencia de los que ocurre con el resto de células
sanguíneas, los linfocitos se multiplican y diferencias también fuera de la
médula ósea. Este proceso tiene lugar en los tejidos del sistema inmunitario
como respuesta a condiciones y estímulos inmunológicos determinados.
LINFOCITOS: Los linfocitos son las células de menor tamaño de la serie

blanca. Tienen generalmente un tamaño ligeramente mayor al de los
hematíes (varía entre 6-8 a 10-20 micras dependiendo de su estado de
activación). Morfológicamente se caracterizan porque tienen un núcleo
redondo, intensamente teñido, y un pequeño anillo de citoplasma agranular
ligeramente basófilo que lo rodea. La expansión del citoplasma varía en
función de la actividad de la célula. Generalmente predominan los linfocitos
pequeños, no obstante, podemos encontrar también linfocitos de mediano
tamaño o algunos más grandes.

82

83
FORMACIÓN DE MONOCITOS (MONOPOYESIS):

El monoblasto es la única célula precursora reconocible. La monopoyesis
se caracteriza por una reducción del tamaño celular y una indentación
progresiva del núcleo. Los monocitos circulan por la sangre durante uno o
dos días y después originan los macrófagos tisulares.
MONOCITOS: Son las células de mayor talla en la sangre periférica. Su

tamaño oscila entre 15 y 30 micras de diámetro, adquiriendo una forma
irregular, cuadrangular u oval. El núcleo, situado en posición central, es
voluminoso y adopta formas abigarradas en herradura, indentado o
doblado; la cromatina es densa y con aspecto como peinada en finas
franjas cromáticas. El citoplasma es amplio con ocasionales mamelones
periféricos, de color azul plomizo y contiene un número variable de gránulos
azurófilos. El citoplasma puede contener alguna vacuola.

84

85
5. Establecer diferencias morfológicas entre monocitos, neutrófilos y grandes

linfocitos.
6. Establecer las diferencias morfológicas entre metamielocitos y monocitos
7. Establecer las diferencias morfológicas entre mielocito en cayado y
neutrófilo maduro.
VII. EVALUACIÓN
9. Explique el procedimiento correcto para la evaluación de un frotis de
aspirado de médula ósea.
VIII. BIBLIOGRAFIA
Panamericana. 2009.
 Abbott Laboratorios. La morfología de sangre periférica y médula ósea
teñidos con el colorante Wright. 1977.
PRACTICA Nº 10
ALTERACIONES CUALITATIVAS DE LOS LEUCOCITOS- ESTUDIO DE

ASPIRADO DE MÉDULA ÓSEA.
I. INTRODUCCION
Las alteraciones benignas de los leucocitos pueden ser hereditarias o
adquiridas, y no poseen las características de la displasia o la malignidad. Los
cambios adquiridos se observan como respuesta a un conjunto de
circunstancias específicas y se interpretan como indicadores de esos estados
de enfermedad.
II. OBJETIVO
Identificación microscópica de las alteraciones cualitativas de los leucocitos
en extendidos de sangre periférica y/o médula ósea teñidos con Wright.
Interpretación y reporte según los protocolos establecidos.
III. COMPETENCIAS
 Identificar, describe, diferencia los precursores celulares que conforman la
médula ósea normal.
 Identifica las alteraciones cualitativas de los leucocitos en muestras teñidas
con Wright

86
d. Demuestra actitud crítica y reflexiva y orden durante el desarrollo del

procedimiento.
V. METODOLOGIA

 Laminas teñidas con Wright de médula ósea normal
 Microscopios
 Aceite de inmersión.
 Agua destilada
 Papel filtro.
Procedimiento:
 Anomalía de Perget-Huet
Aberración nuclear de los granulocitos
con hipo segmentación del núcleo.
Esta anomalía es autosómica
dominante. Las claves de
identificación son:
 Núcleos esféricos ovalados o

bilobulados.
 Cromatina dispuesta en
racimos
 La mayoría de las células tiene una apariencia similar.
 Hipersegmentación
“desviación a la derecha”
hipersegmentación observada en las
anemias megolobláticas (deficiencia de
Ácido Fólico) o deficiencia de B12). Los
núcleos de los neutrófilos pueden ser
retorcidos y deformados, en ocasiones
esféricos - abultaos

87
 Anomalía de Alder Reilly

La disminución de la degradación
mucopolisacárida provoca el depósito
de mucoplisacáridos (lípidos) en el
citoplasma de los neutrófilos que
teñidos con Wright se asemejan a
gránulos metacromáticos (violeta
oscuro a violeta) y puede ser difícil
distinguirlos de las granulaciones
tóxicas. Se agrupan en racimos
- Granulaciones tóxicas
Son gránulos primarios

hipertrofiados que le dan
aspecto hipergranular a los
citoplasmas especialmente de
los neutrófilos. Es la respuesta
al estrés causado por un
cuadro infeccioso o
inflamatorio. Tienen
importancia clínica porque
refleja un mal pronóstico.
 Cuerpo de Dohle
Se desarrollan en el citoplasma de los neutrófilos de pacientes con
infecciones o cuadros de estrés
son esféricos u ovalados con 1-5
u de diámetro y están
compuestos de cadenas
paralelas de ARN ribosómico. Su

88
color varía de gris a celeste. Se asocian con una gran variedad de lesiones
químicas y físicas, como quemaduras, infecciones, cirugía, embarazo.
 Vacuolización
Las vacuolas fagocíticas se
encuentran en los neutrófilos
en diversas situaciones. Se
observan ante la exposición
prolongada a medicamentos,
antibióticos, degradación de
bacterias.
Estudio de aspirado de médula ósea

Datos diagnósticos
 La extensión normal se caracteriza por un aspecto abigarrado de todos los

tipos de células mieloides y eritroides, que están presentes en proporción
de 3 – 4 mieloides a 1 eritroide (3 – 4:1).
 La maduración de las células de la médula ósea es progresiva, con

algunas células que muestran formas entre el estadio más joven y el más
maduro. Para fines diagnósticos no es importante el que las células
intermedias estén colocadas en una categoría más juvenil o más madura.
 La ausencia de una preponderancia de células inmaduras y la presencia de

un patrón mieloide y eritroide abigarrado con una relación M:E normal
significa la ausencia de discrasia sanguínea. Deben existir los
megacariocitos funcionantes suficientes sin núcleos ni citoplasmas
anormales. Morfológicamente, los eritrocitos han de tener el tamaño y
forma normales, así como las cualidades de tinción normal.
ELEMENTOS FORMES CELULARES NORMAL LÍMITES

