PENELITIAN ORIGINAL

diterbitkan: 5 Februari 2016 doi: 10,3389

/ fspas.2016.00002

Efek awal Diubah Gravity Lingkungan di Plant

Cell Growth dan Cell Proliferasi: Karakterisasi

Jenis nucleolar morfofungsi dalam Arabidopsis Kultur

Sel Sistem
Ana I. Manzano 1 †, Raúl Herranz 1 †, Aranzazu Manzano 1, Jack JWA van Loon 2, 3, 4 dan
F. Javier Madinah 1 *

1 Centro de Investigaciones Biológicas (CSIC), Madrid, Spanyol, 2 Departemen Mulut dan Maksilofasial Bedah / Patologi Oral, Percobaan Belanda Support Center, VU

University Medical Center, Amsterdam, Belanda, 3 Pusat Akademik Gigi Amsterdam (ACTA), Amsterdam, Belanda, 4 ESA-ESTEC, TEC-MMG, Noordwijk, Belanda

Diedit oleh:

Martin Bojowald,

The Pennsylvania State University,

Perubahan tingkat pertumbuhan sel dari in vitro sistem selular di Arabidopsis thaliana
Amerika Serikat

diinduksi oleh paparan singkat ke lingkungan gravitasi berubah telah diperkirakan oleh pendekatan baru. Metode ini
Diperiksa oleh:

Kazuharu Bamba,
terdiri dari mendefinisikan tiga jenis nukleolus struktural yang merupakan indikator yang mudah dan dapat diandalkan
Fukushima University, Jepang aktivitas biogenesis ribosom dan, akibatnya, biosintesis protein, parameter ketat berkorelasi dengan pertumbuhan sel
Zurab Silagadze,
dalam sistem seluler ini. Kelimpahan relatif dari masing-masing jenis nukleolus secara statistik dinilai dalam kondisi
Novosibirsk State University, Rusia
yang berbeda dari gravitasi. Sampel terkena mikro simulasi untuk 200min menunjukkan signifikan penurunan
* Korespondensi:

F. Javier Madinah aktivitas nukleolus dibandingkan dengan 1 g kontrol, sedangkan sampel terkena hypergravity (2 g) untuk periode yang
fjmedina@cib.csic.es
sama menunjukkan aktivitas nukleolus sedikit meningkat. Efek ini dapat dianggap sebagai respon seluler dini untuk
† penulis ini telah memberikan kontribusi
perubahan lingkungan, mengingat durasi pendek dari pengobatan. Fungsional signifikansi dari data struktur divalidasi
sama untuk pekerjaan ini.
oleh kombinasi dari beberapa parameter terkenal yang berbeda, menggunakan mikroskopis, fl ow cytometry, qPCR,

Bagian khusus: dan pendekatan proteomik, yang menunjukkan bahwa tingkat pertumbuhan sel menurun itu dipisahkan dari
Artikel ini telah disampaikan kepada
peningkatan tingkat proliferasi sel di bawah simulasi gayaberat mikro, dan tren yang berlawanan diamati di bawah
Kosmologi,

bagian dari jurnal

hypergravity. Sebenarnya, tidak semua parameter yang diuji menunjukkan perubahan kuantitatif yang sama,
Frontiers di Astronomi dan Antariksa menunjukkan bahwa respon terhadap perubahan lingkungan adalah tergantung waktu.
Ilmu

diterima: 7 Desember 2015

diterima: 18 Januari 2016

Diterbitkan: 5 Februari 2016

Kutipan:

Manzano AI, Herranz R, Manzano A, van Loon

JJWA dan Madinah FJ (2016)

Efek awal Diubah Gravity Lingkungan di

Plant Cell Growth dan Cell Proliferasi: Karakterisasi

Kata kunci: nucleolus, gayaberat mikro simulasi, hypergravity, pertumbuhan sel, proliferasi sel, mikroskop elektron
Jenis morfofungsi nucleolar dalam Arabidopsis Sel

Sistem Budaya.

Depan. Astron. Ruang Sci. 3: 2. doi:

10,3389 / fspas.2016.00002 singkatan: g, percepatan gravitasi; LDC, besar Centrifuge Diameter; RPM, Random Positioning Mesin.

Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org 1 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al.
PENGANTAR
pengembangan tanaman dipengaruhi oleh faktor lingkungan. Di antara mereka,
gravitasi adalah parameter unik yang tetap konstan di Bumi sepanjang seluruh
sejarah kehidupan. Semua organisme hidup yang baik disesuaikan dengan ini
1 g tingkat, yang digunakan oleh tanaman untuk mendefinisikan pola
perkembangan mereka dan untuk mengoptimalkan penangkapan garam
cahaya, air, dan mineral. Akibatnya, modi fi kasi dari parameter ini akan
menyebabkan perubahan fisiologis yang signifikan dan akhirnya akan memicu
mekanisme adaptif. Memahami perubahan ini penting untuk meningkatkan
pengetahuan dasar kita pada fisiologi tanaman, tetapi juga penting untuk
biologi tanaman ruang, jika kita menganggap bahwa gravitasi adalah salah
satu yang paling penting faktor di ff erentiating lingkungan bumi dari luar
angkasa atau exoplanet. Tanaman akan menjadi penting untuk
perusahaan-perusahaan yang berasal dari eksplorasi ruang angkasa berawak
sebagai bagian dari sistem pendukung kehidupan yang diperlukan untuk
memberi makan manusia selama panjang ights ruang fl dan untuk bertahan
hidup pada exoplanets. Untuk tujuan ini, g, atau onMars, di mana gravitasi
adalah 3/8 g.
fakta bahwa Bumi 1 g Tingkat tidak dapat dihindari di permukaan planet kita
membuat perlu bahwa percobaan di bawah mikro nyata harus dilakukan di luar
angkasa (menara terjun bebas dapat memberikan beberapa detik bobot, tidak
cukup untuk sebagian besar jenis eksperimen biologi). Namun, mengingat
keterbatasan parah di akses ke ruang fl ights, bahkan setelah pelaksanaan Stasiun
Luar Angkasa Internasional (ISS), sejumlah fasilitas berbasis darat telah
dikembangkan, mampu memberikan simulasi lingkungan gravitasi diubah ( Herranz
et al., 2013a ). Lingkungan gravitasi berkurang dapat disimulasikan oleh
clinorotation 3D pada mesin posisi acak (RPM, Ruang Belanda, Leiden, Belanda) ( Van didorong dan pembesaran sel bertepatan spatio-temporal dengan
Loon, 2007 ) Dan peningkatan hadir beban gravitasi di habitat hypergravity
diperoleh dengan sentrifugasi ( Van Loon et al., 2008 ). Karena, seperti yang
ditunjukkan di atas, gravitasi digunakan oleh tanaman untuk menentukan pola
perkembangan mereka, perubahan gravitasi harus memiliki e ff ect pada proses
seluler yang merupakan dasar bagi perkembangan tanaman, seperti proliferasi sel
dan pertumbuhan sel. Hasil yang diperoleh dalam serangkaian ruang perintis dan
percobaan groundbased, menggunakan bibit miju-miju, menunjukkan signifikan
perubahan fi kan dalam perkembangan siklus sel, dalam indeks mitosis dan dalam
durasi fase siklus sel, sangat menunjukkan bahwa gravitasi diubah menghasilkan
spesifikasi-modi dalam mekanisme peraturan dari siklus sel ( Merkys et al, 1984.;
Darbelley et al., 1989; Legue et al., 1996; Yu et al., 1999; Driss-Ecole et al., 2008 ).
Baru-baru ini, kami melaporkan bahwa Arabidopsis kecambah dan fi xed setelah 4
hari pertumbuhan di Stasiun Luar Angkasa Internasional (ISS) menunjukkan
decoupling antara tingkat proliferasi sel (meningkat) dan pertumbuhan sel
(menurun) ( Matia et al., 2010 ). Percobaan selanjutnya dilakukan dengan bibit di
Bumi oleh kelompok kami, menggunakan perangkat erent di ff untuk simulasi
kondisi gravitasi berubah, sebagian besar telah direproduksi hasil yang diperoleh
di ruang angkasa. Clinorotation dan levitasi diamagnetic teknologi telah digunakan
untuk mereproduksi decoupling yang sama seperti yang diamati dalam ruang
bawah kondisi gayaberat mikro, dan entah bagaimana berlawanan di
Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org
Sel tanaman di bawah Gravity Diubah
kasus sentrifugal untuk lingkungan hypergravity ( Manzano et al., 2012b, 2013 ).
Dalam percobaan lain pada sel-sel akar meristematik tumbuh di
gayaberat mikro simulasi, penipisan biogenesis ribosom dilaporkan ( Shen-Miller
dan Hinchman, 1995; Sobol et al.,
2005, 2006 ), Namun temuan ini tidak terhubung ke fungsi sel lainnya.
eksperimen lebih jauh lagi, genomik dan proteomik dengan kultur sel kalus dari Arabidopsis
thaliana di gayaberat mikro nyata dan simulasi, termasuk eksperimen
microarray, juga menunjukkan perubahan dalam gen dan protein yang terlibat
dalam berbagai proses, fungsi dan kegiatan selular, beberapa dari mereka
terkait dengan respon stres abiotik dan regulasi siklus sel ( Barjaktarovic et al,
2009.; Manzano et al, 2012a.; Paul et al, 2012.; Herranz et al, 2013b.; Fengler
et al., 2015 ). Mekanisme e ff ects seluler dari perubahan gravitasi pada
meristem saat ini belum diketahui secara detail, tetapi diketahui bahwa, secara
umum, sinyal lingkungan tertransduksi antara organ tanaman di ff erent
mampu mengaktifkan modulator proliferasi sel dan pertumbuhan sel secara
terkoordinasi di meristem ; penerimaan sinyal tersebut dan respon mereka
disebut “kompetensi meristematik” ( Mizukami 2001 ). Modulasi proliferasi sel di
meristem tegas mengacu pada regulasi progresi siklus sel di pos pemeriksaan
diketahui, yang menentukan laju pembelahan sel ( Inzé dan De Veylder, 2006;
De Veylder et al., 2007; Van Leene et al., 2010 ). Sehubungan dengan
pertumbuhan sel, konsep ini dalam sel meristematik dimaksudkan untuk
produksi biomassa sel, pada dasarnya protein, di atas ambang tertentu
kompatibel dengan pembelahan sel, yang dikenakan spesifik pos pemeriksaan
( Mizukami, 2001; Doerner 2008 ). Oleh karena itu, pertumbuhan sel harus erat
dengan proliferasi, spasial serta temporal, sehingga, jika kopling ini terganggu,
sel akan kehilangan kompetensi meristematik. Perlu ditekankan bahwa
peningkatan ukuran sel dapat dicapai dengan cara lain, di ff erent yang
beroperasi pada sel-sel meristematik; misalnya, dalam sel-sel di ff erentiating
postmitotik, peningkatan massa adalah karena penyerapan air osmotik
perkembangan dan perluasan vakuola. Dalam hal ini, tegasnya, kita harus
merujuk pada “ekspansi sel,” tetapi tidak untuk “pertumbuhan sel.” The di ff
selisih antara kedua proses ini tidak semantik karena mereka didorong oleh
mekanisme erent di ff ( Li et al, 2005.; Doerner 2008 ).
Akibatnya, pertumbuhan sel meristematik ditentukan terutama oleh
aktivitas biogenesis ribosom dan sintesis protein ( Bernstein dan Baserga
2004; Baserga, 2007; Bernstein et al., 2007 ). biogenesis ribosom terjadi di
sebuah sumur-de fi domain nuklir ned, nukleolus, yang fitur struktural adalah
penanda diandalkan tingkat produksi ribosom ( Saez-Vásquez dan Madinah,
2008 ).
Selanjutnya, struktur nukleolus sangat sensitif terhadap perubahan
fisiologis sel. Perubahan struktural nukleolus mampu terdeteksi baik di tingkat
cahaya dan mikroskop elektron, serta perubahan dalam tingkat dan lokasi
protein nukleolus, misalnya, nucleolin. Respon cepat dan terdeteksi nukleolus
terhadap perubahan kondisi sel lama dikenal di ff erent sistem model biologis
di, baik hewan dan tumbuhan, dan hal itu berkaitan dengan peran penting
yang dimainkan oleh nukleolus di
2 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al. Sel tanaman di bawah Gravity Diubah

