DESARROLLO DE PREGUNTAS

1. Señale las ventajas e inconvenientes del examen en fresco

El examen fresco es aquel que hacemos en el momento, colocando una gota

de la suspensión de microorganismos entre un porta y un cubreobjetos. Este
no precisa de un tratamiento en el que se maten las células, como es la
fijación o la inclusión.

Existen dos técnicas, una preparación en fresco simple (entre porta y cubre)
que consiste en colocar una gota de líquido con los microorganismos sobre
un portaobjetos y cubrirla con un cubreobjetos; y una preparación en gota
pendiente que se realiza colocando una gota del material en un cubreobjetos
y cubriéndolo con un portaobjetos (invertido) con una excavación central
(portaobjetos excavado) sellándola con vaselina alrededor. Esta última
técnica, permite que la preparación no se seque y puede ser observada
durante un tiempo más largo

Algunas ventajas de estas técnicas son la sencillez y rapidez para llevarlas a

cabo, además de la economía en su realización, ambos tipos de montaje se
pueden preparar en un mismo portaobjetos.No presenta dificultades
añadidas a las de cualquier técnica microscópica, permite la observación de
microorganismos vivos gracias a la refringencia; ya que no se necesita fijarlos
ni teñirlos, puede tener utilidad en la comprobación de la motilidad de los
microorganismos; constituyen un arma potente de diagnóstico en las
infecciones producidas por parásitos intestinales. Pueden detectarse huevos,
quistes y trofozoitos que por sus características morfológicas pueden generar
por si solas un diagnóstico definitivo; así mismo se emplea para observar la
movilidad, tamaño, forma de agrupación de los microorganismos en su
estado natural (Gránulos refráctiles, esporas y cloroplastos) en células vivas.
 Así mismos se pueden evidenciar desventajas como que las muestras se
deshidratan rápidamente y se arruinan, se requiere la máxima limpieza; las
bacterias no teñidas muestran pocos detalles morfológicos, no permite
aumentar el contraste de la preparación. Por tanto, su uso, con un
microscopio óptico de campo claro, está bastante limitado. Los
microorganismos en general no presentan demasiado contraste respecto al
medio que les rodea. La observación es difícil por la escasa diferencia entre
los índices de refracción del medio y los microorganismos, no hay buen
contraste, el continuo movimiento del fluido y los microorganismos dificultan
la observación
2. ¿Por qué cubrimos la muestra con un cubreobjetos o laminilla?

Un cubreobjetos es una fina hoja de material transparente cuadrada o

rectangular. Se coloca sobre un objeto que va a ser observado bajo
microscopio, el cual se suele encontrarse sobre un portaobjetos. El
cubreobjetos sirve para fijar y aplanar la muestra permitiendo una mejor
visualización y evitando que se mueva fuera del alcance de nuestra
observación. Se halla a menudo pegado al portaobjetos, con la finalidad de
aislar y proteger al espécimen contra la contaminación por partículas
suspendidas en el aire u otras sustancias y la descomposición. También
disminuyen la tasa de evaporación de la muestra, tanto en portaobjetos
montados en seco como en húmedo. Si se ha agregado una mancha u otro
líquido, el cubreobjetos lo mantiene en la muestra.

3. ¿Cuáles son las diferencias morfológicas y estructurales, más

importantes, que se pueden apreciar en los microorganismos
observados?

