UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLAREAL

FCCNM – EAP BIOLOGÍA BIOQUÍMICA I – 2017 PRÁCTICA

Reporte N° 8 Fecha de Entrega: 2017 – 06 – 20

Código, Apellidos y Nombres:
 2015003686, Betancourt Jiménez, Elizabeth
 2015003668, Cerrato Huapaya, Luis Alejandro
 2015003383, Flores Bancayan, Carlos Alonso
 2015231304, Valencia Velasco, Fernando Gabriel

DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS TOTALES

MATERIALES
 Tubos de ensayo
 Pipetas
 Muestra biológica: suero
 Espectrofotómetro
 Baño maría
 Estándar de lípidos
 Sulfo- fosto- vainillina

CARACTERÍSTICAS DE LAS MUESTRAS O EL MÉTODO UTILIZADO

Con el reactivo sulfo- fosfo- vainillina se puede observar la concentración de los lípidos. En los
lípidos totales se utilizó 7tubos de ensayo que 5son estándar y uno de muestra. En el primer
estándar se colocó 5 ul, el segundo 7.5 ul, tercero 10 ul, el cuarto 12.5 ul y el quinto 15 ul más
0.5ml de ácido sulfúrico. Luego se utilizó 10 ul del suero de la muestra de sangre más 0.5 ml, los
tubos se colocan en baño maría hirviente durante 15 minutos se deja enfriar por unos minutos y
luego se recogen 50 ul = 0.5 ml de cada tubo para ser pasado respectivamente a tubos ya
preparados con 1.25 ml de reactivo vainillin- fosfórico. Se homogenizo durante 10 minutos. Se
llevó al espectrofotómetro colocando el tubo en blanco junto con uno de los tubos estándar a 530
nm hasta completar la lectura de los 7 tubos Luego en tres tubos de prueba colocar las siguientes
cantidades de la mezcla anterior. En 7 tubos de ensayo el primero 100ul ácido sulfúrico y los 5
tubos se echaran la mezcla de estándar y el último la mezcla de muestra. En cada tubo se colocara
1.25 ml de reactivo vainillin – fosfórico. Mezclar y dejar en reposos durante 10 minutos. Leer en
espectrofotómetros 530 nm. Para el colesterol se utilizó 4 tubos de ensayos se va a poner 0.02 ml
de agua destilada, 0.02 ml estándar de lípidos y 0.02 ml de cada muestra, el sobrenadante. A cada
tubo se le agregara 2 ml de sulfo- fosfo- vainillina. Agitar para homogeneizar. Colocar en baño
maría hirviente durante 10 minutos. Enfriar y leer en espectrofotómetro a 530 nm.
RESULTADOS
DETERMINACIÓN DE COLESTEROL
Tabla 1. Contenido de los 4 tubos utilizados para la determinación de colesterol.
Blanco Estandar Muestra 1 Muestra 2
Reactivo de
colesterol (ml) 2 2 2 2
Agua (ml) 0,02
Estandar (ml) 0,02
Muestra 1 (ml) 0,02
Muestra 2 (ml) 0,02

Tabla 2. Datos obtenidos de concentración de las dos muestras.

Absorbancia Concentración Unidades
l 500

Estandar 0.269 2 mg/ml

Muestra Leila 0.277 2.059 mg/ml
Muestra Fabio 0.185 1.375 mg/ml

Nota. Se muestran los resultados obtenidos de concentración de las muestras, la

absorbancia fue determinada gracias al espectrofotómetro con una longitud de onda de
500 nm. Se observa una concentración más alta en el caso de la muestra de Leila.
El cálculo de las concentraciones de colesterol fueron determinadas bajo las siguientes
formulas:
[𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎] = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑥 𝐹𝑐 (𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛)
[𝐸𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟]
Donde: 𝐹𝑐 = = 2/0.269 = 7.435
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝐸𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟

El rango según la Organización Mundial de la Salud (OMS), es el siguiente:

 Deseable =  200 mg/dL
 Limite alto = 200 – 239 mg/dL
 Alto =  240 mg/dL
Las concentraciones de las muestras fueron transformadas para contrastar con respecto a
los rangos establecidos por la OMS, siendo estas:
Muestra Leila = 2.059 mg/ml = 205.948 mg/dL
Muestra Fabio = 1.375 mg/ml = 137.546 mg/dL
DETERMINACIÓN DE LIPIDOS TOTALES
El rango de lípidos totales en g/L en suero es de 4 – 8 g/L, las concentraciones de las muestras
obtenidas fueron contrastadas dentro de este rango. concentración del estándar de reactivo de
lípidos fue de 10 g/L, aplicado a nuestros cálculos fue transformado a ml, siendo 10 mg/ml, el
volumen constante fue la adición de volumen de reactivo Vainillin-fosfórico con la cantidad
extraída luego del calentamiento en baño maria de los estándares y muestras con ácido
sulfúrico, siendo el siguiente:
1.25 ml + 0.05 ml = 1.30 ml
Tabla 3. Datos de estándares para curva de calibración de lípidos totales.
Datos estandares para curva de calibración
Tubo Absorbancia (A) Concentracion (mg/ml)
l 530

