KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, dimana dengan izin-Nya
penulis dapat menyelesaikan laporan yang berjudul “High Performance Liquid
Chromatography dan Gas Chromatography”.
Dalam pembuatan laporan ini penulis banyak mengucapkan terima kasih
kepada pihak yang telah banyak membantu dalam pembuatan laporan ini, yaitu
kepada kelompok 1 dan kelompok 2 yang telah membantu kami dalam
pengambilan data, serta kepada asisten laboratorium yang turut membantu dalam
membimbing kami untuk pengambilan data dan penulisan laporan ini.

Dalam penulisan laporan ini, mungkin banyak kekurangan yang perlu

diperbaiki. Untuk itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat
membangun demi penyempurnaan laporan ini. Akhir kata penulis mengucapkan
terima kasih.

Medan, 04 Mei 2019

(Penulis)

iv
 DAFTAR ISI

Halaman
LEMBAR PENGESAHAN ......................................................................... ii
LEMBAR ASISTENSI .................................................................................. iii
KATA PENGANTAR ................................................................................... iv
DAFTAR ISI .................................................................................................. v
DAFTAR TABEL .......................................................................................... vii
DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... viii
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................... 1
1.1 Tujuan Percobaan Praktikum ......................................................... 1
1.2 Prinsip Percobaan ........................................................................... 1
1.3 Landasan Teori ............................................................................... 1
1.3.1 Optimasi Metode Ekstraksi Fase Padat dan KCKT Untuk
Analisis Kuantitaif Bahan Kimia Obat Paracetamol Dan
Demaktosa Analisis Kuantitatif Bahan Kimia Obat
Parasetamol dan Deksametason Dalam Jamu Pegal Linu ... 1
1.3.2 Analisis Komponen Kimia Minyak Atdiri Pada Ekstrak
Metanol Daun Kelor .............................................................. 1
1.3.3 Kromatografi ......................................................................... 17
1.3.4 Jenis Jenis Kromatografi ....................................................... 18
1.3.5 Kromatografi Gas .................................................................. 19
BAB II PROSEDUR KERJA ........................................................................ 20
2.1 Alat dan Bahan ............................................................................... 20
a. Alat ............................................................................................ 20
b. Bahan ......................................................................................... 21
2.2 Prosedur Kerja ................................................................................ 10
2.2.1 Prosedur Pembuatan Larutan Ekstrak Klorofil dari
Daun Kangkung ................................................................... 22
2.2.2 Prosedur Pembuatan Larutan Fasa Gerak
2.2.3 Prosedur Pembuatan Larutan Internal Standar Dari
Internal Standar Paracetamol Generik 500 mg Dalam
Labu ukur 100 ml .................................................................. 23
2.2.4 Prosedur Pembuatan Larutan Standar Kurva Kalibrasi ....... 24
2.2.5 Pembuatan Larutan Standar Alkohol Secara Gas ................ 26
2.2.6 Prosedur Injeksi Gas Chromatography ............................... 26

v
 DAFTAR ISI (Lanjutan)
Halaman

2.2.7 Prosedur Injeksi Gas Chromatography ................................ 26

2.2.8 Prosedur HPLC .................................................................... 26
2.2.9 Persiapan Uji Ekstrak Klorofil Secara Paper
Cromatography .................................................................... 29

BAB III GAMBAR RANGKAIAN............................................................... 34

3.1 Gambar Alat ............................................................................... 34
3.2 Gambar Rangkaian ..................................................................... 38
3.3 Keterangan Gambar ................................................................... 39
BAB IV DATA PENGAMATAN .................................................................. 42
4.1 Standar HPLC Kelompok 1 ....................................................... 42
4.2 Standar HPLC Kelompok 2 ....................................................... 42
4.3 Standar GC Kelompok 1 ........................................................... 43
4.4 Standar GC Kelompok 2 ........................................................... 45
4.5 Pengamatan Kertas Kromatografi ............................................. 47
BAB V PENGOLAHAN DATA .................................................................... 49
5.1 Preparasi Kromatografi HPLC ..................................................... 49
5.2 Pembuatan Fase Gerak HPLC ..................................................... 50
5.3 Ekstraksi Klorofil Dari Daun Kangkung ..................................... 51
5.4 Perhitungan Massa Larutan Standar ............................................. 51
5.5 Perhitungan Regresi Sederhana ................................................... 53
5.6 Perhitungan Gas Kromatografi (GC) ........................................... 57
5.7 Uji Presisi Retensi Waktu ............................................................ 64
5.8 Perhitungan nilai Rf pada percobaan kertas ................................. 69

vi
 DAFTAR ISI (LANJUTAN)