(MEDIO%) %
CÉLULAS INDIFERENCIADAS 0.0 0.0 – 1.0
CÉLULAS DEL RETÍCULO 0.4 0.0 – 1.3
MIELOBLASTOS 2.0 0.3 – 5.0
PROMIELOCITOS 5.0 1.0 – 8.0

89
MIELOCITOS NEUTROFILO 12.0 5.0 – 19.0
MIELOCITO EOSINOFILO 1.5 0.5 – 3.0
MIELOCITO BASOFILO 0.3 0.0 – 0.5
METAMIELOCITO NEUTROFILO 25.6 17.5 – 33.7
METAMIELOCITO EOSINÓFILO 0.4 0.0 – 1.1
METAMIELOCITO BASIFILO 0.0 0.0 – 0.2
NEUTRÓFILO EN BANDA 12.2 9.5 – 15.3
EOSINOFILO EN BANDA 1.3 0.2 – 2.4
NEUTRÓFILO SEGMENTADO 20.0 11.6 – 30.0
EOSINOFILO SEGMENTADO2.0 2.0 0.5 – 4.0
BASOFILO SEGMENTADO 0.2 0.0 - 3.7
MONOCITOS 2.0 1.6 – 4.3
LINFOCITOS 10.0 3.0 – 20.7
MEGACARIOCITOS 0.4 0.0 – 3.0
PRONORMOBLASTO 0.5 0.2 – 4.2
NORMOBLASTO BASOFILO 1.6 0.25 – 4.8
NORMOBLASTO POLICROMATOFILO 10.4 3.5 – 20.5
NORMOBLASTO ORTOCROMATICO 6.4 3.0 – 25.0
PROMEGALOBLASTO 0 0
MEGALOBLASTO BASOFILO 0 0
MEGALOBLASTO POLICROMÁTICO 0 0
MEGALOBLASTO ORTOCROMATICO 0 0
RELACIÓN MIELOIDE / ERITROIDE (M/E) 3–4:1
Resultado del Mielograma
1. Presencia de células que normalmente no se encuentran en la médula: de

mieloma, de carcinoma, de Gaucher, de Niemmann-Pick.
2. Presencia de parasitos: leishmania, plasmodio, histoplasma.
3. Cociente mieloide: eritrocitos nucleados normales (2-5:1) o variable: médula
normal, anemia aplástica, anemia mielotísica.
90
4. Cociente mieloide: eritrocito nucleado disminuido (0,5-2:1). a) por

disminución de células mieloides: agrunalocitosis; b) por aumento de
eritrocitos nucleados: anemia hemolítica, anemia poshemorrágica, anemia
deficitaria de hierro, policitemia vera.
5. Cociente mieloide: eritrocitos nucleados aumentados (5+:1) por aumento de
células mieloides: leucemia mieloblástica aguda, leucemia mielocítica
crónica, reacciones leucemoides.
6. Aumento de células no mieloide: leucemias linfáticas agudas y crónica,
mononucleosis infecciosa, anemia aplástica.

1. Reconocimiento de las características morfológicas.
2. Apreciar la celularidad global.
3. Recuento porcentual de los elementos celulares
VII. EVALUACIÓN
Describa el proceso completo
VIII. BIBLIOGRAFIA
Panamericana. 2009.
PRACTICA Nº 11
CITOMETRIA HEMÁTICA - RECUENTO DE LEUCOCITOS
I. INTRODUCCION
Si bien es cierto los anticoagulantes tienen como función evitar la coagulación,
su uso inadecuado puede provocar una serie de alteraciones en los elementos
sanguíneos generando apreciaciones microscópicas alteradas en la

91
morfología celular. Por tanto, es importante conocer las ventajas y desventaja

de su uso y la relación exacta entre anticoagulante y sangre.
Con respecto a las coloraciones empleadas, todas muestran bondades
policromatófilas permitiendo describir numerosas características en las
células, pero debemos igual establecer tiempos y equilibrios adecuados para
obtener los tonos adecuados que favorezcan la visualización de las células y
por ende el diagnóstico microscópico.
II. OBJETIVO
Realizar el recuento de Leucocitos en cámara.
III. COMPETENCIAS
 Prepara las diluciones y realiza el recuento de leucocitos.
 Calcula el número de leucocitos a partir de los valores obtenidos
IV. CONTENIDOS
1. Preparación de las diluciones para el recuento de leucocitos.
2. Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer.
3. Identificar los errores procedimentales y aplicar las correcciones del caso.
V. METODOLOGIA
RECUENTO LEUCOCITARIO
Principio
La sangre anticoagulada se deposita en un líquido hipotónico que permite
evidenciar los leucocitos, manteniéndolos visibles, mientras que los eritrocitos son
hemolizados. El recuento del número de leucocitos o glóbulos blancos se expresa
por mm3 (milímetro cúbico).
Materiales, Equipos y Reactivos requeridos
 Microscopio.
 Tubos con EDTA
 Agujas y holder
 Hemocitómetro (Cámara de Neubauer).

92
 Pipeta de glóbulos blancos (de Thoma): Presenta cerca del extremo superior
una marca de 11, inmediatamente continúa una dilatación (bulbo) que contiene
una perla de color blanco mezcladora, luego sigue el tallo (extremo más largo),
el cual está dividido en 10 partes con 2 marcas: 1 acabando el bulbo y 0,5 a la
mitad del tallo.
 Boquilla para aspirar.
 Diluyente de Glóbulos blancos:
Solución de Turk
Ácido Acético Glacial…………..2.0 ml
Agua destilada…………csp…..100 ml.
Azul de metileno……………….. 1.0 ml
Procedimiento
1. Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar del dedo, se
procede a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos blancos hasta la marca
de 0,5 y a limpiar la punta con papel absorbente.
2. Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber hasta
la marca de 11 (no debe haber burbujas).
3. Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente (agitar
vigorosamente para provocar hemólisis) o en un rotador automático por 2 ó 3
minutos.
4. Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar limpia y
seca.
5. Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una
gota pequeña de esta solución en la cámara.
6. Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten.
7. Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrados grandes angulares.
Opcional:
1. Cuando se usa la pipeta automática, se toma 20 uL (0,02 mL) de sangre total

con anticoagulante o sangre capilar con anticoagulante y se diluye en un tubo
que contenga 380 mL de solución de Turk (aquí tenemos una dilución 1:20).
2. Se deja reposar 3 minutos para que las células sedimenten y se procede a

cargar la cámara con la misma pipeta usando 10ul.
La lectura se realiza en los campos 1, 3, 7 y 9 como está indicado en la figura.

