Full

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
PERBANDINGAN DAYA ANTIOKSIDAN

SARI BUAH MARKISA UNGU (Passiflora edulis f. edulis Sims) DENGAN
SARI BUAH MARKISA KUNING (P. edulis Sims f. flavicarpa Deg)
MENGGUNAKAN METODE DPPH
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Meiske Munda
NIM : 088114177
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2012
PERBANDINGAN DAYA ANTIOKSIDAN

SARI BUAH MARKISA UNGU (Passiflora edulis f. edulis Sims) DENGAN
SARI BUAH MARKISA KUNING (P. edulis Sims f. flavicarpa Deg)
MENGGUNAKAN METODE DPPH
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Meiske Munda
NIM : 088114177
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2012
i
ii
iii
“Mulai”adalah kata yang penuh dengan kekuatan….
Cara terbaik untuk menyelesaikan sesuatu adalah dengan
memulainya. Tetapi, pekerjaan apakah yang dapat kita selesaikan
kalau kita hanya memulainya ????? (Clifford Warren)
Kupersembahkan karyaku ini untuk :

Kedua orang tuaku yang luar biasa, papa & mama tersayang,
adik-adikku yang selalu kubanggakan.
Sahabat dan keluarga besarku Farmasi 2008, dan
Almamaterku, Fakultas Farmasi Unversitas Sanata Dharma
And all things,whatsoever ye shall ask in prayer, believing…..

Ye shall receive (Matthew 21:22)
iv
v
PRAKATA
Segala Puji dan Syukur penulis panjatkan kepada Bapa di Sorga yang
senantiasa melindungi, membimbing, menganugerahkan kasih dan
pertolonganNya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan
skripsi dengan judul “Perbandingan Daya Antioksidan Sari Buah Markisa
Ungu (Passiflora edulis f. edulis Sims) Dengan Sari Buah Markisa Kuning
(P.edulis Sims f. flavicarpa Deg) Menggunakan Metode DPPH” disusun
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi di Fakultas
Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
Dalam proses penelitian dan penyusunan skripsi ini tidak lepas dari
bantuan berbagai pihak berupa bimbingan, nasehat, dorongan, kritik dan saran.
Oleh karena itu, dalam kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih
kepada :
1. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku Dosen Pembimbing yang dengan
sabar membimbing mulai dari awal hingga akhir penyusunan skripsi ini.
2. Bapak Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt., selaku Dosen Penguji yang telah
bersedia, menguji dan memberikan saran serta kritik selama penyusunan
skripsi.
3. Ibu Lucia Wiwid Wijayanti, M.Si., selaku Dosen Penguji yang telah bersedia
menguji dan memberikan saran serta kritik selama penyusunan skripsi.
4. Seluruh staf pengajar dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma Yogyakarta. Terima kasih atas bantuan dan bimbingannya.
vi
5. Mas Bimo, Mas Kunto, Mas Parlan, Mas Wagiran, Pak Ketul, Mas Andri,
terima kasih atas bantuan dan keramahan selama peneliti berada di lab.
6. My lovely aunt yang bersedia mengirimkan buah markisa dari Toraja ke
Yogyakarta.
7. Bapak Supardi yang telah menyediakan sampel bagi peneliti.
8. My best partner Augustiyani Novie Imoliana, terima kasih buat persahabatan,
kerjasama, bantuan dan motivasi yang sangat berarti dalam penyelesaian
skripsi ini.
9. Partner kerja di lantai 4 (anti stress team), terima kasih buat semua bantuan,
masukan, dan motivasnya . Sebuah kebersamaan yang pastinya tidak akan
terlupakan dari mulai masa-masa yang sulit dan pastinya akan diakhiri
dengan senyum bahagia. Satu kata “semangat , pasti bisa ”, merupakan obat
yang sangat mujarab.
10. Pius dan Yuni yang membantu dalam proses pengolahan data, semua sahabat-
sahabatku yang selalu menanyakan “Ike, kapan selesainya? Semangat ya…”,
itu merupakan motivasi yang sangat berarti.
11. Teman-teman kelas FST B angkatan 2008, terima kasih buat persahabatan
yang tulus dan kebersamaan yang tidak akan pernah tergantikan menjadi
sebuah memori indah penghias album kehidupanku.
12. Teman-teman Ikaskibar Jogja, yang selalu mendoakan, memotivasi dan selalu
membantu.
vii
Serta untuk semua pribadi yang telah bersedia membantu penulis dalam
banyak hal, semuanya akan menjadi bagian yang tak akan terlupakan dan akan
selalu ada senyuman bahkan keharuan ketika penulis mengingatnya.
Penulis menyadari bahwa masih terdapat banyak kekurangan dalam
pemyusunan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran
dari semua pihak. Akhir kata, besar harapan penulis semoga hasil penelitian ini
bermanfaat dan menjadi sumbangan dalam perkembangan ilmu pengetahuan
khususnya farmasi.
Penulis
viii
ix
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL .............................................................................. i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ....................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................. iii
HALAMAN PERSEMBAHAN .............................................................. iv
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ...... v
PRAKATA ............................................................................................. vi
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .................................................. ix
DAFTAR ISI .......................................................................................... x
DAFTAR TABEL ................................................................................... xiv
DAFTAR GAMBAR .............................................................................. xv
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................... xvii
INTISARI ............................................................................................... xviii
ABSTRACT ............................................................................................. xix
BAB I PENGANTAR ............................................................................ 1
A. Latar Belakang ................................................................................. 1
B. Perumusan Masalah ......................................................................... 4
C. Keaslian Penelitian ........................................................................... 5
D. Manfaat Penelitian ........................................................................... 5
1. Manfaat teoritis .......................................................................... 5
2. Manfaat praktis .......................................................................... 6
E. Tujuan Penelitian ............................................................................. 6
x
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ...................................................... 7
A. Markisa Ungu dan Markisa Kuning .................................................. 7
1. Keterangan botani ...................................................................... 7
2. Ekologi dan penyebaran ............................................................. 8
3. Kandungan kimia dan pemanfaatan buah markisa ....................... 9
B. Radikal Bebas .................................................................................. 10
C. Antioksidan ...................................................................................... 11
1. Metode conjugated diene ............................................................ 12
2. Metode penangkapan radikal hidroksil ....................................... 13
3. Metode ferric reducing ability of plasma (FRAP) ....................... 13
4. Metode trapping antioxidant parameter (TRAP) ......................... 13
D. Metode DPPH .................................................................................. 14
E. Spektrofotometri UV-Visibel ........................................................... 15
F. Validasi Metode Analisis ................................................................. 18
G. Landasan Teori ................................................................................ 20
H. Hipotesis .......................................................................................... 22
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ................................................. 23
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ........................................................ 23
B. Variabel Penelitian ........................................................................... 23
1. Variabel bebas ............................................................................ 23
2. Variabel tergantung .................................................................... 23
3. Variabel pengacau ...................................................................... 23
C. Definisi Operasional ........................................................................ 23
xi
D. Bahan Penelitian .............................................................................. 24
E. Alat-Alat Penelitian .......................................................................... 25
F. Tata Cara Penelitian ......................................................................... 25
1. Determinasi tanaman .................................................................. 25
2. Pengambilan sampel ................................................................... 25
3. Penyiapan bahan uji ................................................................... 26
4. Analisis data ............................................................................... 29
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................. 30
A. Hasil Determinasi Tumbuhan ........................................................... 30
B. Hasil Pengumpulan Bahan ............................................................... 30
C. Hasil Preparasi Sampel ..................................................................... 33
D. Hasil Optimasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan ............................ 37
1. Penentuan OT metode uji aktivitas antioksidan ........................... 38
2. Penentuan λ maksimum metode uji aktivitas antioksidan ............ 41
E. Hasil Validasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan ............................. 43
1. Akurasi ...................................................................................... 45
2. Presisi ........................................................................................ 48
3. Linearitas ................................................................................... 48
4. Spesifisitas ................................................................................. 49
F. Hasil Estimasi Aktivitas Antioksidan dengan Radikal DPPH ........... 49
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .................................................. 57
A. Kesimpulan ...................................................................................... 57
B. Saran ................................................................................................ 57
xii
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................ 58
LAMPIRAN .......................................................................................... 62
BIOGRAFI PENULIS ........................................................................... 81
xiii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel I. Komposisi markisa ungu dan markisa kuning ....................... 3
Tabel II. Beberapa macam Reactive Oxygen Species (ROS) dan
antioksidan yang menetralkannya (Percival, M., 1998) ......... 10
Tabel III. Tingkat kekuatan antioksidan dengan metode DPPH ............ 15
Tabel IV. Rentang akurasi yang masih dapat diterima ........................... 19
Tabel V. Rentang KV yang masih dapat diterima ................................ 20
Tabel VI. Volume sari buah markisa ungu dan sari buah markisa kuning 36
Tabel VII. Hasil %recovery dan %CV uji aktivitas antioksidan vitamin
C............................................................................................ 46
Tabel VIII. Hasil %recovery dan %CV uji aktivitas antioksidan
sari markisa ungu ................................................................. 46
Tabel IX. Hasil %recovery dan %CV uji aktivitas antioksidan sari
markisa kuning ..................................................................... 47
Tabel X. Hasil %IC vitamin C menggunakan radikal DPPH ................ 51
Tabel XI. Hasil %IC sari buah markisa ungu menggunakan radikal
DPPH ................................................................................... 52
Tabel XII. Hasil %IC sari buah markisa kuning menggunakan radikal
DPPH ................................................................................... 53
Tabel XIII. ....Hasil %IC50 vitamin C, sari markisa ungu dan sari markisa
kuning .................................................................................. 54
xiv
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Markisa ungu dan markisa kuning (Karsinah, 2007) ........... 8
Gambar 2. Perubahan warna larutan pada reaksi radikal DPPH dengan
antioksidan (Witt , Lalk, Hager, dan Voigt, 2010) ............... 14
Gambar 3. Diagram spektrofotometer UV-Vis (Sastrohamidjodjo,
2001) .................................................................................. 16
Gambar 4. Gugus kromofor dan auksokrom DPPH (Prakash et al., 2001) ….. 18
Gambar 5. Perbedaan warna sari markisa ungu dan markisa kuning ..... 36
Gambar 6. Pengendapan protein dan pati yang terkandung dalam isi
buah ................................................................................... 37
Gambar 7. Hasil grafik penentuan OT vitamin C ................................. 39
Gambar 8. Hasil grafik penentuan OT markisa ungu ............................ 39
Gambar 9. Hasil grafik penentuan OT markisa kuning ......................... 40
Gambar 10. Spektra panjang gelombang maksimum DPPH 0,054 mM . 42
Gambar 11. Spektra panjang gelombang maksimum DPPH 0,11 mM ... 42
Gambar 12. Spektra panjang gelombang maksimum DPPH 0,22 mM ... 42
Gambar 13. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan
vitamin C ............................................................................ 44
Gambar 14. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan sari
markisa ungu ...................................................................... 44
Gambar 15. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan sari
markisa kuning ................................................................... 45
xv
Gambar 16. Donasi proton senyawa antioksidan ke radikal DPPH
(Prakash, et.,al.,2010) ......................................................... 54
xvi
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat Pengesahan Determinasi Tanaman Markisa Ungu
dan Markisa Kuning ......................................................... 63
Lampiran 2. Gambar Buah Markisa Ungu dan Markisa Kuning ........... 65
Lampiran 3. Gambar Blender ............................................................... 66
Lampiran 4. Data Penimbangan Bahan ................................................. 67
Lampiran 5. Data Perhitungan Konsentrasi DPPH, Larutan
Pembanding, dan Larutan Uji ........................................... 68
Lampiran 6. Scanning Pengkoreksi ...................................................... 71
Lampiran 7. Optimasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan ..................... 73
Lampiran 8. Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Radikal DPPH .. 75
Lampiran 9. Perhitungan Nilai IC50 Vitamin C, Sari Markisa Ungu dan
Sari Markisa Kuning ........................................................ 78
Lampiran 10. Uji Statistik Aktivitas Antioksidan dengan SPSS 17.0 ...... 80
xvii
INTISARI
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat terjadinya

reaksi radikal bebas yang berpotensi merusak sel-sel penting dalam tubuh.
Berbagai komponen antioksidan alami terdapat di alam secara melimpah, baik
dalam sayur-sayuran maupun buah-buahan. Markisa merupakan salah satu jenis
buah yang masih kurang dimanfaatkan oleh masyarakat Indonesia. Berdasarkan
beberapa sumber diketahui bahwa markisa mengandung vitamin C yang tinggi,
flavonoid dan karotenoid yang merupakan senyawa antioksidan.
Terdapat beberapa forma markisa asam di Indonesia, namun markisa
ungu (Passiflora edulis f. edulis Sims) dan markisa kuning (P.edulis Sims f.
flavicarpa Deg) yang lebih dikenal dan mulai dibudidayakan oleh masyarakat.
Perbedaan forma dapat memungkinkan adanya perbedaan daya antioksidan yang
dimiliki. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan daya antioksidan antara
sari buah markisa ungu dan sari buah markisa kuning menggunakan metode
DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) yang dinyatakan dengan IC50. Penetapan
aktivitas antioksidan dilakukan dengan mengukur penurunan serapan DPPH pada
berbagai konsentrasi sari buah markisa ungu dan markisa kuning. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa sari buah markisa ungu dan sari buah markisa kuning
mempunyai aktivitas antioksidan lemah karena nilai IC50 >50 µg/mL, yaitu
2,74±0,39 mg/ml untuk sari markisa ungu dan 5,26±1,57 mg/mL untuk sari
markisa kuning. Dari hasil uji statistik diketahui bahwa terdapat perbedaan yang
signifikan antara nilai IC50 sari buah markisa ungu dengan sari buah markisa
kuning.
Kata kunci : antioksidan, radikal bebas, sari buah markisa ungu, sari buah markisa
kuning, metode DPPH.
xviii
ABSTRACT
Antioxidants are compounds that can inhibit free radical reactions that
potentially damage important cells in the body.There are many components of the
natural antioxidants are found in nature in abundance, especially in vegetables and
fruits. Passion fruit is one kind of fruit that still under-utilized by the people in
Indonesia. According to some researches, passion fruit contains a high vitamin C,
flavonoids and carotenoids which are antioxidant compounds.
There are several forma of Passiflora edulis Sims in Indonesia, but forma
violet and yellow passion fruit which is well known and cultivated by the
community. Forma differences can allow for differences in antioxidant activity.
This research was conducted to compare the antioxidant activity of violet passion
fruit with yellow passion fruit juice using the DPPH method that expressed as
Inhibition Concentration 50 (IC50). Determination of antioxidant activity carried
out by measuring the decrease in DPPH absorption in various concentrations of
the juice. The result showed that both of passion fruit forma have weak
antioxidant activity with IC50 >50 µg/mL. Violet passion fruit forma have
antioxidant activity IC50 value of 2,74±0,39 mg/mL and IC50 value of 5,26±1,57
mg/mL for the yellow passion fruit forma. From the result of statistikal test
showed that there are significant differences IC50 value between the violet passion
fruit with the yellow passion fruit forma.
Keywords: Antioxidant, free radical, violet passion fruit juice, yellow passion
fruit juice, DPPH method
xix
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Perubahan kondisi lingkungan dan pola hidup masyarakat, terutama pola
makan dan kebiasaan buruk di kota-kota besar pada negara berkembang seperti
Indonesia menjadikan tubuh lebih rentan terkena berbagai jenis penyakit,
khusunya penyakit-penyakit yang dipicu oleh radikal bebas. Radikal bebas dapat
berasal dari dalam tubuh manusia sendiri maupun dari lingkungan sekitar, oleh
karena itu dengan pola hidup yang tidak sehat dan didukung oleh kondisi
lingkungan yang juga tidak sehat menyebabkan potensi terserangnya tubuh oleh
radikal bebas semakin besar.
Radikal bebas merupakan atom atau molekul yang mempunyai satu atau
lebih elektron bebas yang tidak berpasangan. Radikal bebas bersifat sangat
reaktif, sehingga untuk menstabilkan dirinya molekul ini akan melakukan
serangkaian reaksi oksidasi patogenik terhadap sel atau komponen sel seperti
nukleotida, membran sel, lemak dan protein, sehingga sel akan mengalami
disfungsi atau mutasi yang akhirnya berakibat pada timbulnya berbagai jenis
penyakit degenaratif (Hernani dan Rahardjo, 2005). Radikal bebas diketahui dapat
menginduksi penyakit kanker, arteriosklerosis dan penuaan, disebabkan oleh
kerusakan jaringan karena oksidasi (Kikuzaki dan Nakatani, 1993).
Antioksidan didefinisikan sebagai senyawa yang mampu menunda,
memperlambat, atau menghambat reaksi oksidasi dengan mengikat radikal bebas
1
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 2
(Pokorny dkk., 2001). Senyawa antioksidan memegang peranan penting dalam
pertahanan tubuh terhadap pengaruh buruk yang disebabkan radikal bebas.
Di sisi lain, telah terjadi booming produk-produk yang berlabel antioksidan
dan dikatakan dapat melawan kerja radikal bebas. Produk antioksidan yang
banyak beredar merupkan produk antioksidan sintetik seperti BHA (butil hidroksi
anisol), BHT (butil hidroksi toluen), PG (propel galat), dan TBHQ (tert-butil
hidroquinon) yang berdasarkan beberapa penelitian dapat meningkatkan
terjadinya karsinogenesis sehingga penggunaan antioksidan alami semakin gencar
diperlukan (Amarowicz et al., 2000). Antioksidan sintetis memiliki efektivitas
yang tinggi namun kurang aman bagi kesehatan sehingga pengunaannya diawasi
secara ketat di berbagai negara (Pujimulyani, 2003). Produk-produk antioksidan
ini dijual dengan harga yang cukup mahal. Padahal, komponen antioksidan
terdapat di alam secara melimpah, baik dalam sayur-sayuran maupun buah-
buahan. Studi epidemiologi menunjukkan bahwa konsumsi buah dan sayuran
yang cukup, berhubungan dengan tingkat kejadian yang lebih rendah terhadap
jenis penyakit seperti kanker dan kardiovaskuler. Efek tersebut antara lain
disebabkan adanya aktivitas antioksidan alami seperti vitamin C, E, betakaroten
dan beberapa senyawa polifenol lain (Cos dkk., 2001). Banyak orang yang tidak
menyadari hal ini karena belum paham betul apa yang dimaksud dengan
antioksidan, jenis, kegunaan, dan bahan-bahan yang mengandungnya.
Buah markisa merupakan salah satu buah yang mengandung banyak nutrisi
dan belum dimanfaatkan secara optimal oleh masyarakat Indonesia, karena
mungkin rasanya yang asam berbeda dengan buah-buahan lain yang rasanya
manis. Markisa memang bukan tanaman asli Indonesia namun dapat tumbuh
subur di Indonesia khususnya di daerah dataran tinggi untuk markisa ungu dan
dataran rendah untuk markisa kuning. Menurut Karsinah (2007) dan Verheij
(1997), dalam 100 g buah markisa asam mengandung 69-80 g air, 2,3 g protein,
2,0 g lemak (hampir semuanya berada dalam biji), 16 g karbohidrat, 3,5 g serat,
10 mg Ca, 1,0 mg Fe, 20 SI vitamin A, sedikit sekali tiamin, 0,1 mg riboflavin,
1,5 mg niasin, dan 20-80 mg vitamin C.
Ada dua jenis forma markisa asam yang saat ini mulai dibudidayakan di
Indonesia yang merupakan bahan baku utama industri pengolahan sirup markisa.
Kedua forma markisa asam ini adalah markisa ungu dan markisa kuning. Baik
markisa ungu maupun markisa kuning memiliki rasa yang tidak jauh berbeda,
namun karena adanya perbedaan “forma” memungkinkan komposisi zat antara
markisa ungu dan markisa kuning juga berbeda dan dapat mempengaruhi
khasiatnya. Seperti yang disampaikan Karsinah (2007), terdapat perbedaan
komposisi zat yang terkandung pada markisa ungu dan markisa kuning (Tabel 1).
Tabel 1. Komposisi markisa ungu dan markisa kuning