Halaman
BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN........................................................ 71
6.1 Kesimpulan.................................................................................. 71
6.2 Saran ............................................................................................ 71
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN

vii
 DAFTAR TABEL

Halaman
Tabel 4.1 Data Pengamatan Standar HPLC I ................................................... 42
Tabel 4.2 Data Pengamatan Standar HPLC II ................................................. 42
Tabel 4.3 Data Pengamatan Standar EtOH 10 % ............................................. 43
Tabel 4.4 Data Pengamatan Standar EtOH 20 % ............................................. 43
Tabel 4.5 Data Pengamatan Standar EtOH 30 % ............................................. 44
Tabel 4.6 Data Pengamatan Sampel X1........................................................... 44
Tabel 4.7 Data Pengamatan Standar EtOH 10 % GC ...................................... 45
Tabel 4.3 Data Pengamatan Standar EtOH 20 % GC ...................................... 45
Tabel 4.3 Data Pengamatan Standar EtOH 30 % GC ...................................... 46
Tabel 4.3 Data Pengamatan Sampel X2........................................................... 46
Tabel 5.1 Tabel Perhitungan Regresi Linier ................................................... 53
Tabel 5.1 Tabel Perhitungan Regresi Linier ................................................... 55
Tabel 5.3 Tabel Perhitungan Regresi Linier ................................................... 61
Tabel 5.4 Tabel Perhitungan Regresi Linier ................................................... 62
Tabel 5.5 Analisis Presisi Retensi Waktu Pada HPLC ................................... 64
Tabel 5.6 Analisis Presisi Retensi Waktu Pada GC ........................................ 64

viii
 DAFTAR GAMBAR

Halaman
Gambar 1.1 Struktur Kimia Paracetamol .................................................... 8
Gambar 1.2 Fragmen Penanda .................................................................... 11
Gambar 1.3 Kromatogram Larutan Sisa retensi Sampel ............................. 9
Gambar 1.4 Kromtogram Larutan Hasil Pencucian .................................... 9
Gambar 1.5 Kromatogram Larutan Hasil Elusi .......................................... 9
Gambar 1.6 Kromatogram Paracetamol ...................................................... 9
Gambar 1.7 Kromatogram Demaktosan ..................................................... 9
Gambar 3.1 Corong Buchner Filter ............................................................. 30
Gambar 3.2 Soxhlet..................................................................................... 30
Gambar 3.3 Botol Vial ................................................................................ 30
Gambar 3.4 Oven ........................................................................................ 30
Gambar 3.5 Corng pisah ............................................................................. 31
Gambar 3.6 Botol Vial 1,5 ml ..................................................................... 31
Gambar 3.7 Pipet Mikro .............................................................................. 31
Gambar 3.8 Pompa Vakum ......................................................................... 31
Gambar 3.9 Bola Hisap ............................................................................... 31
Gambar 3.10 Neraca Analitik ..................................................................... 31
Gambar 3.11 Cawan petri ........................................................................... 32
Gambar 3.12 Spatula ................................................................................... 32
Gambar 3.13 Pipet Tetes ............................................................................. 32
Gambar 3.14 Pipet Volum .......................................................................... 32
Gambar 3.15 Gelas Ukur............................................................................. 32
Gambar 3.16 Statif dan Klem...................................................................... 32
Gambar 3.17 Beaker Glass.......................................................................... 33
Gambar 3.18 Labu Ukur ............................................................................. 33
Gambar 3.19 Corong Kaca .......................................................................... 33

ix
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Tujuan Percobaan Praktikum

1. Memahami prinsip kerja dari High Performance Liquid Chromatography
(HPLC) dan Gas Chromatography (GC)
2. Pemisahan senyawa dengan metode High Performance Liquid
Chromatography (HPLC) dan Gas Chromatography (GC)
3. Memahami penggunaan alat Gas Chromatography (GC).
4. Untuk mengetahui kadar senyawa (misalnya alkohol dalam minuman
beralkohol) dalam sampel.