93
1 3
7 9
Además de los leucocitos contados dentro de cada uno de los cuadrantes, se

deben contar todos los leucocitos que se encuentren adheridos en la línea

94
horizontal superior y vertical exterior, o de lo contrario, todos los leucocitos,

adheridos a la línea horizontal inferior y vertical interior.
Causas de error en el recuento en cámara de Neubauer.

El recuento manual de eritrocitos tiene un error del 7 - 10%, el cual puede
deberse a:
1. Errores de extracción: dilución o hemoconcentración. Coagulación parcial.
Hemólisis.
2. Mala homogeneización por agitación insuficiente de la sangre.
3. Utilización de material mal calibrado, sucio o húmedo.
4. Falta de suficiente agitación de la sangre diluida.
5. Cámara de Neubauer mal ajustada, sucia o mojada.
6. Llenado incompleto de la cámara de Neubauer.
7. Empleo de cubreobjetos deformable, no rígido.
8. Células mal distribuidas en el fondo de la cámara.
9. Errores del operador al realizar el recuento.
10. Errores al efectuar los cálculos.
Resultados
Nº de leucocitos x mm3 = leucocitos contados en 4 campos

altura x dilución x área
Reemplazando = leucocitos contados en 4 campos

1/10 x 1/20 x 4
N° de glóbulos blancos x mm3 = Nº leucocitos contados x 50
En consecuencia, en 1 mm3 (1ul) de sangre total habrá B x 50 leucocitos. El

número (N) de leucocitos que hay en un litro (L) de sangre total se calcula
multiplicando B x 5 x 107.
VALORES NORMALES DE LEUCOCITOS POR EDAD

GRUPO DE EDAD Leucocitos/mm3
Hombres y mujeres 4,000 – 10,000
Niños de 10 años 4,000 – 10,000
Niños de 03 años 4,000 – 11,000
Niños de 3 – 9 meses 4,000 – 15,000
Recién nacidos 10,000 – 12,0000
Corrección de valores para restar eritrocitos nucleados

95
Los normoblastos no se destruyen (lisis) en el líquido de dilución, por lo tanto,

pueden observarse al realizar el recuento leucocitario y confundirse con los
leucocitos, de tal manera que se debe emplear la siguiente fórmula:
Cálculo:
La concentración del número de normoblastos (por litro) es:
Número de normoblatos contados x número de leucocitos
100 + Nº de normoblastos contados
Ejemplo:
Si se cuentan 50 normoblastos y la concentración del número de leucocitos es
16 x 109 /L, la concentración del número de normoblastos será:
50 x 16 = 5,3 x 109 /L
100 + 50
y la concentración de leucocitos corregida será: 16 - 5,3 = 10,7 x 10 9 /L
En unidades tradicionales las concentraciones de normoblastos y leucocitos se

expresan por milímetro cúbico. En tales unidades el cálculo correspondiente al
ejemplo que se ha dado sería:
50 x 16 000 = 5300 / mm3

100 + 50
Recuento corregido de leucocitos = 16 000 - 5300 = 10700 / mm 3.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

La disminución de leucocitos se denomina leucopenia y se presentan en algunas
enfermedades infecciosas como ocurre en la angina agranulocítica o
granulocitopenia idiomática; también en algunos casos de anemia perniciosa,
clorosis, mal nutrición, fiebre tifoidea, fiebre de malta, etc.
El aumento en el número de leucocitos se denomina leucocitosis, que se debe a
la quimiotaxis y al estímulo de los órganos hematopoyéticos. La leucocitosis es
normal después de ejercicios violentos, emociones intensas, al final del embarazo.
En condiciones patológicas, se observa en las infecciones generales, la virosis,
necrosis, enfermedades del metabolismo, hemopatías, etc.
1. APLICACIÓN PRACTICA
1. Realizar cada uno de los alumnos el recuento de leucocitos de un paciente
en simultáneo (ambas cuadrículas) y comparar los valores obtenidos.
2. Interpreta los valores obtenidos.

96
2. EVALUACIÓN
1. Explique el proceso del recuento de leucocitos automatizado, establezca los
beneficios diferenciales con el método manual.
2. Explique la forma como se presenta el estudio de leucocitos en los
procedimientos automatizados.
VIII. BIBLIOGRAFIA
García B. Rubio F Carrasco M. Hematología I. 3ra ed. Madrid: Thomson; 2007.
Gomes O. Hemograma: cómo hacer e interpretar. 1 ra ed. Sao Paulo:
AMOLCA; 2011
Interpretación de los resultados
PRACTICA Nº 12
FÓRMULA LEUCOCITARIA
FÓRMULA NORMAL Y PATOLÓGICA-ESTUDIO DE CASOS
I. INTRODUCCION
La fórmula leucocitaria o recuento diferencial leucocitario (RDL) consiste en la
determinación del porcentaje que representa cada uno de los tipos de
leucocitos con respecto al total de ellos.
II. OBJETIVO
Realizar la fórmula leucocitaria en un frotis de sangre periférica.
III. COMPETENCIAS

97
e. Realizar correctamente el frotis la coloración.

f. Demuestra actitud crítica y reflexiva y orden durante el desarrollo del
procedimiento.
g. Interpreta los resultados
h. Trabaja en equipo promoviendo un mejor entendimiento.
IV. CONTENIDOS
Desarrollo de la fórmula leucocitaria e interpretación de los resultados
V. METODOLOGIA

 Láminas extensoras.
 Agua destilada
 Extendidos coloreados con Wright de sangre periférica
 Microscopio
 Papel filtro
Procedimiento:
f) Preparar el microscopio para que tenga el condensador alto y el diafragma
abierto.
g) Enfocar la preparación con el objetivo de 10x
h) Comprobar que la preparación es buena y elegir una zona en la que os
hematíes no estén superpuestos y los leucocitos se encuentren
uniformemente distribuidos.
i) Enfocar esa zona de la preparación con el objetivo de inmersión.
j) Observar esa zona de la preparación mientras se describe un recorrido en
forma de almenas o de greca.

98
Lectura de los resultados
1. Las células contadas se anotan mediante un lápiz y papel. Se ralizan

columnas que representen cada una un tipo de leucocito, y se traza una
raya en la columna correspondiente cada vez que se ve un leucocito.
2. Cuanto mayor es el número de leucocitos contados, más exacta es la
determinación. Sin embargo, en la práctica sólo se cuentan 100 leucocitos
o, como máximo, 200.
3. Si se encuentra un número mayor de linfocitos que de neutrófilos (en el
adulto) o más de un 10% de eosinófilos o más de un 12% de monocitos, la
fórmula leucocitaria se hace contando 200 leucocitos y dividiendo
posteriormente, el resultado obtenido entre 2.
4. Si se conoce el recuento de leucocitos /mm 3, se puede calcular el número

de cada uno de los tipos de leucocitos que está presente en 1 mm 3 de
sangre mediante la siguiente fórmula:
N° TL = N° Leucocitos /mm3 x % TL
100
N°TL = Número de un tipo de leucocito por mm3 de sangre.

