Widal slide agglutination test using antigens from locally

prevalent Salmonella typhi for diagnosis of typhoid fever in

children
Indro Handojo, S.P. Edijanto, Aryati, Paulus Patrianto Department of Clinical Pathology
Medical Faculty, Airlangga University
ABSTRAK
Suatu penelitian laboratorium untuk menilai keandalan dan kepraktisan (nilai
diagnostik) uji Widal lempeng lokal (SAT) menggunakan 5 jenis faga Salmonella typhi
sebagai antigen, telah dilakukan pada 44 penderita demam tifoid anak ( 12 tahun) dengan
kultur darah positif S. typhi dan 44 penderita demam nontifoid. Sera yang diikutkan dalam
penelitian ini diperoleh dari penderita rawat inap di ruang menular anak RSUD Dr.
Soetomo dan penderita rawat jalan di klinik Gotong Royong Surabaya selama kurun waktu
Januari 2001 - Maret 2002. Pada sera penderita dilakukan uji Widal lempeng dengan
prosedur seperti yang direkomendasikan pabrik. Ambang atas titer rujukan uji Widal SAT
untuk anak umur 12 tahun adalah 1/40 untuk titer aglutinin O, H, PA, dan 1/80 untuk titer
aglutinin PB. Kriteria diagnosis demam tifoid uji Widal SAT dalam penelitian ini yaitu bila
titer aglutinin O saja 1/80 atau O dan H 1/80. Hasil penelitian menunjukkan bahwa uji
Widal SAT merupakan suatu uji laboratorium yang memenuhi syarat untuk mendeteksi
demam tifoid pada penderita anak dengan sensitivitas diagnostik sebesar 86,3%, spesifisitas
84,1%, nilai ramal positif 84,4%, nilai ramal negatif 86,0%, dan efisiensi diagnostik 85,2%.
Berdasarkan penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa uji Widal SAT merupakan sarana
diagnostik laboratorium yang andal untuk menunjang diagnosis penyakit demam tifoid pada
anak.
PENDAHULUAN
Demam tifoid adalah penyakit yang menular endemik, yang terus menjadi masalah kesehatan
masyarakat yang serius di indonesia. Tingkat kejadian demam tifus di indonesia masih tinggi,
terutama pada usia 3-19 tahun yaitu 78 %. Di indonesia sebagian besar terdiri dari anak-anak
sekolah. Departemen Kesehatan Republik Indonesia melaporkan bahwa angka kejadian
penyakit meningkat dari 9,2 pada tahun 1990 menjadi 15,4 pada tahun 1994 per 10.000
individu dalam populasi. tingkat fatalitas kasus nasional pasien rawat inap ditemukan 2-5%.
Resistensi terhadap anti tipus obat-obatan juga cenderung meningkat. Vaksinasi imun
menggunakan anti tipus vaksin sebagai strategi untuk mengendalikan penyakit di Indonesia,
tampaknya tidak berhasil dan sanitasi lingkungan harus dipertimbangkan sebagai
mengecewakan. Dengan demikian, penemuan dan kontak kasus pelacakan diikuti oleh
antimikroba yang memadai perawatan tampaknya menjadi andalan dalam pertarungan
melawan penyakit di Indonesia. Untuk tujuan dari penemuan kasus, dapat diandalkan, praktis
dan murah alat diagnostik sangat penting. Konfirmasi diagnosis demam tifoid hanya dapat
dibuat melalui isolasi Salmonella typhi dalam darah atau sumsum tulang. Jenis ini uji
laboratorium, meskipun sangat spesifik, masih jauh dari memuaskan, sebagai hasil kasus
berdasarkan temuan isolat positif bervariasi dari 40% - 80%. tingkat kepraktisan darah yang
relatif rendah budaya merupakan sisi lain dari koin. Itu Tes reaksi rantai polimerase (PCR),
meskipun sangat sensitif dan spesifik, tetap menjadi yang mahal uji laboratorium dengan
tingkat kepraktisan yang rendah. Sampai saat ini, tes Widal konvensional masih banyak
digunakan untuk mendekati diagnosis demam tifoid karena itu dapat dengan mudah dilakukan.