1.2 Prinsip Percobaan

HPLC menggunakan kolom yang mengandung partikel-partikel
kecil-kecil dari fasa tetap dan karena luas permukaan yang lebih besar dari
fase tetap maka sampel dalam HPLC terpisah dengan sangat baik dengan
efisiensi yang tinggi. Mekanisme pemisahan yang berbeda dengan cepat
dilakukan mengikatkan gugus-gugus kimia yang berbeda pada permukaan
partikel silika yang disebut dengan fase terikat. Secara teoritis HPLC itu
identik dengan Liquid Solid Chromatography. Liquid chromatography dan
ion exchange chromatography.

1.3 Landasan Teori

1.3.1 Optimasi Metode Ekstraksi Fase Padat dan KCKT Untuk
Analisis Kuantitatif Bahan Kimia Obat Parasetamol
daDemaktosa Analisis Kuantitatif Bahan Kimia Obat
Parasetamol dan Deksametason dalam Jamu Pegal Linu.

1
Pendahuluan
Obat tradisional merupakan warisan budaya bangsa yang
perlu terus dilestarikan dan dikembangkan untuk menunjang
pembangunan kesehatan sekaligus untuk meningkatkan
perekonomian rakyat. Hingga saat ini penggunaan obat tradisional
di Indonesia masih sangat diminati dan terus berkembang di
masyarakat. Meningkatnya kebutuhan masyarakat akan obat
tradisional menyebabkan bertambahnya industri yang bergerak di
bidang obat tradisional. Persaingan yang cukup ketat membuat para
pelaku usaha berlomba untuk membuat produk yang memiliki efek
cepat. Salah satu kecurangan yang dilakukan oleh produsen yaitu
dengan menambahkan bahan kimia obat (BKO) ke dalam produk
jamu yang mereka buat.
Berdasarkan peraturan kementrian kesehatan (Permenkes) nomor
007 tahun 2012, dijelaskan bahwa obat tradisional dilarang
mengandung etil alkohol lebih dari 1%, kecuali dalam bentuk
sediaan tingtur yang pemakaiannya dengan pengenceran, bahan
kimia obat yang merupakan hasil isolasi atau sintetik berkhasiat
obat, narkotika atau psikotropika, dan atau bahan lain yang
berdasarkan pertimbangan kesehatan dan atau berdasarkan
penelitian membahayakan kesehatan.
Badan pengawas obat dan makanan (BPOM) telah
menemukan berbagai kasus penambahan BKO pada jamu. Salah
satu jamu yang pernah ditemukan mengandung BKO yaitu jamu
pegal linu. Metode yang digunakan oleh BPOM untuk
menganalisis BKO pada jamu yaitu menggunakan KLT. Metode
tersebut digunakan untuk analisis BKO dalam sediaan jamu secara
kualitatif saja, sehingga perlu dikembangkan metode analisis
kuantitatif untuk parasetamol dan deksametason dalam jamu pegal
linu.

2
 Berdasarkan masalah tersebut maka pada penelitian ini
dilakukan pengembangan metode analisis kadar BKO dalam jamu
pegal linu dengan menggunakan ekstraksi fase padat dan KCKT.
Dengan diperolehnya metode untuk analisis kadar BKO dalam
jamu, maka akan memudahkan pemantauan penggunaan BKO pada
jamu pegal linu dan diharapkan ke depannya dapat digunakan
untuk uji paparan terhadap penggunaan jamu ber-BKO. panjang,
BKO dapat memberikan efek samping bagi kesehatan tubuh.
Menurut peraturan menteri kesehatan nomor 007 tahun
2012 obat tradisional adalah bahan atau ramuan bahan yang berupa
bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral, sediaan sarian
(galenik) atau campuran dari bahan tersebut yang secara turun
temurun telah digunakan untuk pengobatan, dan dapat diterapkan
sesuai dengan norma yang berlaku di masyarakat.
Bahan-bahan ramuan obat tradisional seperti bahan
tumbuh-tumbuhan, bahan hewan, sediaan sarian atau galenik yang
memiliki fungsi, pengaruh serta khasiat sebagai obat, dalam
pengertian umum kefarmasian bahan yang digunakan sebagai
simplisia. Simplisia adalah bahan alamiah yang dipergunakan
sebagai obat yang belum mengalami pengolahan apapun juga dan
kecuali dinyatakan lain berupa bahan yang dikeringkan.
Menurut Keputusan Kepala Badan Pengawasan Obat dan
Makanan (Kep. KBPOM) tahun 2004 dengan nomor:
HK.00.05.4.2411, berdasarkan cara pembuatan serta jenis klaim
penggunaan dan tingkat pembuktian khasiat, obat bahan alam
Indonesia dikelompokkan menjadi:
- Jamu
- Obat Herbal Terstandar
- Fitofarmaka
Bahan kimia obat merupakan senyawa kimia tunggal yang