%TL = Porcentaje que representa ese tipo de leucocito.
FORMULA PROPORCION VAL. VALORES VALORES

LEUCOCITARIA RELATIVA (%) ABSOLUTO ALTOS BAJOS
(mm3)
NEUTROFILOS 55 – 65 4,000 – 7,000 Neutrofilia Neutropenia
SEGMENTADOS
NEUTRÓFILOS 0–3 Desviación a la Desviación a la
EN CAYADO izquierda derecha
EOSINOFILOS 0.5 – 4 50 – 400 Eosinofilia Eosinopenia
BASOFILOS 0.5 – 1 50 – 100 Basofilia Basopenia
MONOCITOS 3–8 200 – 800 Monocitosis Monocitopenia
LINFOCITOS 35 – 35 1,500 – 3000 Linfocitosis Linfopenia

99
1Fórmula Leucocitaria
TIPO DE LEUCOCITO NUMERO ENCONTRADO

Neutrófilo en cayado
Neutrófilo segmentado
Eosinófilos
Basófilos
Monocitos
Linfocitos
Otros
TOTAL
2. Valoración de los resultados
En la sangre estudiada:
La proporción de leucocitos es normal
Hay una:
a. Neutrofilia
b. Neutropenia
c. Desviación a la izquierda
d. Desviación a la derecha
e. Eosinofilia
f. Eosinopenia
g. Basofilia
h. Basopenia
i. Monocitosis
j. Monocitopenia
k. Linfocitosis
l. Linfopenia
VII. EVALUACIÓN
1. Explique el proceso pre analítico y analítico de la fórmula
leucocitaria.
2. Determine los errores detectados durante el procedimiento e indique
las correcciones aplicadas para cada caso.
3. Explique la fórmula leucocitaria automatizada, establezca los beneficios
diferenciales frente al método manual.
VIII. BIBLIOGRAFIA
Panamericana. 2009.
 García Espinoza, Benjamín. Hematología. Madrid. Tercera edición. Editorial
Paraninfo.2003.
100
PRACTICA Nº 13
CITOMETRÍA HEMÁTICA - RECUENTO DE PLAQUETAS
I. INTRODUCCION
La hemostasia es un proceso constituido por mecanismos biológico
interdependientes cuya finalidad es prevenir la extravasación sanguínea
espontánea, evitar la hemorragia excesiva a nivel de los vasos lesionados y
mantener la fluidez de la sangre circulante.

101
En esquema, el proceso de la hemostasia puede resumirse como sigue. Al

producirse una lesión vascular, el vaso afectado se contrae transitoriamente
disminuyendo el paso de la sangre a su través (reacción vascular). A
continuación, las plaquetas circulantes se adhieren rápidamente a la colágena
del tejido subendotelial, que se ha exteriorizado como consecuencia de la
lesión, y liberan adenosin-difosfato (ADP), el cual facilita la agregación de
aquellas y la formación de un trombo plaquetario (función plaquetaria). El
trombo plaquetario detiene momentáneamente la hemorragia, mientras es
reforzado por la formación de fibrina (coagulación sanguínea)
II. OBJETIVO
Realizar el recuento de plaquetas en cámara de Neubauer.
III. COMPETENCIAS
 Prepara las diluciones y realiza el recuento de plaquetas.
 Calcula el número de plaquetas a partir de los valores obtenidos
IV. CONTENIDOS
3. Preparación de las diluciones para el recuento de plaquetas.
4. Recuento de plaquetas en cámara de Neubauer.
5. Estimación del número de plaquetas en frotis de sangre periférica.
6. Identificar los errores procedimentales y aplicar las correcciones del caso.
V. METODOLOGIA

 Equipo de toma de muestra.
 Cámara de Neubauer.
 Solución de procaína
 Solución de Rees Ecker
 Pipetas automáticas de 100 a 1000 mL y 10 a 100 mL.
 Cámara húmeda.
 Tubos al vacío con EDTA
 Tubos de plástico
 Gradillas
 Microscopio convencional.

102
 Bandeja de coloración.
Solución de Rees Ecker

Citrato de sodio…………………3.8 g
Formaldehído (40%)……………0.2 ml
Azul de cresil brillante………….0.05 g
Agua destilada…………………100 ml
Mezclar los reactivos en agua destilada y completar hasta llegar a un litro.

Guardar en refrigeración a 4º C.
Procedimiento (Método de Ress Ecker):
1. Mezclar bien la muestra de sangre obtenida con EDTA.

2. Hacer una dilución de 20 µl de sangre total con 4.0 ml de solución de Rees
Ecker en un tubo de plástico de 12 x 75 (dilución 1/200).
3. Dejar en reposo por 15 minutos en una gradilla.
4. De esta dilución, llenar en cámara de Neubauer.
5. Dejar en reposo por 15 minutos en cámara húmeda.
6. Enfocar con objetivo de 40x y contar las plaquetas en el retículo central de 1
mm2 cuadrado. Contar 5 campos (igual que para los hematíes)
7. Calcular el número total de plaquetas según la fórmula que se lee a

continuación:
Resultados:
Nº de plaquetas x mm3= plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeños

altura x dilución x área
Reemplazando = plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeños

1/5 x 1/10 x 1/200
= plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeños
1/10000
= plaquetas contadas x 10000
150 000 - 450 000 plaquetas/mm3

103
El número P de plaquetas que hay en un litro (L) de sangre total se

calcula multiplicando: P x 1000 x 10 6 para expresarlo en litros (10 9 /L)
según el SI de unidades.
Recuento en lámina (valor estimado de plaquetas)
1. A partir de la muestra obtenida con EDTA y previa homogenización, se

realizan extendidos que se tiñen con el colorante de Wright de la forma
convencional. Se debe filtrar el colorante antes de usarlo para evitar la
formación de precipitados que podrían generar error.