MICROORGANISMOS DIFERENCIAS
OBSERVADOS
NOMBRE IMAGEN MORFOLÓGICAS Y ESTRUCTURALES
PROTOZOO Son animales microscópicos unicelulares eucariontes (algunos viven en
grupos y se les denomina coloniales). El tamaño de los protozoarios son
variables, generalmente las formas parasitas son pequeñas, mientras
que las de vida libre son mucho más grandes.
Al igual que todas las células, están constituidos fundamentalmente, de
protoplasma y un núcleo definido, aunque ocasionalmente presentan dos
o más; los núcleos de los protozoos tienen formas, tamaños y estructuras
variadas. El protoplasma se caracteriza por su viscosidad, en él se
encuentra el núcleo, la vacuola, organelos celulares, especializados
como mitocondria, aparato de Golgi, que participan en las distintas
funciones inherentes a la vida del protozoo. La estructura de los
protozoos se parece a una célula de los Metazoos, pero funcionalmente
son organismos completos, equilibrados fisiológicamente y realizan todas
las funciones esenciales de un animal.
 Algunos son de estructura muy simple y otros complejos, con orgánulos
(celulares) que sirven para determinados procesos vitales y
funcionalmente son análogos a los sistemas de órganos de los animales
pluricelulares.
Cada especie vive en un ambiente húmedo particular: en el agua de mar
o en el fondo del océano, en tierra, en las aguas dulces, salobres o
corrompidas; en el suelo o en la sustancia orgánica en descomposición.
Muchos viven y nadan libremente, mientras que otros son sedentarios, y
en ambas categorías los hay coloniales. Otros viven encima o en el
interior de algunas especies de plantas y de toda clase de animales

ALGA es un género de cianobacterias de agua dulce o terrestres, perteneciente

NOSTOC a la familia Nostocaceae, del orden Nostocales, que forma colonias
esféricas y compuestas de filamentos (tricomas). Dichos filamentos se
componen a su vez de células esféricas o con forma de barril de talla
uniforme. Son de color azul verdoso o verde oliva. Los filamentos
doblados, enroscados, esféricos o arrollados son largos y se presentan
ligados por el mucílago firme. Su textura puede ser lisa o verrugosa. Las
envolturas mucilaginosas son firmes y anchas, amarillas, marrones, o de
color negro, y se ven más fácilmente en colonias jóvenes.
Los heterocistos son solitarios, esféricos o en forma de barril, y pueden
ser intercalares o localizados en los extremos de los tricomas.
Las acinetos son elipsoidales y solo levemente más grandes que las
células vegetativas. Las acinetos de Nostoc están situadas generalmente
a medio camino entre los heterocistos.

LEVADURAS Tanto las levaduras como los mohos presentan células eucariontes, es
decir, con cromosomas múltiples, membrana nuclear bien definida,
mitocondrias, retículo endoplásmico y pared celular. Son
microorganismos que contienen paredes celulares rígidas hechas
de glucógeno, de celulosa, de quitina, o mananas. Algunas levaduras
o algunas especies de cándidas tienen cápsula, lo cual es antifagocita.

GLÓBULOS Los glóbulos rojos, también llamados eritrocitos o hematíes, son células
ROJOS que están en la sangre. Su función principal es la de transportar
el oxígeno que recogen en los pulmones y llevarlo a todos los rincones
del cuerpo Los glóbulos rojos tienen forma de disco, y no tienen núcleo
ni mitocondrias. Son de color rojo por una proteína llamada hemoglobina,
la cual transporta el dióxido de carbono y el oxígeno tienen su origen en
la médula ósea y su vida es corta, aunque se renuevan constantemente
(es decir, se van reemplazando por otros)
ESPERMATOZ Los espermatozoides son células sexuales o gametos
OIDES masculinos producidos en los túbulos seminíferos de los testículos; su
principal función es combinar su ADN (información genética) con el del
óvulo (gameto femenino), a fin de crear un nuevo individuo. en
los gametos masculinos se identifican tres partes principales:

Cabeza: consta de núcleo y en su parte superior o punta existe una zona

más gruesa llamada acrosoma, la cual se encarga de perforar la
membrana del óvulo para lograr la fertilización. La cabeza del
 espermatozoide contiene ADN que, al combinarse con el del gameto
femenino, creará el huevo o cigoto humano.

Porción media: cuerpo alargado con gran cantidad de mitocondrias,

orgánulos que proporcionan energía para lograr el movimiento.