Komposisi Markisa ungu Markisa Kuning
Karotenoid 1,16 % 0,058 %
Flavonoid 1,06% 1%
Alkaloid 0,012% 0,7%
Vitamin C 88 mg/100g 75,09mg/100g
Berdasarkan perbedaan komposisi kandungan kimia dari sari buah markisa
ungu maupun sari buah markisa kuning, maka memungkinkan daya antioksidan
yang dimiliki oleh kedua jenis markisa asam ini juga berbeda. Oleh karena itu,
dilakukan penelitian untuk mengetahui perbandingan daya antioksidan antara sari

buah markisa ungu dengan sari buah markisa kuning. Dari penelitian ini
diharapkan dapat memberikan sumbangan informasi kepada masyarakat mengenai
ada atau tidaknya perbedaan antioksidan antara markisa ungu dan markisa kuning
sehingga dapat dijadikan pertimbangan pemilihan dalam mengkonsumsi buah ini.
Penelitian ini difokuskan hanya untuk menguji daya antioksidan masing-masing
sari buah markisa ungu dan sari buah markisa kuning, dan tidak dilakukan uji
kualitatif maupun pemisahan senyawa tunggal yang bertanggung jawab sebagai
antioksidan.
Metode yang digunakan untuk mengukur aktivitas antioksidan sari buah
markisa ungu dan sari buah markisa kuning ini adalah metode DPPH (2,2-
diphenyl-1-picrylhydrazyl) dengan menggunakan vitamin C sebagai kontrol
positif. Pemilihan metode ini karena metode ini dianggap akurat dalam mengukur
aktivitas antioksidan pada buah dan ekstrak sayur (Kwok, 2003) dan juga relatif
lebih sederhana (Hanani, 2005). Prinsip metode ini didasarkan pada kemampuan
suatu antioksidan untuk mengurangi intensitas warna ungu radikal DPPH.
B. Perumusan Masalah
Bagaimanakah perbandingan daya antioksidan sari buah markisa ungu
dengan sari buah markisa kuning yang terukur dengan menggunakan metode
DPPH yang dinyatakan sebagai IC50 ?

C. Keaslian Penelitian
Penelitian tentang daya antioksidan pada tanaman markisa yang diketahui
pernah dilakukan oleh :
1. Ripa, et al., (2009) menguji menggunakan ekstrak daun dan batang tanaman
markisa (Passiflora edulis) dengan pelarut petroleum eter dan kloroform.
2. Zeraik, et al., (2011) meneliti ekstrak metanol Passiflora alata pulp, dimana
aktivitas antioksidan ekstrak metanol buah diukur menggunkaan SIEFED
(Spesific Immunological Extraction Followed by Enzymatic Detection).
Perbedaan penelitian ini dengan penelitian sebelumnya adalah bahwa pada
penelitian ini akan dilakukan uji daya antoksidan pada buah markisa (sampel
dalam bentuk sari buah) bukan pada batang ataupun daun dan juga dilakukan
pada “forma” markisa ungu (P. edulis f. edulis Sims) dan markisa kuning
(P.edulis Sims f. flavicarpa Deg) dengan menggunakan metode DPPH.
D. Manfaat Penelitian
1. Manfaat teoritis
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi bagi penelitian
lebih lanjut dalam ilmu kefarmasian mengenai aplikasi metode DPPH untuk sari
buah dalam pengujian aktivitas antioksidan maupun masyarakat luas mengenai
perbandingan daya antioksidan sari buah markisa ungu dengan sari buah markisa
kuning terhadap 1,1-diphenyl-2-picrylhidrazyl (DPPH) yang dinyatakan dengan
IC50.
2. Manfaat praktis
Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang daya
antioksidan sari buah markisa ungu dan sari buah markisa kuning sehingga
nantinya dapat menjadi pertimbangan bagi masyarakat untuk mengkonsumsi buah
markisa sebagai sumber antioksidan alami.
E. Tujuan Penelitian
Mengetahui perbandingan daya antioksidan sari buah markisa ungu dengan
sari buah markisa kuning yang dinyatakan sebagai IC50 menggunakan metode
DPPH.
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Markisa Ungu dan Markisa Kuning
1. Keterangan botani
Markisa asam (Passiflora edulis Sims) mempunyai nama umum granadilla
atau passion fruit (Inggris), markisa (Indonesia), termasuk dalam famili
Passifloraceae. Diperkirakan ada 500 spesies passiflora dalam famili
Passifloraceae. Di antara spesies-spesies tersebut P.edulis Sims memiliki cirri-ciri
spesifik markisa. Dalam spesies ini terdapat dua forma, yaitu:
a. Forma edulis (markisa ungu), yang termasuk forma ini adalah markisa asam
dengan kulit buah berwarna ungu (violet), merah (red), atau hitam (black
granadilla) disebut juga siuh atau violet passion fruit (Passiflora edulis f.
edulis Sims).
b. Forma flavicarpa (markisa kuning), yaitu markisa asam dengan kulit buah
berwarna kuning disebut juga rola atau yellow passion fruit (Passiflora edulis
Sims f. flavicarpa Deg). Forma ini dapat beradaptasi di dataran rendah tropis
(Karsinah,2010).
Jenis markisa asam yang dibudidayakan di Indonesia, masing-masing dapat
dibedakan berdasarkan ciri-ciri sebagai berikut:
a. Markisa ungu (Passiflora edulis f. edulis Sims). Bentuk daun menjari dengan
ukuran daun lebih kecil. Ruas batang lebih pendek daripada markisa kuning.
Ukuran bunga lebih kecil. Buah muda berwarna hijau , sedangkan bauh tua
7
atau masak berwarna ungu tua, kulit buah agak tipis dan keras. Buah berbentuk
bulat sampai bulat agak lonjong atau oval, berdiameter 4,6-5,7 cm, bobot 45-60
g, sari buah berwarna kuning oranye, rasanya asam-asam manis dengan aroma
khas markisa yang kuat.
b. Markisa kuning (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.). Bentuk daun
menjari dengan ukuran daun lebih besar dan lebih tebal daripada markisa ungu.
Ukuran bunga besar. Buah muda berwarna hijau, sedangkan buah tua berwarna
kuning muda-kuning berbintik putih, kulit buh agak tebal dan agak keras. Buah
berbentuk bulat sampai bulat agak lonjong atau oval, berdiameter 5-7 cm,
bobot 55-130 g, sari buah berwarna kuning, rasanya asam manis dengan aroma
seperti jambu biji (Karsinah,2010).
(a) (b)
(a) (b)
Gambar 1. Markisa ungu (a) dan markisa kuning (b) (Karsinah, 2007)
2. Ekologi dan penyebaran
Markisa ungu berasal dari Brazil bagian selatan, yaitu Paraguay hingga
Argentina bagian utara, sedangkan asal markisa kuning tidak diketahui, atau
mungkin berasal dari Amazon wilayah Brazil, hybrid antara P.edulis dan P.
ligularis (Morton, 1987; Verheij dan Coronel 1997).

Di Indonesia, markisa asam yang sudah dibudidayakan secara komersial
adalah markisa ungu, yang ditanam di daerah dataran tinggi. Daerah penghasil
markisa ungu masih terpusat di beberapa kabupaten di Provinsi Sumatera Utara
dan Provinsi Sulawesi Selatan. Selain markisa ungu, markisa kuning dapat
dijumpai di daerah dataran rendah di Indonesia. Markisa kuning dapat dijumpai di
daerah Pelabuhan Ratu, Sukabumi, dan Bogor (Jawa Barat); Simalungun,
Langkat, dan Medan, (Sumatera Utara), serta di beberapa daerah lainnya
(Karsinah,2010).
3. Kandungan kimia dan pemanfaatan buah markisa
Berdasarkan penelitian di Brazil, markisa asam mengandung vitamin C dan
karoten, di samping itu juga merupakan sumber niasin yang sangat bagus dan
sumber riboflavin yang baik. Buah markisa asam terdiri dari kurang-lebih 45%
kulit buah dan 55% bagian yang dapat dimakan dari bobot buah segar. Dari 100 g
buah markisa asam mengandung 69-80 g air, 2.3 g protein, 2.0 g lemak (hampir
semuanya berada dalam biji), 16 g karbohidrat, 3.5 g serat, 10 mg Ca, 1.0 mg Fe,
20 SI vitamin A, sedikit sekali tiamin, 0.1 mg riboflavin, 1.5 mg niasin, dan 20-
80 mg vitamin C. nilai energi sebanyak 385 kj/100 g (Verheij dan Coronel 1997;
Karsinah et al., 2007). Asam amino bebas pada pada jus markisa ungu adalah
arginin, asam aspartat, glisin, leusin, lisin, prolin, treonin, tirosin, dan valin.
Markisa ungu mengandung karotenoid 1,160%, flavonoid 1,060%, dan alkaloid
0,012%, sedangkan pada markisa kuning mengandung karotenoid 0,058%,
flavonoid 1,000%, alkaloid 0,700% (Karsinah, 2010).

B. Radikal Bebas
Menurut Soeatmaji (1998), Tilarso (2003) dan Hadi (2009), radikal bebas
merupakan suatu senyawa atau molekul yang mengandung satu atau lebih
elektron tidak berpasangan pada orbital luarnya yang mengakibatkan senyawa
tersebut sangat reaktif mencari pasangan, dengan cara menyerang dan mengikat
elektron molekul yang berada di sekitarnya.
Radikal bebas sangat reaktif dan dengan mudah menjurus ke reaksi yang
tidak terkontrol, menghasilkan ikatan silang (cross-link) pada DNA, protein,
lipida, atau kerusakan oksidatif pada gugus fungsional yang penting pada
biomolekul ini. Radikal bebas juga terlibat dan berperan dalam patologi dari
berbagai penyakit degeneratif, yakni kanker, aterosklerosis, rematik, jantung
koroner, dan katarak (Silalahi, 2006).
Mekanisme reaksi radikal bebas dari autooksidasi lipid dapat digambarkan
sebagai tahap inisiasi, propagasi, dan terminasi. Selama tahap inisiasi dan
propagasi, atom hidrogen tetangga dari rantai karbon dengan suatu ikatan rangkap
diabstraksi dan radikal alkil yang terbentuk distabilkan oleh resonansi (Pokorni et
al., 2001).
Tabel II. Beberapa macam Reactive Oxygen Species (ROS) dan antioksidan
yang menetralkannya (Percival, 1998)
ROS Neutralizing Antioxidants
Radikal Hidroksil Vitamin C, glutation, flavonoid, asam lipoat
Radikal Superoksida Vitamin C, glutation, flavonoid, superoksida dismutase
Peroksida Hidrogen Vitamin C, glutation, flavonoid, beta karoten, vitamin E,
asam lipoat
Peroksida Lipid Vitamin E, beta karoten, ubikuinon, flavonoid,
glutation peroksidase
C. Antioksidan
Antioksidan merupakan senyawa yang mempunyai struktur molekul yang
dapat memberikan elektron dengan cuma-cuma kepada molekul radikal bebas
tanpa terganggu sama sekali dan dapat memutuskan reaksi berantai dari radikal
bebas (Kumalaningsih, 2006). Antioksidan bekerja dengan cara mendonorkan satu
elektronnya kepada senyawa yang bersifat oksidan sehingga aktifitas senyawa
oksidan bisa dihambat (Winarsi, 2007).
Antioksidan yang ada di alam dibagi atas tiga macam yaitu: (1) antioksidan
yang dibuat oleh tubuh kita sendiri yang berupa enzim antara lain
superoksidadismutase, glutathinoneperoxidase, peroxsidase dan katalase, (2)
antioksidan alami yang dapat diperoleh dari tanaman atau hewan, yaitu tokoferol,
vitamin C, betakaroten, flavonoid dan senyawa fenolik, (3) antioksidan sintetik
dibuat dari bahan-bahan kimia yaitu Butylated hidroxy-anisole (BHA), Butylated
hidroxy-toluene (BHT), Propylgallate (PG), yang ditambahkan dalam makanan
untuk mencegah kerusakan lemak (Kumalaningsih, 2006).
Antioksidan di dalam tubuh dibedakan atas tiga kelompok, yaitu: (1)
antioksidan primer yang bekerja dengan cara mencegah terbentuknya radikal
bebas yang baru dan mengubah radikal bebas menjadi molekul yang tidak
merugikan, misalnya glutationperoksidase; (2) antioksidan sekunder yang
berfungsi untuk menangkap radikal bebas yang menghalangi terjadinya reaksi
berantai, misalnya vitamin C, vitamin E, dan beta-karoten; (3) antioksidan tertier
yang bermanfaat untuk memperbaiki kerusakan biomolekuler yang disebabkan
oleh radikal bebas, misalnya DNA repair enzyme (Silalahi, 2006).

