LAPORAN HEMATOLOGI

PEMERIKSAAN DAYA KERAPUHAN ERITROSIT

(RESISTENSI OSMOTIK)

OLEH :
I GDE YOGA MAHANANDHA
P07134017071

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA

POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR
JURUSAN ANALIS KESEHATAN
2019
Hari/Tanggal : Kamis, 2 Mei 2019

I. Tujuan
a. Tujuan Instruksional Umum
1. Mahasiswa dapat mengetahui prosedur pemeriksaan Daya Kerapuhan
Eritrosit (Resistensi Osmotic)
2. Mahasiswa dapat menjelaskan prosedur pemeriksaan Daya Kerapuhan
Eritrosit (Resistensi Osmotic)
b. Tujuan Instruksional Khusus
1. Mahasiswa dapat melakukan prosedur pemeriksaan Daya Kerapuhan Eritrosit
(Resistensi Osmotic)
2. Mahasiswa dapat menginterpretasikan hasil pemeriksaan Daya Kerapuhan
Eritrosit (Resistensi Osmotic)

II. Metode
Metode yang digunakan adalah metode manual

III. Prinsip
Eritrosit akan pecah atau membengkak bila dimasukkan ke dalam larutan
hipotonus dan mengkerut dalam larutan hipertonus sedangkan dalam larutan isotonus
tidak terjadi perubahan.

IV. Dasar teori

Osmosis didefinisikan sebagai difusi air dari area konsentrasi pelarut rendah
ke area konsentrasi pelarut tinggi melintasi membran semi-permeabel. Cairan dengan
zat terlarut yang lebih banyak di dalamnya disebut sebagai larutan hipertonik dan
cairan dengan zat terlarut yang kurang disukai disebut larutan hipotonik. Jika larutan
di kedua sisi membran memiliki konsentrasi yang sama, itu disebut isotonic. (M.
Hassan, K. Alrasheedy. 2012)

Sel darah merah mamalia memiliki bentuk bikonkaf (seperti donat). Jika sel
darah merah ditempatkan dalam larutan NaCl 0,3 M, ada sedikit pergerakan osmotik
air, ukuran dan bentuk sel tetap sama; larutan NaCl adalah larutan isotonik ke sel. Jika
sel darah merah ditempatkan dalam larutan dengan konsentrasi zat terlarut lebih
rendah daripada yang ditemukan dalam sel, air bergerak ke dalam sel dengan osmosis,
menyebabkan sel membengkak. Larutan semacam itu bersifat hipotonik bagi sel.
Ketika sel darah merah ditempatkan dalam air murni, air dengan cepat memasuki sel
dengan osmosis dan menyebabkan sel meledak, sebuah fenomena yang dikenal
 sebagai hemolisis. Jika sel-sel darah merah ditempatkan dalam larutan dengan
konsentrasi zat terlarut yang lebih tinggi, air bergerak keluar dari sel melalui osmosis,
sel menjadi lebih kecil dan berbentuk crenated. Larutan semacam itu bersifat
hipertonik bagi sel-sel. (M. Hassan, K. Alrasheedy. 2012)

Kerapuhan osmotik banyak digunakan untuk menjelaskan mekanisme

pengaruh berbagai faktor terhadap sifat osmotik membran RBC, seperti tegangan
geser dan mekanisme hemolisis , suhu, efek ultrasonik , obat-obatan, dan iradiasi. Tes
kerapuhan osmotik juga berguna untuk diagnosis penyakit hematologis tertentu,
misalnya, anemia hemolitik, herediter spherocytosis, dan elliptocytosis, defisiensi
dehidrogenase glukosa-6-fosfat, dan sel sabit anemia, serta untuk sel darah merah dari
pasien uremik atau diabetes. Resistensi osmotik yang rendah dapat menyebabkan
hemolisis intravaskular, yang menyebabkan pengurangan rentang hidup sel darah
merah .(T. Walski, et al. 2014)

Tes erythrocyte osmotic fragility (EOF) digunakan untuk menentukan tingkat

hemolisis sel darah merah (RBC) yang dihasilkan oleh stres osmotik. Tingkat ini
tergantung pada volume sel, luas permukaan, dan integritas fungsional membran sel.
Hemolisis sel darah merah dipengaruhi oleh kondisi teknis pengujian dan beberapa
faktor, termasuk usia, jenis kelamin, suhu, pH, musim, transportasi, kondisi
penyimpanan yang tidak tepat, cacat pada membran RBC dan kelainan pada darah.
Faktor-faktor ini telah mempengaruhi uji EOF dan harus distandarisasi secara ketat
untuk mendapatkan hasil yang dapat direproduksi. (L. Islah, et al. 2016)

