BAB 1 STERILISASI

1.1 CAPAIAN PEMBELAJARAN

Setelah mengikuti praktikum STERILISASI, mahasiswa dapat
a. Menerapkan prinsip sterilisasi alat dan media di bidang ilmu Bioproses.
b. Menggunakan autoclave konvensional, autoclave Hirayama, serta oven
dengan baik dan benar sesuai SOP autoclave

1.2 METODOLOGI
1.2.1 ALAT DAN BAHAN
 Cawan petri
 Tabung reaksi beserta rak
 Pipet ukur 10 ml

 Labu takar 1000 ml

 Batang pengaduk
 Cawan arloji
 Kertas pembungkus
 Kain kassa
 Kapas berlemak
 Tali kasur
 Hot plate
 Gunting
 Oven
 Autoclave konvensional
 Autoclave Hirayama
 Neraca analitis
 Nutrient Agar bubuk (NA)
 Potato Dextrose Agar bubuk
(PDA)
 Aquadest
1.2.2 CARA KERJA
A. Sterilisasi alat
a. Cuci alat yang digunakan dengan air dan sabun hingga tidak terasa berminyak, bilas
dengan air mengalir kemudian dengan aquadest atau alcohol. Tiriskan hingga kering.
b. Untuk tabung reaksi dan peralatan berleher disumbat dengan kapas berbungkus kain
kassa steril. Sumbatan harus padat dibagian luar agar dapat menahan debu dan kotoran.
c. Bungkus semua peralatan dengan kertas kecuali erlenmeyer yang memiliki sumbatan
kapas.
d. Masukkan dalam autoclave pada suhu 121°C, selama 30 menit.
e. Setelah selesai disterilisasi, simpan alat dalam oven bersuhu 80ºC selama 24 jam.
Selanjutnya alat disimpan dalam kotak peralatan steril yang sudah disediakan.

B. Sterilisasi media NA/NB/PDA

a. Larutkan Nutrient Agar (NA), Nutrien Broth (NB) atau Potato Dextrose Agar (PDA)
bubuk dengan aquadest sesuai keperluan
b. Sterilisasi dalam autoclave pada 121ºC selama 30 menit.

C. SOP Autoclave Konvensional

Persiapan
a. Buka pengunci autoclave
b. Periksa kedalaman air. Tinggi air harus tepat di bawah plat berlubang
c. Jika kurang tambahkan aquadest dari bagian atas autoclave
d. Pasang keranjang sesuai kebutuhan
e. Tata alat/media yang akan disterilkan dalam keranjang sedemikan hingga masih ada
ruang untuk lewatnya kukus
Pelaksanaan
a. Tutup autoclave dan kunci dengan rapat, pastikan tidak ada yang bocor
b. Tutup kran kukus (20) dan kran udara (19)
c. Pilih tanda gunting untuk sterilisasi alat dan tanda erlenmeyer untuk sterilisasi media
menggunakan tombol (18). Pastikan penunjuk waktu menunjukkan angka ”0” dan
penunjuk suhu menunjukkan angka di bawah 102C dan tidak ada indikasi error.
d. Tekan tombol pilihan program (13) dan pilih sesuai kebutuhan. Untuk modifikasi
program :
e. Suhu, tekan tombol 9 dan 14/15 berbarengan
f. Waktu, tekan tombol 11 dan 14/15 berbarengan
g. Tekan tombol start (16)
h. Tunggu hingga proses pemanasan selesai, misal untuk program 2 (suhu 121C dan
waktu 30 menit) dibutuhkan waktu sekitar 30 menit untuk mencapai tekanan ± 1 bar.
Selama proses itu lampu heater (7) dan lampu exhaust (6) menyala.
i. Bila tekanan sudah mencapai 1 bar, lampu heater dan lampu exhaust padam sedangkan
lampu steril (5) akan menyala berkedip-kedip selama 7 menit diiringi dengan penurunan
suhu, waktu dan tekanan selama ± 30 menit
j. Setelah itu lampu steril (5) akan padam dan alarm (1) akan berbunyi selama 10 detik ,
menandakan proses sterilisasi sudah selesai.
k. Tekan tombol stop (17) biarkan autoclave tertutup sampai tekanan dalam autoclave
turun dan menunjukkan 0,2 bar
l. Buka keran udara (19) dan keran steam (20)
m. Buka pengunci autoclave
n. Angkat dan keluarkan keranjang
Penyelesaian
a. Putar tombol (18) ke posisi off jika suhu sudah menunjukkan 40C
b. Bersihkan sisa-sisa air di sekitar autoclave
c. Tutup autoclave tanpa dikunci
 Gambar 1-1 Tampak atas autoclave konvensional

