PRÁCTICA 2: RECUENTO DE MICROORGANISMOS MESÓFILOS AEROBIOS

Conocido también como recuento estándar en placa, es el recuento indicador más amplio y general en
alimentos, ya que incluye todos los géneros aerobios y facultativos que crecen en medios simples a una
temperatura entre 15 y 45°C.

Este recuento se considera como indicador del grado de contaminación de los alimentos en cualquier etapa
del proceso de producción; también se utiliza como indicador de la vida útil de un producto.

Materiales

 Frascos y tubos con diluciones de la muestra

 Incubadora a 35°C
 Baño de agua a 45 - 50°C
 Cuenta colonias tipo Quebec
 Cajas petri (15 x 100 mm)
 Pipetas de 1 mL estériles
 Agar Plate Count o Agar Standard Methods

Procedimiento

 Inocular por duplicado 1 mL de las diluciones seleccionadas en las correspondientes cajas petri
 Agregar 15 mL de agar fundido y enfriado a 45°C a cada caja petri
 Mezclar las cajas con movimientos cuidadosos:
a. Moviendo la caja de arriba hacia abajo 5 veces
b. Rotando la caja 5 veces en el sentido de las agujas del reloj
c. Moviendo la caja 5 veces haciendo ángulo recto sobre el movimiento a.
d. Rotando la caja en contra reloj 5 veces.
 Dejar solidificar el agar y agregar una capa adicional de agar. Dejar solidificar nuevamente.
 Invertir las cajas e incubar a 35°C + 1°C durante 48 + 3 horas
 Colocar 1 caja con medio sin inocular como control de esterilidad
 Colocar las cajas petri dentro de la incubadora en montones de hasta 6 cajas.

Lectura y cálculo de resultados:

1. Cómputo de recuento standard

a. Seleccionar las cajas correspondientes a la dilución que contenga entre 30 y 300 colonias por caja.
 Utilizando el contador de colonias, contar todas las colonias
 Tomar la media aritmética y multiplicar por el factor de dilución (recíproco de la dilución utilizada)
 Informar como recuento de mesófilos aerobios, utilizando dos dígitos: UFC por g o mL
b. Si las cajas de 2 diluciones consecutivas presentan recuentos menores de 30 y mayores de 300, se
calcula el recuento para cada una de las diluciones y se toma el promedio entre las dos.

1
 Ejemplos:

Dil. 10-1: 350 y 330

(350 + 330) x 10 = 3.400

2

Dil. 10-2: 26 y 28

(26 + 28) x 100 = 2.700

2

X: 3.400 + 2.700 = 3.050

2

30 x 102 UFC/g

c. En caso de que dos diluciones consecutivas estén dentro del rango de 30 a 300 colonias, se hace el
recuento para cada una de las diluciones y se establece la relación entre los dos recuentos. Si el cociente
es MENOR que 2, se reporta el promedio de los dos valores; si el recuento es MAYOR que dos, se
reporta el recuento menor.

Ejemplos:

290 colonias en dil. 10-1 = 2.900

40 colonias en dil. 10-2 = 4.000

4.000/2.900 = menor que 2, reportar la media aritmética: 35 x 102

170 colonias en dil. 10-1 = 1.700

35 colonias en dil. 10-2 = 3.500

3.500/1.700 = Mayor que 2, reportar el menor 17 x 102

2. Cómputo de recuentos estimado standard

a. Si las cajas de todas las diluciones muestran más de 300 colonias dividir las cajas de la dilución más alta
en secciones radiales (2, 4, 8) y contar todas las colonias de una o más secciones. Multiplicar el total por
el factor apropiado para obtener el número total de colonias en toda la caja. Tomar el promedio de las 2
cajas, multiplicar por la dilución y reportar el resultado como Recuento Estimado Standard.
b. Si hay más de 200 colonias en 1/8 de la caja, multiplicar 1.600 (200x8) por la dilución y expresar el
resultado como mayor que el número resultante.

Ejemplo:

1.600 x 10-3 = > 1.600.000 > 16 x105

c. Si no hay colonias en las cajas de mayor concentración reportar el recuento como menor que (<) una vez
la dilución.
Ejemplo:

2
 Dil. 10-1 = No colonias

Reportar el recuento estimado estándar como < 10/g.

Si se ha sembrado 0.1 mL: <100/g

3. Colonias diseminadas

Cuando se presentan colonias diseminadas, contar las colonias que se hallan en el resto de la caja, siempre
y cuando las colonias diseminadas no cubran más de la mitad de la caja.

Si la presencia de colonias diseminadas es frecuente (más de 1 caja por cada 20 cajas) debe tomarse una
acción correctiva como reducir humedad de la incubadora o verter agar a temperatura más baja.

Expresión de resultados:

Reportar solamente dos dígitos, el primero y el segundo de izquierda a derecha. Los otros dos dígitos deben
reemplazarse por ceros.