Cola: también llamada flagelo, es apéndice en forma de látigo que

permite el desplazamiento de estas células sexuales en el líquido
seminal, a fin de alcanzar el útero y la trompa de Falopio en el aparato
reproductor femenino y fertilizar el óvulo. La cola se divide en pieza
principal (que es la que da la movilidad) y pieza terminal.
HONGO El grupo se caracteriza por presentar hifas septadas y los micelios forman
PENICILLIUM filamentos. Cuando es cultivado en laboratorio produce colonias con un
micelio compacto y los márgenes bien definidos. Las colonias son de
rápido crecimiento y tienen aspecto lanoso o algodonoso. En principio son
blancas y luego se tornan verde azuladas, verdosas amarillentas o
rosadas. Las esporas sexuales (ascosporas) se producen en ascos
(cuerpos fructíferos) que pueden ser leñosos o de textura más suave
según el grupo.

La característica más resaltante del género es el desarrollo de conidióforos

ramificados en forma de cepillo El conidióforo está bien estructurado y
presenta un eje a partir del cual se forman ramificaciones (metúlas). Sobre
las metúlas se forman las fiálides (células en forma de botella que
producen los conidios). Este es el carácter más importante para diferenciar
a las especies del género.

BACTERIAS Los cocos se caracterizan por poseer formas redondeadas y agruparse de

COCO diversas maneras, dependiendo de la tendencia de las células a mantener
unidas y a los planos de división celular. El diámetro de estos procariotas
es variable, oscilando entre los 0,8 y 10 um. Los cocos pueden clasificarse
en diplococos, tétradas, sarcinas, estreptococos y estafilococos.

BACTERIAS Se aprecian como formas alargadas o bacilares agrupan una gran

BACILOS cantidad de subtipos morfológicos. En función de la tendencia de las
células hijas a permanecer unidas, los bacilos presentan también
agrupaciones celulares características, citando como ejemplo las formas
en empalizada o en V o en letras chinas. Aunque son hasta cierto punto
característicos, los agrupamientos de células bacilares no tienen la misma
importancia morfológica que el agrupamiento de cocos.

4. ¿Cómo funciona un microscopio electrónico de barrido (SEM de

scanning electrón microscope)?
El Microscopio electrónico de barrido o SEM (Scanning Electron Microscope),
es aquel que utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz para
formar una imagen. Tiene una gran profundidad de campo, la cual permite
 que se enfoque a la vez una gran parte de la muestra. También produce
imágenes de alta resolución, que significa que características espacialmente
cercanas en la muestra pueden ser examinadas a una alta magnificación. La
preparación de las muestras es relativamente fácil pues la mayoría de SEMs
sólo requieren que estas sean conductoras.

En el microscopio electrónico de barrido la muestra generalmente es

recubierta con una capa de carbón o una capa delgada de un metal como el
oro para darle propiedades conductoras a la muestra. Posteriormente es
barrida con los electrones acelerados que viajan a través del cañón. Un
detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de
la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones,
proyectados en una imagen de TV o una imagen digital. Su resolución está
entre 4 y 20 nm, dependiendo del microscopio. Permite una aproximación
profunda al mundo atómico. Permite obtener imágenes de gran resolución en
materiales pétreos, metálicos y orgánicos. La luz se sustituye por un haz de
electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se hacen conductoras
metalizando su superficie.

FUNCIONAMIENTO

Un microscopio de barrido de electrones funciona con un haz de electrones

producido por una fuente que puede ser un cañón termoiónico (filamento de
tungsteno o de hexaboruro de lantano) o un cañón de emisión de campo
FEG, de las siglas en inglés Field Emission Gun.

Al cañón se le aplica un potencial eléctrico que acelera el haz de electrones

hacia una columna, éste es focalizado por medio de lentes electromagnéticas
sobre la muestra (toda la trayectoria de los electrones debe estar en vacío,
de lo contrario, los electrones colisionarían con las moléculas de aire y serán
absorbidos). Los electrones chocan e interactúan con la muestra
produciendo varias señales que podrán ser recogidas de acuerdo con la
señal y con los detectores presentes. La magnificación de la imagen se
produce por un conjunto de lentes electromagnéticas que mediante un
tratamiento adecuado de las señales electrónicas son proyectadas en un
tubo de rayos catódicos (CRT).

5. ¿Cuál es la función del filtro colocado en la parte inferior del diafragma?

