TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MÉRIDA

INGENIERÍA BIOQUÍMICA
ENERO-JUNIO 2019

PRACTICA 2: CUANTIFICACIÓN DE CAFEÍNA EN MUESTRA DE COCA-

COLA POR ESPECTROFOTOMETRÍA

INTEGRANTES

CHE AGUILAR, LIGIA MARISOL

HÉRNANDEZ MÉRIDA, GEMA YOSSELIN

PEÑÚÑURI CANTÚ, CAROLINA

SALAZAR AYUSO, KAROL PATRICIA

MATERIA:

ANÁLISIS INSTRUMENTAL

PROFESOR

DR. ENRIQUE SAURI DUCH

FECHA DE ENTREGA

29 DE MAYO DE 2019
 CUANTIFICACIÓN DE CAFEÍNA EN MUESTRA DE COCA-COLA POR
ESPECTROFOTOMETRÍA

INTRODUCCIÓN
La cafeína es un polvo inodoro, incoloro y amargo, alcaloide del grupo de las xantinas,
que actúa como estimulante y psicoactivo. La cafeína se produce naturalmente de las hojas o
semillas de muchas plantas. La fuente habitual de cafeína es el café, pero también se
encuentra en el té (teína), guaraná (guaranina), mate (mateína), cacao y refrescos de cola,
entre otros. La determinación de cafeína ha adquirido mucha importancia, debido a su uso en
la industria farmacéutica y en la industria de alimentos; ya sea como ingrediente en la
elaboración de refrescos y bebidas energéticas, por lo que es importante su cuantificación.
Las bebidas con cafeína suelen tener calorías que no proporciona ningún nutriente en
nuestro organismo. La cafeína es un diurético que hace que hace que nuestro cuerpo elimine
agua, lo que puede llevarnos a la deshidratación.
En este caso, se realizó un análisis en la Coca-Cola, una bebida de cola mundialmente
conocida, en la cual comprobaremos y compararemos los valores que la literatura nos da a
cerca de la cantidad de este compuesto que posee, que es 9.6 mg por cada 100ml.

OBJETIVO
Determinar el espectro de absorción y la curva patrón de un analito y usar esta
información para cuantificar una muestra problema del mismo analito.

METODOLOGÍA
La espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la
detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su
aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza, es uno de los métodos de análisis más
usados, y se basa en la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un compuesto
y su concentración. Cuando se hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de onda)
sobre un medio homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra
transmitida, como consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea atenuada desde Po a P,
siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz transmitido.
 Los espectrómetros, o espectrofotómetros, son aparatos que se emplean en el estudio de
la absorción o emisión de la radiación electromagnética en función de la longitud de onda.
Sus componentes básicos son:
1) Fuente estable de energía radiante
2) Monocromador
3) Recipientes transparentes para la muestra
4) Detector de la radiación con un sistema de lectura acoplado
Dependiendo si se requiere de luz ultra violeta, luz visible o infrarroja se emplea un tipo
diferente de fuente de energía. Para el caso de la región UV se utilizan las lámparas de
hidrogeno y deuterio, o las de xenón. Como fuente de radiación visible se encuentra la
lámpara de filamento de Tungsteno, y para infrarrojo se utilizan las lámparas Nernst y
Globar.
El monocromador reduce la radiación policromática a anchos de banda efectivos que
varían entre 35 y 0.1 nm. Como su nombre lo indica, desdobla la radiación policromática en
las longitudes de onda que la forman y separa estas longitudes de onda en bandas muy
angostas. Un monocromador está constituido por una rendija de entrada por la que penetra la
radiación policromática de la fuente, un colimador (lente o espejo), un dispersor (prisma o
rejilla) que desdobla la radiación en longitudes de onda componentes, un lente de enfoque o
espejo y una rendija de salida, tal como se muestra en la figura 1.

Figura 1. Funcionamiento de un monocromador

 Las muestras que se estudian en la región del ultravioleta o del visible mayormente son
gases y estas se colocan en celdas o cubas. En la región del ultravioleta se usan celdas de
cuarzo o de sílice fundida, las cuales generalmente se colocan después del monocromador.
Las ventanas de la celda de absorción se deben mantener escrupulosamente limpias, pues
las celdas de absorción se deben mantener limpias, ya que tanto las huellas digitales como
las muestras anteriores puede causar un error.
Los detectores de los espectrofotómetros absorben la energía de los fotones que chocan
contra él y la convierte en una cantidad mensurable, como es la impresión de una placa
fotográfica, una corriente eléctrica o cambios térmicos. Cualquier tipo de detector debe
generar una señal que esta cuantitativamente relacionada con el poder radiante que recibe.
Para las regiones ultravioleta y visible los detectores que se utilizan son las celdas
fotovoltaicas y los fototubos.
Materiales
 Espectrofotómetro  1 pipeta graduada de 1 ml
 2 celdas para el espectrofotómetro  1 pipeta graduada de 10 ml
 6 Tubos de ensaye  1 espátula
 1 gradilla  1 probeta
 1 matraz aforado de 50 ml  1 vaso de precipitado
 Balanza analítica  1 agitador de vidrio

Reactivos
 Cafeína
 Sub-Acetato de plomo
 Agua destilada

Procedimiento:
Preparación de 50 ml la solución patrón de cafeína a 500 ppm.
Se pesó 25 mg de cafeína en la balanza analítica, y se transfirió a un matraz para luego
aforarse con 50 ml de agua destilada.