D. SOP Autoclave Hirayama

Persiapan
1. Letakkan Autoclave Hirayama HVE 50 pada permukaan yang stabil dan rata, serta
hindarkan dari sinar matahari secara langsung.
2. Hubungkan stop kontak dengan sumber tenaga listrik.
3. Tekan tombol “ON” yang ada di sisi kanan.
Pengoperasian
1. Power On. Tekan power ON/OFF di bagian depan alat.
2. Menuangkan air, Hirayama HVE-50 membutuhkan 2 liter air aquades.
3. Memuat bahan. Tempatkan substansi yang akan disterilkan ke dalam chamber. Tekan
bagian depan-tengah tutupnya sampai magnet catch tertarik ke magnet. Sambil
menekan tutup, geser tuas OPEN/CLOSE ke sisi LOCK.
4. Memilih mode (Process).
 Mode Aplikasi
Sterilisasi medium agar (dihangatkan untuk pencegahan koagulasi
1 LIQ
setelah sterilisasi).
Sterilisasi cairan, seperti air, media, reagen, dan obat-obatan cair,
2 LIQ
yang bertahan pada suhu tinggi, uap bertekanan tinggi.
Sterilisasi alat dari kaca, logam keramik, atau karet yang tahan
3 SOLID terhadap suhu tinggi, uap tekanan tinggi dan penurunan tekanan uap
secara tiba-tiba selama proses pembuangan.

5. Mengubah nilai set.

a. Tekan tombol SET/ENT.
b. Tekan tombol NEXT untuk memilih item untuk mengubah.
c. Ubah nilai ditampilkan menggunakan tombol increase/ decrease (↑,↓).
d. Tekan tombol SET/ENT.
e. Unutk membatalkan perubahan pengaturan selama perubahan operasi, tekan
tombol MODE. Nilai-nilai yang berubah tidak akan disimpan dan peralatan
akan kembali ke keadaan standby.
6. Memulai operasi. Tekan tombol START/STOP.
7. Membongkar. Pastikan bahwa pengukuran tekanan dalam chamber tertera “0 Mpa”.
8. Setelah operasi komplit. Matikan tombol power setelah selesai operasi.
9. Membatalkan operasi. Tekan tombol START/STOP.
Mengakhiri penggunaan
1. Tekan tombol “OFF” yang ada di sisi kanan.
2. Cabut kabel stop kontak.
3. Simpan di tempat yang kering.
Catatan
1. Sterilization temperature : 105 – 135 oC
2. Sterilization time : 1 - 250 menit
3. Exhaust pattern : unit 0 – 2
4. Warming temperature : 45 – 80 oC
5. Reference values of delay time (per flask)
Liquid volume Delay time
3 Liters 30 minutes
2 Liters 25 minutes
1 Liters 20 minutes
500 cc 15 minutes

Gambar 1-2 Autoclave Hirayama HVE 50

 Gambar 1-3 Bagian-bagian Autoclave Hirayama HVE 50

Gambar 1-4 Bagian untuk mengoperasikan Autoclave Hirayama HVE 50

E. SOP SAFETY CABINET

Memulai (start up)
1. Menyalakan sinar ultraviolet (uv), matikan sinar ultraviolet (uv).
2. Hidupkan cabinet dengan menyalakan blower dan light biarkan blower beroperasi
selama minimal 15 menit sebelum kerja aseptik dimulai di kabinet.
 Membersihkan (wipe down)
1. Disinfeksi seluruh permukaan pekerjaan interior dengan al kohol 70%, glutaraldehid
alkalin 2% atau agen antimikroba non-korosif sejenis
Bahan dan peralatan (materials and equipment)
1. Letakkan peralatan dan bahan pada permukaan kerja kabinet.
2. Jangan menaruh barang apapun disekitar area keluarnya udara dari blower
3. Memisahkan bahan yang terkontaminasi pada permukaan kerja kabinet
4. Jangan gunakan bunsen burner api konstan.
5. Jangan gunakan dengan bahan mudah terbakar yang titik nyalanya di bawah 250 F
Pembersihan udara (air purge)
1. Biarkan 2 - 3 menit setelah peralatan dan bahan ditempatkan ke dalam kabinet
Lakukan kerja (perform work)
1. Gunakan pakaian yang tepat, baju lengan panjang (jas lab), dan sarung tangan karet
meminimalkan gerakan dan menggunakan teknik aseptik yang tepat
Pembersihan terakhir
1. Membersihkan bahan dan peralatan dari meja kerja dengan disinfeksi seperti yang di
atas
Matikan
1. Matikan blower dan lampu.

1.3 HASIL PENGAMATAN

Laporkan hasil pengamatan anda dalam tabel di bawah ini. Sesuaikan dengan langkah kerja
di atas.
NO KONDISI AUTOCLAVE DATA PENGAMATAN KETERANGAN

1. PERSIAPAN
2. PELAKSANAAN

3. PENYELESAIAN