Un filtro óptico es un medio que sólo permite el paso a través de la luz con
ciertas propiedades, suprimiendo o atenuando la luz restante. Los filtros
ópticos más comunes son los filtros de color, es decir, aquellos que sólo
dejan pasar luz de una determinada longitud de onda. Según su
procedimiento de acción pueden ser de absorción, si absorben parte de la
luz, o bien reflectivos si la reflejan. Elevan la acción de contraste en la
observación
6. Haga una revisión bibliográfica de los siguientes investigadores e
indique sus aportes a la microbiología:

-Antonie Van Leeuwenhoek: Nació el 24 de octubre de 1632 en Delft,

Holanda. Construyó como entretenimiento diminutas lentes
biconvexas montadas sobre platinas de latón, que se sostenían muy cerca
del ojo. A través de ellos podía observar objetos que montaba sobre la
cabeza de un alfiler, ampliándolos hasta 300 veces. Consiguió lentes de
entre 70 y 250 aumentos. En el año 1668, desarrolló el descubrimiento de la
red de capilares del italiano Marcello Malpighi, demostrando cómo circulaban
los glóbulos rojos por los capilares de la oreja de un conejo y la membrana
interdigital de la pata de una rana. En 1674, realizó la primera descripción
precisa de los glóbulos rojos de la sangre.

Más tarde, observó en el agua de lluvia y en la saliva humana, lo que

llamaría animálculos, conocidos en la actualidad
como protozoos y bacterias. En 1677 Anton van Leeuwenhoek describió
los espermatozoos de los insectos y los seres humanos. Se opuso a la teoría
de la generación espontánea, demostrando que los gorgojos no surgían
espontáneamente a partir de granos de trigo y arena, sino que se
desarrollaban a partir de huevos diminutos. Examinó plantas y tejidos
musculares, describiendo tres tipos de bacterias: bacilos, cocos y espirilos.
Mantuvo en secreto el arte de construir sus lentes, por lo que no se realizaron
nuevas observaciones de bacterias hasta que se desarrolló
el microscopio compuesto en el siglo XIX. Puede que fabricara más de 200
microscopios y 500 lentes ópticas.
Anton van Leeuwenhoek falleció el 26 de agosto de 1723 en Delft, a los 90
años.

-Louis Pasteur: fue un químico y microbiólogo francés del siglo XIX (nació
el 27 de diciembre de 1822 y murió el 28 de septiembre de 1895 a los 72
años) conocido principalmente por:
– Descubrir y desarrollar el proceso de pasteurización (tratamiento térmico
de los alimentos para eliminar la mayoría de sus agentes patógenos).
– Refutar mediante la experimentación la teoría de la generación
espontánea.
– Descubrir que las enfermedades infecciosas eran producidas por
microorganismos y no por desequilibrios de humores, como se pensaba en
su época.

-Robert koch: (Klausthal, 1843 - Baden-Baden, 1910) Bacteriólogo alemán

galardonado con el Premio Nobel. Descubrió la bacteria productora del
ántrax o carbunco y la bacteria productora de la tuberculosis. Se le considera,
junto a Louis Pasteur, el padre de la bacteriología, y el que sentó las bases
de la microbiología médica moderna.

-Robert Lister: (Upton, 1827 - Walmer, 1912) Médico y cirujano inglés,

considerado el fundador de la medicina antiséptica y preventiva. Joseph
Lister procedía de una familia de cuáqueros y era hijo de un comerciante de
vinos, con gran habilidad para la microscopía. Ello propició que Lister
diseñara su propio microscopio acromático en 1813, contribuyendo así al
comienzo de la moderna microscopía. También estudió arte en Londres y
comenzó a interesarse por la medicina; obtuvo el título de cirujano en 1852.
Influido por los descubrimientos de Pasteur sobre el origen de la
fermentación y la putrefacción, se interesó por la prevención séptica de las
heridas. En 1867 demostró que los métodos antisépticos eran fundamentales
para evitar la infección de las heridas. Lister usó una solución de fenol sin
purificar, su antiséptico preferido tanto para el instrumental como para la
vestimenta de los profesionales de la medicina.
Asimismo, solía emplear la solución anterior para desinfectar el aire de las
salas de operaciones. En 1887 abandonó el uso del pulverizador, utilizando
el vapor como agente esterilizador. Gracias a sus investigaciones disminuyó
enormemente el riesgo de las infecciones postquirúrgicas, que, por lo
general, resultaban mortales para los pacientes.