3
dapat memberikan efek farmakologi. BKO adalah senyawa sintetis
atau produk kimiawi berasal dari bahan alam yang umumnya
digunakan pada pengobatan modern. Pada umumnya BKO
merupakan obat keras, contohnya deksametason. Apabila
dikonsumsi berlebihan dan digunakan dalam jangka waktu yang
panjang, BKO dapat memberikan efek samping bagi kesehatan
tubuh.

Paracetamol
Paracetamol merupakan obat analgetik non narkotik yang
bekerja menghambat sintesis prostaglandin terutama di sistem
syaraf pusat. Parasetamol merupakan obat yang aman dan efektif
untuk pegal dan nyeri otot, dan demam akibat infeksi virus.
Parasetamol dapat menimbulkan hepatotoksisitas karena sangat
toksik terhadap sel hati apabila digunakan secara berlebihan dan
dapat menimbulkan gangguan pada lambung apabila digunakan
dalam jangka waktu lama.
Paracetamol memiliki berat molekul 151,16 g/mol dengan
rumus molekul C8H9NO2. Nama kimia parasetamol adalah N-
asetil-4-aminofenol. Pemberian paracetamol yaitu serbuk hablur,
putih, tidak berbau, rasa sedikit pahit. Kelarutan: larut dalam air
mendidih dan dalam natrium hidroksida 1 N, mudah larut dalam
etanol.

Gambar 1.1. Struktur Kimia Parasetamol

Deksametason
Deksametason adalah glukokortikoid dengan aktivitas
immunosupresan dan anti-inflamasi. Deksametason bekerja dengan

4
menurunkan respon imun tubuh terhadap stimulasi rangsangan.
Aktivitas anti-inflamasi deksametason dengan jalan menekan atau
mencegah respon jaringan terhadap proses inflamasi dan
menghambat akumulasi sel yang mengalami inflamasi, termasuk
makrofag dan leukosit pada tempat inflamasi. Pada pemakaian
dengan dosis berlebih dan jangka panjang, deksametason dapat
menyebabkan aritmia, hipertensi, gagal jantung kongestif, dan
gangguan penyembuhan luka .
Deksametason memiliki nama kimia 9 - fluoro - 11β, 17,
21- trihidroksi- 16α- metil pregna- 1,4 diena- 3,20- dion dengan
berat molekul 392,47 g/mol dan rumus molekul C22H29FO5.
Pemerian deksametason yaitu serbuk hablur, putih sampai praktis
putih, tidak berbau, stabil di udara, melebur pada suhu lebih kurang
2500C disertai peruraian. Kelarutan: praktis tidak larut dalam air;
agak sukar larut dalam aseton, dalam etanol, dalam dioksan, dan
dalam methanol, sukar larut dalam kloroform sangat sukar larut
dalam eter.