Lain kelebihannya adalah tes ini dianggap sangat tes murah. Namun sensitivitasnya juga
sebagai spesifisitas uji Widal konvensional tetap diragukan, terutama untuk daerah endemis
seperti di Indonesia. Disisi lain, yang memanfaatkan antigen diperoleh dari S. typhi yang lazim
secara lokal, menunjukkan secara signifikan (p <0,05) diagnostik yang lebih tinggi sensitivitas
dan spesifisitas bila dibandingkan dengan Tes Widal lainnya menggunakan bahan antigen yang
diperoleh dari galur yang diimpor atau dari galur atau fag lain jenis S. typhi yang tidak lazim
secara lokal. Baru-baru ini, di Indonesia banyak digunakan laboratorium mengimpor tes
aglutinasi Widal slide (SAT) ke menegakkan diagnosis demam tifoid. Namun banyak dokter
tidak puas dengan seringnya Temuan positif palsu dan negatif palsu hasil. Uji tabung Widal
konvensional, yang memanfaatkan antigen yang lazim secara lokal, juga memberi hasil yang
tidak memuaskan. Standardisasi yang buruk dari antigen dan penggunaan pemeriksaan yang
tidak tepat tanpa penentuan nilai cutoff sebelumnya terkait daerah endemik diperlukan untuk
menegakkan diagnosis penyakit dapat menjelaskan temuan hasil tidak memuaskan yang
disebutkan di atas. Kesempatan untuk mendapatkan infeksi sub klinis S. typhi (kurang dari
105/ ml) lebih tinggi di daerah endemis seperti di Indonesia dibandingkan dengan di Indonesia
individu yang tinggal di daerah non endemik karena kesempatan untuk mengkonsumsi
makanan yang terkontaminasi (S. typhi dalam dosis sub klinis) lebih tinggi pada endemik ini
area. Peluang ini lebih besar pada individu dewasa hidup di daerah endemis dibandingkan
dengan anak-anak karena kebiasaan makan di luar Rumah di warung-warung kecil non higienis
lebih banyak lebih sering pada orang dewasa dibandingkan dengan anak-anak kurang dari 12
tahun.
MATERIAL DAN METODE
Subjek
Penelitian laboratorium ini dilakukan pada serum dari 88 pasien berusia kurang dari 12 tahun,
terdiri dari 44 pasien dengan demam tifoid (kultur darah positif untuk S. typhi) dan 44 pasien
demam nontyphoid (darah negatif, kultur untuk S. typhi) yang menghadiri rawat jalan Klinik
Gotong Royong dan pasien rawat inap yang dirawat di bangsal penyakit menular,
Departemen Pediatrik Rumah Sakit Dr. Soetomo di Surabaya selama Januari 2001 hingga
Maret 2002. Dalam daftar penyakit nontyphoid dengan demam, 14 pasien dengan malaria
(noda darah positif), 24 pasien dengan demam berdarah dengue, 2 pasien dengan gondong, 2
pasien dengan difteri, 2 pasien dengan infeksi saluran kemih dan 1 pasien dengan bronkitis,
dimasukkan.
Populasi yang diteliti terdiri dari anak-anak (pria dan wanita) yang berusia di bawah 12 tahun
pada saat dilakukan penelitian, menunjukkan demam 7 hari atau lebih dan orang tua telah
menandatangani informed consent. Tak satu pun dari pasien yang dalam perawatan dengan
kortikosteroid atau obat imunosupresif lainnya selama bulan sebelumnya dan tidak menderita
penyakit yang dapat mengganggu generasi respon imun humoral. Selain itu, mereka tidak
menderita kekurangan gizi.
Prosedur Sampel
Sera yang diperoleh dari populasi yang diteliti diuji dengan Widal SAT yang diproduksi oleh
MJD Research Laboratory, mengikuti instruksi yang diberikan oleh produsen kit. Antigen
digunakan untuk Widal SAT-MJD adalah campuran antigen dalam jumlah yang sama yang
diperoleh dari 5 jenis fag S. typhi yang lazim.