V. Alat dan bahan

a. Alat :
1. Tabung serologis
2. Centrifuge
3. Pipet tetes
4. Yellow tip
5. Blue tip
6. Mikropipet
7. Stopwatch

b. Bahan
1. Darah EDTA
2. NaCL1 1%
3. Aquadest

VI. Cara kerja

 1. Tabung reaksi disediakan sebanyak 10 dan diisi dengan NaCl 1% pada
masing-masing tabung (1,2ml; 1,1ml; 1,0ml; 0,9ml; 0,8ml; 0,7ml; 0,6ml;
0,5ml; 0,4ml; 0,3ml)
2. Tabung yang sama ditambahkan aquades secara berurutan (0,6ml; 0,7ml;
0,8ml; 0,9ml; 1,0ml; 1,1ml; 1,2ml; 1,3ml; 1,4ml; 1,5ml)
3. Tabung yang sama ditambahkan 1 tetes darah
4. Didiamkam selama 15 menit
5. Disentrifuge dengan kecepatan 2000 rpm selama 15 menit
6. Tabung diamati secara visual : dimana terjadi permulaan hemolysis dan
hemolysis sempurna
7. Hasil dibandingkan dengan nilai normal (cari di literature ) dan disimpulkan

VII. NILAI RUJUKAN

No. Tabung NaCl 1% Aquadest Konsentrasi
(ml) NaCl (%)
1. 1,2 ml 0,6 ml 0,66
2. 1,1 ml 0,7 ml 0,61
3. 1,0 ml 0,8 ml 0,55
4. 0,9 ml 0,9 ml 0,50
5. 0,8 ml 1,0 ml 0,44
6. 0,7 ml 1,1 ml 0,39
7. 0,6 ml 1,2 ml 0,33
8. 0,5 ml 1,3 ml 0,27
9. 0,4 ml 1,4 ml 0,22
10. 0,3 ml 1,5 ml 0,17

VIII. Hasil pengamatan

Nama probandus : Ayu Sukma
Usia : 20 tahun
Jenis kelamin : Perempuan
Hasil : Tabung 1-3 belum terjadi hemolisa
Tabung 4-5 terjadi hemolisa sebagian
Tabung 6-10 terjadi hemolisa sempurna
No NaCl 1% Aquadest Konsentrasi Hasil
NaCl 1%
1 1,2 ml 0,6 ml 0,66 Tidak terjadi hemolisa
2 1,1 ml 0,7 ml 0,61 Tidak terjadi hemolisa
3 1,0 ml 0,8 ml 0,55 Tidak terjadi hemolisa
4 0,9 ml 0,9 ml 0,50 Hemolisa sebagian
5 0,8 ml 1,0 ml 0,44 Hemolisa sebagian
6 0,7 ml 1,1 ml 0,39 Hemolisa sempurna
 7 0,6 ml 1,2 ml 0,33 Hemolisa sempurna
8 0,5 ml 1,3 ml 0,27 Hemolisa sempurna
9 0,4 ml 1,4 ml 0,22 Hemolisa sempurna
10 0,3 ml 1,5 ml 0,17 Hemolisa sempurna

IX. Pembahasan
Osmosis didefinisikan sebagai difusi air dari area konsentrasi pelarut rendah
ke area konsentrasi pelarut tinggi melintasi membran semi-permeabel. Cairan dengan
zat terlarut yang lebih banyak di dalamnya disebut sebagai larutan hipertonik dan
cairan dengan zat terlarut yang kurang disukai disebut larutan hipotonik. Jika larutan
di kedua sisi membran memiliki konsentrasi yang sama, itu disebut isotonic. (M.
Hassan, K. Alrasheedy. 2012)

Darah manusia terdiri dari sel darah merah, leukosit, trombosit dan plasma.
Hitung darah lengkap mendefinisikan keadaan kesehatan. Darah adalah indikator
kesehatan sehingga segmentasi dan identifikasi sel darah sangat penting. Complete
Blood Count (CBC) mencakup penghitungan semua sel yang menentukan kesehatan
seseorang. Hitung RBC dan WBC sangat penting untuk mendiagnosis berbagai
penyakit seperti anemia, leukemia, kerusakan jaringan, dll. Metode konvensional
lama yang digunakan di laboratorium rumah sakit melibatkan penghitungan sel darah
secara manual menggunakan alat yang disebut Hemocytometer dan mikroskop. Tetapi
metode ini sangat monoton, melelahkan, memakan waktu, dan mengarah pada hasil
yang tidak akurat karena kesalahan manusia. Juga ada beberapa mesin mahal seperti
Analyzer, yang tidak terjangkau oleh setiap laboratorium. (Akshaya P. 2016)

