INTRODUÇÃO:

Microrganismo é o nome dado a todos os organismos compostos por uma única célula e que não
podem ser vistos a olho nu, sendo visíveis apenas com o auxílio de um microscópio. Podem estar
reunidos organismos pertencentes aos mais diversos grupos, como, por exemplo, vírus,
bactérias, fungos unicelulares e protistas.

A área que estuda esses pequenos organismos é chamada de microbiologia. Muitas vezes, o
termo é associado à transmissão de doenças. No entanto, nem todos os microrganismos são
patogênicos, existindo até mesmo aqueles que são benéficos à saúde humana, como é o caso
das bactérias da flora intestinal. Os microrganismos, tal como outros organismos vivos,
necessitam de obter os nutrientes apropriados do seu meio ambiente. Assim se quisermos
cultivar e manter microrganismos vivos em laboratório, necessitamos coloca-los em meios de
cultura contendo os nutrientes apropriados para o seu crescimento. Além dos nutrientes é
necessário também que as condições de oxigênio, pH e pressão osmótica sejam adequadas ao
crescimento desses microrganismos.

Na preparação dos meios e na manutenção das culturas de microrganismos é importante

observar as condições necessárias de assepsia, de modo que se evitem contaminações com
outros microrganismos.

Os meios de cultura dividem-se primeiramente em meios sólidos, aqueles que contêm ágar, e
meios líquidos, sem ágar. Ambos os meios são preparados com água destilada, aquecidos até
que se dissolvam completamente e posteriormente esterilizados por autoclavagem a 121º C.

Nos meios sólidos o crescimento para por exaustão de nutrientes, devendo realizar-se a
transferência de colónias para novo meio. No entanto estes meios permitem a individualização
das colónias. Os meios líquidos permitem melhor difusão de metabólitos, mas não o isolamento
de colónias. O crescimento de bactérias, em um meio liquido, identifica-se por turvação do
meio, formação de uma película na sua superfície, ou aparecimento de sedimento, enquanto
que num meio sólido por aparecimento de colónias, essa característica é conveniente para
isolamento de colónias de bactérias. As colónias de diferentes espécies de bactérias diferem no
tamanho, forma, textura e cor.

A coloração de Gram é um método de coloração de bactérias desenvolvido pelo médico

dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853 - 1838), em 1884, e que consiste no
tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com o reagente cristal
violeta, lugol, álcool-acetona e fucsina básica. Essa técnica permite a separação de amostras
bacterianas em Gram-positivas (roxas) e Gram-negativas (vermelhas) e a determinação da
morfologia e do tamanho das amostras analisadas. A coloração de Gram é um dos mais
importantes métodos de coloração utilizados em laboratórios de microbiologia e de análises
clínicas, sendo quase sempre o primeiro passo para a caracterização de amostras de bactérias.

OBJETIVOS:
Coletar, isolar, caracterizar bactérias de amostras ambientais (da sola do sapato) e confeccionar
uma lâmina e utilizar a técnica de gram para visualizar a morfologia das bactérias ao microscópio
óptico.

MATERIAIS E MÉTODOS:

1 \u201cswabs\u201d esterilizado

1 tubo com água destilada estéreo

1 tubo com caldo BHI

1 alça de platina

Bico de Bunsen

Fósforo

Estufa bacteriológica

1 placa de Petri com ágar nutriente

1 lâmina de microscopia

Bateria de Gram: Cristal violeta, lugol, álcool \u2013 acetona e fucsina

Microscópio óptico comum

Óleo de imersão

PROCEDIMENTOS:

Com a alça bacteriológica devidamente esterilizada à chama, e resfriada, coletou-se amostras de

bactérias da sola do sapato, suspensas em um tubo de ensaio. Utilizando a técnica do esfregaço
por estrias foi semeada a amostra de bactérias no ágar nutriente. Incubaram-se os meios de
cultivo sólidos. Esterilizou-se a alça antes e depois de cada inoculação. Incubou-se em estufa por
24 horas.

Posteriormente observaram-se as características das colônias nos ágares. Logo após realizou-se a
flambagem da alça de platina no bico de Bunsen para esterilização, sem seguida colocou-se a
alça de platina na água destilada contida no tubo de ensaio. Em seguida pegamos a placa de
Petri onde estava contida a colônia de bactérias e removemos delicadamente com a alça de
platina uma amostra de bactérias (da sola do sapato) e espalhamos na lâmina com movimentos
circulares e em seguida passamos a lâmina pela chama do bico de Bunsen aproximadamente 3
vezes para fixar o esfregaço pelo calor.