kegiatan fungsional sel ( Srivastava dan Pollard 1999; Raska et al., 2006 ). Bahkan, MATERIAL DAN METODE
nucleolus dan aktivitas nukleolus telah diidentifikasi sebagai e FFI efisien dan
indikator yang dapat diandalkan dari stres seluler ( Mayer dan Grummt 2005 ). Perangkat mekanis Membangkitkan Perubahan Kondisi
Gravity (RPM dan LDC): Deskripsi dan Setup
Kami telah mengambil keuntungan dari fitur ini dari nukleolus untuk merancang
suatu metode analisis untuk mendeteksi perubahan awal fungsional di pabrik
Kami terkena sampel untuk mikro simulasi dalam Machine Acak Positioning ( μ
berkembang biak sel dan menggunakannya dalam evaluasi e ff ects gravitasi diubah,
g- RPM, mode acak nyata) dan untuk hypergravity dalam Diameter Besar
dengan tujuan memajukan pengetahuan kita tentang perubahan ditemukan dalam
Centrifuge (2 g- LDC) yang terletak di European Space Riset dan Teknologi
pertumbuhan sel dan proliferasi. Untuk tujuan ini, kita telah menggunakan Arabidopsis
(ESAESTEC) di Noordwijk, Belanda ( Van Loon, 2007; Van Loon et al., 2008 ).
RPM run dilakukan dengan menggunakan mode acak nyata dengan
sistem kultur sel semipadat, diambil sebagai diandalkan in vitro Model seluler
kecepatan rotasi maksimum 60 ◦ / s. Dalam rangka untuk di ff erentiate antara
mampu memverifikasi dan memperluas temuan kami sebelumnya pada
Ects ​e ff karena beban mekanik diterapkan selama 3D-rotasi dan
pertumbuhan sel dan proliferasi sel yang diperoleh dalam sel meristematik bibit
sentrifugasi, kami melakukan percobaan secara bersamaan di RPM dan
akar. Untuk pengetahuan kita, masih ada tidak ada fi informasi tidak bisa relevan
LDC, bersama dengan dua kontrol eksternal (satu ditempatkan pada struktur
atau signifikan tentang karakterisasi morfofungsi dari nukleolus di in vitro kultur sel
statis RPM dan yang lainnya dalam gondola pusat di sumbu rotasi LDC).
Untuk kedua kondisi gravitasi diubah, durasi pengobatan itu 200min, di RT
Arabidopsis thaliana. Oleh karena itu, perlu untuk melakukan karakterisasi seperti
(terdaftar sebagai 22 ± 0,5 ◦ C).
ini dan kemudian untuk de jenis struktural fi ne yang bisa ditafsirkan dari sudut
pandang fungsional, sesuai dengan informasi yang laboratorium kami sebelumnya
diperoleh dalam sistem tanaman lain, seperti Allium cepa ( González-Camacho
dan Madinah, 2005 ).

Percobaan dalam kondisi gravitasi berubah telah dilakukan secara

Bahan tanaman dan Kondisi Pertumbuhan
Kalus budaya semi-padat Arabidopsis thaliana ( CV. Landsberg erecta) dibuat dari
serentak di dua fasilitas, yaitu RPM (Random Positioning Machine), untuk
kultur suspensi MM2d sebelum perbaikan mingguan seperti yang dijelaskan
mensimulasikan lingkungan gayaberat mikro, dan LDC (Large Diameter
dalam literatur sebelumnya ( Menges dan Murray, 2006 ). Bahan biologis
Centrifuge), untuk menghasilkan 2 g lingkungan, dengan sama set-up di dua
ditumbuhkan dalam dua rutin 90mm piring diameter Petri sebagai lapisan tebal
fasilitas. Sebuah pengobatan singkat 200min diberikan dalam kedua kondisi
1-2mm pada permukaan lapisan 1 cm dari 1% (b / v) agar dengan Murashige dan
gravitasi berubah. Durasi ini sesuai dengan sekitar 15% dari durasi siklus sel
Skoog ini (MS) menengah, di mana kultur suspensi yang berserakan di
( Beemster dan Baskin, 1998 ). Data morfofungsi diperoleh dari nukleolus
permukaan agar 1 minggu sebelum dimulainya percobaan. Kultur terlindung dari
divalidasi dengan menggunakan berbagai teknik termasuk analisis fase siklus
cahaya dengan cakupan aluminium foil (kegelapan adalah kondisi pertumbuhan
sel oleh aliran cytometry, estimasi ekspresi gen faktor yang relevan peraturan
yang optimal dari budaya MM2d) dan tumbuh pada 22 ◦ C untuk memungkinkan
ff merenung dari siklus sel dan ribosom biogenesis (qPCR), dan karakterisasi
kalus untuk mencapai kepadatan maksimum dengan hari ketujuh (1- lapisan tebal
proteomik dari nukleolus kunci nucleolin protein (2D-Barat-blot). Koleksi ini
2mm). Setelah RPM paparan / LDC, sampel dipanen dan diawetkan segera
data memungkinkan kita untuk mendefinisikan parameter seluler dan
(kurang dari 2 menit) dengan pembekuan cepat dalam nitrogen cair dan
molekuler yang terlibat dalam fase awal respon terhadap perubahan gravitasi
selanjutnya kering penyimpanan es. Dari setiap perlakuan, sebagian kecil dari
dan untuk membedakan mereka dari parameter muncul tidak berubah dalam
budaya itu fi xed di 3% (v / v) glutaraldehida fosfat-bu ff garam ered (PBS) selama
fase ini. Memang, respon awal yang cepat untuk stimulasi gravitropic,
5 hari pada 4 ◦ C untuk analisis mikroskopis struktural.
melibatkan perubahan cepat dan sementara di tingkat transkrip seluruh jam
pertama gravitasi dan stimulasi mekanik telah dijelaskan, diikuti oleh strategi
adaptif longerterm ( Moseyko et al., 2002; Kimbrough dkk., 2004; Paul et al.,
2012 ). Akurat identifikasi parameter yang terlibat dalam respon awal ini pada
tingkat seluler dan molekuler penting bagi tujuan nal fi mencapai
pertumbuhan yang kuat dari tanaman di lingkungan gayaberat mikro, yang Contoh Pengolahan Untuk Cahaya dan Elektron Mikroskop
merupakan kondisi baru untuk organisme darat. Setelah perubahan awal
telah diidentifikasi, kita akan berada di kondisi yang lebih baik untuk Sampel fi xed di 3% (v / v) glutaraldehid dipindahkan ke PBS untuk mencuci
menyelidiki strategi adaptasi dan mekanisme diadopsi untuk melawan (3 kali, 10 menit), benar-benar dehidrasi dalam serangkaian metanol
perubahan fisiologis dalam rangka untuk kelangsungan hidup tanaman di (30-100%, 30 menit di setiap pengenceran), dikenakan prosedur
lingkungan baru. metilasi-asetilasi, metode memungkinkan diskriminasi yang lebih baik dari
subkomponen nukleolus ( Testillano et al., 1995 ) Dan tertanam di LR Putih
resin (London Resin Co, London, UK). Dari bahan tertanam dalam resin,
semithin bagian, 2 μ m ketebalan, dipotong dan diamati ternoda bawah
mikroskop Leica DM2500 dilengkapi dengan fase kontras. Gambar secara
digital direkam dengan kamera Leica DFC320 CCD. Untuk studi
Selain itu, penelitian kami telah menanggapi pertanyaan tentang apakah atau tidak ultrastructural, bagian ultrathin ( ~ 60 nm tipis), yang dipasang di grid nikel
UNDI sel erentiated ff merasakan perubahan gravitasi dengan tidak adanya jaringan Formvar berlapis, diwarnai dengan 5% uranil asetat selama 30 menit, baik
khusus atau terorganisir struktur perkembangan dikenal untuk mendeteksi gravitasi. sendiri

Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org 3 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al.
atau diikuti oleh 90 s di 0,3% memimpin sitrat, dan diamati dalam JEOL 1230
mikroskop elektron transmisi beroperasi pada 100 kV. pengukuran kuantitatif
nukleolus dilakukan pada gambar digital menggunakan software kuantisasi
“QWin Standard” (Leica Microsystems).
Analisis Siklus Sel oleh Arus cytometry
Salah satu bagian dari materi beku yang digunakan untuk analisis siklus sel
oleh aliran cytometry. Sampel dicampur dengan 500 μ l ekstraksi nuklir bu ff er
(Kit Cystain UV, tepat P, Partec, Swedesboro, NJ, USA) ( Menges dan Murray,
2006 ) Dan dihomogenisasi menggunakan “Ultraturrax” blender (T25 dasar; IKA
Labortechnik, Staufen, Jerman). Campuran diinkubasi selama 2 menit pada
suhu kamar dan disaring melalui mesh ganda dengan pori 50 μ m untuk
membersihkan sampel dari residu sitoplasma dan organel, menjaga inti hanya
utuh dalam ekstrak. Satu ml dari uorescent solusi DNA penanda fl termasuk
DAPI (kit Cystain UV tepat P) ditambahkan dan pewarnaan melanjutkan untuk
2min pada suhu kamar. Kemudian, sampel disimpan pada 4 ◦ C dalam
kegelapan. Maksimal 12 jam kemudian, persentase sel dalam setiap tahapan
siklus sel diperkirakan dengan menganalisis ekstrak nuklir masing-masing
sampel dalam Cell Sorter FACS (Vantage, Becton-Dickinson, San Diego, CA,
USA), menggunakan laser cahaya dengan panjang gelombang eksitasi 360
nm. Hasilnya dianalisis dengan software ModFit Lt3.2 (Verity Software House).
RNA Ekstraksi dan Real-Time PCR
RNA total diekstraksi dari tiga ulangan biologi kalus beku menggunakan Trizol
pereaksi (Invitrogen / Life Technologies) sesuai dengan instruksi pabrik dan
dimurnikan dengan DNase-turbo (Turbo DNA bebas; AM1907 Ambion / Life
Technologies,). RNA kuantitas dan kualitas yang pertama diverifikasi dengan
elektroforesis gel dan NanoDrop spektrofotometri. Dimurnikan RNA digunakan
untuk membuat Quanti fi kasi Retrotranscription-qPCR mempekerjakan dan
mengikuti protokol kit Quantimix Mudah SYG (Biotools, Madrid, Spanyol)
dengan 30 min (48 ◦ C RT langkah) diikuti oleh 10 menit pada 95 ◦ C
Studi struktural dilakukan pada sampel yang diperoleh dari uji coba yang
(denaturalisasi langkah) dan 40 siklus PCR (10 s 95 ◦ C, 20 s 60 ◦ C dan 30 s 72 ◦ C).
Probesets digunakan ditunjukkan dalam Tabel 1. Hasilnya diproses oleh IQ5
Optical Sistem Software (BioRad Laboratories). Sampel RNA yang sama juga
digunakan dalam genom microarray seluruh
TABEL 1 | daftar probeset RT-qPCR.
Gene Probe ke depan (5 '- 3 ')
CDKB1; 1 (AT3G54180) ACA AAG CGA TGG AGA AAG GA
CycB1; 2 (AT5G06150) GTG CCT TGC TTA TTG CTT CC
CycB1; 1 (AT4G37490) CAG CAA TGG AAG CAA CAA GA
AtNucL1 (AT1G48920) CCG AGA GGA GAT AGC AGT GG
AtFib1 (AT5G52470) CGT CTT TCG TTC TTC ACT TTT AGA CAA G
Actin2 (AT3G18780) GCA CCC TGT TCT TCT TAC CG
Semua oligonukleotida digunakan di RT-qPCR terdaftar, termasuk gen kontrol homeostatik (aktin) yang menunjukkan tidak ada variasi dalam salah satu kondisi dianalisis dan digunakan untuk menormalkan hasil qPCR.
Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org
Sel tanaman di bawah Gravity Diubah
analisis sudah tersedia di GEO: GSE29787 ( Manzano et al., 2012a ).
Protein Air hujan, Quanti fi kation, 2D-Elektroforesis
dan Barat-Blot
Protein diekstraksi dari tiga ulangan biologi seperti yang dijelaskan ( Barjaktarovic
et al., 2007 ) Dan dimurnikan dengan pengendapan metanol / kloroform.
2D-elektroforesis dilakukan dengan menggunakan sistem Protean IEF (BioRad)
dengan 7 strip cm ( “ReadyStripIPG,” BioRad Laboratories), mengikuti instruksi
dari tanda komersial. Dua gel per sampel dijalankan; salah satunya ditandai
dengan SYPRO Ruby gel protein noda dan gel kedua dipindahkan ke 0,20 μ m
membran PVDF dengan menggunakan sistem BioRad selama 1 jam pada 100V.
Westernblot dilakukan dengan menggunakan anti-AtNUC-L1 (p) 1: 2000. ini
adalah antibodi yang diajukan terhadap “GAR,” wilayah C-terminal, yang ramah
disediakan kepada kami oleh Dr. J. Saez-Vásquez, Universitas Perpignan,
Prancis ( Saez-Vásquez dkk., 2004; Pontvianne et al., 2007 ). membran diinkubasi
dengan antibodi primer ini selama 1 jam, dan kemudian dengan antibodi kedua
(anti-kelinci terkait dengan peroksidase kegiatan untuk ECL, Amersham, GE
Healthcare), pada pengenceran 1: 5000, selama 1 jam. Aktivitas peroksidase
dikembangkan oleh solusi ECL (ECL Barat-blot Detection, Amersham, GE
Healthcare).
Analisis statistik
Analisis statistik data dilakukan dengan menggunakan Stargraphic
5.1 software. variabel kuantitatif dinilai dengan menggunakan mean dan standar deviasi
nilai-nilai setelah memeriksa normalitas dengan uji Kolmogorov-Smirnov. nilai rata-rata
dibandingkan dengan menggunakan Mahasiswa t test untuk sampel independen; di ff
perbedaan-perbedaan dianggap signifikan untuk nilai bilateral lebih rendah dari 0,05.
HASIL
De fi Jenis ning morfofungsi nucleolar
dilakukan di dua perangkat mekanik untuk generasi gravitasi diubah, yaitu
RPM (simulasi mikro) dan LDC (hypergravity) dan kontrol masing-masing.
Untuk gayaberat mikro simulasi, RPM adalah model yang paling canggih dan
paling umum digunakan 3D-clinostats atau clinostats
Membalikkan Probe (5 '- 3 ')
CGA AGA GCA GTT GGT GGA AT
ATT GCC TTC TCC ATC ACC AG
ATG AGT GTT TGG GAA TGA A
TCC ACG ACC ACG ATC ACT T
GCC CAC TAC GGC CTC TGT CA
ATC CAG CAC AAT ACC GGT TGT A
4 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al.
dengan dua sumbu. Sebuah clinostat adalah perangkat di mana sampel yang
diputar untuk mencegah sistem biologis dari mempersepsikan vektor
percepatan gravitasi, mencapai apa yang disebut “bobot fungsional” ( Klaus et
al., 1997 ). Dengan cara rotasi cepat dan konstan, sedimentasi dicegah secara
fisik oleh perubahan terus-menerus dan konstan dari arah vektor gravitasi.
Dalam RPM, kualitas simulasi meningkat dengan memutar sekitar dua sumbu
menyusul kecepatan acak pro fi le, dibandingkan dengan 2D-clinostat klasik,
terutama untuk benda besar ( Kraft et al., 2000; Van Loon, 2007 ). 3D-sistem
ini memiliki dua frame independen berputar; kedua frame dapat dioperasikan
dengan kecepatan erent di ff dan di ff arah erent. Dengan randommode
pengaturan kecepatan bingkai individu dan arah rotasi acak bervariasi,
mengakibatkan jalur tak terduga dan simetris ( Borst dan Van Loon, 2009 ).
Keterbatasan utama dari teknologi ini adalah ukuran sampel, karena
percepatan sentripetal muncul selama kita menempatkan sampel jauh dari
pusat rotasi, terutama ketika menggunakan kecepatan putaran tinggi ( Van
Loon, 2007 ). Untuk generasi kondisi hypergravity, ada sejumlah besar
sentrifugal tersedia untuk komunitas riset biologi. Sebuah Diameter Besar
Centrifuge (LDC) telah dikembangkan oleh European Space Agency (ESA),
yang memungkinkan perolehan poin pengukuran dalam rentang dari 1 sampai
20
g. Instrumen ini memang bisa menyediakan lingkungan hypergravity stabil untuk
penelitian fundamental pada sel, tanaman dan hewan-hewan kecil ( Van Loon et al.,
2005 ).
Fitur yang spesifik dari dua perangkat mekanik yang dibuat diperlukan untuk
melakukan dedicated 1 g eksperimen kontrol untuk masing-masing dari mereka, dalam
rangka untuk memisahkan e ects ff dari perubahan gravitasi dari kemungkinan Ects ​e
ff karena kondisi lingkungan yang ada di fasilitas masing-masing. Dalam semua
kasus, di ff perbedaan-perbedaan yang diamati antara beberapa ini 1 g percobaan
kontrol secara statistik tidak signifikan, sehingga memvalidasi variasi ditemukan dalam
kondisi erent gravitasi di ff.
Sebagai pendekatan pertama fi, ukuran nukleolus adalah quanti fi ed di 2 μ m
semithin bagian diamati dengan mikroskop fase kontras. Ini
GAMBAR 1 | Gravity terkait variasi ukuran nukleolus (mean ± SD n = 60). Diubah gravitasi menghasilkan variasi yang signifikan, ditandai dengan * ( p < 0,05 dalam kondisi eksperimental vs masing-masing 1 g kontrol setelah Mahasiswa t
test) di wilayah nukleolus, diambil sebagai penanda diandalkan aktivitas nukleolus dalam sistem sel proliferatif. Area diukur gambar mikroskop cahaya dari bagian semithin (2 μ m tebal) dari kultur kalus. mikro simulasi (sim- μ g) (RPM)
menginduksi penurunan 19% di wilayah nukleolus, sementara 2 g lingkungan (hiper-g) (LDC) menghasilkan nukleolus yang lebih besar, dengan peningkatan 25% dalam parameter ini.
Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org
Sel tanaman di bawah Gravity Diubah
ketebalan bagian adalah di kisaran diameter rata-rata sel inmeristematic
nucleolus dari Arabidopsis ( Matia et al., 2010 ), Yang meminimalkan
kemungkinan menggabungkan bagian tangensial ke dalam rekening. Parameter
ini memberikan estimasi keseluruhan aktivitas nukleolus (yaitu, tingkat produksi
ribosom) dan, akibatnya, pertumbuhan sel. Secara umum, nukleolus lebih besar
dalam kondisi hypergravity dibandingkan dengan kontrol rotasi. Sebaliknya,
dalam kondisi mikro simulasi ukuran nukleolus menurun dibandingkan dengan 1 g
kontrol RPMexperiment yang ( Gambar 1).
Setelah data awal ini, kami meneliti dengan detail yang lebih tinggi
perubahan terjadi di nucleolus sebagai konsekuensi dari perubahan gravitasi
lingkungan, untuk mengeksploitasi potensi organel nuklir ini sebagai sensor
diandalkan perubahan fisiologi sel. Untuk tujuan ini, kami berusaha
pengidentifikasian jenis struktural nukleolus yang bisa berfungsi sebagai
indikator di ff erent negara fungsional. Pengamatan di bawah mikroskop
elektron transmisi membawa kita ke definisi de dari tiga jenis, yang dapat
disebut, menurut morfologi mereka, sebagai “vakuolisasi terutama,”
“kompak”, dan “fi brillar” ( Gambar 2
menunjukkan contoh perwakilan dari mereka dalam kondisi gravitasi yang
diteliti).
nukleolus vakuolisasi terutama dicirikan oleh adanya satu atau beberapa
ruang tengah yang besar dan jelas, yang disebut “vakuola nukleolus” ( Moreno
Díaz De La Espina et al., 1980 ), Yang mengandung butiran mirip dengan
komponen granular dari nucleolus ( Gambar 2, atas baris). Pusat-pusat fi brillar,
padat fi komponen brillar dan komponen granular dapat diidentifikasi di korteks,
sekitar “vakuola.” Secara fungsional, nukleolus vakuolisasi terutama muncul dalam
sel aktif berkembang biak dengan tingginya tingkat produksi prekursor ribosom ( Risueño
dan Madinah, 1986 ). Secara khusus, mereka adalah khas sel ditemukan dalam
periode siklus sel G2, yang paling aktif dalam memproduksi ribosom ( GonzálezCamacho
dan Madinah, 2006 ).
The “kompak” nukleolus tampaknya memiliki struktur yang lebih homogen. ruang
yang lebih jelas internal pusat brillar fi, zona untuk
5 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al. Sel tanaman di bawah Gravity Diubah