Sel darah merah juga dikenal sebagai eritrosit memiliki Fungsi RBC untuk
membawa oksigen dan mengumpulkan karbon dioksida dari paru-paru ke sel-sel
tubuh. Mereka mengandung protein yang disebut hemoglobin. Kehadiran lapisan
dalam dan luar protein memberi warna merah pada darah. Hemoglobin melakukan
pekerjaan membawa oksigen. Jumlah abnormal sel darah merah menyebabkan anemia
yang menyebabkan kelelahan mental, penyakit, kelemahan, pusing. Jika tidak segera
diobati, hasilnya menjadi gejala yang lebih serius seperti kekurangan gizi dan
leukemia. Indeks RBC memberikan informasi tentang ukuran dan bentuk sel dan juga
berguna dalam membedakan jenis anemia. (Akshaya P. 2016)
 Sel darah merah mamalia memiliki bentuk bikonkaf (seperti donat). Jika sel
darah merah ditempatkan dalam larutan NaCl 0,3 M, ada sedikit pergerakan osmotik
air, ukuran dan bentuk sel tetap sama; larutan NaCl adalah larutan isotonik ke sel. Jika
sel darah merah ditempatkan dalam larutan dengan konsentrasi zat terlarut lebih
rendah daripada yang ditemukan dalam sel, air bergerak ke dalam sel dengan osmosis,
menyebabkan sel membengkak. Larutan semacam itu bersifat hipotonik bagi sel.
Ketika sel darah merah ditempatkan dalam air murni, air dengan cepat memasuki sel
dengan osmosis dan menyebabkan sel meledak, sebuah fenomena yang dikenal
sebagai hemolisis. Jika sel-sel darah merah ditempatkan dalam larutan dengan
konsentrasi zat terlarut yang lebih tinggi, air bergerak keluar dari sel melalui osmosis,
sel menjadi lebih kecil dan berbentuk crenated. Larutan semacam itu bersifat
hipertonik bagi sel-sel. (M. Hassan, K. Alrasheedy. 2012)

Kerapuhan osmotik banyak digunakan untuk menjelaskan mekanisme

pengaruh berbagai faktor terhadap sifat osmotik membran RBC, seperti tegangan
geser dan mekanisme hemolisis , suhu, efek ultrasonik , obat-obatan, dan iradiasi. Tes
kerapuhan osmotik juga berguna untuk diagnosis penyakit hematologis tertentu,
misalnya, anemia hemolitik, herediter spherocytosis, dan elliptocytosis, defisiensi
dehidrogenase glukosa-6-fosfat, dan sel sabit anemia, serta untuk sel darah merah dari
pasien uremik atau diabetes. Resistensi osmotik yang rendah dapat menyebabkan
hemolisis intravaskular, yang menyebabkan pengurangan rentang hidup sel darah
merah .(T. Walski, et al. 2014)

Fagilitas eritrosit adalah reaksi membrane eritrosit untuk melawan tekanan

osmosis media di sekelilingnya, guna mengetahui berapa besar fragilitas atau daya
tegang dinding eritrosit dapat diketahui dengan menaruh eritrosit kedalam berbagai
larutan dengan tekanan osmosis beragam. Larutan yang biasa digunakan adalah NaCl.
Konsentrasi larutan dengan tekanan osmosis tertentu akan memecah eritrosit. Inilah
yang menunjukkan fragilitaseritrosit tersebut. Semakin rendah konsentrasi NaCl maka
eritrosit akan mengalami lisis dan semakin pekat konsentrasi NaCl maka eritrosit akan
mengalami krenasi. Eritrosit yang mengalami krenasi ditandai dengan adanya proses
pengkerutan pada sel sedangkan eritrosit yang mengalami lisis ditandai dengan
pengembungan pada sel. (W. Grünberg. 2017)
 Uji fragilitas osmotik erytrosit (juga disebut resistensi osmotik erytrosit)
dilakukan untuk mengukur kemampuan erytrosit menahan terjadinya hemolisis
(destruksi erytrosit) dalam larutan yang hipotonis dalam keadaan normal dalam tubuh
selalu terjadi hemolisis dari erytrosit yang telah tua erytrosit yang mengalami
hemolisis setiap harinya adalah 0,5-1,5% dari jumlah normal eritrosit proses hemolisis
berlangsung didalam res terutama dalam lienpada penyakit tertentu terjadinya
hemolisis yang lebih dari normal sehingga timbul gejala seperti anemia, icterus.
Pemeriksaan daya tahan osmotik eritrosit dalam hal anemia hemolitikus adalah
merupakan langkah pertama untuk mengetahui sebab-sebab dari pada hemolisis
eritrosit. (Arun Kumar. 2011)