Realizou-se a coloração cobrindo a lâmina com Cristal violeta, por 1 minuto. Depois lavamos a
lâmina em água corrente. Colocou-se Lugol por 1 minuto e novamente lavamos em água
corrente, em seguida colocou-se o álcool-acetona por 5 segundos e lavamos novamente com
água corrente e por último colocamos a fucsina por 30 a 60 segundos e lavamos com água
corrente.

Secou-se a lâmina e levamos ao microscópio óptico no aumento de 100x com uso de óleo de
imersão.

RESULTADO:

Após o procedimento de coloração de Gram a amostra foi observada em microscópio óptico,

utilizando um aumento da ocular em 10x e a objetiva de 100x, totalizando um aumento de 1000
x.

A amostra apresentou bactérias em formas cocos. Indicou serem bactérias Gram + positivas,
com coloração roxa.

CONCLUSÃO:

Com a coloração de Gram é possível distinguir uma bactéria Gram- positiva, que se coram em
roxo, das Gram-negativas, que se coram em vermelho, devido às diferenças encontradas na
parede celular de ambas, cada uma apresenta características próprias, além de possuir o grau de
virulência diferenciado.

A principal finalidade é detectar os tipos de bactérias que estão presentes no ambiente.

INTRODUÇÃO:

Microrganismo é o nome dado a todos os organismos compostos por uma única célula e que não
podem ser vistos a olho nu, sendo visíveis apenas com o auxílio de um microscópio. Podem estar
reunidos organismos pertencentes aos mais diversos grupos, como, por exemplo, vírus,
bactérias, fungos unicelulares e protistas.

A área que estuda esses pequenos organismos é chamada de microbiologia. Muitas vezes, o
termo é associado à transmissão de doenças. No entanto, nem todos os microrganismos são
patogênicos, existindo até mesmo aqueles que são benéficos à saúde humana, como é o caso
das bactérias da flora intestinal. Os microrganismos, tal como outros organismos vivos,
necessitam de obter os nutrientes apropriados do seu meio ambiente. Assim se quisermos
cultivar e manter microrganismos vivos em laboratório, necessitamos coloca-los em meios de
cultura contendo os nutrientes apropriados para o seu crescimento. Além dos nutrientes é
necessário também que as condições de oxigênio, pH e pressão osmótica sejam adequadas ao
crescimento desses microrganismos.

Na preparação dos meios e na manutenção das culturas de microrganismos é importante

observar as condições necessárias de assepsia, de modo que se evitem contaminações com
outros microrganismos.
Os meios de cultura dividem-se primeiramente em meios sólidos, aqueles que contêm ágar, e
meios líquidos, sem ágar. Ambos os meios são preparados com água destilada, aquecidos até
que se dissolvam completamente e posteriormente esterilizados por autoclavagem a 121º C.

Nos meios sólidos o crescimento para por exaustão de nutrientes, devendo realizar-se a
transferência de colónias para novo meio. No entanto estes meios permitem a individualização
das colónias. Os meios líquidos permitem melhor difusão de metabólitos, mas não o isolamento
de colónias. O crescimento de bactérias, em um meio liquido, identifica-se por turvação do
meio, formação de uma película na sua superfície, ou aparecimento de sedimento, enquanto
que num meio sólido por aparecimento de colónias, essa característica é conveniente para
isolamento de colónias de bactérias. As colónias de diferentes espécies de bactérias diferem no
tamanho, forma, textura e cor.

A coloração de Gram é um método de coloração de bactérias desenvolvido pelo médico

dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853 - 1838), em 1884, e que consiste no
tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com o reagente cristal
violeta, lugol, álcool-acetona e fucsina básica. Essa técnica permite a separação de amostras
bacterianas em Gram-positivas (roxas) e Gram-negativas (vermelhas) e a determinação da
morfologia e do tamanho das amostras analisadas. A coloração de Gram é um dos mais
importantes métodos de coloração utilizados em laboratórios de microbiologia e de análises
clínicas, sendo quase sempre o primeiro passo para a caracterização de amostras de bactérias.

OBJETIVOS:

Coletar, isolar, caracterizar bactérias de amostras ambientais (da sola do sapato) e confeccionar
uma lâmina e utilizar a técnica de gram para visualizar a morfologia das bactérias ao microscópio
óptico.

MATERIAIS E MÉTODOS:

1 \u201cswabs\u201d esterilizado