Ekstraksi fase padat

Ekstraksi Fase Padat (EFP) atau yang lebih dikenal dengan Solid
Phase Extraction (SPE) merupakan metode pemisahan dimana
senyawa yang terlarut atau tersuspensi dalam campuran cairan
dipisahkan dari senyawa lain dalam campuran sesuai dengan sifat
fisik dan kimianya. Ekstraksi fase padat digunakan untuk
memekatkan dan memurnikan sampel untuk analisis.
Prinsip ekstraksi fase padat yaitu analit yang terlarut dalam suatu
pelarut yang memiliki daya elusi rendah dimasukkan ke dalam
cartridge dan kemudian akan terperangkap pada medium SPE.
Analit tersebut kemudian dapat dibilas dengan pelarut lain yang
berdaya elusi rendah dan kemudian akhirnya dielusi dengan pelarut

5
berdaya elusi kuat bervolume kecil.
SPE dapat dibagi menjadi 4 berdasarkan jenis fase diam atau
penjerap yang dikemas dalam cartridge, yakni fase normal (normal
phase), fase terbalik (reversed phase), adsorpsi (adsorption) dan
pertukaran ion (ion exchange). Pemilihan penjerap didasarkan pada
kemampuannya berikatan dengan analit, dimana ikatan antara
analit dengan penjerap harus lebih kuat dibandingkan ikatan antara
analit dengan matriks sampel. Sehingga analit akan tertahan pada
penjerap. Selanjutnya dipilih pelarut yang mampu melepaskan
ikatan antara analit dengan penjerap pada tahap elusi. Adapun 4
langkah utama dalam penggunaan ekstraksi fase padat, yaitu
pengondisian, retensi sampel, pencucian,dan elusi.

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) yang juga
dikenal dengan istilah High Performance Liquid Chromatography
(HPLC) merupakan suatu teknik pemisahan yang didasarkan pada
partisi sampel diantara suatu fasa gerak dan fasa diam yang berupa
cairan maupun padatan dibantu dengan adanya tekanan tinggi
sehingga analit lebih mudah dipisahkan untuk selanjutnya
diidentifikasi dan dihitung berapa konsentrasi dari masing-masing
komponen tersebut.
Prinsip kerja KCKT adalah pemisahan absorpsi dan
desorpsi yang berulang kali dari komponen yang dipisahkan.
Pemisahan ini terjadi karena adanya perbedaan kecepatan migrasi
dari masing-masing komponen yang didasarkan oleh adanya
perbedaan koefisien distribusi dari komponen tersebut antara kedua
fasa. Selanjutnya komponen diidentifikasi secara kualitatif dan
dihitung berapa konsentrasi dari masing- masing komponen
tersebut secara kuantitatif.

6
 Penelitian ini terdiri dari beberapa tahap, yaitu pembuatan
jamu pegal linu simulasi, pemeriksaan mikroskopik (fragmen
penanda), optimasi preparasi sampel ekstraksi fase padat dengan
cartridge C-18 Merck, uji kualitatif dengan KLT, dan uji
kuantutatif dengan KCKT.
Berikut adalah skema pengembangan metode analisis:
Simplisia yang digunakan untuk penelitian dipastikan
kebenaran identitasnya dengan dilakukan pemeriksaan secara
mikroskopik fragmen-fragmen penanda pada masing-masing
simplisia yang diperoleh dari Fermako Herbal tahun 2008.

(a) (b) (c)

Gambar 1.2. Fragmen Penanda (a) Curcumae Xanthorrizhae

Rhizoma, (b) Curcumae Domesticae Rhizoma, (c) Zingiberis
Officinalis Rhizoma

Menggunakan Pereaksi Kloral Hidrat pada Perbesaran 400

x Pembuatan Jamu Pegal Linu Simulasi. Sebanyak 1,75 g simplisia
Curcumae domesticae rhizoma; 1,75 g simplisia Curcumae
xanthorrizhae rhizoma; 1,5 g Zingiberis officinalis rhizoma;
dicampur dan digerus di dalam mortar sehingga diperoleh
campuran jamu simulasi dalam bentuk serbuk homogen.
Pada penelitian ini jamu simulasi (yang telah ditambahkan
BKO) yang digunakan sebanyak 500 mg dan dilarutkan dalam
metanol. Kemudian campuran disaring, filtratnya diambil.
Sebelumnya dilakukan pengondisian kolom EFP C-18 berturut-
turut dengan 6 mL metanol dan 6 mL aquadestilata. Sebanyak 1 mL

7
sampel jamu simulasi dimasukkan ke dalam kolom EFP dan
dibiarkan menetes perlahan. Kemudian kolom dicuci dengan
larutan pencuci metanol dan aquadest (60:40). Kemudian analit
dielusi dengan metanol. Lalu dilakukan pemantauan menggunakan
KLT dan uji kuantitatif KCKT.
Digunakan pelarut metanol karena berdasarkan orientasi,
dalam jumlah yang digunakan parasetamol dan deksametason
masih dapat larut dalam metanol. Hasil yang didapat dari
pemantauan KLT dapat dilihat pada gambar 1.2.