-Christian Gram: (Copenhague, 1853-1938) Microbiólogo y médico danés.

En 1884, durante su viaje a Berlín, diseñó y presentó el método
microbiológico de tinción de bacterias que lleva su nombre. Se compone de
yodo, yoduro potásico y agua, y permite teñir determinados elementos por
contraste con otros o con el fondo. El método de Gram permite clasificar a las
bacterias en dos tipos fundamentales, grampositivas y gramnegativas.
 WEB GRAFÍA

1. https://core.ac.uk/download/pdf/154797545.pdf
2. http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56
/cap304.htm
3. https://es.scribd.com/doc/95313060/Examenes-en-fresco
4. https://es.scribd.com/doc/151170544/Para-Preparaciones-Frescas
5. http://ebarreramota.blogspot.com/2013/09/metodo-cps-directo-o-en-fresco.html
6. https://m.torrerovidre.com/portaobjetos-y-cubreobjetos.html
7. http://www.euita.upv.es/varios/biologia/tecnicas_de_histologia_vegetal/Documentos/M
ontaje_cubreobjetos.htm
8. http://es.scienceaq.com/Biology/100312853.html
9. https://es.slideshare.net/MiguelCoral/protozoarios-36797607
10. https://www.monografias.com/trabajos31/protozoos/protozoos.shtml
11. http://www.redalyc.org/pdf/862/86238659013.pdf
12. https://es.slideshare.net/CarlosPenafielBelieberBoy/eritrocitos-morfologa-y-metabolismo
13. https://www.lifeder.com/penicillium/
14. https://www.lifeder.com/cocos-gram-positivos/
15. https://investigaciones.uniandes.edu.co/microscopio-electronico-de-barrido-meb/
16. https://www.buscabiografias.com/biografia/verDetalle/4442/Anton%20van%20Leeuwenh
oek
17. https://www.saberespractico.com/biografias-resumidas/louis-pasteur/
18. https://www.biografiasyvidas.com/biografia/k/koch.htm
19. https://www.biografiasyvidas.com/biografia/g/gram.htm
 INTRODUCCIÓN

Este trabajo de microbiología general permite comprender la naturaleza de los

microorganismos e identificar los diferentes métodos aplicando las técnicas
microscópicas que sirven para su estudio. Está diseñado para que el alumno se
inicie en el conocimiento de la biología básica de los microorganismos por medio
del microscopio, de sus características morfológicas, nutricionales, de crecimiento,
control, y que adquiera las habilidades necesarias para su manipulación en el
laboratorio. Se tendrá en cuenta las partes y manejo adecuada del microscopio
para fortalecer los conocimientos de las diferentes estructuras y características de
los microorganismos.
 CONCLUSIONES

 El Microscopio es un instrumento que se utilizan para obtener una imagen

aumentada de objetos minúsculos o detalles muy pequeños de los mismos.
 Cada lente hace converger los rayos luminosos que la atraviesan. Una de
ellas, llamada objetivo, se sitúa cerca del objeto que se quiere estudiar. La
imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que actúa
sencillamente como una lupa.
 Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para
mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y
tinturas son sustancias que usualmente se utilizan en biología para resaltar
estructuras en tejidos biológicos que van a ser observados con la ayuda de
diferentes tipos de microscopios.
 El examen en fresco es una forma de observar los microorganismo vivos ya
que no se necesita fijarlos ni teñirlos, dando así utilidad en la comprobación
y diagnóstico en las infecciones producidas por los mismos.
 Se debe tener en cuenta la utilidad de las partes del microscopio para
favorecer los procesos que en él se realizan, y llevar a un mejor análisis de
los microrganismos que se observan.
 Como docentes debemos tener en cuenta los grandes representantes y
creadores de las diferentes teorías que hoy son expuestas, con el fin de
fortalecer los procesos de investigación, enseñanza y aprendizaje de los
estudiantes.