Secara garis besar, mekanisme penangkapan radikal bebas dapat dibedakan
menjadi dua macam, yaitu secara enzimatik dan non-enzimatik. Enzim yang dapat
berperan sebagai antioksidan adalah superoksida dismutase, katalase, glutation
peroksidase, dan glutation reduktase (Winarsi, 2007).
Secara non-enzimatik, senyawa antioksidan bekerja melalui empat cara
(Huang, et al., 2005), yaitu sebagai berikut:
1. penangkap radikal bebas, misalnya vitamin C dan vitamin E,
2. pengkelat logam transisi, misalnya EDTA,
3. inhibitor enzim oksidatif, misalnya aspirin dan ibuprofen, dan
4. kofaktor enzim antioksidan, misalnya selenium sebagai kofaktor glutation
peroksidase.
Vitamin C merupakan antioksidan yang larut dalam air. Vitamin C bekerja
sebagai donor elektron, dengan cara memindahkan suatu elektron ke senyawa
logam Cu. Selain itu, juga dapat menyumbangkan elektron ke dalam reaksi
biokimia intraseluler dab ekstraseluler (Levine, et al.,1995). Antioksidan vitamin
C mampu bereaksi dengan radikal bebas, kemudian mengubahnya menjadi radikal
askorbil.
Menurut Shivaprasad, Mohan, Kharya, Shiradkar, dan Lakshman (2005)
ada beberapa metode uji aktivitas antioksidan secara spektrofotometri yang
dilakukan secara in-vitro.
1. Metode conjugated diene
Metode ini mengukur absorbansi konjugasi dari diena sebagai hasil dari
oksidasi asam lemak tak jenuh pada panjang gelombang UV 234 nm. Prinsip
metode ini adalah selama oksidasi asam linoleat, ikatan rangkap terkonversi ke
bentuk ikatan rangkap terkonjugasi, yang dikarakterisasi dengan absorpsi kuat
pada panjang gelombang UV 234 nm. Aktivitasnya diekspresikan dengan istilah
inhibitory concentration (IC50).
2. Metode penangkapan radikal hidroksil
Kapasitas penangkapan radikal hidroksil dari suatu ekstrak berhubungan
langsung dengan aktivitas antioksidannya. Metode ini memerlukan generation
invitro dari radikal hidroksil menggunakan Fe3+/ascorbate/EDTA/H2O2
menggunakan reaksi Fenton. Penangkapan radikal hidroksil sebagai tanda adanya
aktivitas antioksidan. Radikal hidroksil akan bereaksi dengan dimetil sulfoksida
(DMSO) untuk membentuk formaldehid. Formaldehid akan menghasilkan warna
kuning dengan reagen Nash (2 M ammonium asetat dengan 0,05 M asam asetat
dan 0,02 M asetil aseton dalam air destilasi). Intensitas warna kuning diukur
secara spektrofotometri pada panjang gelombang 412 nm. Aktivitas antioksidan
diekspresikan dengan %penangkapan radikal hidroksil.
3. Metode ferric reducing ability of plasma (FRAP)
Aktivitas antioksidan diestimasi dengan mengukur peningkatan absorbansi
dari pembentukan ion-ion fero dari reagen FRAP yang mengandung 2,4,6- tri (2-
piridil)-s triazin (TPTZ) dan FeCl3.6H2O. Absorbansi diukur secara
spektrofotometri pada 595 nm.
4. Metode trapping antioxidant parameter (TRAP)
Metode ini didefinisikan sebagai pengukuran parameter total radikal yang
terjebak antioksidan. Fluororesen dari R-phycoerythrin yang dipadamkan oleh

2,2’-azo-bis (2-amidino-propan) hidroklorida (ABAP) sebagai generator radikal.
Reaksi pemadaman ini diukur sebagai adanya aktivitas antioksidan (Shivaprasad,
et al., 2005).
D. Metode DPPH
Pengujian penangkapan radikal pada metode ini dilakukan dengan cara
mengukur penangkapan radikal sintetik dalam pelarut polar seperti metanol atau
etanol pada suhu kamar. Radikal sintetik yang sering digunakan adalah DPPH
(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) dan ABTS (2,2-azinobis (3-etil benzotiazolin-
asam sulfonat). Dasar dari metode ini adalah kemampuan suatu senyawa untuk
menagkap radikal DPPH. DPPH memberikan warna violet pada panjang
gelombang 515 nm diukur menggunakan spektrofotometer visible (Pokorny et al.,
2001).
Gambar 2. Perubahan warna larutan pada reaksi radikal DPPH dengan

antioksidan (Witt, Lalk, Hager, dan Voigt, 2010)
Penangkapan radikal bebas menyebabkan elektron menjadi berpasangan
yang kemudian menyebabkan penghilangan warna yang sebanding dengan jumlah
elektron yang diambil, yaitu warna larutan berubah dari ungu tua menjadi kuning
terang (Molyneux, 2004). Metode DPPH merupakan salah satu metode yang
akurat mengukur aktivitas antioksidan pada buah dan ekstrak sayur (Antolovic cit
Kwok, 2003).
Menurut Ariyanto cit Nusarini (2007), tingkat kekuatan antioksidan
senyawa uji menggunakan metode DPPH dapat digolongkan menurut IC50 (Tabel
III).
Tabel III. Tingkat kekuatan antioksidan dengan metode DPPH

Intensitas Nilai IC50
Sangat kuat <50 µg/mL
Kuat 50-100 µg/mL
Sedang 101-150 µg/mL
Lemah 150 µg/mL
E. Spektrofotometri UV-Visibel
Spektrofotometer UV-visibel merupakan teknik analisis yang memakai
sumber radiasi elektromagnetik ultra violet dekat (190-380 nm) dan sinar tampak
(380-780 nm) dengan menggunakan instrumen spektrofotometer. Distribusi
elektron di dalam suatu senyawa organik secara umum yang dikenal sebagai
orbital elektron pi (π), sigma (α) dan elektron tidak berpasangan (n). Apabila pada
molekul dikenakan radiasi elektromagnetik maka akan terjadi eksitasi elektron ke
tingkat elektron yang lebih tinggi yang dikenal sebagai orbital elektron anti
bonding (Mulja dan Suharman, 1995).
Cara kerja spektrofotometer UV-Vis adalah sebagai berikut.

1. Sinar dari sumber radiasi diteruskan menuju monokromator,
2. monokromator sebagai penyeleksi panjang gelombang dengan mengubah
cahaya yang berasal dari sumber sinar polikromatis menjadi cahaya
monokromatis,
3. cahaya monokromatis kemudian dilewatkan pada sampel. Digunakan kuvet
untuk meletakkan sampel, kuvet biasa terbuat dari gelas atau kuarsa
transparan,
4. detektor berfungsi menangkap cahaya yang diteruskan dari sampel dan
mengubahnya menjadi arus listrik,
5. meter/pencatat akan menangkap besarnya isyarat listrik yang berasal dari
detektor (Sastrohamidjodjo, 2001).
Sumber Mono Sel Detektor Meter/

radiasi kromator penyerap pencatat
Gambar 3. Diagram spektrofotometer UV-Vis (Sastrohamidjodjo, 2001)
Interaksi antara senyawa yang mempunyai gugus kromofor dengan radiasi
elektromagnetik pada daerah UV-Vis (200-800 nm) akan menghasilkan transisi
elektromagnetik dan spektra absorbansi elektromagnetik, jumlah radiasi
elektromagnetik yang diserap akan sebanding dengan jumlah molekul
penyerapnya, sehingga spektra absorbansi dapat digunakan untuk analisis
kuantitaf. Kuantitas energi yang diserap oleh suatu senyawa berbanding terbalik
dengan panjang gelombang radiasi (Fesenden dan Fesenden, 1995).
Analisis spektrofotometer UV-Vis melibatkan pembacaan absorban radiasi
elektromagnetik oleh molekul atau radiasi elektromagnetik yang diteruskan.

Keduanya dikenal sebagai absorban (A) dan transmitan dengan satuan persen.
Hubungan antara intensitas radiasi elektromagnetik yang diserap oleh sistem (I0)
dengan intensitas radiasi yang ditransmisikan (It) yang dijelaskan melalui hukum
Lambert-Beer:
. .
= = 10 (1)
= log = . . (2)
Dengan T = persen transmitan; Io = intensitas radiasi yang datang; It = intensitas
radiasi yang diteruskan ; ε = daya serap molar (L. mol -1,cm-1); c = konsentrasi
(mol/L); b = panjang sel (cm); A = serapan.
Jika konsentrasi (c) dalam mol/L dan panjang sel dalam cm, persamaannya
menjadi
= . . (3)
Jika konsentrasi (c) dalam g/L, persamaannya menjadi
= . . (4)
Jika a adalah daya serap, hubungan dengan daya serap molar ditunjukan
dengan persamaan
= . (5)
Dimana M adalah bobot molekul (Silverstein,1991).
Kromofor merupakan grup kovalen yang tidak jenuh (unsaturated) yang
bertanggung jawab atas serapan elektron, contoh: C=C, C=O, NO2. Auksokrom
adalah saturated group yang mempunyai elektron bebas, ketika tertarik oleh
kromofor, panjang gelombang dan intensitas serapan dapat berubah, contoh: -OH,
-Cl, NH2. Pergeseran batokromik adalah pergeseran serapan ke panjang

gelombang yang lebih panjang karena penggantian (substitusi) atau efek pelarut
(pergeseran merah). Pergeseran hipokromik adalah pergeseran serapan ke panjang
gelombang yang lebih pendek karena penggantian (substitusi) atau efek pelarut
(pergeseran biru) (Silverstein, 1991).
Gambar 4. Gugus kromofor dan auksokrom DPPH (Prakash et al., 2001)
F. Validasi Metode Analisis
Validasi metode analisis merupakan suatu prosedur yang digunakan dengan
tujuan untuk memberikan jaminan dan membuktikan bahwa metode analisis yang
digunakan memenuhi syarat untuk penggunaannya (Gandjar dan Rohman, 2007).
Metode analisis harus selalu divalidasi ketika (1) metode baru
dikembangkan untuk mengatasi masalah analisis tertentu. (2) metode yang sudah
baku direvisi untuk menyesuaikan perkembangan atau karena terjadi suatu
masalah yang mengarahkan agar metode tersebut harus direvisi. (3) penjaminan
mutu yang mengindikasikan bahwa metode baku telah berubah. (4) metode baku
yang dilakukan di laboratorium yang berbeda, di kerjakan oleh analisis yang
berbeda, atau dikerjakan dengan alat yang berbeda. (5) untuk mendemonstrasikan
kesetaraan antar 2 metode seperti metode baru dan metode baku (Gandjar dan
Rohman, 2007). Parameter-parameter yang harus dipertimbangkan dalam validasi
metode analisis antaralain spesifisitas, linearitas, akurasi, presisi, LOD dan LOQ.
Perbedaan prosedur pengujian suatu analit membutuhkan parameter validasi
yang berbeda. Kategori pengujian yang paling umum adalah yang data validasinya
dibutuhkan menurut USP-NF (United States Pharmacopendial Convention,
2007).
Akurasi adalah ketepatan prosedur analisis yang menyatakan kedekatan
antara suatu nilai yang sebenarnya atau nilai referensi dengan nilai yang
ditemukan. Akurasi dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (recovery)
analit yang ditambahkan (Mulja dan Hanwar, 2003).
Tabel IV. Rentang akurasi yang masih dapat diterima

Analit pada matrik sampel (%) Rata-rata yang diperoleh (%)
100 98-102
>10 98-102
>1 97-103
>0,1 95-105
0,01 90-107
0,001 90-107
0,000.1 (1 ppm) 80-110
0,000.01 (100 ppb) 80-110
0,000.001 (10 ppb) 60-115
0,000.000.1 (1 ppb) 40-120
(Harmita, 2004).
Presisi merupakan ukuran yang menunjukkan derajad kesesuaian antara
hasil uji individual yang diperoleh dari pengambilan sampel berulang yang telah
dihomogenkan dengan suatu metode analisis (Snyder et al., 1997). Presisi dari
suatu prosedur analisis umumnya dinyatakan dengan koefisien variasi atau standar
deviasi.
Tabel V. Rentang koefisien variasi (KV) yang masih dapat diterima
Analit pada matrik sampel (%) KV (%)

>1 2,5
0,001 5
0,000.1 (1 ppm) 16
0,000.000.1 (1 ppb) 32
(Harmita, 2004).
Linearitas dari suatu prosedur analisis merupakan kemampuannya (pada
rentang tertentu) untuk mendapatkan hasil uji yang secara langsung proporsional
dengan konsentrasi (jumlah) analit di dalam sampel. Jika nilai r ≥0,99 (APVMA,
2004) maka dapat memiliki linearitas yang baik.
Spesifisitas dari suatu metode analisis merupakan kemampuan metode
yang hanya mengukur zat tertentu saja secara cermat dan seksama dengan adanya
komponen lain yang mungkin ada dalam matriks sampel (Harmita, 2004).
G. Landasan Teori
Radikal bebas merupakan senyawa yang memiliki elektron yang tidak
berpasangan sehingga brsifat sangat reaktif menari pasangan dengan cara
menyerang dan mengikat elektron molekul yang ada di sekitarnya. Sebagai
dampak kerja radikal bebas tersebut, akan terbentuk radikal bebas yang baru. Hal
ini menyebabkan berbagai macam kerusakan sel dan menyebabkan berbagai jenis
penyakit. Oleh karena itu, dibutuhkan antioksidan yang merupakan senyawa
penghambat atau penunda reaksi radikal bebas tersebut.
Sumber antioksidan dapat berasal dari hasil sintesis maupun dari alam.
Antioksidan sintesis memang mempunyai efektifitas yang tinggi namun dapat
menyebabkan terjadinya kanker. Oleh karena itu, perlu adanya penelitian

eksplorasi sumber antioksidan alami yang berasal dari tumbuhan yang bersifat
lebih aman.
Markisa diketahui memiliki kandungan vitamin C yang cukup tinggi.
Selain itu, beberapa sumber menyebutkan bahwa buah markisa memiliki beberapa
kandungan senyawa lain yang berpotensi sebagai penangkap radikal bebas.
Secara spesifik markisa asam, yaitu forma markisa ungu dan markisa kuning
mengandung karotenoid, flavonoid, dan alkaloid. Senyawa-senyawa ini
merupakan antioksidan alami yang berpotensi untuk mencegah efek buruk yang
ditimbulkan oleh radikal bebas. Kedua forma markisa ini mempunyai komposisi
kandungan kimia yang berbeda, yaitu karotenoid 1,160%, flavonoid 1,060%, dan
alkaloid 0,012% pada markisa ungu, sedangkan karotenoid 0,058%, flavonoid
1,000%, alkaloid 0,700% untuk markisa kuning. Berdasarkan komposisi
kandungan kimia dan juga tempat tumbuh yang berbeda, sehingga dapat
dimungkinkan bahwa daya antioksidan yang dimiliki oleh kedua forma markisa
asam ini juga berbeda. Oleh karena itu, dilakukan penelitian untuk mengetahui
perbandingan daya antioksidannya.
Metode yang digunakan untuk mengukur aktivitas antioksidan sari buah
markisa ungu dan sari buah markisa kuning ini adalah metode DPPH (2,2-
diphenyl-1-picrylhydrazyl) dengan menggunakan vitamin C sebagai kontrol
positif. Prinsip metode ini didasarkan pada kemampuan suatu antioksidan untuk
mengurangi intensitas warna ungu radikal DPPH. Dalam metode DPPH,
penangkapan radikal DPPH oleh suatu senyawa antioksidan diikuti dengan
penurunan absorbansi yang terjadi pada panjang gelombang 515 nm sebagai

akibat direduksinya radikal tersebut oleh antioksidan (Pokorny, Yanishlieva,
Gordon, 2001).
H. Hipotesis
Berdasarkan landasan teori di atas, dapat dihipotesiskan bahwa sari buah
markisa ungu memiliki aktivitas antioksidan yang lebih besar dibandingkan sari
buah markisa kuning, diukur dengan menggunakan metode DPPH yang
dinyatakan dengan IC50.

BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan jenis penelitian eksperimental murni.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel bebas
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah konsentrasi sari buah markisa
ungu dan sari buah markisa kuning.
2. Variabel tergantung
Variabel tergantung adalah kemampuan sari markisa ungu dan kuning
untuk menetralkan radikal DPPH yang dinyatakan sebagai % IC.
3. Variabel pengacau
a. Variabel pengacau terkendali. Tempat tumbuh tanaman jenis markisa ungu
dan kuning, umur markisa, bahan kimia, dan alat yang digunakan.
b. Variabel pengacau tak terkendali. Suhu, cahaya matahari, dan cuaca.
C. Definisi Operasional
1. Tanaman markisa ungu merupakan forma dari varietas markisa asam. Tanaman
markisa ungu (Passiflora edulis f. edulis Sims) diperoleh dari perkebunan
markisa, Tanah Toraja, Sulawesi Selatan.
23
2. Tanaman markisa kuning merupakan forma dari varietas tanaman markisa
asam. markisa kuning ( Passiflora edulis f. flavicarpa Deg) diperoleh dari
kebun markisa organik Bapak Supardi di Desa Bener, Tegalrejo, Yogyakarta.
3. Isi buah berupa biji yang terbungkus salut berisi cairan warna kuning hingga
orange.
4. Sari buah markisa merupakan cairan berwarna kuning hingga orange yang
mempunyai rasa manis asam dengan aroma khas markisa, diperoleh dengan
cara memblender dan menambahkan aquades sejumlah volume penimbangan
kemudian memisahkan bagian serat serta biji melalui proses penyaringan.
5. Persen inhibition concentration (%IC) adalah persen yang menyatakan
kemampuan sari buah markisa ungu dan kuning untuk menetralkan radikal
DPPH.
6. IC50, yaitu konsentrasi sari markisa ungu dan kuning yang dibutuhkan untuk
menangkap 50% radikal bebas DPPH.
7. Larutan kontrol merupakan larutan yang terdiri dari 0,95 ml DPPH dan 2,15 ml
metanol.
8. Larutan uji merupakan larutan kontrol yang telah ditambah sari buah markisa
ungu maupun sari buah markisa kuning dari buah yang dipanen pada umur 85
dan 95 hari setelah bunga mekar.
D. Bahan Penelitian
Bahan uji berupa buah markisa ungu (Passiflora edulis f. edulis Sims) yang
diperoleh dari Perkebunan markisa, Tanah Toraja, Sulawesi Selatan dan buah
markisa kuning diperoleh dari kebun markisa organik Bapak Supardi di Desa
Bener, Tegalrejo, Yogyakarta, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) p.a. Sigma
Chem. Co., USA, metanol p.a (Merck), vitamin C p.a (Merck), aluminium foil,
kain tetron dan aquadest.
E. Alat-Alat Penelitian
Spektrofotometer UV-Vis Optima SP-3000 , timbangan SBC 22 (Scaltec),
mikropipet 50 µl-200 µl, 200-1000 µl (Socorex), makropipet 1 ml- 10 ml, tabung
reaksi (Pyrex-Germany), vortex (Janke & Kunkel), flakon bertutup, blender;
penyaring vakum, dan alat-alat gelas yang lazim digunakan.
F. Tata Cara Penelitian
1. Determinasi tanaman
Determinasi sampel buah markisa ungu dan buah markisa kuning yang
digunakan berdasarkan pengamatan ciri morfologinya dan dilakukan berdasarkan
acuan Karsinah, Hutabarat, dan Manshur (2010).
2. Pengambilan sampel
Bahan uji berupa buah markisa ungu (Passiflora edulis f. edulis Sims)
diperoleh dari Perkebunan Markisa, Tanah Toraja, Sulawesi Selatan dengan
menggunakan jasa pengiriman kilat mengikuti prosedur pengiriman buah yang
baik untuk memastikan buah tetap segar hingga tempat tujuan, sedangkan untuk
buah markisa kuning diperoleh dari Kebun Markisa Organik Bapak Supardi di
Desa Bener, Tegalrejo, Yogyakarta dengan umur buah 85 dan 95 hari setelah
bunga mekar.
3. Penyiapan bahan uji
Persiapan uji penangkapan radikal bebas DPPH
a. Pembuatan dan pengenceran sari buah markisa ungu dan sari buah markisa
kuning. Sebanyak masing-masing 50 gram isi buah markisa ungu dan buah
markisa kuning dihancurkan dengan blender dengan penambahan aquades untuk
membantu proses penyarian. Sari buah yang diperoleh kemudian disaring
menggunakan penyaring Buchner dengan dilapisi kain tetron. Dilakukan
pengenceran sari dengan mengambil sebanyak 0,5 ml sari dan dimasukkan ke
dalam labu ukur 10,0 mL kemudian ditambahkan metanol hingga tanda.
Dilakukan replikasi sebanyak 5x untuk masing-masing sampel yang dimulai dari
tahap penimbangan.
b. Pembuatan sari uji buah markisa ungu dan markisa kuning. Sari yang telah
diencerkan kemudian digojog selama 1 menit dan didiamkan selama 30 menit
hingga terbentuk endapan. Dipipet cairan metanol (bagian atas) sebanyak 600 µL,
700 µL, 800 µL, 900 µL, dan 1000 µL, dan ditambahkan dengan metanol p.a
hingga volume 5 mL, sehingga diperoleh konsentrasi untuk setiap replikasi yang
dituliskan pada lampiran 5.
c. Pembuatan larutan kontrol. Dipipet sebanyak 3,05 mL metanol dan
dimasukan ke dalam vial. Ditambahkan 0,95 mL larutan DPPH 57,62 µM dan di
gojog selama 1 menit. Setelah itu larutan dibiarkan selama 30 menit di tempat
gelap, serapan diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang
515 nm.
d. Pembuatan larutan DPPH dan pembanding.
1). Pembuatan larutan DPPH
DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) ditimbang sebanyak 22,4 mg
dan dilarutkan dengan metanol di dalam labu ukur sampai 250,0 mL.
diperoleh larutan DPPH dengan konsentrasi 0,228 mM. Larutan tersebut
ditutup dengan menggunakan alumunium foil dan selalu dibuat baru.
2). Pembuatan pembanding vitamin C 1 mM
Sebanyak 17,61 mg vit C ditimbang seksama dan dilarutkan dengan
aquades dalam labu ukur 10,0 mL. Dari larutan tersebut dibuat larutan
intermediet dengan mengambil 1 ml kemudian ditambahkan aquades
hingga 10 mL. Diambil sebanyak 200; 225; 250; 275; dan 300 µL larutan
intermediet vitamin C dan dimasukan ke dalam labu ukur 5,0 mL
kemudian ditambahkan dengan aquades hingga tanda, sehingga diperoleh
konsentrasi larutan 7,044; 7,925; 8,805; 9,86; dan 10,566 µg/mL. Larutan
harus selalu dibuat baru .
e. Pengujian dengan metode DPPH.
1). Penentuan Operating Time
Memipet sebanyak 0,95 mL larutan DPPH dan ditambah metanol
hingga volume akhir 4,0 mL. larutan divortek selama 30 detik. Serapan
kemudian diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang 515 nm selama 1 jam. Dilakukan juga penentuan OT selama 1
jam untuk sari buah markisa ungu dan kuning dengan memipet sebanyak
0,95 mL larutan DPPH dan 600; 800; 1000 µL sari buah markisa ungu dan
kuning kemudian ditambahkan metanol hingga volume akhir 4,0 mL.
2). Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Pipet sebanyak 0,95; 1,9; dan 3,8 mL larutan DPPH dan ditambah
metanol hingga volume akhir 4,0 mL. larutan vortek selama 30 detik
kemudian scanning panjang gelombang serapan maksimum dengan
spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 400-600 nm.
3). Penentuan aktivitas antioksidan
a) Pengukuran absorbansi larutan DPPH (kontrol), pipet sebanyak 0,95
mL larutan DPPH dan ditambahkan metanol hingga volume akhir
4,0 mL. kemudian larutan tersebut didiamkan selama OT dan dibaca
absorbansinya pada panjang gelombang serapan maksimum.
Pengerjaan dilakukan sebanyak 5 kali.
b) Pengukuran absorbansi larutan pembanding dan uji, sebanyak 0,95
mL larutan DPPH dimasukkan ke dalam flakon kemudian
ditambahkan masing-masing 900 µL larutan pembanding dan larutan
uji pada berbagai seri konsentrasi yang telah dibuat. Selanjutnya
larutan tersebut ditambahkan dengan metanol p.a hingga volume
akhir 4,0 mL. larutan kemudian didiamkan selama OT dan dibaca
absorbansinya dengan spektrofotometer visibel pada panjang
gelombang serapan maksimum. Pengujian dilakukan dengan lima
kali replikasi.
4. Analisis data
a. Validasi metode uji aktivitas antioksidan. Hasil pengukuran absorbansi
divalidasi akurasi (%recovery), presisi (%CV), spesifisitas (spektra kontrol), dan
linearitas (nilai r)
%Recovery = 100% …..........................(6)
( )
%CV = x 100% ………..(7)
b. Aktivitas antioksidan. Data absorbansi sampel dan senyawa kontrol
digunakan untuk menghitung %IC dan IC50, dengan menggunakan persamaan
garis regresi linear antara masing-masing konsentrasi sari buah markisa ungu atau
sari buah markisa kuning (sumbu x) dengan % inhibisi (sumbu Y). Persamaan
regresi linier y= bx + a. Kemudian dilakukan uji T untuk menentukan signifikansi
perbedaan nilai IC50 sari buah markisa ungu dan sari buah markisa kuning yang
diperoleh.
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil Determinasi Tanaman
Hal pertama yang dilakukan dalam penelitian ini adalah determinasi
tanaman markisa ungu dan tanaman markisa kuning. Tujuan dari determinasi
tanaman tersebut adalah untuk mengetahui kebenaran identitas tanaman yang
digunakan untuk proses pengujian aktivitas antioksidan dalam penelitian ini.
Mengetahui secara pasti kebenaran identitas tanaman yang digunakan dapat
menghindarkan adanya kemungkinan kesalahan dalam pengambilan sampel pada
analisis fitokimia (Harborne, 1987). Determinasi tanaman markisa ungu dan
markisa kuning ini menggunakan acuan Karsinah, Hutabarat, dan Manshur
(2010).
Dari hasil determinasi tersebut (lampiran 1) dapat dinyatakan bahwa
sampel buah markisa ungu dan sampel buah markis kuning yang digunakan dalam
penelitian ini benar-benar diambil dari varietas markisa asam forma markisa ungu
(Passiflora edulis f. edulis Sims) dan forma markisa kuning (Passiflora edulis f.
flavicarpa Deg).
B. Hasil Pengumpulan Bahan
Buah markisa ungu dan markisa kuning diperoleh dari 2 tempat berbeda
sesuai habitatnya masing-masing. Buah markisa ungu diperoleh dari Perkebunan
Organik Markisa, Tanah Toraja, Sulawesi Selatan yang diperoleh dengan
30
perantara jasa pengiriman kilat. Buah markisa kuning diperoleh dari Kebun
Oarkisa organik, Desa Bener, Tegalrejo, Yogyakarta.
Karena adanya perbedaan habitat tempat tumbuh antara markisa ungu dan
markisa kuning, sampel tidak dapat diperoleh dari satu tempat yang sama.
Markisa ungu tumbuh subur di daerah subtropis dan di dataran tinggi tropis pada
ketinggian 700-2.000 m dpl., curah hujan 2.000-3.000mm/tahun, dan suhu 18-
25ºC (Karsinah, 2007). Kriteria ini sesuai dengan keadaan georafis daerah Tanah
Toraja sehingga markisa ungu dapat tumbuh subur di daerah ini. Perkebunan
markisa Tanah Toraja ini digunakan sebagai pusat budidaya markisa ungu dimana
buah hasil budidaya ini digunakan sebagai bahan pembuatan sirup markisa khas
dari Tanah Toraja, Sulawesi Selatan. Untuk memperoleh buah markisa ungu
sebagai sampel, digunakan jasa pengiriman khusus dari Tanah Toraja ke
Yogyakarta dengan memperhatikan cara pengemasan yang dapat melindungi buah
dengan baik sehingga dapat menjamin kualitas buah hingga di tempat tujuan.
Bahan yang digunakan dalam pengemasan harus bersih dan memiliki mutu yang
cukup untuk mencegah kerusakan eksternal maupun internal buah. Markisa
dikemas dalam kontainer sesuai dengan rekomendasi internasional untuk
pengemasan dan pengangkutan buah dan sayur segar sesuai yang dicantumkan
dalam ketentuan pengemasan SNI (Standar Nasional Indonesia) tahun 2009 yang
dibuat oleh BSN (Badan Standarisasi Nasional) khusus untuk buah markisa.
Markisa kuning dapat dibudidayakan di daerah dataran rendah hingga pada
ketinggian 600 m dpl., curah hujan antara 2.000-3.000 mm/ tahun dan suhu 22-
32ºC seperti di Yogyakarta sehingga markisa kuning dapat diperoleh dengan

mudah di sekitar daerah Yogyakarta khususnya di kebun markisa organik Bapak
Supardi. Buah markisa kuning dari kebun markisa organik ini juga digunakan
sebagai bahan baku pembuatan sirup markisa “Malioboro Manis” yang telah
mempunyai ijin dari Dinas Kesehatan RI sehingga dapat dipastikan bahwa buah
yang digunakan mempunyai kualitas yang baik. Berdasarkan hasil observasi untuk
buah markisa kuning di kebun markisa milik Bapak Supardi, ditemukan kendala
mengenai adanya perkawinan silang pada tanaman markisa kuning yang terjadi
secara alami. Hal ini menyebabkan dalam tanaman markisa kuning ditemukan
buah dengan variasi warna isi buah yang berbeda, yaitu dari warna orange hingga
warna kuning, namun tetap merupakan forma markisa kuning. Adanya perbedaan
warna ini dapat memberikan nilai variasi yang cukup tinggi pada hasil pengukuran
sampel sehingga dapat menyebabkan nilai CV yang cukup tinggi. Untuk
mengatasi permasalahan ini, peneliti menetukan batasan tertentu dalam pemilihan
sampel markisa kuning, yaitu secara kualitatif yaitu dengan melihat persamaan
warna isi buah pada makisa kuning, warna isi buah markisa kuning yang dipilih
adalah warna kuning dan tidak mengambil warna isi buah yang orange untuk
meminimalkan variasi pada hasil pengukuran.
Buah markisa dapat dipanen pada umur 85 dan 95 hari setelah bunga
mekar. Adapun kriteria buah markisa ungu yang siap dipanen adalah warna ungu
hingga ungu kehitaman dengan menyisakan tangkainya 3 cm dengan diameter
buah 4,6-5,7 cm dan bobot 45-60 g. Untuk markisa kuning yang siap dipanen
mempunyai kriteria berwarna kuning dengan diameter buah 5-7 cm dan bobot 55-
130 g. Kriteria ini dapat menyatakan bahwa buah yang digunakan memiliki
karakterisik fisik dan kimia yang baik (Karsinah, 2007). Buah yang telah
diperoleh kemudian kemudian langsung dibawa ke laboratorium untuk proses
preparasi.
C. Hasil Preparasi Sampel
Proses preparasi sampel dilakukan dengan tujuan untuk mendapatkan sari
buah markisa ungu dan sari buah markisa kuning yang diduga mengandung
senyawa antioksidan. Pemilihan sari buah sebagai objek penelitian ini disesuaikan
dengan aplikasi pemanfaatan buah markisa oleh masyarakat sebagai bagian yang
dikonsumsi. Pada beberapa penelitian sebelumnya, peneliti menggunakan metode
spray dryer dan freeze dryer untuk membuat serbuk dari sari buah markisa. Hal
ini bertujuan untuk meningkatkan stabilitas penyimpanan sampel agar tidak
mudah rusak. Pada metode spray dryer, pembuatan sari buah menjadi serbuk
menggunakan aplikasi panas pada rentang suhu yang cukup tinggi, padahal dalam
penelitian ini akan meneliti aktivitas antioksidan dari senyawa yang rentan
terhadap pengaruh suhu sehingga ditakutkan dapat mempengaruhi stabilitas fisik
dan kimiawi kandungan senyawa dalam sari buah. Pada penggunaan metode spray
dryer maupun freeze dryer juga diperlukan penambahan bahan-bahan lain seperti
bahan pengisi, bahan penyalut dan masih banyak lagi yang memungkinkan adanya
interaksi dengan senyawa antioksidan dalam sari yang akan diteliti. Oleh karena
itu, peneliti lebih memilih sampel dalam berupa sari buah untuk mengetahui
aktivitas antioksidan pada buah markisa dan untuk memperkecil kemungkinan
kerusakan sampel, sari buah selalu dibuat baru.