Beberapa implikasi praktis yang penting terkait pemeriksaan kerapuhan sel

darah merah. Pertama, rumah sakit harus menyimpan sel darah merah dalam larutan
plasma yang memiliki proporsi garam dan protein yang benar. Larutan plasma dibuat
sedikit hipertonik terhadap sel-sel merah sehingga integritas sel dipertahankan dan
hemolisis dicegah. Kedua, ketika dokter menyuntikkan obat intravena ke pasien, obat
ditangguhkan dalam larutan salin yang sedikit hipertonik ke sel darah merah. Suntikan
obat secara intravena dalam air murni akan menyebabkan sebagian sel darah merah
pasien mengalami hemolisis karena air bersifat hipotonik terhadap sel darah merah.
Oleh karena itu, ada kebutuhan untuk reagen sederhana, berbiaya rendah, cepat dan
andal untuk teknik kerapuhan osmotik untuk penyaringan hemolisis sel darah merah .
(M. Hassan, K. Alrasheedy. 2012)

Pada praktikum yang dilakukan tentang pemeriksaan kerapuhan sel darah

merah dengan sampel probandus atas nama Ayu Sukma, umur 20 tahun dan jenis
kelamin perempuan, didapatkan hasil tabung 1-3 belum terjadi hemolisa, tabung 4-5
terjadi hemolisa sebagian dan tabung 6-10 terjadi hemolisa sempurna. Jika
dibandingkan dengan nilai rujukan, hasil tersebut masih dalam kategori normal
dimana nilai normalnya yaitu 3,39 atau 3,33 (tabung 6 atau 7).

Tes erythrocyte osmotic fragility (EOF) digunakan untuk menentukan tingkat

hemolisis sel darah merah (RBC) yang dihasilkan oleh stres osmotik. Tingkat ini
tergantung pada volume sel, luas permukaan, dan integritas fungsional membran sel.
Hemolisis sel darah merah dipengaruhi oleh kondisi teknis pengujian dan beberapa
faktor, termasuk usia, jenis kelamin, suhu, pH, musim, transportasi, kondisi
 penyimpanan yang tidak tepat, cacat pada membran RBC dan kelainan pada darah.
Faktor-faktor ini telah mempengaruhi uji EOF dan harus distandarisasi secara ketat
untuk mendapatkan hasil yang dapat direproduksi. (L. Islah, et al. 2016).

X. Kesimpulan
Berdasarkan praktikum yang dilakukan tentang pemeriksaan kerapuhan sel
darah merah dengan sampel probandus atas nama Ayu Sukma, umur 20 tahun dan
jenis kelamin perempuan, didapatkan hasil tabung 1-3 belum terjadi hemolisa, tabung
4-5 terjadi hemolisa sebagian dan tabung 6-10 terjadi hemolisa sempurna. Maka nilai
RO pada probandus masih dinyatakan normal dimana nilai normalnya yaitu 3,39 atau
3,33 (tabung 6 atau 7).

DAFTAR PUSTAKA

W. Grünberg. 2017. Red Blood Cell Phosphate Concentration and Osmotic Resistance During
Dietary Phosphate Depletion in Dairy Cows. Tersedia di :
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4858069/. Diakses pada tanggal 4
Mei 2019
Akshaya P. 2016. COUNTING OF RBC AND WBC USING IMAGE PROCESSING: A
REVIEW. Tersedia Pada :
https://pdfs.semanticscholar.org/2a19/b73303d23555e17e45a6c609ff9893e441c7.pd
f. Diakses pada tanggal 4 Mei 2019
Arun Kumar. 2011. Tersedi di : Biomedical studies on lipid peroxidation and erythrocyte
fragility during the process of aging. Tersedia di :
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3609159/. Diakses pada tanggal 4
Mei 2019
M. Hassan, K. Alrasheedy. 2012. Validation of Osmotic Fragility Test using a modified new
Garden Angelica Reagent in Healthy Individuals Blood, Saudia Arabia. Asian
Journal of Biomedical Pharmaceutical Science. 2(14), 37-40.
https://www.alliedacademies.org/articles/validation-of-osmotic-fragility-test-using-
a-modified-new-garden-angelica-reagent-in-healthy-individuals-blood-saudia-
arabia.pdf
T. Walski, et al. 2014. Individual Osmotic Fragility Distribution: A New Parameter for
Determination of the Osmotic Properties of Human Red Blood Cells. Tersedia
pada : https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3909971/
L. Islah, et al. 2016. Study of Incubation Conditions for Erythrocytes Osmotic Fragility
Testing in Dromedary Camel (Camelus dromedarius). 2(2), 22-32. International
Journal of Research in Environmental Science (IJRES).
https://www.researchgate.net/publication/302405236_Study_of_Incubation_Conditi
ons_for_Erythrocytes_Osmotic_Fragility_Testing_in_Dromedary_Camel_Camelus
_dromedarius