Untuk mendapatkan titer antibodi dalam serum uji, pengenceran serum yang optimal harus
dilakukan. Daftar rasio larutan salin serum dan fosfat (PBS) yang disediakan oleh produsen
test kit, dapat dilihat pada Tabel 1 (dicetak dalam leaflet yang terlampir dalam kit).
Prosedur Tes SAT-MJD Widal
Dalam penelitian ini, Widal SAT-MJD dilakukan pada objek kaca dengan cekung di
pusatnya. Untuk pengenceran serum aglutinin O, H dan paratyphi A (PA) dimulai dengan
titer 1:20, dan untuk pengenceran serum paratyphi B (PB) dimulai dengan titer 1:40. Sera
encer seperti ditunjukkan pada Tabel 1, dicampur dengan 40 μl suspensi antigen (O, H, PA
dan PB) menggunakan aplikator, dan objek kaca kemudian diputar dengan lembut selama 5
menit pada suhu kamar. Hasil tes (aglutinasi) dibaca dengan mata telanjang di atas lampu
neon 10 Watt atau dengan bantuan sinar matahari di dekat jendela. Setiap slide dibaca oleh 3
teknisi laboratorium dan hasil akhir yang dilaporkan adalah yang disetujui oleh setidaknya 2
dari 3 pembaca. Namun, jika Widal SAT-MJD menunjukkan hasil pemeriksaan negatif, tes
harus diakhiri, dan hasilnya dilaporkan negatif.
Setiap pemeriksaan harus disertai dengan serum kontrol positif dan negatif (terlampir dalam
kit). Untuk kinerja SAT-MJD Widal, serum kontrol ini diencerkan dua kali lipat dari cutoff
tes. Sera kontrol positif dan negatif harus memberikan hasil positif ada perbedaan dalam hasil
serum kontrol, pelaksanaan pemeriksaan ini harus diulang. Sebagaimana dinyatakan dalam
dalam kit, nilai cutoff dari Widal SAT-MJD pada anak-anak kurang dari 12 tahun adalah
sebagai berikut:
1. untuk O aglutinin, sesuai dengan titer 1: 40
2. untuk H aglutinin, sesuai dengan titer 1: 40
3. untuk aglutinin PA, sesuai dengan titer 1: 40
4. untuk aglutinin PB, sesuai dengan titer 1: 80
Kultur darah dalam media kaldu empedu, kultur urin dan kultur tinja telah dilakukan sesuai
dengan prosedur standar Divisi Mikrobiologi, Departemen Patologi Klinik, Rumah Sakit Dr.
Soetomo di Surabaya.
1. Untuk kultur darah, 5 ml sampel darah dimasukkan ke dalam botol yang berisi 50 ml
media kaldu empedu (1:10). Setelah diguncang dengan baik, botol diinkubasi pada
suhu 37oC selama 18-24 jam. Untuk memeriksa pertumbuhan bakteri, kaldu empedu
disubkultur ke dalam agar-agar SS dan yang kemudian diinkubasi pada suhu 37oC
selama 18-24 jam. Jika tidak ada bakteri yang ditemukan di lempeng agar SS, proses
subkultur diulang pada hari ke 5, 7, dan 14 dari inokulasi kaldu empedu. Jika ada
pertumbuhan bakteri, isolat bakteri yang dicurigai diidentifikasi untuk
mengkonfirmasi bahwa koloni yang tumbuh adalah S. typhi. Tes identifikasi meliputi
uji biokimia (Triple Sugar Iron, Lysine Indol Motility, Simon's citrate), tes serologis,
dan pewarnaan Gram.
2. Kultur urin dan feses menggunakan metode deteksi dan identifikasi S. typhi yang
sama dengan kultur darah tetapi media kaldu empedu tidak digunakan.
 Sampel urin disentrifugasi 2500 rpm selama 5 menit, dan kemudian sedimen
diinokulasi dalam plat agar SS.
  Untuk kultur tinja, tinja secara langsung diinokulasi ke plat agar SS dari media
transport Carry dan Blair.