104
2. Se busca zonas donde las plaquetas se encuentren uniformemente

dispersas, Se sugiere los bordes de los extendidos.
3. Se cuentan 10 campos con objetivo de 100x y se multiplica por 1000 que
es la fórmula convencional para recuento de plaquetas.
ZONA DE LECTURA DE PLAQUETAS
150 000 - 450 000 Plaquetas/mm3
Causas de aumento (trombocitosis)

La trombocitosis puede ser secundaria a un estímulo medular
inespecífico (posthemorrágica o tras una crisis hemolítica),
paraneoplásica o posquirúrgica. Es especialmente
importante la que se produce tras la esplenectomía.
La trombocitopenia esencial aislada es muy rara, pero puede
aparecer asociada a trastornos mieloproliferativos. En estos
casos, las plaquetas pueden ser funcionalmente inoperantes
y cursar, paradójicamente, con hemorragias.
Causas de disminución (Trombopenia)

Es fundamental descartar que no se haya producido un error
de lectura como consecuencia de una agregación parcial de

105
las plaquetas en la muestra estudiada. Especialmente

llamativos son los casos en los que existe una agregación
precisamente en presencia de EDTA, que es el
anticoagulante utilizado para mantener incoagulable la
muestra de sangre en la que se ha de realizar la lectura.
Las verdaderas trombopenias pueden obedecer a una causa
central (generalmente asociada a leucopenia y anemia),
periférica (inmunológica, secuestro, consumo) o mixta
(vírica). La púrpura trombocitopénica idiopática es
relativamente frecuente.
TIEMPO DE SANGRÍA: Método de Ivy
Principio
Mediante esta prueba se estudia la adhesión de las plaquetas al endotelio
vascular y su capacidad para formar el trombo plaquetario que detiene la
hemorragia a nivel de un vaso de pequeño calibre. Consiste, por tanto, en
realizar una pequeña herida y medir el tiempo que tarde en dejar de sangrar.
Materiales
 Esfingomanómetro (tensiómetro).
 Lanceta (dispositivo descartable estandarizado para tiempo de sangría).
 Cronómetro.Papel Wathman Nº 1, cortado en círculos.
 Vendita compresiva. Algodón y alcohol.
Técnica
1. Exponer el antebrazo del paciente y escoger una zona libre de vénulas,
hematomas, heridas y otros.
2. Limpie con alcohol la zona escogida.
3. Coloque el tensiómetro en el brazo del paciente y regúlelo a 40 mm Hg.
4. Se extrae la lanceta de su reservorio estéril y se quita el seguro. No deben
pasar más de 30 a 60 segundos entre la inflada del tensiómetro y la
producción de la incisión.
5. Se presiona el disparador al mismo tiempo que el cronómetro y un
segundo después retire el dispositivo.
6. Cada 30 segundos secar con el papel de filtro, no tocar los bordes de la
incisión para no interferir con el tapón plaquetario. Se anota el tiempo que
tarda en cesar la hemorragia, lo que corresponde al tiempo de sangría.

106
Limpie con alcohol la Realice la incisión Cada 30 segundos secar

zona escogida con el papel filtro
Interpretación del resultado
El valor normal del tiempo de sangría según esta metodología es de 2 a 8

minutos, por lo que los valores superiores a 10 minutos pueden ser ya
considerado patológico. Cuando el tiempo se alarga más de 20 minutos,
puede detenerse la hemorragia aplicando sobre la herida una compresa de
algodón o gasa estéril si es muy profunda.
Limitaciones
Si existe trombocitopenia menor de 50 000/mm3 el tiempo debe ser
prolongado.
Debe tenerse cuidado de que el paciente no haya ingerido medicamentos que
interfieran la función plaquetaria, como aspirina u otros, hasta 7 a 8 días antes
de la prueba.
Interpretación
El tiempo de sangría por este método es la mejor valoración de la función
plaquetaria. La prolongación del tiempo en esta prueba se encuentra en
trombocitopenias o las enfermedades de alteración funcional de las plaquetas,
como son la enfermedad de Von Willebrand, la trombastenia de Glasmann, el
Síndrome de Bernard-Soulier, la enfermedad de Storage Pool y otras. Mide in
vivo la adhesión, la agregación y la liberación plaquetaria como respuesta del
organismo a la lesión vascular.
Al realizar esta prueba, debe tenerse siempre en cuenta que la ingesta previa
de ácido acetilsalicílico puede alterar los resultados.
TIEMPO DE SANGRÍA: Método de Duke
Con una lanceta se hace una pequeña incisión en el lóbulo de la oreja. La

sangre fluye por esta incisión y se mide el tiempo que transcurre hasta que se
detiene el sangrado.
Este ensayo se lleva a cabo:
 Para diagnosticar ciertos padecimientos hemorrágicos.
 Antes de realizar operaciones quirúrgicas.
 Antes de efectuar una punción en el hígado o el bazo.

107
Materiales
1. Una lanceta estéril.

2. Algodón y alcohol
3. Filtro de papel (o papel secante).
4. Un cronómetro o, en su lugar, un reloj con segundero.
Método
1. Limpie con suavidad el lóbulo de la oreja utilizando una pieza de algodón

embebida en alcohol. No frote. Déjese secar.
2. al mismo tiempo cronometrar. La sangre deberá fluir libremente sin que se
necesite exprimir el lóbulo de la oreja.
3. Después de 30 segundos. Recoja la primera gota de sangre en una
esquina del papel secante. No toque la piel con el papel.
4. Espere otros 30 segundos y recoja la segunda gota de sangre con el papel
secante, un poco más adelante de la primera.
5. Cuando las gotas de sangre dejen de fluir, detener el cronómetro (o anote
el tiempo transcurrido según el reloj, o contar el número de gotas recogidas
en el papel secante y multiplicarlo por 30 segundos
Previa asepsia, haga la

Resultados Cuando
Espere
incisión en el lóbulo deotros
las gotas de sangre
la 30 segundos y recoja
dejen de fluir, detener
cierta minuto más de sangre con el
Comunique el tiempo de sangrado redondeándolooreja al con
medio la segunda gota
cronómetro.
papel secante ,
cercano. profundidad,
Observaciones
Si el tiempo de sangrado se prolonga examine una extensión de sangre teñida
según el método de Wright para observar si las plaquetas son escasas.
Interpretación del resultado

108
El valor de referencia del tiempo de sangría según este método es de 1 a 4

minutos.