Ejemplo:

283.000 tomar como 280.000 e informar como 28 x 104

Si el tercer dígito es 5 o mayor aproximar a la unidad superior

Ejemplo:

53.800 tomar como 54.000 e informar como 54 x 103

Informar el número de colonias contadas como UFC (Unidad Formadora de Colonia) por gramo o mL. y la
temperatura utilizada.

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Normas para interpretar y reportar el recuento estándar en placa

Características del Recuento Ejemplo Calcular Reportar

1. Dos cajas de la misma dilución Caja 1: 180 Recuento estándar en

tienen entre 30 y 300 colonias. Dil.10-2 Promedio placa
Contar las 2 cajas Caja 2: 140 aritmético 16 x 103
X= 160
2. En la misma dilución, una caja Caja 1: 70 Recuento estándar en
tiene entre 30 y 300 y la otra Dil.10-2 Promedio placa
<30 ó >300 colonias. Caja 2: 26 aritmético 48 x 102
Contar las 2 cajas. X= 48
a. Relación: 10-3/10-2 Recuento estándar en
X Dil.10-3 : 35 35.000= Si menor placa
X Dil.10-2: 250 de 30 x 103
3. Las cajas de 2 diluciones 25.000 2 tomar
consecutivas tienen entre 30 y b. promedio
300 colonias. X Dil.10-3: 38 Relación: 10-3/10-2 Recuento estándar en
Contar las 4 cajas X Dil. 10-2: 150 38.000= Si mayor placa
de 15 x 103
15.000 2 tomar
el
menor
4. No hay colonias en las cajas de Caja 1: < 1 Recuento Estimado en
la suspensión más Dil. 10-1 X = < 1 placa: < 10
concentrada. Caja 2: < 1
-3
a. Dil. 10 Promedio Recuento Estimado en
Caja 1: 180 aritmético placa: 68 x 104
5. Dos cajas de la dilución más en ¼ 180 x 4 = 720
alta tienen más de 300 Caja 2: 160 160 x 4 = 640
colonias. en ¼ X = 680
Dividir las cajas en forma radial b. Más de 200 en 1/8 Recuento Estimado en
(2, 4, 8) y contar el número de > 200 x 8 = 1.600 placa: > 16 x 105
colonias por sección.
6. Presencia de colonias Dil. 10-2 = Caja 1 Promedio Presencia de colonias
diseminadas en un área menor mitad: aritmético diseminadas.
de la mitad de la caja. 60 x 2 X = 150 15 x 103
Contar la otra mitad Caja 2
180
I.C.M.S.F. (1978)

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PRÁCTICA 2.1: PETRIFILM. 3M. RECUENTO DE MESOFILOS AEROBIOS

Es similar al procedimiento recuento estándar en placa que es el recuento indicador más amplio y
general en alimentos, ya que incluye todos los géneros aerobios y facultativos que crecen en
medios simples a una temperatura entre 15 y 45°C.

Este recuento se considera como indicador del grado de contaminación de los alimentos en
cualquier etapa del proceso de producción; también se utiliza como indicador de la vida útil de un
producto.

Materiales

þ Frascos y tubos con diluciones de la muestra

þ Incubadora a 35°C
þ Pipetas de 1 mL estériles
þ Placas Petrifilm para Recuento de Aerobios
þ Contador de colonias standard tipo Quebec.

Procedimiento

 Seleccionar por lo menos 3 diluciones de la muestra preparadas (según el capítulo

Homogenización y diluciones)
 Colocar la placa Petrifilm en una superficie plana. Levantar el film superior.
 Con una pipeta perpendicular a la placa Petrifilm colocar 1 mL de muestra en el centro del film
inferior
 Bajar el film superior; dejar que caiga. No deslizarlo hacia abajo
 Con la cara lisa hacia arriba, colocar el aplicador en el film superior sobre el inóculo
 Con cuidado ejercer una presión sobre el aplicador para repartir el inóculo sobre el área
circular. No girar ni deslizar el aplicador
 Levantar el aplicador. Esperar un minuto a que se solidifique el gel.
 Repetir el proceso con las diferentes diluciones
 Incubar las placas Petrifilm cara arriba en pilas de hasta 20 placas.
 Leer las placas en un contador de colonias.Rango 25-250 UFC/ml
 Interpretar los resultados. (Se adjunta guía de resultados para el recuento de aerobios)

Nota: Según las normas locales de incubación para tiempo y temperatura: 30ºC  1ºC por 72  3
horas (normas AFNOR, normas IDF) 32 o 35ºC  1ºC por 48 horas  3 horas (métodos estándar
para pruebas de productos lácteos, normatizados por la AOAC).

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Consulta:

1. Fichas de cada medio de cultivo utilizado. Referencias

2. Como está estructurada la placa petrifilm. Referencias