Urin dan kultur tinja yang dilakukan dalam penelitian ini digunakan untuk
mendeteksi pembawa sehat S. typhi di antara pasien demam nontyphoid, yang
kemudian dikeluarkan dari penelitian.
Kriteria diagnostik uji SAT-MJD Widal untuk demam tifoid yang digunakan dalam
penelitian ini adalah sebagai berikut:
1. jika titer O aglutinin ≥ 1/80 atau titer O dan H aglutinin ≥ 1/80.
2. jika dalam interval 5-7 hari, ada peningkatan titer aglutinin empat kali lipat.
3. Pada kelompok pasien dengan demam nontyphoid, hasil Widal SAT-MJD dianggap
sebagai false positive jika O aglutinin, O dan H aglutinin, PA aglutinin atau PB
aglutinin sama atau lebih tinggi dari 2 kali nilai cutoff mereka.
4. Hasil positif dari kultur darah menjadi standar emas untuk konfirmasi demam tifoid
dalam penelitian ini.
5. Nilai diagnostik SAT-MJD Widal dinilai berdasarkan penentuan sensitivitas
diagnostik, spesifisitas diagnostik, nilai prediktif positif diagnostik, dan nilai prediktif
negatif diagnostik.

HASIL
Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 2, dari 44 pasien dengan demam tifoid yang diterima
dalam penelitian ini, 38 pasien (86,4%) menunjukkan Widal SAT-MJD positif. Sensitivitas
diagnostik Widal SAT yang diproduksi oleh Laboratorium Penelitian MJD dalam penelitian
ini ditemukan 86,4%.

PENGAKUAN
Namun, hanya 5 di antara 23 pasien dengan demam berdarah dengue yang dilaporkan
menunjukkan hasil positif palsu. Dari 14 pasien yang diteliti menderita malaria (dengan
plasmodium positif dalam darah mereka), hanya 2 pasien yang memiliki hasil positif palsu
untuk demam tifoid. Dalam penelitian ini, masih ada kemungkinan infeksi gabungan dengan
S. typhi dan penyebab lain dari demam nontyphoid, meskipun semua pasien dengan demam
nontyphoid menunjukkan kultur darah negatif untuk demam tifoid. Tingkat kepositifan
kultur darah pada demam tifoid seringkali rendah. Jadi ketika kultur darah positif, ia dapat
menegakkan diagnosis tetapi ketika negatif, tidak dapat mengecualikan diagnosis demam
tifoid.
Dari sudut pandang praktis, Widal SAT-MJD adalah tes dengan tingkat kelayakan yang
tinggi. Refrigator masih diperlukan untuk menjaga antigen Widal SAT-MJD pada 4'C.
Dalam tes ini, tidak ada pipet atau mikropipet khusus (seperti yang harus digunakan dalam uji
Widal yang diimpor) yang diperlukan untuk mencairkan serum pasien. Untuk tujuan
pengenceran serum, pipet yang sangat sederhana dimasukkan dalam kit Widal SAT-MJD.
objek glass yang digunakan untuk mencampur antigen dan serum encer juga disertakan dalam
test kit. Untuk penggunaan berulang, objek glass ini dapat dicuci. Masa inkubasi untuk tes
ini tidak lebih dari 5 menit. Untuk membaca hasil tes, tidak diperlukan peralatan khusus.
Membaca bisa
menerawang dengan bantuan cahaya atau dengan menempatkan bahan uji 15 cm di atas
lampu neon 10 Watt. keuntungan tambahan dari tes yaitu biaya yang rendah, yang mungkin
setengah dari biaya tes Widal yang diimpor. Analisis data yang diperoleh selama
pelaksanaan penelitian yang dilaporkan di sini menunjukkan bahwa SAT Widal yang
diproduksi oleh MJD Research Laboratory menggunakan campuran (dalam jumlah yang
sama) antigen yang berasal dari 5 jenis fag S. typhi yang lazim secara lokal, yang memenuhi
syarat dan murah untuk tes skrining mendeteksi demam tifoid pada anak-anak.