4. Realizar las diluciones empleando la solución de Oxalato de Amonio y Rees
Ecker.
5. Realizar el recuento para cada caso y anote las diferencias observadas
microscópicamente.
6. Interpretación de los resultados.
VII. EVALUACIÓN
1. Explique el proceso del recuento de plaquetas automatizado, establezca
los beneficios diferenciales con el método manual.
2. Determine los errores detectados durante el procedimiento e indique las
correcciones aplicadas para cada caso.
3. Defina y explique las constantes incorporadas en los equipos
automatizados para el estudio de las plaquetas: Plaquetocrito. VPM, y
otros.
4. Esquema del fundamento de del tiempo de Sangría (Ivy)
VIII. BIBLIOGRAFIA
1.García B. Rubio F Carrasco M. Hematología I. 3 ra ed. Madrid: Thomson;
2007.
2.Gomes O. Hemograma: cómo hacer e interpretar. 1 ra ed. Sao Paulo:
AMOLCA; 2011
3.Gonzales De Buitrago J. Técnicas y métodos de Laboratorio Clínico. 3 ra. Ed.
Barcelona: Masson; 2010.
PRACTICA Nº 14
HEMOSTASIA
TIEMPO DE COAGULACIÓN - TIEMPO DE PROTROMBINA (PT) - TIEMPO DE

TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA)
I. INTRODUCCION
Principios Generales
Cuando se realizan pruebas de hemostasia se debe considerar los cuidados
comunes a toda prueba de laboratorio. Entre estos tenemos:

109
1. Uso de anticoagulantes indicados: El tipo y la proporción del anticoagulante

deben ser evaluados para cada muestra.
2. Luego de centrifugar la sangre, el plasma obtenido es activado por contacto
con el vidrio. Esto puede alterar algunas pruebas, por ello se sugiere usar
recipientes de superficies “no humedecibles “, como el plástico o el vidrio
siliconizado.
3. El material debe estar escrupulosamente lavado, ya que residuos de proteínas
pueden contener sustancias tromboplásticas, enjuagarse con agua destilada
varias veces
4. Las pruebas deben realizarse lo antes posible y, si hay demora, las muestras
se podrán en congelación a 4 ºC. La conservación prolongada del plasma
antes de realizar la prueba conduce a un descenso de la actividad de los
factores lábiles (V y VIII), por tanto, el plasma debe ser analizado dentro de las
dos o cuatro horas de practicada la extracción.
5. Las pruebas se realizan siempre en duplicado y usando controles. Las
muestras controles serán obtenidas usando la misma técnica empleada para
obtener las muestras problema (pool de plasmas) o en forma comercial.
II. OBJETIVO
Desarrollar el Perfil de Coagulación para evaluar la Hemostasia primaria y
secundaria.
III. COMPETENCIAS
a. Utiliza correctamente los anticoagulantes para la obtención de
muestras sanguíneas; realiza los procedimientos correctos durante la
fase pre analítica.
b. Realiza el control de calidad de los procedimientos.
c. Aplica medidas de Bioseguridad.
IV. CONTENIDOS
1. Tiempo de sangrado, método de Ivy, Duke.

2. Tiempo de coagulación, método de Lee White.
3. Tiempo de Protrombina (TP)
4. Tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA)
V. METODOLOGIA
TIEMPO DE COAGULACIÓN DE SANGRE TOTAL Método de Lee- White

Principio
Se observa la formación del coágulo en tubos de vidrio en condiciones
estandarizadas; esta prueba mide el mecanismo intrínseco de la coagulación.

110
Materiales
 Utensilios y materiales para punción venosa.
 Un baño maría a 37 ºC,
 Dos tubos de ensayo limpios, de 10 x 75 mm, del mismo calibre, marcados
en el nivel de 1 ml.
 Cronómetro.
Método
1. Mediante una jeringa de material plástico extraiga poco
más de 3 ml de sangre venosa, puncione la vena
rápidamente, de la manera adecuada. Cronometrar el
tiempo desde el momento que la sangre entre a la
jeringa.
2. Llenar cada uno de los tubos de
ensayo con 1 ml de sangre. Taponar con parafilm.
Colocar en baño maría a 37 ºC.
3. Después de 3 a 5 minutos sacar el primer tubo del baño
maría. Inclinar hacia un plano de 90º en
rotación a intervalos de 30 segundos
hasta que la sangre coagule (la sangre
no fluye cuando el tubo está en posición horizontal)
4. Examine el segundo tubo inmediatamente después que
haya coagulado la sangre del primero, lo que por lo
general es inmediato. Cronometrar. Se notifica como el
tiempo de coagulación la media de los dos tubos.
Resultados
El tiempo normal de coagulación en tubo es de 5 a 15 minutos a 37 º C.
Interpretación
El tiempo de coagulación está prolongado cuando hay severa deficiencia de

todos los factores de coagulación, excepto en la trombocitopenia y deficiencia
de factor VII o XIII. También está prolongado en presencia de heparina o
anticoagulantes circulantes endógenos. Un tiempo de coagulación normal no
excluye un desorden de la hemostasia.
Es una prueba muy poco dolorosa y es prolongada apenas cuando la
deficiencia es severa.
El factor deficiente puede estar a 5% de lo normal sin afectar la prueba.

111
VII. EVALUACIÓN
1. Fundamente, esquematice y explique los procedimientos automatizados
para el estudio del perfil de coagulación: coagulómetros.
2. Realice una lista de posibles errores e interferencias pre analíticos y
Analíticos que alteren los resultados del perfil de coagulación.
2. Proponga las soluciones
VIII. BIBLIOGRAFIA
 San Miguel, Jesús. Cuestiones en Hematología. Barcelona. Editorial
Harcout Brace. 2002.
 Cuellar, Francisco. Fundamentos de Medicina. Hematología. Medellín 6 ta
edición. CIB, 2004.
TROMBOPLASTINA CÁLCICA PARA LA DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE

PROTROMBINA O TIEMPO DE QUICK EN UNA ETAPA (SOLUPLASTIN)
SIGNIFICACION CLINICA
El tiempo de protrombina o Tiempo de Quick es el test de screening de mayor

importancia clínica en la evaluación de desórdenes de la vía extrínseca de la
coagulación. Su sensibilidad a alteraciones cuali y cuantitativas de factores de la
vía extrínseca y común, le permite ser empleado en: - Detección de deficiencias
simples o combinadas de factores, por alteraciones hereditarias o adquiridas
(hepatopatías, deficiencia de vitamina K, etc.). - Estudios prequirúrgicos.
Determinación específica de la actividad de factores: II, V, VII y X. - Monitoreo de

112
terapia con anticoagulantes orales, por su sensibilidad a factores vitamina K

dependientes (II, VII y X).
FUNDAMENTOS DEL METODO: El método se basa en la medición del tiempo de

formación del coágulo de fibrina, al agregar una tromboplastina cálcica a un
plasma citratado.
REACTIVOS.
Reactivo A: liofilizado de tromboplastina de cerebro de conejo con una
concentración final de 10 mM de cloruro de calcio.
INSTRUCCIONES PARA SU USO:
- Abrir el vial quitando el precinto metálico y retirando lentamente el tapón de
goma para evitar pérdidas del material.
- Agregar el volumen de agua bidestilada o desionizada indicado en el
rótulo.
- Tapar, dejar reposar 30 minutos a temperatura ambiente y luego
homogeneizar la solución por agitación suave antes de su uso.
- Volver a homogeneizar cada vez que se emplee
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO

- Reactivo A: estable en refrigerador (2-10o C) hasta la fecha de vencimiento
indicada en la caja.
- Reactivo A reconstituido: una vez reconsitutuido el reactivo es estable 5
días en refrigerador (2-10°C). No congelar.
MUESTRA
Plasma citratado
a) Recolección: obtener sangre cuidadosamente (evitando estasis o trauma) y
colocar en un tubo con anticoagulante en proporción 9 + 1 exacta (ejemplo: 4,5
ml de sangre + 0,5 ml de anticoagulante). Mezclar suavemente. Centrifugar
durante 15 minutos a 2500g y separar el plasma antes de los 30 minutos. Es
recomendable efectuar la extracción con jeringas plásticas.
b) Sustancias interferentes conocidas: - No debe emplearse EDTA o heparina
para obtener plasma. Las contaminaciones, visibles o no, son causa de
tiempos falsamente prolongados. Hemólisis y lipemias visibles dificultan la
medición fotoóptica de los resultados.
c) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el plasma debe mantenerse a
temperatura ambiente hasta el momento de efectuar el ensayo (no conservar a
2-10ºC) Este período no debe prolongarse más de 4 horas. En caso de no
procesarse en este lapso, el plasma puede congelarse hasta 2 semanas a -20o
C. En este caso la muestra debe ser congelada inmediatamente y deberá ser
descongelada rápidamente a 37ºC, no prolongando más de 10 minutos este
período.

113
MATERIAL REQUERIDO
- Tubos de 13x100.
- Pipetas y micropipetas para medir los volúmenes indicados.
- Baño de agua a 37 ± 1o C.
- Cronómetro.
PROCEDIMIENTO
1. Precalentar el Reactivo A: a 37ºC (no más de 20 minutos)
2. 2- En un tubo precalentado a 37ºC, colocar 100 µl de muestra. Incubar 1
minuto en baño de agua a 37ºC.
3. Disparar el cronómetro con el agregado de 200 µl del Reactivo A
precalentado. Previo al tiempo estimado de coagulación, sacar el tubo del
baño, deslizando suavemente el contenido líquido desde el fondo hasta la
mitad del tubo y detener el cronómetro en el momento de aparición del
coágulo.
4. Registrar el tiempo de formación del coágulo.
5. Repetir la determinación y promediar el resultado para cada muestra. Si la
diferencia entre los replicados es mayor a 5%, se aconseja repetir el
procedimiento

Los resultados pueden expresarse de distintas formas:
1- Tiempo de Protrombina (TP) en segundos.
2- Porcentaje de Actividad Protrombínica (%TP)
3- Según la World Health Organization (WHO), los resultados de TP
(segundos) de pacientes bajo tratamiento con anticoagulantes orales en
fase estable, deben ser expresados en INR o RIN (Razón Internacional
Normatizada) para independizarse del sistema de medición
(reactivo/Instrumento) utilizado, a través de la siguiente fórmula:
RIN: (TP paciente / MNPT) ISI
Donde:
- TP paciente: media del Tiempo de Protrombina del paciente en
segundos.
- MNPT: media geométrica del TP de la población normal adulta. Se
calcula para cada lote de reactivo con al menos 20 muestras de
plasmas frescos de individuos adultos sanos.
- ISI: índice de sensibilidad Internacional. Es obtenido para cada
sistema de medición: reactivo/instrumento, a través de las
recomendaciones de la WHO.
VALORES DE REFERENCIA:
- 70 - 120%

114
- 10 -14 segundos (rango orientativo - depende del sistema de medición)

En general se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios intervalos
de referencia, dentro de su población de pacientes. Los rangos terapéuticos de
RIN pueden variar según las indicaciones de la terapia con anticoagulantes orales.
DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA

(APT/TTPA TEST)
SIGNIFICACION CLINICA
El tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT), es una prueba sensible a la
deficiencia de factores procoagulantes del plasma, así como a la presencia de
ciertos inhibidores de la coagulación. Sirve para detectar anormalidades en la vía
intrínseca de la coagulación, como son los factores necesarios para la formación
del activador intrínseco de la protrombina, o sea los factores VIII, IX, XI y XII.
También detecta deficiencias severas de los factores II, V, X y fibrinógeno, no
siendo así con los trastornos plaquetarios, las deficiencias de los factores VII y XIII
ni los problemas vasculares. La rapidez, sencillez y reproducibilidad de la prueba
la hacen muy adecuada para el control de la terapéutica anticoagulante por
heparina. También permite la identificación rápida de hemofílicos en potencia, a fin
de poder someterlos a tratamientos preventivos prequirúrgicos y evitar problemas
hemorrágicos.
FUNDAMENTOS DEL METODO El ensayo se basa en la medida del tiempo que
tarda en coagular un plasma descalcificado, colocado en un baño a 37o C y en
presencia de un exceso de cefalina, activador y calcio.
REACTIVOS
- Reactivo A: viales conteniendo cefalina con tierra de diatomeas como
activador particulado.
- Reactivo B: solución de cloruro de calcio 0,025 mol/l.
INSTRUCCIONES PARA SU USO
- Reactivo A, preparación: Abrir un vial quitando el precinto metálico y
retirando lentamente el tapón de goma para evitar pérdidas del material.
- Agregar el volumen de agua bidestilada o desionizada indicado en el
envase.
- Verificar que la temperatura del agua empleada no sea mayor a 37o C.
- Tapar y agitar suavemente hasta obtener una suspensión homogénea.
Volver a homogeneizar cada vez que se emplee.
- Reactivo B: solución de cloruro de calcio, listo para usar.
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO
Reactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10o C) hasta la fecha de
vencimiento indicada en la caja.
- Reactivo A: una vez reconstituido es estable durante 14 días en refrigerador
o 30 días congelado (-20o C). El congelado y descongelado sólo puede