Sampel yang digunakan dalam preparasi merupakan buah segar untuk
menjaga kestabilan kandungan kimia dalam buah. Buah markisa digolongkan
kedalam buah klimaterik karena pola respirasi markisa meningkat seiring dengan
perubahan akibat pematangan seperti pelunakan daging buah atau perubahan
pigmen warna, oleh karena itu penting untuk langsung melakukan preparasi
setelah buah diperoleh untuk meminimalkan pola respirasi tersebut yang dapat
mempengaruhi kandungan kimia sari buah.
Buah yang diperoleh kemudian dicuci dengan air mengalir untuk
membersihkan dari pengotor-pengotor yang mungkin menempel setelah proses
pemanenan. Isi buah markisa ungu dan markisa kuning kemudian ditimbang
seberat 50 g dan dilakukan 5x replikasi untuk markisa ungu dan markisa kuning.
Untuk memperoleh sari dari buah segar, kemudian dilakukan proses blenderisasi
pada isi buah yang berupa biji dan cairan berwarna kuning yang merupakan
bagian yang dikonsumsi oleh masyarakat. Proses blender dipilih karena
disesuaikan dengan proses yang biasanya dilakukan oleh masyarakat untuk
memperoleh sari buah markisa selain itu proses ini lebih mudah dan sederhana
serta memperoleh sari yang cukup banyak. Proses penghancuran isi buah
menggunakan blender dapat menghancurkan dinding sel khususnya pada biji
markisa sehingga dari proses ini tidak diperoleh sari murni melainkan sari dengan
ampas biji markisa, untuk itu masih diperlukan poses penyaringan agar yang
diperoleh adalah sari buah tanpa ampas. Pada proses blender dilakukan
penambahan aquades sesuai dengan volume buah yang ditimbang untuk masing-
masing replikasi agar mempermudah blenderisasi dan proses penyaringan karena

sari yang diperoleh tidak terlalu kental. Alat-alat yang digunakan dipastikan
kering sebelum digunakan kembali oleh karena itu digunakan hair dryer untuk
mempercepat proses pengeringan.
Proses penyaringan dilakukan 2 kali menggunakan alat yang berbeda,
yaitu pertama menggunakan alat penyaring tepung yang terbuat dari bahan
tertentu dengan diameter lubang yang cukup besar. Penyaringan pertama ini
bertujuan untuk menyaring terlebih dahulu biji-biji markisa yang yang masih
berdiameter besar sehingga diharapkan dapat mempermudah proses penyaringan
kedua dan memperoleh sari yang bebas dari ampas. Proses penyaringan kedua
menggunakan corong Buchner yang disambungkan dengan pompa vacuum dan
dilapisi dengan kain tetron untuk mempercepat proses penyaringan dan
memperoleh hasil yang lebih banyak dengan sari bebas ampas. Sari yang
diperoleh mempunyai warna yang cukup berbeda yaitu pada sari markisa ungu
mempunyai warna sari lebih orange dibandingkan dengan sari markisa kuning
(Gambar. 5). Pemilihan penggunaan kain tetron karena jenis kain ini hanya sedikit
menyerap sari pada saat penyaringan sehingga volume sari yang diperoleh tidak
berkurang. Sebelumnya peneliti telah mencoba menggunkan kertas saring dalam
proses penyaringan tetapi proses penyaringan tidak berjalan dengan baik karena
sari yng diperoleh cukup kental sehingga proses penyarian menggunakan kertas
saring memakan waktu yang sangat lama. Terdapat perbedaan perolehan sari pada
markisa ungu dan markia kuning (Tabel VI). Sari pada markisa ungu diperoleh
lebih sedikit dibandingan sari pada markisa kuning. Hal ini dapat disebabkan
karena kandungan TSS (Total Soluble Solid) pada markis kuning lebih banyak
dibandingkan pada markisa ungu (Karsinah et al., 2007).
MK MU
Gambar 5. Perbedaan warna sari pada markisa ungu (MU) dan markisa kuning
(MK)
Tabel VI. Volume sari buah markisa ungu dan sari buah markisa kuning
Replikasi Replikasi Replikasi Replikasi
Replikasi I
II III IV V
Markisa
64,6 65,0 63,4 66,0 62,1
Ungu (mL)
Markisa
72,3 74,5 70,6 73,0 73,4
Kuning (mL)
Sari yang diperoleh diasumsikan merupakan berat markisa, yaitu 25 g
karena pada proses blenderisasi dilakukan penambahan aquades sesuai volume
penimbangan yang diperoleh. Dari sari yang diperoleh kemudian dilakukan
pengenceran dengan tujuan agar ketika direaksikan dengan DPPH, sari memiliki
rentang absorbansi sesuai persyaratan menurut hukum Lambert-Beer 0,2-0,8.
Pada proses pembuatan larutan induk, yaitu dengan memasukan masing-masing
0,5 mL sari markisa ungu dan sari markisa kuning ke dalam labu ukur 10,0 mL
yang ditambahkan metanol hingga tanda, terbentuk 2 lapisan, yaitu lapisan atas
yang berupa cairan bening berwarna kekuningan dengan lapisan bawah yang
berupa endapan (Gambar. 6). Endapan yang terbentuk merupakan protein dan
patih yang terkandung dalam buah markisa. Tanpa penambahan metanol
sekalipun senyawa-senyawa ini tetap akan mengendap namun secara perlahan dan
dalam waktu yang cukup lama. Hal ini dapat dibuktikan dengan melakukan
penyimpanan pada sari buah dalam jangka waktu tertentu yang juga telah
dilakukan oleh peneliti. Akan terlihat adanya endapan yang terbentuk setelah sari
disimpan selama 1 hari tanpa penambahan metanol. Untuk itu metanol yang
digunakan dalam penelitian ini, selain sebagai pelarut untuk mengencerkan sari
juga berperan dalam mempercepat pengendapan protein dan pektin sehingga
diperoleh cairan sari yang bening dan tidak mengganggu proses pengukuran
absorbansi menggunakan spektrofotometer visibel.
MK MU
Gambar 6. Pengendapan protein, pati, dan pektin yang terkandung dalam isi buah
Ket: markisa Ungu (MU) dan markisa kuning (MK)
D. Hasil Optimasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan
DPPH sangat luas digunakan untuk menguji kemampuan suatu senyawa
yang bekerja sebagai penangkap radikal bebas atau donor hidrogen, dan untuk
mengevaluasi aktivitas antioksidan. Dalam penelitian ini dipilih menggunakan

metode DPPH karena merupakan metode yang mudah, cepat, dan sensitif untuk
pengujian aktivitas antioksidan senyawa tertentu atau ekstrak tanaman (Koleva, et
al., 2002; Prakash, et al., 2010). Pada metode ini absorbansi yang diukur adalah
absorbansi larutan DPPH yang tidak bereaksi dengan senyawa antioksidan pada
panjang gelombang 515 nm (Andayani, Lisawati, dan Maimunah, 2003; Hanani,
Mun’im, dan Sekarini, 2005). Peneliti perlu melakukan scanning λmaks pada
pelarut, sari buah markisa ungu dan sari buah markisa kuning, vitamin C pada λ
400-600 nm untuk memastikan bahwa tidak ada gangguan pengukuran pada
daerah λmaks DPPH yang dapat menyebabkan hasil pengukuran absorbansi DPPH
menjadi tidak akurat. Dari hasil scanning pada λ 400-600 nm (Lampiran 6) tidak
menunjukkan adanya gangguan yang ditandai dengan tidak adanya peak yang
terbentuk oleh karena itu metode DPPH dapat dilanjutkan untuk menguji aktivitas
antioksidan sari buah markisa ungu dan sari buah markisa kuning.
1. Penentuan OT metode uji aktivitas antioksidan
Penentuan operating time pada metode DPPH diperoleh ketika senyawa
uji telah mereduksi radikal DPPH dengan sempurna yang ditandai dengan
diperolehnya nilai absorbansi yang stabil pada rentang waktu tertentu. Dengan
memperoleh nilai absorbansi yang stabil, pengukuran diharapkan memiliki tingkat
reprodusibilitas yang tinggi sehingga dapat meminimalkan kesalahan pada tahap
analisis. Dalam penelitian ini penentuan operating time dilakukan pada larutan
sampel yaitu sari markisa ungu dan kuning juga pada vitamin C yang dihitung
mulai dari larutan sampel dan vitamin C direaksikan dengan DPPH. Penentuan
OT dilakukan pada tiga konsentrasi untuk masing-masing sampel dan vitamin C

yaitu konsentrasi rendah, tengah, dan tinggi. Hal ini bertujuan untuk mewakili 5
konsentrasi yang akan digunakan ketika dilakukan pengukuran aktivitas
antioksidan untuk sampel maupun larutan pembanding. Pengukuran operating
time dilakukan pada panjang gelombang 515 nm selama 60 menit.
Penentuan OT Vitamin C
0.45
0.4
0.35
0.3
Absorbansi
0.25
0.2
7.044 µg/ml
0.15
0.1 8.805 µg/ml
0.05 10,566 µg/ml
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
Waktu (menit)
Gambar 7. Hasil grafik penentuan OT vitamin C
Penentuan OT Markisa Ungu

0.53
0.52
Absorbansi
0.51
0.5
0.49 2.328 mg/ml
3.104 mg/ml
0.48
3.880 mg/ml
0.47
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
Waktu (menit)
Gambar 8. Hasil grafik penetuan OT markisa ungu

Penentuan OT Markisa Kuning

0.56
0.54
Absorbansi
0.52
0.5
2.124 mg/ml
0.48
2.832 mg/ml
0.46
3.540 mg/ml
0.44
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
Waktu (menit)
Gambar 9. Hasil grafik penentuan OT markisa kuning
Dari hasil penentuan OT pada larutan pembanding maupun larutan uji
terlihat pada Gambar 6, 7, dan 8, yaitu untuk vitamin C pada menit ke-10 hingga
menit ke-60, markisa ungu pada menit ke-24 hingga menit ke-50 untuk
konsentrasi rendah dan menit ke-18 hingga menit ke-50 untuk konsentrasi tengah
dan tinggi. Untuk OT pada markisa ungu dipilih dari menit ke-24 hingga menit
ke-50 untuk menjamin agar semua DPPH telah bereaksi dengan sempurna dengan
senyawa antioksidan yang terdapat dalam markisa ungu. OT untuk markisa
kuning diperoleh dari menit ke-16 hingga menit ke-38 untuk konsentrasi rendah,
dari menit ke-14 hingga menit ke-36 untuk konsentrasi tengah, dan menit ke-12
hingga menit ke-32 untuk konsentrasi rendah, sehingga untuk markisa kuning
dipilih OT dari menit ke-16 hingga menit ke-32 untuk waktu pereaksian DPPH
dengan sampel. Untuk penentuan OT, terdapat perbedaan perlakuan antara
vitamin C dan larutan uji sari markisa. Pengukuran OT vitamin C dilakukan
dengan mengukur larutan setiap 5 menit selama 1 jam sedangkan untuk larutan
sari diukur secara berkesinambungan selama 1 jam dengan pengaturan alat agar
pembacaan absorbansi dilakukan setiap 5 menit. Perbedaan perlakuan ini
didasarkan pada hasil orientasi yang menunjukkan ketidak stabilan vitamin C
(terjadi kenaikan absorbansi setelah 5 menit pengukuran) ketika dilakukan
pengukuran dengan cara berkesinambungan selama 1 jam atau dengan
memaparkan sinar visibel secara terus menerus selama satu jam. Berbeda dengan
hasil orientasi pada larutan uji yaitu sari buah, larutan uji tetap menunjukkan
kestabilan hingga menit tertentu dan kemudian pada menit selanjutnya baru terjadi
kenaikan absorbansi. Untuk itu penetapan OT untuk sari buah diusahakan
dilakukan pada rentang dimana diperoleh absorbansi yang stabil.
2. Penentuan λ maks metode uji aktivitas antioksidan
Tujuan dalam menentukan panjang gelombang serapan maksimum adalah
untuk mencari panjang gelombang dimana dengan adanya sedikit perubahan
konsentrasi akan memberikan perubahan absorbansi yang besar sehingga dapat
diperoleh sensitivitas analisis yang maksimum.
Pada penelitian ini dilakukan penentuan panjang gelombang serapan
maksimum dan tidak langsung menggunakan panjang gelombang teoritis, karena
kondisi percobaan dan alat yang digunakan tidak selalu sama sehingga untuk
setiap penilitian mempunyai kemungkinan untuk mempunyai panajang
gelombang yang berbeda namun tidak terlalu jauh dari panjang serapan
gelombang maksimum teoritis. Penentuan λ maksimum larutan DPPH diukur
pada λ visibel 400-600 nm pada tiga seri konsentrasi, yaitu 0,054 mM, 0,11 mM,
dan 0,22 mM. DPPH dapat terukur pada daerah visibel karena DPPH memiliki
gugus kromofor dan auksokrom. Secara teoritis λ maks larutan DPPH adalah 515
nm (Pokorny, 2001). Dari hasil pengukuran diperoleh serapan maksimum DPPH
untuk ketiga seri konsentrasi yaitu 515 nm dan hasil pengukuran menunjukan
bahwa seiring pertambahan konsentrasi, nilai absorbansi semakin meningkat.
Gambar 10. Spektra panjang gelombang serapan maksimum DPPH

pada konsentrasi 0,054 mM

pada konsentrasi 0,11mM

pada konsentrasi 0,22 mM
E. Hasil Validasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan
Validasi metode analisis merupakan suatu prosedur yang digunakan
dengan tujuan untuk memberikan jaminan dan membuktikan bahwa metode
analisis yang digunakan dalam penelitian ini dapat memenuhi syarat untuk
penggunaannya (Gandjar dan Rohman, 2007).
Untuk mengetahui validitas dari metode analisis uji aktivitas antioksidan
ini, parameter validasi yang dilakukan antara lain adalah analisis akurasi, presisi,
linearitas, dan spesifisitas. Dalam pengujian digunakan lima replikasi untuk
larutan pembanding vitamin C, larutan uji sari markisa ungu dan larutan uji sari
markisa kuning. Dari lima replikasi diperoleh lima persamaan regresi linear antara
konsentrasi rutin, larutan uji sari marisa ungu dan larutan uji sari markisa kuning
dengan %IC. Dari kelima replikasi dipilih persamaan yang paling linear yang
ditunjukan oleh nilai r-nya. Dari persamaan regresi linear yang diperoleh,
digunakan untuk menghitung konsentrasi terukur vitamin C maupun larutan uji
sari markisa ungu dan sari markisa kuning.

Kurva Persamaan Regresi Linear Aktivitas Antioksidan

Vitamin C
70.000
65.000
60.000
% IC (%)
y = 18745x + 20.77
55.000 r = 0.9979
50.000
45.000
40.000
0.0014 0.0016 0.0018 0.002 0.0022 0.0024 0.0026
Konsentrasi (mg/mL)
Gambar 13. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan vitamin C
Kurva Persamaan Regresi Linier Aktivitas

Antioksidan Sari Markisa Ungu
39.000
38.000
37.000
% IC (%)
y = 7.160x + 26.05
36.000 r = 0.9951
35.000
34.000
33.000
1.0 1.2 1.4 1.6 1.8
Konsentrasi (mg/ml)
Gambar 14. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan sari markisa
ungu
Kurva Persamaan Regresi Linier Aktivitas

Antioksidan Sari Markisa Kuning
27.000
26.000
25.000
% IC (%)
y = 10.42x + 10.79
24.000
r = 0.9993
23.000
22.000
21.000
20.000
0.9 1.1 1.3 1.5 1.7
Konsentrasi (mg/ml)
Gambar 15. Kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan sari markisa
kuning
Gambar 13 ,14 dan 15 menunjukkan korelasi yang baik antara konsentrasi
vitamin c dan larutan uji dengan %IC dengan nilai koefisien korelasi (r)
mendekati satu yang berarti semakin besar konsentrasi vitamin C maupun larutan
uji maka semakin besar pula %IC yang dihasilkan.
1. Akurasi
Tujuan penetapan parameter akurasi dalam metode validasi adalah untuk
menunjukkan kedekatan hasil analis dengan kadar analit yang sebenarnya.
Penilaian akurasi didasarkan pada nilai perolehan kembali (%recovery) hubungan
antara seri konsentrasi vitamin C, larutan uji markisa ungu dan larutan uji markisa
kuning dengan aktivitas antioksidan yang diperoleh.