Preparación de la solución de la Coca-Cola

Se vertió en un vaso de precipitado 25ml de Coca-Cola, se le agregó aproximadamente
una cucharada de sub-acetato de plomo y se agito hasta que la mezcla se homogenizo. Luego
en otro vaso de precipitado de 10 ml, con ayuda de un se puso un embudo y papel filtro, y se
filtró la solución de Coca-Cola con el sub-acetato de plomo vertiendo lentamente dicha, esta
filtración se repito dos veces más. Una vez terminada la filtración, la mezcla se diluyo en 10
ml de agua, para asegurarse que estuviera completamente transparente.

Preparación de los tubos de ensayo

En 6 tubos de ensayo diferentes se prepararon disoluciones entre 0 y 50 ppm de la
solución madre diluyendo con agua destilada, como se muestra en la tabla 1.

TABLA 1. Indicaciones para preparar las soluciones de concentración conocida

Tubo Solución madre H20 (ml) Vol. final (ml) Concentración

de cafeína (ml) de cafeína (ppm)
1 0 (BLANCO) 10 10 0
2 0.2 9.8 10 10
3 (triplicado) 0.4 9.6 10 20
4 0.6 9.4 10 30
5 0.8 9.2 10 40
6 1 9 10 50

Se procedió a leer las absorbancias de las soluciones conocidas en el espectrofotómetro,

a la longitud de onda especificada para la cafeína (273nm), dando los valores reportados en
la tabla 2. En el caso de la absorbancia de la solución de 30 ppm, se calculó el promedio de
las muestras por triplicado.

TABLA 2. Resultados de las absorbancias de las muestras de concentración conocida

Concentración (ppm) Absorbancia
0 0
10 0.5106
20 1.0089
30 1.6268 (promedio)
40 1.8396
50 2.3228
 Estos datos se utilizaron para construir la curva de calibración (gráfica1). Para ello se
utilizó el método de regresión lineal, para ajustar los valores a una línea recta.

Gráfica 1. Curva de calibración de la cafeína

2.5

2
Absorbancia

1.5

0.5

0
0 10 20 30 40 50 60
Concentración en ppm

Se calculó el coeficiente de correlación, dando un valor de 𝑟 =0.99421585. También se

calcularon los valores de a y b para encontrar la ecuación de la recta. Los valores fueron 𝑎 =
0.05962 y 𝑏 = 0.04633, por lo tanto la ecuación de la recta quedo de la siguiente manera:

𝑦 = 0.05962 + 0.04633𝑥 (1)

También se calculó la desviación estándar y el coeficiente de variación (C.V.) utilizando

los resultados de la muestra por triplicado. La desviación estándar fue de 0.23511085 y el
coeficiente de variación fue de 14.452351%.

Preparación y análisis de la muestra problema:

De la solución antes preparada de Coca-Cola, se tomaron 2 ml y se aforó a 10 ml con
agua destilada. De ésta solución se midió la absorbancia a la longitud de onda necesaria de
273 nm.

CÁLCULOS Y RESULTADOS
Al leer en el espectrofotómetro la absorbancia arrojada del análisis de la muestra
problema dio un valor de 1.5424. Por lo que para obtener la concentración de cafeína presente
en la Coca-Cola se realizaron los siguientes cálculos:
Sustituyendo el valor de la absorbancia (y) en la ecuación de la recta obtenida por la curva
de calibración y despejando el valor de x se obtiene que
1.5424−0.05962
𝑥= = 32.004𝑝𝑝𝑚 = 32.004 𝑚𝑔/𝐿
0.04633
32.004𝑚𝑔 1𝐿
𝐶𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑓𝑒í𝑛𝑎 𝑒𝑛 10𝑚𝑙 = × 1000𝑚𝑙 × 10𝑚𝑙 = 0.32004 𝑚𝑔
𝐿
500𝑚𝑙×0.32004𝑚𝑔
𝐶𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑎𝑧ú𝑐𝑎𝑟 𝑒𝑛 500 𝑚𝑙 = = 81.01 𝑚𝑔
2𝑚𝑙
81.01𝑚𝑔 1000𝑚𝑙
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑓𝑒í𝑛𝑎 = × = 162.01𝑚𝑔/𝐿
500𝑚𝑙 1𝐿

DISCUSIÓN Y ANÁLISIS
La literatura nos dice que la cantidad de cafeína en la Coca-Cola es de 24 mg por cada
250 ml, lo que es equivalente a 96 mg de cafeína por litro de Coca-Cola, que comparado con
el resultado experimental de 162.01mg/L si refleja cierta diferencia, dando mayores
concentraciones en el análisis experimental. Estas diferencias se pueden deber a la
interferencia del sub-acetato de plomo o quizá en verdad la Coca-Cola tiene más cafeína de
la que refleja en su información nutrimental.

CONCLUSION
Se determinó la cantidad de cafeína presente en la muestra de Coca-Cola y el resultado
se comparó con los datos recabados en fuentes de referencia. Los resultados experimentales
y los datos de la literatura difirieron un poco, dando como resultado una mayor cantidad de
cafeína a la que establece la literatura.

REFERENCIAS BIBIOLGRAFICAS
 Harris D. C. 2001. Análisis Químico Cuantitativo 2a ed. Ed. Reverté
 Pardo, R (2007). Cafeína: un nutriente, un fármaco, o una droga de abuso. Adicciones.
Vol.19. Núm 3. Doi: https://doi.org/10.20882/adicciones.303
 Pecsok, R. (1983). Métodos modernos de análisis químico. Editoria Limusa. México.
 ANEXOS

Anexo 1. Preparación de la Anexo 2. Reactivos (sub-acetato de plomo

solución de Coca-Cola a la izquierda y agua destilada a la derecha)

Anexo 3. Preparación de la Anexo 4. Medición de las

solución de cafeína. absorbancias