115
realizarse una vez. Por esto se recomienda dividirlo en porciones, de

acuerdo a las necesidades de trabajo.
MUESTRA
Plasma
1. Recolección: obtener sangre cuidadosamente (evitando estasis o trauma) y
colocar en un tubo con anticoagulante en proporción 9 + 1 exacta (ejemplo: 4,5
ml de sangre + 0,5 ml de Anticoagulante TP de Wiener lab.). Mezclar
suavemente. Centrifugar y separar el plasma antes de los 30 minutos. Es
recomendable efectuar la extracción con jeringas plásticas.
2. Sustancias interferentes conocidas:
- Las contaminaciones, visibles o no, son causa de tiempos falsamente
prolongados.
- No debe emplearse EDTA o heparina para obtener plasma. Referirse a la
bibliografía de Young para los efectos de las drogas en el presente método.
3. Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el plasma debe mantenerse en
refrigerador (2-10o C) hasta el momento de efectuar la prueba. Este período no
debe prolongarse más de 4 horas. En caso de no poder procesarse en este
lapso, el plasma debe congelarse a -20o C. Este procedimiento al igual que el
descongelado debe realizarse con rapidez (sumergiendo en baño a 37o C)
previo a la determinación. La muestra debe conservarse hasta el momento de
su análisis en tubos plásticos para minimizar los efectos de activación por
contacto que pueden ocurrir con los tubos de vidrio.
MATERIAL REQUERIDO
- Tubos de 13X100
- Pipetas y micropipetas para medir los volúmenes indicados.
- Baño de agua a 37°C.
- Cronómetro. - Fuente luminosa, para la observación del coágulo
PROCEDIMIENTO
Precalentar el Reactivo B antes de realizar la prueba en baño de agua a 37o C. En
un tubo de 13X100 colocar:
1. Muestra (plasma desconocido o control) 100 ul
2. Reactivo A (homogenizado) 100 ul
Mezclar e incubar 3 minutos a 37o C, luego agregar:

116
3. Reactivo B (a 37o C) 100 ul

Disparar simultáneamente un cronómetro. Agitar brevemente para homogenizar el
contenido, mantener en el baño unos 25 segundos. Luego sacar el tubo del baño,
inclinar suavemente una vez por segundo y detener el cronómetro en el momento
de la formación del coágulo. Tomar nota del tiempo de coagulación

Los resultados pueden expresarse de distinta forma:
1. Como tiempo de tromboplastina parcial activada en segundos.
2. Como relación entre el tiempo obtenido con el desconocido y el de un plasma
control.
VALORES DE REFERENCIA
El intervalo de valores observados en individuos normales oscila entre 33-48
segundos.
Se considera fuera de lo normal valores que difieran en más de 6 segundos de un
plasma control.
Es recomendable que cada laboratorio procese un plasma control con cada lote de
reactivos empleado y que correlacione los valores obtenidos para los pacientes
con el de dicho plasma, haciendo constar estos resultados en el informe.
PRACTICA Nº 15
HEMOGRAMA COMPLETO – PERFIL DE COAGULACIÓN
I. INTRODUCCION
El alumno aplicará procedimientos de laboratorio tanto en la fase pre analítica
y analítica para desarrollar un Perfil Hematológico completo y un Perfil de
coagulación, interpretará los resultados. Finalmente emitirá un resultado.
II. OBJETIVO
Realizar un Perfil Hematológico completo y Perfil de coagulación.
III. COMPETENCIAS
d. Realizar correctamente el Perfil Hematológico completo y Perfil de
coagulación.
e. Demuestra actitud crítica y reflexiva y orden durante el desarrollo del
procedimiento.
f. Interpreta los resultados
g. Asume su labor profesional con sentido ético.

117
IV. CONTENIDOS
Perfil Hematológico completo y Perfil de coagulación.
V. METODOLOGIA

 Equipo de Toma de muestra
 Lancetas
 Tubos con EDTA
 Tubos con citrato 3.8%
 Capilares con heparina y sin
heparina
 plastilina
 Láminas extensoras.
 Agua destilada
 Microscopio
 Papel filtro
 Micropipetas de 10 – 100 µl
 Micropipetas de 100 – 1000 µl
 Tubos de 10 x 75 + gradillas
 Líquido de dilución para
hematíes, leucocitos,
plaquetas
 Reactivo de Hemoglobina
(Drabkin)
 Baño maría
 Espectrofotómetro
 Tromboplastina cálcica

1
HEMATIES mm3 3,800,000 – 6,300,000 /mm3

LEUCOCITOS mm3 4,000 – 10,500 /mm3
HEMATOCRITO % 38 – 54 % (HOMBRES)
36 – 46 % ( MUJERES)
38 – 44 % ( NIÑOS)
HEMOGLOBINA gr/dl 13 – 18 gr/dl (HOMBRES)
12 – 16 gr/dl ( MUJERES)
11.5 – 14.5 gr/dl ( NIÑOS)
VCM µm3 80 – 92 µm3
HCM pg 27 – 32 pg
CHCM pg 23 – 36 pg
PLAQUETAS mm3 150,000 – 450,000 / mm3
FORMULA LEUCOCITARIA
MIELOCITO 0% 0 / mm3
METAMIELOCITO 0% 0 / mm3
ABASTONADOS 0– 5 % 0 - 700 / mm3
SEGMENTADOS 55 – 75 % 1,800 - 7,000 / mm3
EOSINOFILOS 0- 4 % 0 - 450 / mm3
BASOFILOS 0- 2 % 0 - 200 / mm3
MONOCITOS 0-8 % 0 - 800 / mm3
LINFOCITOS 25 - 35 % 1,000 - 4,800 /mm3
0%
ANISOCITOSIS
POIQUILOCITOSIS
HIPOCROMIA
TIEMPO DE SANGRIA (IVY)

TIEMPO DE COAGULACIÓN
TIEMPO DE PROTROMBINA
APLICACIÓN PRÁCTICA
Aplicar los diferentes procedimientos para el desarrollo del Perfil Hematológico y
Perfil de coagulación
VII. EVALUACIÓN
1. Explique el proceso pre analítico y analítico del análisis realizado.
2. Determine los errores detectados durante el procedimiento e indique
las correcciones aplicadas para cada caso.
VIII. BIBLIOGRAFIA
 Mazza J. Hematología Clínica. 3ra ed. Madrid: Marbán; 2004.
F-GA-04A-3 Rev. Marzo 2007

2
 Gil J. Hematología sin microscopio. El hemograma en la práctica clínica.

Barcelona: Masson; 2004.
 Cuellar F. Fundamentos de Medicina. Hematología. 6 ta ed. Medellín: CIB;
2004
 García Espinoza, Benjamín. Hematología. Madrid. Tercera edición. Editorial
Paraninfo.2003.
F-GA-04A-3 Rev. Marzo 2007

Guia de Hematologia 2019 II

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1

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11. AUTOMATIZACIÓN EN HEMATOLOGÍA

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IV. APLICACIÓN PRACTICA

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OBTENCIÓN DE MUESTRAS SANGUNEAS. PUNCIÓN VENOSA Y CAPILAR

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 Aplique el torniquete suavemente de forma que todavía pueda sentir el

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(1) (2) (3) (4) (5)

OBTENCIÓN DE SANGRE CAPILAR

Punción capilar del dedo

Materiales y equipos requeridos