Tabel VII. Hasil %Recovery dan %CV uji aktivitas antioksidan vitamin C
Konsentrasi Konsentrasi %
Vitamin % IC % CV
teoritis terukur Recovery SD (%)
C (%) (%)
(mg/mL) (mg/ml) (%)
0,001586 50,50 0,001586 99,99
Seri I 0,001585 50,62 0,001592 100,46 3,6 x 10-5 2,3
0,001585 49,40 0,001527 96,34
0,001784 54,49 0,001798 100,79
Seri II 0,001783 52,85 0,001711 95,97 4,8 x 10-5 2,7
0,001783 54,35 0,001791 100,46
0,001982 57,34 0,001951 98,42
Seri III 0,001981 56,93 0,001929 97,38 2,5 x 10-5 1,3
0,001981 56,40 0,001901 95,95
0,002181 62,05 0,002202 100,96
Seri IV 0,002179 59,41 0,002061 94,59 7,1 x 10-5 3,3
0,002179 61,11 0,002152 98,76
0,002379 65,30 0,002375 99,85
Seri V 0,002377 61,39 0,002167 91,15 0,0001 4,6
0,003277 63,04 0,002255 94,87
Tabel VIII. Hasil %Recovery dan %CV uji aktivitas antioksidan sari markisa ungu
Markisa % IC % CV
ungu (%) (%)
(mg/mL) (mg/mL) (%)
1,045 33,491 1,038 99,349
Seri I 1,040 33,333 1,016 97,705 0,04 3,5
1,064 33,846 1,088 102,234
1,219 34,438 1,170 96,017
Seri II 1,213 34,998 1,249 102,939 0,06 4,8
1,241 35,266 1,286 103,632
1,393 35,503 1,319 94,700
Seri III 1,386 36,052 1,396 100,710 0,04 2,8
1,418 35,740 1,352 95,365
1,567 36,805 1,501 95,788
Seri IV 1,559 36,998 1,528 98,008 0,02 1,2
1,596 37,041 1,534 96,113
1,742 38,935 1,798 103,241
Seri V 1,733 38,534 1,743 100,546 0,06 3,8
1,773 37,988 1,666 93,977
Tabel IX. Hasil %Recovery dan %CV uji aktivitas antioksidan sari markisa kuning
Markisa % IC % CV
kuning (%) (%)
(mg/mL) (mg/mL) (%)
0,907 20,360 0,918 101,219
Seri I 0,956 19,924 0,876 91,654 0,02 2,5
0,923 20,302 0,913 98,861
1,058 22,299 1,104 104,359
Seri II 1,115 21,816 1,058 94,867 0,02 2,1
1,077 22,085 1,084 100,611
1,210 22,992 1,171 96,745
Seri III 1,274 23,581 1,227 96,321 0,04 3,1
1,231 23,731 1,242 100,855
1,361 24,238 1,290 94,796
Seri IV 1,434 24,968 1,360 94,855 0,05 3,7
1,385 25,240 1,386 100,095
1,512 25,485 1,410 93,243
Seri V 1,593 26,860 1,542 96,784 0,07 4,9
1,539 26,749 1,531 99,488
Dari tabel VII, VIII, dan IX diperoleh, %recovery vitamin C berada dalam
rentang 91,15%-100,96%, larutan uji sari markisa ungu berada dalam rentang
93,98%-103,60%, sedangkan untuk larutan uji sari buah markisa kuning berada
dalam rentang 91,65%-104,36%. Rentang %recovery yang baik untuk untuk
vitamin C dengan kadar sekitar 10 ppm berkisar antara 90%-107% sehingga dapat
dikatakan bahwa persyaratan %recovery untuk vitamin C terpenuhi. Untuk
persyaratan %recovery yang baik untuk larutan uji markisa ungu dan markisa
kuning dengan kadar antara 100 ppm-1000 ppm adalah 90%-105% sehingga
dapat dikatakan bahwa persyaratan %recovery untuk larutan uji sari buah markisa
ungu dan sari buah markisa kuning terpenuhi. Dengan demikian dapat dikatakan
bahwa metode ini memiliki akurasi yang baik karena telah memenuhi persyaratan
akurasi yang telah ditentukan.

2. Presisi
Tujuan penetapan parameter presisi dalam metode validasi adalah untuk
menunjukkan derajad kesesuaian antara hasil uji individual yang diperoleh dari
pengambilan sampel berulang yang telah dihomogenkan dengan suatu metode
analisis (Snyder et al., 1997). Penilaian presisi didasarkan pada koefisien variasi
(CV) yang diperoleh dari pengulangan pengukuran suatu sampel. Dari data pada
tabel VII, VIII, dan IX diperoleh, %CV vitamin C berada dalam rentang 1,3%-
4,6%, larutan uji sari markisa ungu berada dalam rentang 1,2%-4,8%, dan untuk
larutan uji sari markisa kuning berada dalam rentang 2,1%-4,9%. Persyaratan %
CV yang baik untuk kadar sekitar 10 ppm harus ≤5%, sehingga dapat dikatakan
persyaratan %CV untuk vitamin C terpenuhi. Untuk persyaratan rentang %CV
yang baik untuk bahan alam adalah ≤15% sehingga dapat dikatakan bahwa
persyaratan %CV untuk sari markisa ungu dan sari markisa kuning juga terpenuhi.
Dari hasil penetapan parameter presisi ini, dapat disimpulkan bahwa metode ini
memiliki presisi yang baik karena telah memenuhi persyaratan yang telah
ditentukan.
3. Linearitas
Tujuan penetapan parameter linearitas dalam metode validasi adalah untuk
menunjukkan hubungan antara kadar analit dengan absorbansi yang dhasilkan.
Penilaian parameter linearitas didasarkan pada nilai koefisien korelasi (r). Jika
nilai r semakin mendekati 1, maka hubungan antara kadar analit dengan
absorbansinya dapat dikatakan semakin linear. Hasil nilai koefisien korelasi (r)
persamaan regresi linea untuk vitamin C yang paling bagus diperoleh dari
replikasi I yaitu r = 0,9979, larutan uji sari markisa ungu diperoleh dari replikasi
II yaitu r = 0,9951 dan untuk larutan uji sari markisa kuning diperoleh dari
replikasi IV, yaitu r = 0,9993. Berdasarkan persyaratan linearitas menurut
APVMA tahun 2004, persyaratan linearitas yang baik adalah ≥0,99. Berdasarkan
persyaratan tersebut dapat dismpulkan bahwa nilai r untuk vitamin C, sari markisa
ungu dan sari markisa kuning, memiliki linearitas yang baik.
4. Spesifisitas
Tujuan penetapan parameter spesifisitas dalam metode validasi adalah
untuk melihat kemampuannya yang hanya mengukur zat tertentu saja secara
cermat dan seksama dengan adanya komponen lain yang mungkin ada dalam
matriks sampel (Harmita,2004). Uji dilakukan dengan pengukuran larutan vitamin
C, larutan uji sari markisa ungu dan sari markisa kuning, juga pelarut yang
digunakan pada λ 400-600 nm apakah memberikan serapan yang dapat
mengganggu pengukuran absorbansi DPPH atau tidak.
Dari hasil scanning (Lampiran 6) terlihat bahwa baik larutan vitamin C,
larutan uji sari markisa ungu, sari markisa kuning dan pelarut, tidak menunjukkan
adanya gangguan terhadap absorbansi DPPH yang dibuktikan dengan tidak
adanya spektra yang terbentuk. Dengan demikian dapat dikatakan bahwa metode
ini memiliki spesifisitas yang baik.
F. Hasil Estimasi Aktivitas Antioksidan dengan Radikal DPPH
Metode DPPH yang digunakan dalam pelelitian ini bertujuan untuk
mengetahui perbandingan besar aktivitas antioksidan antara sari buah markisa

ungu dan sari buah markisa kuning. Dalam metode ini, aktivitas antioksidan
diperoleh dengan menghitung rasio penurunan absorbansi radikal DPPH pada
senyawa uji yang diduga mempunyai aktivitas antioksidan dibandingkan dengan
absorbansi kontrol yang tidak diberi senyawa uji (Molyneux, 2004). Aktivitas
antioksidan yang diperoleh dinyatakan dengan IC50 yang merupakan konsentrasi
senyawa antioksidan yang diperlukan untuk mengurangi radikal DPPH sebesar
50% (Zou et al., 2004). Nilai IC50 diperoleh dari persamaan regresi linear yang
menyatakan hubungan antara konsentrasi senyawa uji dengan persen penangkapan
radikal (%IC). Semakin kecil nilai IC50, maka semakin besar aktivitas antioksidan
senyawa uji tersebut. Pengukuran aktivitas antioksidan sari buah markisa ungu
dan sari buah markisa kuning dalam penelitian ini dilakukan pada berbagai seri
konsentrasi. Hal ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh konsentrasi sampel
terhadap aktifitas antioksidan yang dimiliki. Semakin besar konsentrasi sari
markisa ungu dan sari markisa kuning yang digunakan maka semakin banyak
proton yang didonorkan pada radikal DPPH sehingga terjadi penurunan
absorbansi DPPH.
Tabel X. Hasil % IC vitamin C menggunakan radikal DPPH

Konsentrasi uji
vitamin C Persamaan
Replikasi % IC
dalam 4,0 ml Regresi Linear
(mg/mL)
1,586 x 10-3 50,498
1,784 x 10-3 54,478 A = 20,7722
I 1,982 x 10-3 57,338 B = 18744,6477
2,181 x 10-3 62,045 r = 0,9979
2,379 x 10-3 65,299
1,586 x 10-3 48,481
1,784 x 10-3 52,491 A = 18,2395
II 1,982 x 10-3 57,108 B = 19239,0367
2,181 x 10-3 60,024 r = 0,9976
2,379 x 10-3 63,791
1,585 x 10-3 50,619
1,783 x 10-3 52,847 A = 28,1306
III 1,981 x 10-3 56,931 B = 14188,3838
2,179 x 10-3 59,406 r = 0,9926
2,377 x 10-3 61,386
1,585 x 10-3 42,143
1,783 x 10-3 48,452 A = 4,6654
IV 1,981 x 10-3 54,762 B = 24351,0101
2,179 x 10-3 57,381 r = 0,9883
2,377 x 10-3 61,786
1,585 x 10-3 49,396
1,783 x 10-3 54,348 A = 22,7856
V 1,981 x 10-3 56,401 B = 17200,5050
2,179 x 10-3 61,111 r = 0,9892
2,377 x 10-3 63,043
Tabel XI. Hasil %IC sari buah markisa ungu menggunakan radikal DPPH
Konsentrasi
Persamaan
uji dalam
Replikasi % IC Regresi
4,0 mL
Linear
(mg/mL)
1,045 29,941
1,219 33,254 A= 17,5199
I 1,393 34,793 B = 12,3641
1,567 36,805 r = 0,9924
1,742 38,935
1,040 33,333
1,213 34,998 A = 26,0568
II 1,386 36,052 B = 7,1607
1,559 36,998 r = 0,9951
1,733 38,534
1,064 28,284
1,241 32,426 A = 10,5808
III 1,418 35,740 B = 17,2871
1,596 38,462 r = 0,9919
1,773 40,592
1,023 39,079
1,194 39,787 A = 31,6009
IV 1,364 41,204 B = 7,0557
1,535 42,149 r = 0,9903
1,706 43,920
1,085 38,679
1,266 39,623 A = 31,7522
V 1,447 41,156 B = 6,3845
1,628 42,453 r = 0,9914
1,809 43,042
Tabel XII. Hasil %IC sari buah markisa kuning menggunakan radikal DPPH
Konsentrasi
Persamaan
uji dalam
4,0 mL
Linear
(mg/mL)
0,934 18,471
1,090 19,363 A = 13,7826
I 1,246 20,255 B = 5,0732
1,401 20,637 r = 0,9919
1,557 21,783
0,907 21,191
1,058 22,299 A = 16,4308
II 1,210 22,992 B = 5,4011
1,361 23,823 r = 0,9961
1,512 24,515
0,956 19,294
1,115 20,177 A = 12,9145
III 1,274 21,311 B = 6,5691
1,434 22,068 r = 0,9943
1,593 23,581
0,923 20,302
1,077 22,085 A = 10,7926
IV 1,231 23,731 B = 10,4214
1,385 25,240 r = 0,9993
1,539 26,749
0,918 15,247
1,071 18,132 A = 3,6258
V 1,224 20,192 B = 13,1980
1,377 21,841 r = 0,9920
1,530 23,489
Dari tabel X, XI, dan XII ternyata pada berbagai seri konsentrasi baik
vitamin C, sari buah markisa ungu, dan sari buah markisa kuning mengalami
peningkatan aktivitas antioksidan seiring dengan pertambahan konsentrasi. Hal ini
membuktikan bahwa terjadi penurunan absorbansi DPPH seiring dengan
penambahan konsentrasi akibat adanya penambahan donor proton dari senyawa
yang mempunyai aktivitas antioksidan membentuk senyawa DPPH-H dmna

senyawa ini tidak memberikan serapan pada serapan maksimum penelitian yaitu
515 nm. Semakin banyak hidrogen yang didonorkan maka intenitas warna ungu
DPPH juga akan semakin menurun yang juga akan menurunkan absorbansinya
(Gambar 16).
N N
N NH
R
RH
O2N NO2 O2N NO2
NO2 NO2
DPPH Berwarna ungu DPPH Berwarna kuning
Gambar 16. Donasi proton senyawa antioksidan ke radikal DPPH

(Prakash, et al., 2010)
Tabel XIII. Hasil IC50 vitamin C, sari markisa ungu dan sari markisa kuning
Bahan IC50 Rata-rata SD
Uji Rep.1 Rep. 2 Rep. 3 Rep. 4 Rep. 5 (mg/mL) (mg/mL)
Vitamin 1,559 x 1,651 x 1,541 x 1,862 x 1,582 x
1,64x 10-3 1,3 x 10-4
C 10-3 10-3 10-3 10-3 10-3
Sari
markisa 2,627 3,344 2,280 2,608 2,858 2,74 0,39
ungu
Sari
markisa 7,139 6,215 5,645 3,762 3,514 5,26 1,57
kuning
Dari tabel XIII diperoleh, nilai rata-rata IC50 vitamin C sebesar 1,64 x 10-3
±1,3 x 10-4 mg/mL, Untuk sari markisa ungu sebesar 2,74±0,39 mg/mL, dan
untuk sari markisa kuning sebesar 5,26±1,57 mg/mL. Hasil IC50 yang diperoleh
untuk markisa ungu dan markisa kuning ternyata tidak masuk dalam range kurva
persamaan regresi linear aktivitas antioksidan sari markisa ungu dan sari markisa
kuning. Untuk itu perlu dilakukan modifikasi ada konsentrasi sari markisa ungu
dan sari markisa kuning agar diperoleh nilai IC50 yang masuk dalam range kurva
persamaan regresi linear aktivitas antioksidan.
Untuk mengetahui signifikansi nilai IC50 antara sari buah markisa ungu
dengan sari buah markisa kuning, dari data IC50 yang diperoleh, kemudian
dilakukan analisis satistik menggunakan software SPSS Statistik 17.0 uji T tidak
berpasangan. Syarat suatu data dapat diuji menggunakan uji T yaitu data harus
terdistribusi normal.
Dalam penelitian ini digunakan uji Shapiro-Wilk karena data yang
digunakan kurang dari 50 data. Dari hasil pengujian statistik diperoleh nilai p-
value IC50 markisa ungu 0,733 dan IC50 markisa kuning 0,476, dimana nilai p-
value kedua sampel lebih besar dari 0.05 (taraf kepercayaan 95%), sehingga
dapat disimpulkan bahwa nilai IC50 sari markisa ungu dan sari markisa kuning
mengikuti distribusi normal. Setelah memperoleh data yang terdistribusi normal,
kemudian dilakukan analisis statistik uji T tidak berpasangan untuk melihat
signifikansi nilai IC50 antara sari markisa ungu dan sari markisa kuning. Dari hasil
uji T-test didapatkan hasil p-value = 0.008 (p-value <0.05) sehingga dapat
disimpulkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antara IC50 markisa ungu
dan IC50 markisa kuning.
Dari nilai IC50 yang diperoleh antara vitamin C, sari markisa ungu, dan
sari markisa kuning terlihat bahwa vitamin C mempunyai rata-rata nilai IC50 yang
terkecil yaitu 1,64 x 10-3 mg/ mL yang yang dapat disimpulkan bahwa vitamin C
mempunyai aktivitas antioksidan yang sangat kuat karena IC50 <50µg/mL
(Ariyanto cit Nusrini, 2007) dan mempunyai aktivitas antioksidan terbesar

dibandingkan dengan sari markisa ungu dan sari markisa kuning. Sedangkan
untuk sari markisa ungu dan sari markisa kuning, keduanya mempunyai aktivitas
antioksidan lemah karena IC50 >150 µg/mL (Ariyanto cit Nusrini, 2007). Dari
hasil statistik uji T diperoleh bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antara
IC50 sari markisa ungu yaitu 2,74 mg/mL dengan sari markisa kuning 5,26
mg/mL dimana IC50 sari markisa ungu lebih kecil dibandingkan sari markisa
kuning yang berarti bahwa sari markisa ungu mempunyai aktivitas antioksidan
yang lebih besar dibandingkan dengan sari markisa kuning.