GAMBAR 2 | jenis morfofungsi nukleolus. Tiga jenis struktural nukleolus (dalam baris, vakuolisasi terutama, Compact dan urat saraf) telah ditandai dengan mikroskop elektron dalam tiga kondisi gravitasi [dalam kolom, simulasi mikro
(RPM), 1 g kontrol dan 2 g ( LDC)]. Setiap jenis morfologi menunjukkan jumlah dan distribusi dari subkomponen nukleolus yang berbeda, dan dapat dikaitkan dengan tingkat yang berbeda dari aktivitas nukleolus serta, istimewa, dengan
periode siklus sel. Semua jenis dapat ditemukan di semua kondisi, meskipun dalam proporsi yang berbeda. V, nukleolus “vakuola”; GC, komponen granular, panah, pusat fi brillar. Skala bar ditunjukkan.

anchoring dan akumulasi kromatin ribosom, di mana kompleks transkripsi
oleh RNA polimerase I diselenggarakan ( Saez-Vásquez dan Madinah, 2008 ).
Jumlah dan ukuran dari pusat brillar fi berkorelasi dengan aktivitas nukleolus.
Komponen fi brillar padat terletak di sekitar pusat-pusat fi brillar, dan
selanjutnya keluar, komponen granular dapat diidentifikasi ( Gambar 2, sentral
baris). Nukleolus kompak muncul dalam berkembang biak sel dengan
aktivitas variabel produksi ribosom, sesuai dengan G1 periode siklus sel dan
S. Tingkat aktivitas nukleolus berkorelasi dengan jumlah dan morfometrik
karakteristik dari pusat brillar fi, ukuran nukleolus dan proporsi komponen
granular; semakin besar parameter ini, yang lebih aktif adalah nucleolus ( Saez-Vásquez
Jenis morfofungsi nukleolus, setelah diidentifikasi dan ditandai di bawah
dan Madinah, 2008 ).
Akhirnya, “fi brillar atau nukleolus tidak aktif” yang ditandai dengan kehadiran
pusat fi brillar tunggal yang besar, yang membentang dari sisi ke sisi nukleolus
meskipun mungkin muncul di bagian sebagai beberapa, karena e ff ect dari
sectioning struktur berkelok-kelok. Hebatnya, massa kecil kromatin kental
muncul dalam interiornya. massa nukleolus sangat kompak, secara eksklusif
terdiri dari padat fi komponen brillar ( Gambar 2, lebih rendah berturut-turut).
nukleolus ini awalnya dijelaskan dalam diam meristem akar bawang, ditangkap
fungsional karena kurangnya air. Kemajuan siklus sel dalam jenis sel dihentikan
pada periode G0, jangka waktu sementara atau permanen berasal baik dari G1
atau G2 ( Risueño dan Madinah, 1986 ).
Validasi Jenis nucleolar bawah Gravity Diubah: Aktivitas
nucleolar
mikroskop elektron, bisa dengan mudah diidentifikasi dengan cara mikroskop
fase kontras, dengan memperhatikan ukuran dan / atau fitur struktural mereka
secara keseluruhan ( Angka 3A, B). Kami quanti fi ed kelas nukleolus di 65-80
sel dari masing-masing kondisi gravitasi berubah dan kontrol masing-masing.
Secara khusus, di bawah mikro simulasi di RPM ada penurunan tajam dalam
jumlah sel dengan nukleolus kompak dan peningkatan bahkan lebih tinggi di
tidak aktif fi nukleolus brillar, tapi tidak ada perubahan yang signifikan dalam
proporsi nukleolus vakuolisasi terutama, dibandingkan dengan 1 g

Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org 6 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al. Sel tanaman di bawah Gravity Diubah

GAMBAR 3 | variasi terkait gravitasi dalam proporsi jenis nukleolus yang berbeda. jenis morfofungsi nukleolus yang diidentifikasi dalam persiapan mikroskop optik dari kultur kalus tumbuh di kondisi yang berbeda dari gravitasi. ( SEBUAH)
RPM sampel, ( B) 1 g kontrol sampel dari percobaan RPM. Dalam gambar ini, 1 berarti nukleolus vakuolisasi terutama, 2 berarti nukleolus kompak dan 3 berarti fi brillar nukleolus. Jumlah nukleolus milik masing-masing jenis dihitung
(mean ± SD
n = 65-80 sel / persiapan). ( C) Persentase dari setiap jenis nukleolus di simulasi mikro (RPM) dan yang sesuai 1 g kontrol. mikro simulasi menghasilkan penurunan penting dalam jumlah (aktif) kompak nukleolus mendukung fi brillar
yang (tidak aktif). ( D) Persentase dari setiap jenis nukleolus di 2 g hypergravity (LDC) dan yang sesuai 1 g kontrol. Variasi adalah sedikit tetapi dengan tren yang berlawanan (penurunan nukleolus tidak aktif dalam mendukung
vakuolisasi terutama yang / sangat aktif). Signi perbedaan fi kan (Mahasiswa t uji, p < 0,05) diekspresikan oleh *.

kontrol ( Gambar 3C). Hasil ini konsisten dengan ukuran nukleolus menurun ( Gambar
1) dan bisa ditafsirkan sebagai penurunan aktivitas nukleolus karena stres gravitasi
yang secara struktural terdeteksi pada tahap awal pertumbuhan di RPM. Sebaliknya,
e ff ect dari hypergravity di LDC adalah peningkatan yang signifikan dalam ukuran
nukleolus, parameter berkorelasi dengan aktivitas nukleolus ( Gambar 1), meskipun,
dalam hal ini, itu tidak kembali tercermin dalam signifikan di ff perbedaan-perbedaan
dalam proporsi jenis nukleolus di ff erent dibandingkan dengan kontrol rotasi ( Gambar
3D). Tentu saja, data mentah menunjukkan lebih vakuolisasi terutama dan nukleolus
kompak dan kurang fi nukleolus brillar dalam sampel hypergravitygrown daripada di
kontrol, tetapi perbedaan-perbedaan di ff secara statistik tidak signifikan ( Gambar
3D).
Mengingat korelasi yang ketat yang ada di UNDI ff erentiated berkembang
biak sel antara aktivitas nukleolus, tingkat produksi ribosom, laju sintesis protein
dan pertumbuhan sel ( Bernstein dan Baserga 2004; Baserga, 2007; Bernstein et
al., 2007 ) Kami memeriksa apakah atau tidak perubahan struktural dalam
nukleolus dikaitkan dengan perubahan terdeteksi ukuran sel.
quantitativemeasurement tidak menunjukkan statistik signifikan
perbedaan-perbedaan di ff ukuran sel antara salah satu perawatan gravitasi
diubah dan masing-masing 1 g kontrol dalam kondisi eksperimental kami (data
tidak ditampilkan).
Validasi Jenis nucleolar bawah Gravity Diubah: Siklus Sel
Fase
Status siklus sel dari populasi kultur kalus ditentukan oleh
quantifyingDAPI-stainedDNAby fl ow cytometry di di ff erent lingkungan
gravitasi. Meskipun durasi pengobatan gravitasi diubah kurang dari 15% dari
durasi siklus sel, kita bisa mengamati perubahan signifikan dalam budaya
tumbuh di bawah gayaberat mikro simulasi, secara khusus peningkatan
persentase sel dalam fase S dan peningkatan berikutnya dari G2 / M
populasi karena fi kan penurunan yang sangat signifikan dari populasi G1 ( Gambar
4).
Menariknya, G1 adalah periode lebih lama dari S dan G2 di berkembang biak
sel-sel Arabidopsis, sehingga periode ini adalah target utama dari perawatan
gravitasi berubah. Oleh karena itu, pengurangan proporsi sel di fase G1 bisa
ditafsirkan sebagai pemendekan periode ini dan, akibatnya, sebagai
pemendekan durasi keseluruhan siklus sel di bawah kondisi mikro simulasi.
Sebuah siklus sel yang lebih pendek akan berarti frekuensi yang lebih tinggi
dari pembelahan sel, yaitu, peningkatan laju proliferasi sel. Di sisi lain,
pengobatan hypergravity tampaknya menyebabkan non-signifikan perubahan
fi kan dalam distribusi fase siklus sel antara 2 g
dan kondisi rotasi. Namun, sedikit peningkatan dalam S

Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org 7 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al. Sel tanaman di bawah Gravity Diubah

GAMBAR 4 | variasi terkait gravitasi di sub-populasi sel dalam setiap fase siklus sel. Perubahan proporsi fase siklus sel dalam sampel tumbuh di bawah kondisi yang berbeda dari gravitasi dinilai oleh aliran cytometry setelah
DAPI-pewarnaan DNA dalam kultur sel. Jumlah kejadian (y-axis) vs kandungan DNA (DAPI sinyal di x-axis) di grafik atas dan fi quanti nya kasi dalam pie chart yang lebih rendah ditunjukkan untuk setiap kondisi gravitasi (10.000 sel
dihitung dari tiga ulangan). Signi perbedaan fi kan (Mahasiswa t uji, p < 0,05) diekspresikan oleh *. Ada signifikan penurunan jumlah sel G1 mendukung S dan sel G2 / M bawah mikro simulasi. Dengan mempertimbangkan bahwa G1
jauh lebih lama dari S dan fase G2, pemendekan durasi siklus sel di bawah kondisi mikro simulasi dapat disimpulkan dari hasil ini dan, akibatnya, percepatan (kenaikan) dari tingkat proliferasi sel. Sebaliknya, hanya sedikit variasi yang
ditemukan dalam sampel hypergravity.

populasi dan penurunan G2 / populasi M yang melihat ( Gambar 4). gen cyclin B1 ( Gambar 5, pertama baris). Mencolok, spidol gen yang terkait dengan
regulasi pertumbuhan biogenesis / sel ribosom menunjukkan variasi yang sangat kecil
dalam kondisi eksperimental kami. Meskipun ekspresi microarray-diekstraksi pro fi les

Validasi Jenis nucleolar bawah Gravity Diubah: Rt-qPCR tidak signifikan, peningkatan gen sel-pertumbuhan yang berhubungan diamati ketika
menganalisis hasil qPCR ( Gambar 5, kedua dan baris ketiga).

Dua gen yang terlibat dalam regulasi siklus sel (CdkB1 dan cyclin B1) dan dua
gen yang mengkode protein nukleolus utama, yaitu nucleolin L1 dan fi brillarin,
diambil sebagai penanda pertumbuhan sel, dipelajari oleh retrotranscription
kuantitatif PCR menggunakan sampel ditanam di gravitasi diubah diproduksi
oleh RPM dan perangkat mekanik LDC. Secara khusus, gen cyclin B1 adalah
penanda G2 / M transisi dari siklus sel; gen ini diekspresikan selama periode G2
dan produk yang secara khusus hancur dalam anafase. Oleh karena itu,
ekspresi gen cyclin B1 dianggap sebagai penanda yang baik pembelahan sel,
secara tidak langsung menunjukkan tingkat masuk ke mitosis ( ColónCarmona et
al., 1999 ). Nucleolin L1 ( AtNuc-L1) dan fi brillarin adalah protein nukleolus
utama, yang memainkan peran kunci dalam regulasi biogenesis ribosom, dan, di
sepanjang rentang pH di Western Blot 2-D, sebagai estimasi diandalkan
samping itu, ekspresi mereka adalah sebagian diatur selama siklus sel ( González-Camacho
andMedina,
2004, 2005 ) Dan perkembangan tanaman ( Petricka dan Nelson, 2007 ). Selain
hasil yang diperoleh dari percobaan qPCR, kita telah memasukkan data pada
gen ini diperoleh dari eksperimen microarray sebelumnya ( Manzano et al.,
2012a ). Pada saat perawatan gravitasi diubah, penanda gen proliferasi sel
(yang berkaitan dengan regulasi siklus sel) menunjukkan tingkat penurunan
ekspresi di gayaberat mikro simulasi dan peningkatan hypergravity,
dibandingkan dengan kontrol masing-masing, mencapai statistik signifikansi
dalam percobaan qPCR melibatkan
Validasi Jenis nucleolar bawah Gravity Diubah:
2D-Barat-Blot dengan Anti-AtNUC-L1 Antibodi
Dalam rangka untuk lebih mencirikan hubungan antara ekspresi gen nucleolin,
peran fungsional dimainkan oleh protein ini dan struktur dan aktivitas
nucleolus selama respon awal berkembang biak sel gravitasi diubah, kami
menganalisis pola mobilitas elektroforesis isoform nucleolin dengan cara
pendekatan elektroforesis bidimensional, diikuti oleh Western blotting. Kami
membayar perhatian pada rentang sinyal yang sesuai dengan protein ini
kelimpahan isoform menunjukkan tingkat di ff erent fosforilasi, seperti yang
ditunjukkan sebelumnya ( González-Camacho dan Madinah, 2004 ), Sebuah
juga untuk kehadiran bintik-bintik pada tingkat berat molekul jelas lebih rendah
dari sinyal utama, indikasi dari proteolisis. Hasil yang diperoleh di kedua
fasilitas gravitasi diubah menunjukkan tren yang berlawanan ( Gambar 6). Dalam
kondisi simulatedmicrogravity, isoform nucleolin-L1 menunjukkan rentang
yang lebih pendek, konsisten dengan kehadiran varian fosforilasi kurang,
serta kurang proteolisis (50 dan 30 kDa berat molekul jelas); semua data ini
kompatibel dengan aktivitas yang lebih rendah dari protein

Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org 8 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al.
GAMBAR 5 | variasi terkait gravitasi dalam ekspresi gen proliferasi sel dan pertumbuhan sel faktor. Beberapa
gen dikenal penanda diandalkan proliferasi sel (siklus sel) dan pertumbuhan sel (ribosom biogenesis) telah
dianalisis untuk tingkat ekspresi mereka dalam kondisi yang berbeda dari gravitasi, menggunakan
probesets microarray (GEO: GSE29787, Manzano et al., 2012a
dan RT-qPCR). grafik atas menunjukkan gen yang berhubungan dengan regulasi siklus sel, dan gen pusat
dan grafik yang lebih rendah acara coding untuk protein nukleolus nucleolin-L1 dan fi brillarin (dicatat bahwa
lebih dari satu pasang probeset tersedia bagi mereka gen dalam microarray yang sama), masing-masing.
Secara umum, sebuah perilaku yang berlawanan ditemukan di gayaberat mikro dan hypergravity kondisi
simulasi vs 1 g kontrol. Hasil qPCR paling relevan muncul menekankan pada kolom kanan, dibayangi abu-abu.
Statistik hasil signifikan (Mahasiswa t uji,
p < 0,05, RPM / LDC ekspresi relatif vs 1 g control) akan ditampilkan dengan tanda bintang.
dalam regulasi pengolahan pra-rRNA. Namun, dalam LDC, rentang yang lebih
luas, kompatibel dengan varian yang lebih fosforilasi atau isoform, serta lebih
proteolisis yang ditampilkan, dibandingkan dengan 1 g ( kontrol LDC). Hasil ini
sesuai dengan aktivitas yang lebih tinggi dari protein ( González-Camacho dan
Madinah, 2005, 2006 ).
DISKUSI
kondisi gravitasi diubah menghasilkan decoupling pertumbuhan sel dan
proliferasi sel proses di akar meristematik
Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org
Sel tanaman di bawah Gravity Diubah
sel bibit ( Matia et al, 2010.; Manzano et al., 2012b, 2013 ). Hasil yang dijelaskan di
sini setelah pengobatan mikro simulasi di RPM (penipisan pertumbuhan sel dan
peningkatan proliferasi sel) con fi rm e ects ff yang sama ditemukan pada bibit,
sekarang menggunakan in vitro sistem selular ditandai dengan tingkat proliferasi
yang tinggi, dan menunjukkan bahwa e ini ff ects dapat dideteksi segera setelah
perubahan lingkungan, meskipun tidak semua parameter yang diuji terkait dengan
fungsi sel ini muncul sama dimodifikasi. Mengenai hypergravity (2 g), sistem selular
juga diubah dalam arah yang berlawanan dan, secara umum, dengan intensitas
yang lebih rendah daripada di bawah mikro simulasi.
Hasil ini mungkin setelah definisi de dari serangkaian fitur struktural
dalam nukleolus yang diketahui berkorelasi dengan tingkat biogenesis
ribosom dan yang kemudian dapat digunakan untuk dengan mudah
menentukan di bawah mikroskop keadaan sebenarnya dari fungsi
pertumbuhan sel di berkembang biak sel. Penggunaan jenis struktur
nukleolus telah terbukti sangat e ff efektif, menunjukkan
perbedaan-perbedaan di ff yang jelas antara kondisi erent di ff dianalisis,
terutama mengenai pengobatan mikro simulasi. Hasil kami menunjukkan
sekali lagi bahwa nukleolus adalah sensor yang sangat baik dari negara
fungsional dari sel dan penanda diandalkan stres selular, seperti yang
dilaporkan sebelumnya ( Srivastava dan Pollard 1999; Mayer dan Grummt,
2005; Raska et al., 2006; Saez-Vásquez dan Madinah, 2008 ). Selain itu,
sistem evaluasi pola struktural nukleolus yang disajikan di sini tidak hanya
berlaku dalam konteks penelitian gravitasi diubah, tetapi juga dalam jenis lain
dari studi sel tanaman dari perubahan yang disebabkan oleh kondisi
pertumbuhan diubah pada sel aktif berkembang biak. Kegunaan tes yang
dapat dengan cepat memberikan data tentang status pertumbuhan /
proliferasi populasi sel bila terkena stres lingkungan tertentu, termasuk situasi
patologis, perlu dicatat.
Hasil percobaan kami telah mengungkapkan bahwa perubahan dalam
mekanisme regulasi siklus sel merupakan bagian dari respon seluler dini
untuk stres gravitasi. perubahan ekspresi gen faktor regulasi sepakat dengan
hasil yang dilaporkan pada sel-sel meristematik akar dari bibit ( Manzano et
al., 2009, 2012a ). Selain hasil termasuk dalam Gambar 5, Lembar Data 1 mengumpulkan
daftar puluhan gen-sel-siklus terkait yang menunjukkan tingkat ekspresi
berubah dalam analisis microarray dengan sampel yang sama ( Manzano et
al., 2012a ). Selain itu, aliran cytometry data yang telah mengungkapkan
perubahan dalam durasi fase siklus sel, terutama peningkatan baik S dan G2
/ M subpopulasi sel di bawah gayaberat mikro simulasi dan variasi kecil
(bahkan penurunan G2 / M subpopulasi) di centrifuge tersebut. Jika tidak,
penurunan proporsi sel G1, yang diamati pada sampel RPM, kompatibel
dengan percepatan siklus sel, yang mengakibatkan peningkatan laju
proliferasi sel. Hal ini penting untuk berkomentar bahwa waktu singkat
paparan kondisi gravitasi diubah mungkin tidak cukup lama untuk mengamati
de fi ned e ff ect pada durasi fase siklus sel, yang menjadi lebih jelas setelah
eksposur lama untuk diubah gravitasi (hasil tidak dipublikasikan). Sedangkan
paparan singkat kondisi hypergravity menghasilkan deregulasi yang luas di
tingkat ekspresi gen,
9 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al. Sel tanaman di bawah Gravity Diubah