Gambar 1.3. Kromatogram Lapis Tipis, (1) Standar Kerja

Parasetamol, (2) Standar Kerja Deksametason, (3) Filtrat Jamu
Simulasi, (4) Larutan Sisa Retensi, (5) Larutan Ppencuci, (6) Hasil
Elusi, Dilihat di Bawah Sinar UV λ 254 nm.

Untuk mengetahui ada atau tidaknya parasetamol dan

deksametason, bercak yang timbul pada larutan hasil EFP
dibandingkan dengan bercak standar k e r j a parasetamol dan
deksametason. Dari kromatogram diatas menunjukkan bahwa
parasetamol dan deksametason sudah dapat teretensi (tertahan)
pada penjerap. Filtrat jamu simulasi yang di masukkan ke dalam
cartridge sebanyak 1 mL. Tetapi dalam larutan hasil pencucian
masih terdapat parasetamol, sedangkan dalam larutan hasil elusi
tidak ada sama sekali parasetamol dan deksametason yang terelusi.
Hal ini disebabkan karena sifat parasetamol dan deksametason
yang semi polar, serta sifat metanol yang polar, maka kemungkinan

8
parasetamol dan deksametason terbawa pada saat pencucian.

Hal ini juga diperjelas pada kromatogram hasil KCKT, seperti yang
tersaji dibawah ini:

Gambar 1.3. Kromatogram Larutan Sisa Retensi Sampel

Gambar 1.4. Kromatogram Larutan Hasil Pencucian

Gambar 1.5. Kromatogram Larutan Hasil Elusi

Gambar 1.6. Kromatogram Parasetamol, Komposisi Eluen

Aquabides-Metanol (60:40)

Gambar 1.7. Kromatogram Demaktosan, Komposisi Eluen

9
 Aquabides-Metanol (25:75)

Pada metode ekstraksi dengan EFP, parasetamol dan

deksametason dapat terekstraksi dan teretensi dengan pelarut
metanol, larutan pencuci metanol-akuabides (60:40), dan larutan
pengelusi metanol dengan jumlah sampel yang di masukkan
sebanyak 1 mL, tetapi senyawa BKO masih ikut keluar pada saat
pencucian cartridge. Kondisi KCKT yang paling baik untuk
analisis parasetamol dan deksametason yaitu menggunakan kolom
Zorbax ODS 4,6 mm ID x 250 mm (5µm), fase gerak aquabides-
metanol, laju alir 1,5 mL/menit, detektor UV panjang gelombang
254 nm, dan tipe elusi isokratik.
Kromatogram hasil KCKT (Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi) menunjukkan bahwa parasetamol dan deksametason
kurang teretensi di fasa diam EFP dan pada saat pencucian pun ikut
keluar sehingga pada larutan hasil elusi sudah tidak terdapat
parasetamol dan deksametason. Hal ini menunjukkan bahwa hasil
pengujian dengan KCKT selaras dengan hasil pengujian dengan
KLT dan membuktikan pengujian dengan pelarut metanol kurang
baik sehingga perlu dicari eluen lain yang sesuai.
Pada penelitian ini dilakukan optimasi sistem KCKT untuk
mengetahui fase gerak yang sesuai untuk analisis parasetamol dan
deksametason. Fase gerak yang digunakan yaitu antara aquabides-
metanol dengan perbandingan yang berbeda-beda, yaitu 25:75,
75:25, 65:35, 40:60, 70:30, tipe elusi isokratik, dengan laju alir 1,5
mL/menit, detektor sinar uv 254 nm, dan kolom yang digunakan
adalah kolom zorbax ODS 4,6 mm ID x 250 mm. Hasil yang
diperoleh dari sistem yang diujikan menghasilkan puncak
parasetamol dan deksametason yang baik tetapi dalam
perbandingan fase gerak yang berbeda. Parasetamol memberikan