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa sari buah markisa ungu
(IC50 = 2,74x103 ± 0,39x103 µg/mL) mempunyai daya antioksidan yang lebih
besar dibandingkan daya antioksidan sari buah markisa kuning (IC50 = 5,26x 103 ±
1,57x103 µg/mL).
B. Saran
1. Perlu dilakukan modifikasi konsentrasi pada sari markisa ungu dan sari
markisa kuning agar diperoleh nilai IC50 (%) yang masuk dalam rentang
kurva persamaan regresi linear aktivitas antioksidan sari markisa ungu dan
sari markisa kuning.
2. Perlu adanya penanganan khusus dalam pemilihan sampel untuk sampel
markisa kuning agar dapat memperoleh buah yang seragam terkait dengan
permasalahan adanya perkawinan silang pada tanaman markisa kuning
sehingga tidak diperoleh CV yang besar.
57
DAFTAR PUSTAKA
Andayani, R., Lisawati, Y., dan Maimunah, 2003, Penentuan aktivitas

Antioksidan, Kadar Fenolat Total dan likopen Pada Buah Tomat
(Solanum Lycopersium L.), Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi, Vol. 13
(1), 1-11.
Amarowicz, R., Naczk, M., and Shahidi, F., 2000, Antioksidan activity of Crude
Tannins of canola and Rapeseed Hulss, JAOCS, 77, 957-961.
APVMA, 2004, Guidelines For The Validation Of Analytical Methods For Active
Constituent, Agricultural And Veterinary Chemical Products, Australian
Pesticides & Vetenary Medicines Authority, Australia, pp 4.
Badan Standardisasi Nasional Indonesia, 2009, Markisa, SNI, Jakarta, hal. 4-5.
Cos, P., Calomme, M., Sindambiwe, J.B., de Bruyne, T., Cimanga, K., Pieters, L.,
Vlietinck, A.J., and Vanden Berghe, D., 2001, Cytotoxicity and lipid
peroxidationinhibiting activity of flavonoids, Planta Medica, pp. 515–
519.
Fessenden, R.J. dan Fessenden, J.S., 1995, Kimia Organik, Jilid II, 119-220,
diterjemahkan oleh Pujatmaka, A.H., edisi ke 3, Penerbit Elangga,
Jakarta.
Gandjar, I.G., dan Rohman, A.,2007, Kimai Farmasi Analisis, Cetakan II, Pustaka
Pelajar, Yogyakarta, pp. 249-262.
Gulcin, I., Uguz, M.T., Oktay, M., beydemir, S., and Kufrevioglu , O.I., 2004,
Evaluation of the antioxidant and antimicrobial activities of Clary sage
(salvia sclarea, L.), Turk I. Agric. For., 28, 25-33.
Gordon, M.H., 1990, The Mechanism of Antioxidant Action in Vitro, Hudson,

J,F., editor. Food Antioxidants, Elsivier Applied Science, London.
Hadi, S., 2009, Antioksidan Menangkal Radikal Bebas,

sadhonohadi.com/content&do_pdf=1&id=170, diakses tanggal 3 Maret
2012.
Hanani, E., Mun’im, R., Sekarini, 2005, Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam
Spons Callyspongia SP Dari Kepulauan Seribu, Majalah Ilmu
Kefarmasian, Vol. 2 (3), 127-133.
Harborne, J.B., 1987, Metode Fitokimia: Penentuan Cara Modern Menganalisis

Tumbuhan, Ed. 2, diterjemahkan oleh Padmawinata K. dan Sudiro I., hal.
47-109, ITB, Bandung.
Haris, R., and Shivanandahala, T., 2006, Antioxidant activity and

Hepatoprotective potensial of Phyllanthus niruri, J. Food Chem., 95,
180-185.
Harmita, 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi dan Cara Perhitungan,

Departemen FMIPA UI, Depok, pp. 5-13.
Hernani dan Rahardjo, M., 2005, Tanaman Berkhasiat Antioksidan, 9, 16-20,

Penebar Swadaya, Jakarta.
Hidayat, M.R., 2000, Daya Tangkap Radikal Oksida Nitrit Senyawa

Pentagamavunon-0 dan turunannya, Skripsi, Fakultas Farmasi,
Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Huang, D., Ou, B., dan Prior, R.L., 2005, The Chemistry Behind Antioxidant
Capacity Assays, J. Agric. Food Chem., 53, 1841-1856.
Karsinah, R.C. Silalahi, dan A. Manshur., 2010, Markisa Asam Buah Eksotika
Kaya Manfaat, IPTEK Hortikultura, 30-35.
Karsinah, F.H. Silalahi, dan A. Manshur, 2007, Eksplorasi dan Karakterisasi

Plasma Nutfah Tanaman Markisa, J. Hort, 17(4): 297-306.
Kikuzaki, K. and Nakatani, N., 1993, Antioxidant Effects of Some Ginger

Constituents, Journal of Food. Sci., 58(6), 1407-1410
Kumalaningsih, 2006, Antioksidan Alami Terong Belanda (Tamarillo), Surabaya:

Trubus Agrisarana, 16.
Koleva, I.I., van Beek, T.A., Linssen, J.P.H., de Groot, A., dan Evstatieva, L.N.,
2002, Screening of Plant Extracts For Antioxidant Activity: A
Comparative Study on Three Testing Methods, Phytochemical Analysis,
13, 8-17.
Kwok, B., 2003, Chemical Constituens Comprising The Antioxidant Activity of

Fresh and Dehydrated Sascatoon Berries (Amelanchier alnifolia Nutt.cv.
Smoky and Thiessen), Thesis, Departement of Food, Nutrition and Health,
The University of British Columbia.
Levine, M, K.R. Dhariwal, R.W. Welch, Y. Wang, dan J.B. Park. 1995.
“Determination of Optimal Vitamin C Requirements in Humans.” dalam:
AJCN. 62(suppl): 1347S-1356S.
Molyneux, P., 2004, The use of stable free radical diphenylpicryl-hydrazyl

(DPPH) for estimating antioxsidant activity, J. Sci. Technol., Vol 26 (2),
211-219.
Morton, J. 1987. Passionfruit. P. 320-328. In Morton, J.F.(Ed). Fruits of Warm

Climates. Miami, FL.
http://www.hort.purdue.edu/newcrop/morton/passionfruit.html [20
November 2011].
Mulja, M. dan Suharman, 1995, Analisis Instrumental, 7, 26-32, Airlangga

Unversity Press, Surabaya.
Nusarini, R., 2007, Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat Ekstrak
Metanolik Herba Ketul (Bidens pilosa L.), Skripsi, Universitas Gadjah
Mada, Yogyakarta.
Pokorny, J., Yanishlieva, N., dan Gordon, M., 2001, Antioxidant in Food,
Practical Aplication, Wood publishing Limite, Cambridge, England, pp.
22-123.
Prakash, A., Rigelhof, F., dan Miller, E., 2010, Antioxidant Activity,
http://www.medallionlabs.com, diakses tanggal 5 Mei 2012.
Pujimulyani D., 2003, Pengaruh bleanching terhadap sifat antioksidan sirup kunir
putih (Curcuma mangga val.), Agritech, 23(3): 137-141.
Sastrohamidjojo, H., 2001, Spektroskopi, Liberty, Yogyakarta, pp 1-43

.
Shivaprasad, H.N., Mohan, S., Kharya, M.D., Shiradkar, M.R., dan Lakshman, K.,
2005, In-Vitro Models for Antioxidant Activity Evaluation: a Review,
http://www.pharmainfo.net/reviews/vitro-models-antioxidant-
activityevaluation- review, diakses tanggal 28 November 2011.
Silalahi, J. 2006. Makanan Fungsional. Yogyakarta: Kanisius. Hal. 41-49, 54-55.
Silverstein, R.M. dab Bassler, 1991, Spectrometric Identification of Organic

Compounds, Jhon Willey And Sons, Inc., New York.
Snyder, L.R., Kirkland, J.J., and Glajch, J.L., 1997, Practical HPLC Method
Development, 2nd ed., Jhon Wiley & Sons, Inc., New York, pp. 67-68, 687-
691.
Soeatmaji, D.W. 1998. “Peran Sterss Oksidatif dalam Patogenesis Angiopatik

Mikro dan Makro DM.”dalam: Medica. 5 (24): 318-325.
Tilarso, H., 2003, Suplemen, Olahraga dan Kesehatan, http://unisosdem.org.,

diakses tanggal 14 Januari 2012.
Tringali, C., 2001, Bioactive Compound from Natural Sources: Isolation,

Characterization, and Biological Properties, Taylor & Francis, London,
pp. 53-299
United States Pharmacopeial Convention, 2007, The United States Pharmacopeia,

30th Edition, United States Pharmacopeial Convention Inc., New York,
pp.335-887.
Verheij, E.W.M., dan R.E. Coronel (ED)., 1997, Buah-buahan yang Dapat
Dimakan. Porsea. Sumberdaya Nabati Asia Tenggara 2, Gramedia Pustaka
Utama, Jakarta, 568.
Winarsi, H.,2007, Antioksidan Alami & Radikal Bebas, Kanisius, Yogyakarta, pp.
11-281
Witt, S., Lalk, M., Hager, C., dan Voigt, B., 2010, DPPH-Test: Determination of
Scavenger Properties, http://www.baltic-analytics.de/index.
php?id=7&L=1, diakses tanggal 17 Februari 2012.
Zou, Y., Lu, Y., dan Wei, D., 2004, Antioxidant Activity of Flavonoid-Rich
Extract of Hypericum Perforatum L in vitro, J. Agric Food Chem., 52:
5032-5039.
LAMPIRAN
LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Pengesahan Determinasi Tanaman Markisa Ungu dan

Markisa Kuning
Lampiran 2. Gambar Buah Markisa Ungu dan Kuning
Gambar tanaman markisa kuning dari perkebunan markisa Bapak Supardi

(Yogyakarta)
Gambar buah markisa kuning yang mengalami perkawinan silang dalam

satu tanaman
Lampiran 3. Gambar Blender

Lampiran 4. Data Penimbangan Bahan
1. DPPH
Penimbangan Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Replikasi 4 Replikasi 5

Bobot kertas 0,08837 g 0,07460 g 0,06634 g 0,06731 g 0,07582 g
Bobot kertas +
0,11077 g 0,09705 g 0,08878 g 0,08975 g 0,09826 g
DPPH
Bobot sisa 0,08837 g 0,07463 g 0,06637 g 0,06734 g 0,07587 g
Bobot DPPH 0,02240 g 0,02242 g 0,02241 g 0,02241 g 0,02239 g
2. Vitamin C

Bobot kertas 0,11930 g 0,11958 g 0,11897 g 0,12411 g 0,13092 g
Bobot kertas +
0,13693 g 0,13722 g 0,13659 g 0,14174 g 0,14856 g
vitamin C
Bobot sisa 0,11931 g 0,11960 g 0,11898 g 0,12413 g 0,13095 g
Bobot vit C 0,01762 g 0,01762 g 0,01761 g 0,01761 g 0,01761 g
3. Buah markisa ungu

Beaker glass 66,467 g 66,636 g 66,730 g 66,703 g 64,909 g
beaker + sampel 116,481 g 116,642 g 116,820 g 116,720 g 115,010 g
Bobot sisa 66, 481 g 66,641 g 66,822 g 66,717 g 65,014 g
Bobot sampel 50,000 g 50,001g 49,998 g 50,003 g 49,996 g
4. Buah markisa kuning

Beaker glass 64,196 g 62,211 g 62,209 g 62,246 g 62,207 g
Beaker +
114,228 g 112,220 g 112,214 g 112,252 g 112,214g
sampel
Bobot sisa 64,234 g 62,214 g 62,225 g 62,252 g 62,214 g
Bobot sampel 49,994 g 50,006 g 49,989 g 50,000 g 50,000 g
5. Data perolehan sari markisa
Replikasi I II III IV V
Sari markisa ungu (mL) 64,6 65,0 63,4 66,0 62,1
Sari markisa kuning (mL) 72,3 74,5 70,6 73,0 73,4
Lampiran 5. Data Perhitungan Konsentrasi DPPH, Larutan Pembanding

dan Larutan Uji
1. DPPH
Contoh perhitungan molar DPPH:
Replikasi 1
BM = 394,33
,
Mol = = = 0,057
,
,
M = = = 0,228
,
2. Vitamin C (larutan pembanding)
Konsentrasi Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Replikasi 4 Replikasi 5
Seri 1 7,048 µg/mL 7,048 µg/mL 7,044 µg/mL 7,044 µg/mL 7,044 µg/mL
Contoh perhitungan konsentrasi larutan pembanding :
Replikasi 1
,
Konsentrasi larutan stok vitamin C = = 1,762 /
Konsentrasi larutan intemediet vitamin C
V1 x C1 = V2 x C2
1 mL x 1,762 mg/mL = 10 x C2
C2 = 0,1762 mg/mL
Konsentrasi larutan vitamin C (seri 1) :
V1 x C1 = V2 x C2
0,2 mL x 0,1762 mg/mL = 5 x C2
C2 = 7,048 µg/mL
3. Pengenceran Sari Markisa Ungu dan Sari Markisa Kuning
Volume sari induk yang diperoleh diasumsikan sebagai konsentrasi 100%.
Pada proses blender dilakukan penambahan aquades sejumlah volume yang
diperoleh dari hasil penimbangan. Konsentrasi 100% diasumsikan setara dengan
berat markisa yang ditimbang. Dilakukan pengenceran sari markisa ungu dan
markisa kuning karena sari induk yang diperoleh terlalu pekat. Pengenceran
dilakukan dengan mengambil 0,5 mL sari induk kemudian ditambahkan metanol
hingga volume akhir 10,0 mL. Adapun konsentrasi sari pada larutan intermediet
adalah sebagai berikut:
a) Markisa ungu
Replikasi 1 : 64,6 mL = 50 g, diambil 0,5 mL = 0,387 g
Replikasi Konsentrasi (g/mL)

1 0,0387
2 0,0385
3 0,0394
4 0,0379
5 0,0402
Konsentrasi sari (mg/mL)