GAMBAR 6 | variasi terkait gravitasi di titik isoelektrik dari varian protein nukleolus nucleolin-L1. Eksperimen dari blotting 2D-Barat telah dilakukan untuk menentukan seluruh repertoar varian (berat molekul yang sama, titik isoelektrik
yang berbeda) dari penting protein nukleolus nucleolin-L1 dalam kondisi yang berbeda dari gravitasi. Menurut hasil diterbitkan sebelumnya, varian ini mencerminkan negara fosforilasi yang berbeda dari protein dan jumlah varian
(rentang bintik-bintik melalui rentang pH) berkorelasi dengan aktivitas nucleolin dan tingkat biogenesis ribosom ( González-Camacho dan Madinah, 2004 ). varian Nucleolin-L1 meningkat dalam kondisi hypergravity dan penurunan di
gayaberat mikro simulasi sehubungan dengan masing-masing 1 g kontrol.

cytometry, masih langka dan buruk didefinisikan dalam tahap awal ini respon.
Hasil pada tingkat ekspresi gen pengatur pertumbuhan sel relatif tidak
pasti. Sementara AtNUC-L1 dan AtFIB, protein yang terlibat dalam
biogenesis ribosom ( Cerdido dan Madinah, 1995; Medina et al., 2000 ),
Menunjukkan sedikit peningkatan dalam ekspresi gen di bawah kedua
kondisi gravitasi diubah oleh RTqPCR, data sebelumnya diperoleh dari
percobaan microarray yang di ff erent dan lebih konsisten dengan hasil yang
diperoleh dari studi struktural nukleolus (penurunan mikro simulasi tetapi
meningkat di hypergravity), meskipun besarnya perubahan terdeteksi selalu
kecil. Namun, hasil di tingkat protein yang lebih meyakinkan. Pada
2DWestern-bercak, nucleolin-L1 isoform menunjukkan rentang berkurang
dari titik isoelektrik di RPM, sama seperti yang ditemukan dalam sel-sel
meristematik akar ( Matia et al., 2007 ), Dan rentang ini lebih luas di LDC,
dibandingkan dengan kontrol masing-masing. Beberapa tempat yang sesuai
dengan produk proteolitik bisa juga diidentifikasi dalam sampel LDC. Menurut
laporan sebelumnya pada fungsional signifikansi variasi ini ( GonzálezCamacho nukleolus), tapi tidak dalam hal perubahan yang signifikan dalam ukuran sel, yang
dan Madinah, 2005, 2006 ), Perbedaan-perbedaan di ff ini dalam rentang
isoform nucleolin sepanjang rentang pH sesuai dengan di ff
perbedaan-perbedaan di negara fosforilasi protein. Hal ini diketahui bahwa
aktivitas nucleolin dalam regulasi sintesis pra-rRNA dan pengolahan di
nukleolus, yang berlangsung di langkah erent di ff proses, tergantung pada
fosforilasi dan proteolisis ( Warrener dan Petryshyn, 1991 ). Menariknya, hasil
kami jelas menunjukkan bahwa nucleolin
adalah target dari stres gravitasi, bermain peran dalam respon seluler ff
sebuah ecting pertumbuhan biogenesis / sel ribosom, tetapi perubahan yang
diamati setelah pengobatan gravitasi diubah pendek terutama disebabkan oleh
kation modi fi pasca-translasi protein (fosforilasi / defosforilasi), dan bukan
dengan perubahan dalam ekspresi gen, yang akhirnya terdeteksi hanya ketika
pengobatan gravitasi diubah memperpanjang untuk waktu yang cukup lama
(hasil tidak dipublikasikan). Tampaknya, dalam hal ini, lebih mudah dan lebih
cepat untuk merespon perubahan lingkungan dengan memodifikasi komponen
sudah ada dalam sel daripada menata kembali mesin kompleks regulasi
ekspresi gen.
Oleh karena itu, gambaran lengkap dari respon awal untuk gravitasi berubah
dalam hal pertumbuhan biogenesis / sel ribosom adalah bahwa respon parsial
pada tingkat molekuler (proteomik bukan transcriptomic) disertai dengan respon
phenotypical parsial, terdeteksi di tingkat subselular (ukuran dan struktur
hanya terdeteksi setelah kali lebih lama dari paparan gravitasi diubah ( Matia et al,
2010.; Manzano et al., 2013 ). Oleh karena itu, perubahan nukleolus adalah bagian
dari respon awal untuk perubahan gravitasi ff pertumbuhan sel merenung dan
mendahului e ff ect di tingkat sel secara keseluruhan.
Menurut hasil kami, perubahan dalam pertumbuhan sel dan proliferasi disebabkan oleh
gravitasi diubah dalam berkembang biak sel dalam kultur in vitro mengikuti tren yang sama
seperti yang dijelaskan sebelumnya untuk sel meristematik akar. Hal ini terjadi meskipun
fakta bahwa agregasi dari sel-sel kalus bukan merupakan suatu jaringan yang sebenarnya,

Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org 10 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al.
tidak seperti apa yang terjadi di meristem akar. Sejauh yang kami tahu, tidak ada
data tentang mekanisme yang mungkin gravitasi penginderaan dan respon pada Arabidopsis
yang tepat diselidiki dan diselesaikan.
UNDI ff sel erentiated. makalah sebelumnya hanya melaporkan adanya
semacam tanggapan terhadap mikro dalam sistem selular, tanpa menyelidiki
mekanisme, di Nicotiana ( Sieberer et al., 2009 ) dan Brassica
( Rasmussen et al., 1994 ), Tetapi jelas bahwa setiap sel tanaman memiliki unsur-unsur
yang sensitif terhadap rangsangan amechanical, seperti perubahan gravitasi. Dinding
sel, membran plasma dan sitoskeleton bisa menjadi kandidat yang baik untuk
memainkan peran dalam proses ini ( Tongkat et al., 1997; Hoson et al., 2005, 2010 )
(Lihat Herranz dan Madinah, 2014 untuk hipotesis).
Kesimpulannya, inkubasi jangka pendek dari budaya tanaman sel kalus Arabidopsis
untuk RH dan oleh akses ke fasilitas Berbasis Tanah: ESA SEGMGSPE_Ph1
thaliana di di perangkat ff erent untuk mikro simulasi dan hypergravity telah
memungkinkan pengidentifikasian jenis morfofungsi dari nukleolus, yang telah
berkorelasi dengan status proliferasi pertumbuhan sel / sel. Ini jenis nukleolus
memiliki penerapan potensi sebagai sensor tekanan lingkungan atau sebagai
penanda patologis. Selain itu, kami telah menemukan bahwa gravitasi diubah
menginduksi perubahan di awal siklus perkembangan dan regulasi sel, serta di
tingkat biogenesis ribosom, yang terkait dengan pasca-translasi modi fi kasi dari
nucleolin protein nukleolus. Perubahan ini, pada dasarnya sama dengan yang
dijelaskan sebelumnya untuk bibit, terjadi karena tidak adanya mekanisme
khusus yang dikenal untuk persepsi gravitasi dalam kultur sel in vitro. Oleh karena
itu, mekanisme intraseluler penginderaan dan transduksi sinyal gravitasi harus
beroperasi dalam sel erentiated ff UNDI.
KONTRIBUSI PENULIS
Konsepsi dan desain dari pekerjaan itu terutama tanggung jawab FJM, dengan
partisipasi dari RH dan JVL. Akuisisi data adalah tanggung jawab AIM, RH, dan
AM, dengan partisipasi JVL. Analisis dan interpretasi data, penyusunan karya,
revisi penting untuk konten intelektual penting dan persetujuan fi nal dari versi
yang akan diterbitkan adalah tanggung jawab semua lima co-penulis. Semua
dari mereka adalah dalam perjanjian untuk bertanggung jawab untuk semua
aspek pekerjaan dalam memastikan bahwa
REFERENSI
Barjaktarovic, Z., Nordheim, A., Lamkemeyer, T., Fladerer, C., Madlung, J., dan
Hampp, R. (2007). Waktu-kursus perubahan jumlah spesifik protein setelah terpapar hiper-g,
2-D clinorotation, dan 3-D posisi acak kultur sel Arabidopsis. J. Exp. Bot. 58, 4357-4363. doi:
10,1093 / JXB / erm302
Barjaktarovic, Z., Schutz, W., Madlung, J., Fladerer, C., Nordheim, A., dan Hampp,
R. (2009). Perubahan dalam e ff efektif kekuatan gravitasi medan sebuah ff ect keadaan fosforilasi protein
yang berhubungan dengan stres dalam kultur kalus dari Arabidopsis thaliana. J. Exp. Bot. 60, 779-789. doi:
10,1093 / JXB / ern324
Baserga, R. (2007). Apakah ukuran sel penting? Siklus sel 6, 814-816. doi:
10,4161 / cc.6.7.4049
Beemster, GTS, dan Baskin, TI (1998). Analisis pembelahan sel dan pemanjangan
mendasari percepatan perkembangan pertumbuhan akar di Arabidopsis thaliana. Tanaman Physiol. 116, Darbelley, N., Driss-École, D., dan Perbal, G. (1989). Pemanjangan dan mitosis
1515-1526. doi: 10,1104 / pp.116.4.1515
Bernstein, KA, dan Baserga, SJ (2004). Subunit kecil processome adalah
diperlukan untuk progresi siklus sel pada G1. Mol. Biol. Sel 15, 5038-5046. doi:
10,1091 / mbc.E04-06-0515
Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org
Sel tanaman di bawah Gravity Diubah
pertanyaan yang terkait dengan keakuratan atau integritas dari setiap bagian dari pekerjaan
PENDANAAN
AIM dan AM didukung oleh program fellowship FPI Spanyol. RH didukung
oleh Spanyol Sains dan Teknologi (Especialización en ORGANISMOS
Internacionales) / CDTI beasiswa (ESA Program trainee Spanyol) dan juga
didukung oleh kontrak CSIC JAE-Doc. Karya ini didukung oleh Hibah dari
Spanyol “Rencana Nacional de Investigacion Cientí fi ca y Desarrollo
Tecnológico” (Ministerio de Economia y Competitividad, Spanyol), Ref.
AYA2010-11834-E dan AYA2012-33982 untuk FJMand AYA2009-07792-E
Project (kontrak nomor 4200022650) untuk JVL, FJM, dan RH.
UCAPAN TERIMA KASIH
Kami berterima kasih kepada Dr J. Saez-Vásquez (Universitas Perpignan,
Prancis) untuk hadiah murah hati antibodi anti-nucleolin. Penelitian ini tidak
akan mungkin terjadi tanpa dukungan teknis dari bagian TEC-MMG di
ESTEC, terutama Mr Allan Dowson, Mr. Robert Lindner dan Ibu Jutta Krause,
dan tenaga teknis dari CIB-CSIC, terutama Dr Pedro Lastres dan Ibu
Mercedes Carnota.
MATERI TAMBAHAN
Bahan Tambahan untuk artikel ini dapat ditemukan secara online di:
http://journal.frontiersin.org/article/10.3389/fspas.
2016,00002
Lembar Data 1 | Tabel dengan ekspresi kuantitatif dari gen siklus sel. Kedua inti mesin siklus sel (bold) dan sel
siklus terkait gen yang diinduksi atau ditekan di bawah angka kondisi gravitasi diubah ditunjukkan (disediakan
sebagai lembar EXCEL 1 dan 2). Gen perubahan ekspresi kali lipat untuk RPM dan LDC vs kontrol dari 31 gen
dengan signifikan perubahan fi kan di bawah 2 g kondisi menggunakan limma sebuah p- value <
0,01 oleh FIESTA penampil v.1.0. uji statistik lainnya yang telah disediakan (limma, limma FDR dan Rankprod)
.Sheet 3 (dalam dokumen yang sama) menguraikan nomor PCR kuantitatif diwakili dalam Gambar 5. Berarti ± nilai
standar deviasi selama 3 ulangan disediakan untuk kontrol dan kondisi eksperimental.
Bernstein, KA, Bleichert, F., Bean, JM, Cross, FR, dan Baserga, SJ (2007).
biogenesis ribosom dirasakan di pos pemeriksaan siklus sel awal. Mol. Biol. Sel
18, 953-964. doi: 10,1091 / mbc.E06-06-0512
Borst, AG, dan Van Loon, JJWA (2009). Teknologi dan perkembangan
untuk mesin posisi acak, RPM. Microgr. Sci. Technol. 21, 6. doi:
10,1007 / s12217-008-9043-2
Cerdido, A., dan Madinah, FJ (1995). Subnucleolar lokasi fi brillarin dan
variasi dalam tingkat selama siklus sel dan selama di ff diferensiasi sel tumbuhan. Chromosoma 103,
625-634. doi: 10,1007 / BF00357689
Colón-Carmona, A., Anda, R., Haimovitch-Gal, T., dan Doerner, P. (1999).
muka Teknis: analisis spatio-temporal aktivitas mitosis dengan cyclin-GUS protein fusi labil. Tanaman
J. 20, 503-508. doi: 10,1046 / j.1365313x.1999.00620.x
aktivitas sel kortikal akar miju-miju tumbuh di mikro. Tanaman Physiol. Biochem. 27, 341-347.
De Veylder, L., Beeckman, T., dan Inzé, D. (2007). Seluk beluk tanaman
siklus sel. Nat. Rev. Mol. Sel Biol. 8, 655-665. doi: 10.1038 / nrm2227
11 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al.
Doerner, P. (2008). “Sinyal dan mekanisme dalam mengendalikan pertumbuhan tanaman,” di
Pertumbuhan Tanaman Signaling, eds L. Bögre dan G. Beemster (Berlin; Heidelberg: Springer), 1-23. doi:
10,1007 / 7089_2007_142
Driss-Ecole, D., Legue, V., Carnero-Diaz, E., dan Perbal, G. (2008). Gravisensitivity
dan automorphogenesis akar bibit lentil tumbuh di papan Stasiun Luar Angkasa Internasional. Physiol.
plantarum 134, 191-201. doi:
10,1111 / j.1399-3054.2008.01121.x
Fengler, S., Spirer, I., Neef, M., Ecke, M., Nieselt, K., dan Hampp, R. (2015).
Sebuah studi microarray seluruh genom dari Arabidopsis thaliana kultur kalus semipadat
terkena mikro dan kondisi ight ruang fl nonmicrogravity terkait selama 5 hari di papan dari
Shenzhou 8. BioMed Res. Int. 2015: 547.495. doi: 10,1155 / 2015/547495
González-Camacho, F., dan Madinah, FJ (2004). Identifikasi dari spesifik tanaman
phosphoproteins nukleolus dalam analisis proteomik fungsional proteomik 4, 407-417. doi: 10,1002 /
pmic.200300645
González-Camacho, F., dan Madinah, FJ (2005). Struktur nukleolus dan
protein nukleolus sebagai indikator peristiwa proliferasi sel pada tumbuhan. J. Appl. Biomed. 3,
167-174. Tersedia online di: http://jab.zsf.jcu.cz//3_4/medina.pdf
González-Camacho, F., dan Madinah, FJ (2006). Struktur nukleolus dan
kegiatan nucleolin seperti NopA100 protein selama siklus sel dalam berkembang biak sel tumbuhan. Histochem. Menges, M., dan Murray, JA (2006). Sinkronisasi, transformasi, dan
Sel Biol. 125, 139-153. doi: 10,1007 / s00418-005-0081-1
Herranz, R., Anken, R., Boonstra, J., Braun, M., Christianen, PCM, Geest, MD,
et al. (2013a). Fasilitas berbasis darat untuk simulasi mikro: organismspeci rekomendasi fi c
untuk mereka gunakan, dan direkomendasikan terminologi.
Astrobiology 13, 1-17. doi: 10,1089 / ast.2012.0876
Herranz, R., Manzano, AI, Van Loon, JJWA, Christianen, PCM, dan
Madinah, FJ (2013b). tanda tangan proteomik dari Arabidopsis kultur sel terkena magnetis yang
disebabkan hiper dan mikro lingkungan. Astrobiology
13, 217-224. doi: 10,1089 / ast.2012.0883
Herranz, R., dan Madinah, FJ (2014). Proliferasi sel dan perkembangan tanaman
di bawah diubah Novel lingkungan gravitasi. Tanaman Biol. 16, 23-30. doi:
10,1111 / plb.12103
Hoson, T., Matsumoto, S., Soga, K., dan Wakabayashi, K. (2010). kortikal
mikrotubulus bertanggung jawab untuk ketahanan gravitasi pada tanaman. Tanaman Signal. Behav. 5, 752-754.
doi: 10,4161 / psb.5.6.11706
Hoson, T., Saito, Y., Soga, K., dan Wakabayashi, K. (2005). persepsi sinyal,
transduksi, dan respon dalam perlawanan gravitasi. graviresponse lain pada tanaman. Adv. Ruang
Res. 36, 1196-1202. doi: 10,1016 / j.asr.2005.04.095
Inzé, D., dan De Veylder, L. (2006). regulasi siklus sel dalam pembangunan pabrik.
Annu. Rev. Genet. 40, 77-105. doi: 10,1146 / annurev.genet.40.110405.090431
Kimbrough, JM, Salinas-Mondragon, R., Boss, WF, Brown, CS, dan Sedero ff,
HW (2004). Cepat dan transien jaringan transkripsi gravitasi dan stimulasi mekanik di Arabidopsis
apeks akar. Tanaman Physiol. 136, 2790-2805. doi: 10,1104 / pp.104.044594
Klaus, DM, Schatz, A., Neubert, J., Höfer, M., dan Todd, P. (1997). Escherichia coli
kinetika pertumbuhan: a definisi dari “bobot fungsional” dan perbandingan clinostat dan ruang
hasil fl ight. Naturwissenschaften 143, 7.
Kraft, TF, van Loon, JJ, dan Kiss, JZ (2000). Posisi plastida di Arabidopsis
sel kolumela mirip mikro dan pada mesin acak-positioning. Planta 211, 415-422. doi: 10,1007 /
s004250000302
Legue, V., Yu, F., Driss-École, D., dan Perbal, G. (1996). Ects E ff stres gravitropic
pada pengembangan akar utama dari bibit miju-miju tumbuh di ruang angkasa.
J. Biotechnol. 47, 129-135. doi: 10,1016 / 0168-1656 (96) 01.356-9
Li, C., Potuschak, T., Colón-Carmona, A., Gutiérrez, RA, dan Doerner, P. (2005). Arabidopsis
TCP20 link regulasi pertumbuhan dan pembelahan sel jalur kontrol. Proc. Natl. Acad. Sci.
Amerika Serikat 102, 12.978-12.983. doi:
10,1073 / pnas.0504039102
Manzano, AI, Herranz, R., Van Loon, J., dan Madinah, FJ (2012b). pertumbuhan sel
dan proliferasi sel decoupling bawah lingkungan hypergravity diinduksi dengan sentrifugasi. Mikro
Sci. Technol. 24, 373-381. doi: 10,1007 / s12217012-9301-1
Manzano, AI, Larkin, O., Dijkstra, C., Anthony, P., Davey, M., Eaves, L., et al.
(2013). proliferasi sel meristematik dan biogenesis ribosom yang dipisahkan di diamagnetically
diangkat sekitar Arabidopsis bibit. BMC Tanaman Biol. 13: 124. doi:
10,1186 / 1471-2229-13-124
Manzano, AI, Matia, I., González-Camacho, F., Carnero-Díaz, E., Van Loon,
JJWA, Dijkstra, C., et al. (2009). Perkecambahan biji Arabidopsis dalam ruang dan di gayaberat
mikro simulasi: perubahan dalam pertumbuhan sel akar dan
Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org
Sel tanaman di bawah Gravity Diubah
proliferasi. Microgr. Sci. Technol. 21, 293-297. doi: 10,1007 / s12217-0089099-z
Manzano, A., van Loon, J., Christianen, P., Gonzalez-Rubio, J., Medina, FJ, dan
Herranz, R. (2012a). variasi gravitasi dan magnetik lapangan bersinergi untuk menyebabkan
variasi halus di negara transkripsi global Arabidopsis in vitro
kultur kalus. BMC Genomics 13: 105. doi: 10,1186 / 1471-2164-13-105 Matia, I.,
González-Camacho, F., Herranz, R., Kiss, JZ, Gasset, G., van Loon,
JJWA, et al. (2010). Tanaman proliferasi dan pertumbuhan sel yang diubah oleh kondisi mikro
di ruang fl ight. J. Tanaman Physiol. 167, 184-193. doi:
10,1016 / j.jplph.2009.08.012
Matia, I., González-Camacho, F., Marco, R., Kiss, JZ, Gasset, G., Van Loon, JJ
WA, et al. (2007). “Akar” percobaan dari “cervantes” Spanyol Soyuz Misi: proliferasi sel dan
aktivitas nukleolus perubahan dalam Arabidopsis
akar berkecambah di gayaberat mikro nyata atau simulasi. Microgr. Sci. Technol. 19, 128-132. doi:
10,1007 / BF02919467 Mayer, C., dan Grummt, I. (2005). stres seluler dan fungsi nukleolus. Siklus sel
4, 1036-1038. doi: 10,4161 / cc.4.8.1925
Medina, FJ, Cerdido, A., dan de Carcer, G. (2000). Organisasi fungsional
dari nucleolus di berkembang biak sel tumbuhan. Eur. J. Histochem. 44, 117-131.
kriopreservasi sel suspensi-berbudaya. Metode Mol. Biol. 323, 45-61. doi: 10,1385 /
1-59745-003-0: 45
Merkys, AJ, Laurinavicius, RS, dan Svegzdiene, DV (1984). Pertumbuhan tanaman,
pengembangan dan embriogenesis selama Salyut-7 fl ight. Adv. Ruang Res. 4, 55-63. doi: 10,1016 /
0273-1177 (84) 90.224-2 Mizukami, Y. (2001). Soal ukuran: kontrol perkembangan ukuran organ
dalam
tanaman. Curr. Opin. Tanaman Biol. 4, 533-539. doi: 10,1016 / S1369-5266 (00) 00.212-0
Moreno Díaz de la Espina, S., Medina, FJ, dan Risueño, MC (1980). Korelasi
aktivitas nukleolus dan vacuolation nukleolus dalam sel tanaman. Eur. J. Sel Biol.
22, 724-729.
Moseyko, N., Zhu, T., Chang, HS, Wang, X., dan Feldman, LJ (2002).
Transkripsi pro fi ling dari respon gravitropic awal Arabidopsis menggunakan high-density microarray
probe oligonukleotida. Tanaman Physiol. 130, 720-728. doi: 10,1104 / pp.009688
Paul, A.-L., Zupanska, AK, Ostrow, DT, Zhang, Y., Sun, Y., Li, J.-L., et al.
(2012). Ruang transkriptomika fl ight: tanggapan unik untuk lingkungan baru.
Astrobiology 12, 40-56. doi: 10,1089 / ast.2011.0696
Petricka, JJ, dan Nelson, TM (2007). Arabidopsis nucleolin sebuah ff ects
pengembangan tanaman dan pola. Tanaman Physiol. 144, 173-186. doi:
10,1104 / pp.106.093575
Pontvianne, F., Matia, I., Douet, J., Tourmente, S., Medina, FJ, Echeverría, M.,
et al. (2007). Karakterisasi AtNUC-L1 mengungkapkan peran sentral dari nucleolin dalam organisasi
nukleolus dan pembungkaman gen AtNUC-L2 di Arabidopsis. Mol. Biol. Sel 18, 369-379. doi: 10,1091 /
mbc.E06-08-0751
Raska, I., Shaw, PJ, dan Cmarko, D. (2006). Struktur dan fungsi
yang nucleolus dalam sorotan. Curr. Opin. Sel Biol. 18, 325-334. doi:
10,1016 / j.ceb.2006.04.008
Rasmussen, O., Bondar, RL, Baggerud, C., dan Iversen, TH (1994).
Pengembangan tanaman protoplas selama misi IML-1. Adv. Ruang Res.
14, 189-196. doi: 10,1016 / 0273-1177 (94) 90.403-0
Risueño, MC, dan Madinah, FJ (1986). “Struktur nukleolus dalam sel tanaman,”
di Ulasan Biologi Sel (RBC), Vol. 7, ed E. Barbera-Guillem (Leioa; Vizcaya: Universitas Basque
Country-Springer Internasional), 1-154. Saez-Vásquez, J., Caparros-Ruiz, D., Barneche, F., dan
Echeverría, M. (2004). SEBUAH
tanaman snoRNP kompleks yang mengandung snoRNAs, fi brillarin, dan protein nucleolin seperti
kompeten untuk kedua gen rRNA mengikat dan pra-rRNA pengolahan
in vitro. Mol. Sel Biol. 24, 7284-7297. doi: 10,1128 / MCB.24.16.7284-72
97,2004
Saez-Vásquez, J., dan Madinah, FJ (2008). “Pabrik nucleolus,” di kemajuan dalam
Botanical Research, Vol. 47, eds JC Kader dan M. Delseny. (San Diego, CA: Elsevier), 1-46.
Shen-Miller, J., dan Hinchman, RR (1995). transformasi nukleolus pada tanaman
ditanam di clinostats. protoplasma 185, 194-204. doi: 10,1007 / BF01272860
Sieberer, BJ, Kieft, H., Franssen-Verheijen, T., Emons, AMC, dan Vos,
JW (2009). Proliferasi sel, bentuk sel, dan mikrotubulus dan selulosa organisasi fi bril mikro
tembakau BY-2 sel tidak diubah oleh paparan dekat bobot di ruang angkasa. Planta 230,
1129-1140. doi: 10,1007 / s00425-0091010-7
12 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2
Manzano et al. Sel tanaman di bawah Gravity Diubah