Estandar 1 0.007 0.038

Estandar 2 0.015 0.577
Estandar 3 0.187 0.154
Estandar 4 0.222 0.962
Estandar 5 0.230 0.115

Nota. Se muestra la absorbancia de cada estándar el cual fue obtenido por

espectrofotometría con una longitud de onda de 530 nm, la concentración de cada
estándar fue calculada por la siguiente formula: 𝐶𝑖(𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒) 𝑥 𝑉𝑖 =
𝐶𝑓 𝑥 𝑉𝑓(𝑐𝑜𝑛𝑠𝑡𝑎𝑛𝑡𝑒), donde el volumen de cada estándar se muestran en la Tabla 2; la
concentración se calculó en mg/ml, el volumen constante es 1.30 ml y la concentración
constante 10 mg/ml.
Tabla 4. Volúmenes en mililitros de tubos estándar de 1 al 5.
Tubo Volumen (ml)
Estandar 1 0.005
Estandar 2 0.075
Estandar 3 0.020
Estandar 4 0.125
Estandar 5 0.015

Nota. Los volúmenes se presentan en mililitros (ml), las cantidades que fueron utilizadas fueron
la mitad de lo que indica el procedimiento de la práctica.
Durante el procedimiento de la práctica se mostraron tres métodos para la obtención de lípidos
totales de las muestras de sangre.
Factor de Calibración (Método 1), Este se desarrolló por la fórmula de factor de calibración:
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑐/𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟
𝐹𝑐 =
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑐/𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟
El factor de calibración de los estándares fue promediado, siendo 9.922, para obtener finalmente
las concentraciones de ambas muestras este valor fue multiplicado por las absorbancias de cada
una de ellas.
Coeficiente de Absorción (Método 2), Los cálculos de las concentraciones de cada estándar
junto con las absorbancias de los mismos fueron dispuestos en un gráfico de dispersión, se realizó
una regresión lineal obteniendo el valor de la pendiente de 0.672, se aplicó la siguiente fórmula
para determinar las concentraciones de las muestras:
𝐴𝑏𝑠 = 𝐶𝑜𝑒𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎()𝑥 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑥 1
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
Donde: 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 =
∋

Fig.1 Gráfico de valores de absorbancia y concentración de los 5 estándares.

Nota. Se observa en el grafico una línea de tendencia lineal para los valores de dispersión con una
ecuación de y = 0.2936x + 0.0346, de esta se despeja la pendiente que es 0.294, la pendiente es
utilizada para el cálculo de las concentraciones de las muestras, tal cual indica el método 2.
Fórmula de Lípidos totales (Método 3), Este método fue el propuesto por la guía de práctica y
se utiliza la fórmula de lípidos totales en g/L, se utiliza la absorbancia de la muestra y la
absorbancia y concentración del estándar de lípidos, este método te brinda un resultado directo en
g/L de la cantidad de lípidos en suero.
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝐿𝑖𝑝𝑖𝑑𝑜𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 = 𝑥 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟
 Tabla 5. Concentraciones de las muestras obtenidas por los 3 métodos.
Concentración g/L
Tubo Absorbancia (A) Método 1 Método 2 Método 3
Muestra Fabio 0.037 0.56 1.26 4.1
Muestra Leila 0.038 0.58 1.29 4.2
Método 1: Promedio de Factor de Calibración 1.522
Método 2: Pendiente de Curva de Calibración 0.294
Método 3: Absorbancia y concentración de estandar de lipidos 0.09 A, 10 g/L

Nota. Se muestra en la tabla la obtención de las concentraciones de las muestras de Fabio y Leila,
la absorbancia obtenida por el espectrofotómetro fue con una longitud de onda de 530 nm; se
observan los factores necesarios para la obtención de estas concentraciones por los tres métodos.
Según el método tres, el sugerido por la guía de práctica muestra que tanto la muestra de Fabio
como la muestra de Leila se encuentran dentro del rango de lípidos totales (4 – 8 g/L), aunque
presentan una baja concentración de lípidos totales, ambos se diferencian de manera mínima.
Los factores de calibración de cada estándar se muestran en la siguiente tabla:
Tabla 6. Factores de calibración de cada estándar.

Tubo Factor de Calibración

Estandar 1 5.495
Estandar 2 0.769
Estandar 3 0.412
Estandar 4 0.433
Estandar 5 0.502
Promedio de Fc 1.522

Nota. Se muestran los promedios calculados por la formula indicada en la descripción del
método uno.
 Fig.2 Esquema de localización y transporte de lípidos en el organismo estómago – capilar.