Replikasi
Seri 1 Seri 2 Seri 3 Seri 4 Seri 5
I 4,644 5,418 6,192 6,966 7,74
II 4,62 5,39 6,16 6,93 7,7
III 4,728 5,516 6,304 7,092 7,88
IV 4,548 5,306 6,064 6,822 7,58
V 4,824 5,628 6,432 7,236 8,04
Contoh perhitungan konsentrasi sari markisa ungu
Replikasi 1
Konsentrasi larutan sari markisa ungu 0,387 g/10 mL = 0,0387 g/mL
Konsentrasi larutan seri (seri 1)
V1 x C1 = V2 x C2
0,6 mL x 0,0387 g/mL = 5 mL x C2
C2 = 4,644 mg/mL
b) Markisa kuning
Replikasi 1 : 72,3 mL = 50 g, diambil 0,5 mL = 0,346 g
Konsentrasi
Replikasi
(g/mL)
1 0,0346
2 0,0336
3 0,0354
4 0,0342
5 0,0340
Konsentrasi (g/mL)
Replikasi
Seri 1 Seri 2 Seri 3 Seri 4 Seri 5
I 4,152 4,844 5,536 6,228 6,92
II 4,032 4,704 5,376 6,048 6,72
III 4,248 4,956 5,664 6,372 7,08
IV 4,104 4,788 5,472 6,156 6,84
V 4,08 4,76 5,44 6,12 6,80
Contoh perhitungan konsentrasi sari markisa ungu
Replikasi 1
Konsentrasi larutan sari markisa ungu 0,346 g/10 mL = 0,0346 g/mL
Konsentrasi larutan seri (seri 1)
V1 x C1 = V2 x C2
0,6 mL x 0,0346 g/mL = 5 mL x C2
C2 = 4,152 mg/mL
Lampiran 6. Scanning Pengkoreksi pada λ 400-600 nm
1. Scanning Metanol
2. Scanning Sari Markisa Ungu

3. Scanning Sari Markisa Kuning
4. Scanning Vitamin C
Lampiran 7. Optimasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan
1. Penentuan OT
a. Vitamin C
Vit C
Waktu
(menit) Rendah Tengah Tinggi
0 0,420 0,358 0,309
5 0,416 0,354 0,307
10 0,412 0,353 0,307
15 0,412 0,353 0,307
20 0,412 0,353 0,307
25 0,412 0,352 0,307
30 0,412 0,352 0,307
35 0,412 0,352 0,307
40 0,412 0,352 0,307
45 0,412 0,352 0,307
50 0,412 0,352 0,307
55 0,412 0,352 0,307
60 0,412 0,352 0,307
b. Markisa Ungu dan Markisa Kuning
Waktu Markisa ungu Markisa kuning

(menit) Rendah Tengah Tinggi Rendah Tengah Tinggi
0 0,524 0,521 0,511 0,542 0,526 0,500
5 0,514 0,511 0,501 0,532 0,518 0,491
10 0,510 0,504 0,494 0,527 0,513 0,486
15 0,509 0,499 0,490 0,524 0,510 0,486
20 0,508 0,496 0,489 0,524 0,510 0,486
25 0,507 0,496 0,489 0,524 0,510 0,486
30 0,507 0,496 0,489 0,524 0,510 0,486
35 0,507 0,496 0,489 0,524 0,510 0,486
40 0,507 0,496 0,489 0,524 0,510 0,489
45 0,507 0,496 0,489 0,525 0,512 0,491
50 0,507 0,496 0,490 0,526 0,514 0,493
55 0,508 0,498 0,493 0,528 0,515 0,495
60 0,509 0,499 0,497 0,528 0,517 0,496
Lampiran 8. Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Radikal DPPH
( /
% IC = 100
1. Vitamin C
Konsentrasi
uji vitamin Absorbansi Absorbansi Persamaan
Replikasi % IC
C dalam 4,0 kontrol vitamin C Regresi Linear
mL (mg/mL)
1,586 x 10-3 0,398 50,498
1,784 x 10-3 0,366 54,478 A = 20,7722
I 1,982 x 10-3 0,804 0,343 57,338 B = 18744,6477
2,181 x 10-3 0,305 62,045 r = 0,9979
2,379 x 10-3 0,279 65,299
1,586 x 10-3 0,424 48,481
1,784 x 10-3 0,391 52,491 A = 18,2395
II 1,982 x 10-3 0,823 0,353 57,108 B = 19239,0367
2,181 x 10-3 0,329 60,024 r = 0,9976
2,379 x 10-3 0,298 63,791
1,585 x 10-3 0,399 50,619
1,783 x 10-3 0,381 52,847 A = 28,1306
III 1,981 x 10-3 0,808 0,348 56,931 B = 14188,3838
2,179 x 10-3 0,328 59,406 r = 0,9926
2,377 x 10-3 0,312 61,386
1,585 x 10-3 0,486 42,143
1,783 x 10-3 0,433 48,452 A = 4,6654
IV 1,981 x 10-3 0,840 0,380 54,762 B = 24351,0101
2,179 x 10-3 0,358 57,381 r = 0,9883
2,377 x 10-3 0,321 61,786
1,585 x 10-3 0,419 49,396
1,783 x 10-3 0,378 54,348 A = 22,7856
V 1,981 x 10-3 0,828 0,361 56,401 B = 17200,5050
2,179 x 10-3 0,322 61,111 r = 0,9892
2,377 x 10-3 0,306 63,043
Contoh perhitungan nilai %IC
Vitamin C (replikasi 1, seri 1)

, ,
% IC = x 100% = 50,498%
,
2. Markisa Ungu
Konsentrasi
Persamaan
uji dalam Absorbansi Absorbansi
4,0 mL kontrol sari
Linear
(mg/mL)
1,045 0,592 29,941
1,219 0,564 33,254 A= 17,5199
I 1,393 0,845 0,551 34,793 B = 12,3641
1,567 0,534 36,805 r = 0,9924
1,742 0,516 38,935
1,040 0,564 33,333
1,213 0,550 34,998 A = 26,0568
II 1,386 0,846 0,541 36,052 B = 7,1607
1,559 0,533 36,998 r = 0,9951
1,733 0,520 38,534
1,064 0,606 28,284
1,241 0,571 32,426 A = 10,5808
III 1,418 0,845 0,543 35,740 B = 17,2871
1,596 0,520 38,462 r = 0,9919
1,773 0,502 40,592
1,023 0,516 39,079
1,194 0,510 39,787 A = 31,6009
IV 1,364 0,847 0,498 41,204 B = 7,0557
1,535 0,490 42,149 r = 0,9903
1,706 0,475 43,920
1,085 0,520 38,679
1,266 0,512 39,623 A = 31,7522
V 1,447 0,848 0,499 41,156 B = 6,3845
1,628 0,488 42,453 r = 0,9914
1,809 0,483 43,042
Contoh perhitungan konsentrasi uji
Sari markisa ungu (replikasi 1, seri 1)
V1 x C1 = V2 x C2
0,6 mL x 4,644 g/mL = 4 mL x C2
C2 = 1,045 mg/mL
Sari markisa ungu (replikasi 1, seri 1)
, ,
% IC = x 100 % = 29,941 %
,
3. Markisa Kuning
Konsentrasi
Persamaan
uji dalam Absorbansi Absorbansi
4,0 mL kontrol sari
Linear
(mg/mL)
0,934 0,640 18,471
1,090 0,633 19,363 A = 13,7826
I 1,246 0,785 0,626 20,255 B = 5,0732
1,401 0,623 20,637 r = 0,9919
1,557 0,614 21,783
0,907 0,569 21,191
1,058 0,561 22,299 A = 16,4308
II 1,210 0,722 0,556 22,992 B = 5,4011
1,361 0,550 23,823 r = 0,9961
1,512 0,545 24,515
0,956 0,640 19,294
1,115 0,633 20,177 A = 12,9145
III 1,274 0,793 0,624 21,311 B = 6,5691
1,434 0,618 22,068 r = 0,9943
1,593 0,606 23,581
0,923 0,581 20,302
1,077 0,568 22,085 A = 10,7926
IV 1,231 0,729 0,556 23,731 B = 10,4214
1,385 0,545 25,240 r = 0,9993
1,539 0,534 26,749
0,918 0,617 15,247
1,071 0,596 18,132 A = 3,6258
V 1,224 0,728 0,581 20,192 B = 13,1980
1,377 0,569 21,841 r = 0,9920
1,530 0,557 23,489
Contoh perhitungan konsentrasi uji
Sari markisa kuning (replikasi 1, seri 1)
V1 x C1 = V2 x C2
0,6 mL x 4,152 g/mL = 4 mL x C2
C2 = 0,934 mg/mL
, ,
Sari markisa kuning (replikasi 1, seri 1) % IC = x 100 % = 18,471 %
,
Lampiran 9. Perhitungan Nilai IC50 Vitamin C, Sari Markisa Ungu dan Sari
Markisa Kuning
Persamaan Regresi
Sampel Replikasi IC50 (mg/mL)
Linear
A = 20,7722
I B = 18744,6477 1,559 x 10-3
r = 0,9979
A = 18,2395
II B = 19239,0367 1,651 x 10-3
r = 0,9976
A = 28,1306
Vitamin C III B = 14188,3838 1,541 x 10-3
r = 0,9926
A = 4,6654
IV B = 24351,0101 1,862 x 10-3
r = 0,9883
A = 22,7856
V B = 17200,5050 1,582 x 10-3
r = 0,9892
A= 17,5199
I B = 12,3641 2,627
r = 0,9924
A = 26,0568
II B = 7,1607 3,344
r = 0,9951
A = 10,5808
Markisa Ungu III B = 17,2871 2,280
r = 0,9919
A = 31,6009
IV B = 7,0557 2,608
r = 0,9903
A = 31,7522
V B = 6,3845 2,858
r = 0,9914
A = 13,7826
I B = 5,0732 7,139
r = 0,9919
A = 16,4308
II B = 5,4011 6,215
r = 0,9961
A = 12,9145
Markisa Kuning III B = 6,5691 5,645
r = 0,9943
A = 10,7926
IV B = 10,4214 3,762
r = 0,9993
A = 3,6258
V B = 13,1980 3,514
r = 0,9920
Bahan IC50 Rata-rata SD

Uji Rep.1 Rep. 2 Rep. 3 Rep. 4 Rep. 5 (mg/mL) (mg/mL)
Vitamin 1,559 x 1,651 x 1,541 x 1,862 x 1,582 x 1,3 x 10-
1,64x 10-3
C 10-3 10-3 10-3 10-3 10-3 4
Sari
markisa 2,627 3,344 2,280 2,608 2,858 2,74 0,39
ungu
Sari
markisa 7,139 6,215 5,645 3,762 3,514 5,26 1,57
kuning
Keterangan:
Rep = Replikasi; SD = Simpangan Deviasi
Contoh perhitungan IC50
Persamaan regresi linear dari konsentrasi dengan %IC adalah Bx + A
y = aktivitas antioksidan (%IC)
x = konsentrasi (mg/mL)
IC50 adalah nilai x pada saat y sebesar 50%
Contoh perhitungan nilai IC50 (vitamin C replikasi 1)
y = 18744,6477 x + 20,772
50 = 18744,6477 x + 20,772
x = 1,559 x 10-3
Lampiran 10. Uji Statistik Aktivitas Antioksidan dengan SPSS 17.0
1. Uji Normalitas
Tests of Normality
a
Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.

*
IC50_Markisa_Ungu .216 5 .200 .949 5 .733
*
IC50_Markisa_kuning .229 5 .200 .911 5 .476
a. Lilliefors Significance Correction
*. This is a lower bound of the true significance.
2. Uji T Tidak Berpasangan
Independent Samples Test
Levene's
Test for
Equality of
Variances t-test for Equality of Means
95% Confidence
Interval of the
Difference
Sig.
(2- Mean Std. Error
F Sig. t df tailed) Difference Difference Lower Upper
IC50_Markisa Equal 11.752 .009 - 8 .008 -2.511600 .724699 - -

variances 3.466 4.182758 .840442
assumed
Equal - 4.500 .021 -2.511600 .724699 - -

variances 3.466 4.438471 .584729
not
assumed
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi yang berjudul “Perbandingan daya

Antioksidan Sari Buah Markisa Ungu (Passiflora. edulis
f. edulis Sims) dengan Sari Buah Markisa Kuning (P.
edulis Sims f. flavicarpa Deg) Menggunakan Metode
DPPH” memiliki nama lengkap Meiske Munda. Penulis
lahir di Luwuk Banggai, Sulawesi Tengah pada tanggal
05 Mei 1990. Penulis merupakan anak pertama dari
empat bersaudara pasangan Semuel Munda dan Yunika
Payung.
Riwayat pendidikan penulis dimulai tahun 1994-
1996 di TK Pertiwi, Pendolo, Sulawesi Tengah dan TK Katolik, Rantepao,
Sulawesi Selatan. Pada tahun 1996-2002 di SD 2 Pendolo, Sulawesi Tengah dan
SD Kr. Tagari, Sulawesi Selatan. Pada tahun 2002-2005 melanjutkan di SMPN 2
Rantepao. Tahun 2005-2008 menempuh pendidikan di SMU Kr. Barana’ Toraja.
Tahun 2008 penulis melanjutkan pendidikan S1 di Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta. Selama menjalani masa perkuliahan, penulis akif
dalam berbagai kegiatan baik di dalam universitas maupun di luar universitas
antara lain: Panitia Pharmacy Performance dan Pharmacy Event Cup (2011),
Panitia Hari Pekabaran Injil Pemuda, Gereja Kristen Sulawesi Tengah (2009 dan
2010), seta mejadi peserta beberapa seminar seperti seminar Enterpreunership
(2008), seminar HIV-AIDS (2011), seminar Nasional “Pemberdayaan Pasien
Dalam Self Management Diabetes Melitus untuk Meningkatkan Kualitas Hidup
(2011).

Full

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Full

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PERBANDINGAN DAYA ANTIOKSIDAN

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

PERBANDINGAN DAYA ANTIOKSIDAN

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

“Mulai”adalah kata yang penuh dengan kekuatan….

Cara terbaik untuk menyelesaikan sesuatu adalah dengan

memulainya. Tetapi, pekerjaan apakah yang dapat kita selesaikan

kalau kita hanya memulainya ????? (Clifford Warren)

Kupersembahkan karyaku ini untuk :

adik-adikku yang selalu kubanggakan.

Sahabat dan keluarga besarku Farmasi 2008, dan

Almamaterku, Fakultas Farmasi Unversitas Sanata Dharma

And all things,whatsoever ye shall ask in prayer, believing…..

senantiasa melindungi, membimbing, menganugerahkan kasih dan

pertolonganNya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan

skripsi dengan judul “Perbandingan Daya Antioksidan Sari Buah Markisa

(P.edulis Sims f. flavicarpa Deg) Menggunakan Metode DPPH” disusun

Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

1. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku Dosen Pembimbing yang dengan

bersedia, menguji dan memberikan saran serta kritik selama penyusunan

menguji dan memberikan saran serta kritik selama penyusunan skripsi.

4. Seluruh staf pengajar dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata

Dharma Yogyakarta. Terima kasih atas bantuan dan bimbingannya.

6. My lovely aunt yang bersedia mengirimkan buah markisa dari Toraja ke

7. Bapak Supardi yang telah menyediakan sampel bagi peneliti.

8. My best partner Augustiyani Novie Imoliana, terima kasih buat persahabatan,

kerjasama, bantuan dan motivasi yang sangat berarti dalam penyelesaian

masukan, dan motivasnya . Sebuah kebersamaan yang pastinya tidak akan

yang sangat mujarab.

sahabatku yang selalu menanyakan “Ike, kapan selesainya? Semangat ya…”,

itu merupakan motivasi yang sangat berarti.

sebuah memori indah penghias album kehidupanku.

selalu ada senyuman bahkan keharuan ketika penulis mengingatnya.

Penulis menyadari bahwa masih terdapat banyak kekurangan dalam

bermanfaat dan menjadi sumbangan dalam perkembangan ilmu pengetahuan

HALAMAN JUDUL .............................................................................. i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ....................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................. iii

HALAMAN PERSEMBAHAN .............................................................. iv

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ...... v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .................................................. ix

DAFTAR ISI .......................................................................................... x

DAFTAR TABEL ................................................................................... xiv

DAFTAR GAMBAR .............................................................................. xv

DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................... xvii

INTISARI ............................................................................................... xviii

ABSTRACT ............................................................................................. xix

BAB I PENGANTAR ............................................................................ 1

A. Latar Belakang ................................................................................. 1

B. Perumusan Masalah ......................................................................... 4

C. Keaslian Penelitian ........................................................................... 5

D. Manfaat Penelitian ........................................................................... 5

1. Manfaat teoritis .......................................................................... 5

2. Manfaat praktis .......................................................................... 6

E. Tujuan Penelitian ............................................................................. 6

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ...................................................... 7

A. Markisa Ungu dan Markisa Kuning .................................................. 7

1. Keterangan botani ...................................................................... 7

2. Ekologi dan penyebaran ............................................................. 8

3. Kandungan kimia dan pemanfaatan buah markisa ....................... 9

B. Radikal Bebas .................................................................................. 10

1. Metode conjugated diene ............................................................ 12