Sobol, M., González-Camacho, F., Rodríguez-Vilarino, V., Kordyum, EL, dan Van Loon, J., Krause, J., Cunha, H., Goncalves, J., Almeida, H., dan Schiller, P.
Madinah, FJ (2005). Clinorotation memengaruhi rDNA dan NopA100 lokalisasi di nukleolus. Adv. (2008). “Diameter besar centrifuge, LDC, untuk hidup dan ilmu fisik dan teknologi,” di Prosiding
Ruang Res. 36, 1254-1262. doi: 10,1016 / j.asr.2005.05.072 Hidup Space For Life On Earth Simposium
Sobol, M., González-Camacho, F., Rodríguez-Vilarino, V., Kordyum, E., dan (Angers), 22-27.
Madinah, FJ (2006). Lokasi Subnucleolar dari fi brillarin dan NopA64 di Warrener, P., dan Petryshyn, R. (1991). fosforilasi dan
Lepidium sativum akar sel meristematik berubah dalam gravitasi diubah. degradasi proteolitik dari nucleolin dari sel 3T3-F442A. Biochem. Biophys. Res. Commun. 180,
protoplasma 228, 209-219. doi: 10,1007 / s00709-006-0157-3 716-723. doi: 10,1016 / S0006-291X (05) 81.124-6
Srivastava, M., dan Pollard, HB (1999). diseksi molekuler dari peran nucleolin ini
dalam pertumbuhan dan proliferasi sel: wawasan baru. FASEB J. 13, 1911-1922. Yu, F., Driss-École, D., Rembur, J., Legu, é, V., dan Perbal, G.
Paranada, MP, Wayne, R., dan Leopold, AC (1997). E ff ect dari eksternal (1999). E ff ect dari mikro pada siklus sel di root miju-miju.
media pada kelengkungan gravitropic beras (Oryza sativa, Poaceae) akar. Physiol. plantarum 105, 171-178. doi: 10,1034 / j.1399-3054.1999.
Amer. J. Bot. 84, 1522-1529. doi: 10,2307 / 2.446.613 105125.x
Testillano, PS, González-Melendi, P., Ahmadian, P., dan Risueño, MC (1995).
Metilasi-asetilasi metode: sebuah sitokimia ultrastructural untuk asam nukleat yang kompatibel Konflik Pernyataan Tujuan: Para penulis menyatakan bahwa penelitian ini dilakukan dalam tidak
dengan studi immunogold. J. Struct. Biol. 114, 123-139. adanya hubungan keuangan komersial atau fi yang dapat ditafsirkan sebagai konflik kepentingan yang
Van Leene, J., Hollunder, J., Eeckhout, D., Persiau, G. Van De Slijke, E., Stals, H., potensial.
et al. (2010). Target interactomics mengungkapkan siklus sel mesin inti yang kompleks di Arabidopsis
thaliana. Mol. Syst. Biol. 6, 397. doi: 10.1038 / msb.2010.53 Copyright © 2016 Manzano, Herranz, Manzano, van Loon dan Madinah. Ini adalah sebuah artikel akses
Van Loon, JJWA (2007). Beberapa sejarah dan penggunaan posisi acak terbuka didistribusikan di bawah persyaratan Lisensi Creative Commons Attribution (CC BY).
mesin, RPM, dalam penelitian gravitasi terkait. Adv. Ruang Res. 39, 1161-1165. doi: Penggunaan, distribusi atau reproduksi di forum lain diperbolehkan, asalkan penulis asli (s) atau
10,1016 / j.asr.2007.02.016 pemberi lisensi dikreditkan dan bahwa publikasi asli dalam jurnal ini dikutip, sesuai dengan praktek
Van Loon, JJWA, Tranck, E., VanNieuwenhoven, FA, Snoeckx, LHEH, De akademik diterima. Tidak ada penggunaan, distribusi atau reproduksi diperbolehkan yang tidak
Jong, HA, andWubbels, RJ (2005). Sebuah gambaran singkat dari penelitian hypergravity hewan. J. Gravit. mematuhi persyaratan ini.
Physiol. 12, 6.

Frontiers di Astronomi dan Ilmu Antariksa | www.frontiersin.org 13 Februari 2016 | Volume 3 | Pasal 2