DISCUSIONES
Según la Organización Mundial de la Salud (OMS)1. Un valor de colesterol total por encima de
200 mg/dL puede significar que está en mayor riesgo de sufrir una cardiopatía. Sin embargo, los
niveles de LDL son una mejor manera de predecir la cardiopatía y determinan cómo se debe
tratar el colesterol alto. Análogamente a nuestros resultados en la muestra de nuestra compañera
Leila se observa un valor alto de colesterol por encima de los 200 mg/dl y pude ser por las
siguientes causas: Cirrosis biliar, hiperlipidemias familiares, dieta alta en grasa, hipotiroidismo,
síndrome nefrótico, diabetes no controlada, sin embargo estas posibles causas pueden verse
descartadas debido a que la cantidad de colesterol que presenta no es de valores elevados como
para presentar las patologías mencionadas. Nuestro compañero Fabio tiene un nivel por debajo
de los 200 mg/dL esto puede ser ocasionado por las diferentes causas presentadas a continuación:
Hipertiroidismo, enfermedad hepática, malabsorción (absorción inadecuada de nutrientes desde
el tracto intestinal), desnutrición, anemia perniciosa, sepsis.
Durante el desarrollo de la práctica se realizaron tres métodos, se encontraron valores diferentes
para los tres, solo las concentraciones obtenidas por el tercer método se encuentran dentro del
rango de lípidos totales de 4 a 8 g/L, esto puede deberse a que en el desarrollo de la fórmula se
involucran variantes directas como la absorbancia y concentración del estándar de lípidos; en los
dos métodos restantes estas no son variantes consideradas directamente con las absorbancias de
las muestras; el cálculo de las concentraciones pueden ser variadas aunque el procedimiento se
mantiene, según SPINREACT2 , los cálculos de lípidos totales se desarrollan con la siguiente
𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝐴)−𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 (𝐴) 𝑚𝑔
fórmula: 𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛 (𝐴)−𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 (𝐴) 𝑥 𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛 (750 ⁄𝑑𝐿), dentro del procedimiento
indican un enfriamiento en baño de agua fría luego del calentamiento con ácido sulfúrico,
además de utilizar un agitador mecánico para la homogenización, el tiempo de incubación es
durante 15 minutos a 37 °C. Con respecto al desarrollo de nuestro método existen diferencias en
la concentración de patrón o estándar de lípidos, SPINREACT utiliza 7.5 g/L, además de utilizar
una formula diferente para la obtención de lípidos totales; en relación al procedimiento se
encuentran diferencias en cuanto a la homogenización y al tiempo de incubación.
Los resultados de las concentraciones de lípidos totales son variables de acuerdo al método
utilizado, sin embargo el método más aceptado es aquel que involucra la concentración y la
absorbancia del estándar de lípidos utilizado. (Díaz, C; 2006)3, es por ello que se toman con
mucha más confiabilidad los resultados realizados por el método tres.
Según el Dr.Carlos Díaz Olachea3, Las consideraciones técnicas para una medición de muestras
de suero para medir Triglicéridos deben ser de 12 a 14 horas, sin embargo este tiempo no es
necesario para la medición de colesterol o HDL, el rango de lípidos totales que utiliza es de 300
a 1000 mg/dL ( 3 – 10 g/L) y 140 a 200 mg/dL para colesterol, dichos valores son variables;
durante el desarrollo de la práctica los valores establecidos de los rangos difieren tanto para lípidos
totales como para colesterol, esto puede deberse al método utilizado y a las condiciones del
laboratorio donde se realizan los perfiles lipídicos, además de las referencias tomadas dichos
rangos sin embargo los rangos deben guardar cierta relación y no diferir de manera elevada.

CONCLUSIÓNES
La muestra de Leila se encuentra en el rango límite alto indicado según la OMS con 205.948
mg/dL con respecto a colesterol.
La muestra de Fabio se encuentra en el rango deseable pero muy bajo con 137.546 mg/dl según
los rangos establecidos por la OMS, con respecto a colesterol
Las muestras de Fabio y Leila presentan una concentración de lípidos totales baja de 4.1 y 4.2
respectivamente según el método por aplicación de la fórmula de lípidos totales establecida por
la guía de práctica.
Los métodos para calcular la concentración de muestras para lípidos totales son variados sin
embargo los resultados son dependientes de los factores utilizados en estos.
La realización del perfil lipídico es importante para la detección o la prevención de enfermedades
relacionadas a la cantidad de estos en sangre.
Los rangos establecidos pueden ser variables dependiendo de la referencia tomada y de las
condiciones en las que se toma la muestra y es realizado el procedimiento.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Organización Mundial de la Salud. (2013). Plan de acción para la prevención y el control
de las enfermedades no transmisibles en relación al colesterol. Estados Unidos. Consejo
Directivo 52°.

2. Spinreact.com. (2016). Lípidos totales: Sulfo-fosfo vainillina. Colorimétrico. México.

Extraído de:
http://www.spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%20CLINICA/LIQUIDOS/
1001270.pdf Disponible en: http://spinreact.com.mx/public/presentacion.html
3. Diaz, C. (2006). Lípidos, detección y perfil lipídico. México. TecLab.