10
 puncak yang baik pada menit ke 2,300 dengan perbandingan fase
gerak aquabides-metanol (60:40), sedangkan deksametason
memberikan puncak yang baik pada menit ke 4,390 dengan
perbandingan fase gerak aquabides-metanol (25:75).
Pada metode ekstraksi dengan EFP, parasetamol dan
deksametason dapat terekstraksi dan teretensi dengan pelarut
metanol, larutan pencuci metanol-akuabides (60:40), dan larutan
pengelusi metanol dengan jumlah sampel yang di masukkan
sebanyak 1 mL, tetapi senyawa BKO masih ikut keluar pada saat
pencucian cartridge. Kondisi KCKT yang paling baik untuk
analisis parasetamol dan deksametason yaitu menggunakan kolom
Zorbax ODS 4,6 mm ID x 250 mm (5µm), fase gerak aquabides-
metanol, laju alir 1,5 mL/menit, detektor UV panjang gelombang
254 nm, dan tipe elusi isokratik.

1.3.1 Analisis Komponen Kimia Minyak Atsiri Pada Ekstrak

Metanol Daun Kelor

Pendahuluan
Daun kelor (M. oleifera) merupakan tanaman obat tradisional
yang sering digunakan oleh masyarakat Indonesia untuk mengobati
beberapa penyakit. Air rebusan daun kelor digunakan masyarakat
untuk menurunkan tekanan darah tinggi dan menormalkan kadar gula
darah pada penderita diabetes. Selain itu, air rebusan daun kelor
dapat digunakan sebagai antibakteri. Khasiat daun kelor ini
dikarenakan daun kelor terdiri dari komponen kimia senyawa
metabolit sekunder seperti flavonoid, fenolat, alkaloid.
Minyak atsiri merupakan senyawa aromatik yang memiliki
aroma khas dan bersifat volatil (mudah menguap). Minyak atsiri ini
merupakan salah satu hasil metabolit sekunder yang dihasilkan

11
tanaman. Sumber minyak atsiri secara alami terdapat pada bagian
daun, bunga, biji, kulit, buah dan kulit batang. Komponen kimia
minyak atsiri memegang peranan penting sehubungan dengan
aktivitas minyak atsiri sebagai antibakteri. Berdasarkan hasil
penelitian Kayode (2015) minyak atsiri pada biji kelor bersifat
non toksik sehingga aman dikonsumsi manusia.
Proses isolasi minyak atsiri dapat dilakukan dengan beberapa
metode seperti distilasi, ekstraksi dan pengepresan (pressing).
Sebelum proses isolasi minyak atsiri dilakukan, maka dilakukan
analisis komponen kimia minyak atsiri terlebih dahulu. Analisis ini
dapat dilakukan dengan menggunakan alat Kromatografi Gas
Spektrofotometer Massa (KG-MS). Alat ini bekerja berdasarkan pada
pemisahan senyawa volatil yang terikat antara fasa diam dan fasa
gerak. Fasa diam yang digunakan seperti silika dan alumina
merupakan adsorben dengan tingkat kepolaran tertentu. Fasa gerak
merupakan gas inert yang tidak bereaksi dengan sampel dan
fasa diamnya serta stabil pada suhu tinggi. Prinsip pemisahannya
yaitu “like dissolve like”, masing-masing komponen akan
terpisahkan berdasarkan waktu retensi (kecepatan senyawa melalui
kolom). Senyawa hasil pemisahan selanjutnya masuk ke dalam ruang
ionisasi spektrometer massa. Kemudian senyawa akan ditembak
dengan elektron berenergi tinggi dan dihasilkan ion molekul yang

bermuatan listrik, pada umumnya ion molecular (M+).

Fragmen ion akan terbentuk dikarenakan adanya perbedaan rasio
massa/energi (m/z). Fragmen ion yang paling banyak dihasilkan
dijadikan puncak dasar (base peak) yang menggambarkan
karakteristik suatu senyawa hidrokarbon. Berdasarkan hal di atas,
maka dilakukanlah penelitian mengenai analisis kandungan kimia
minyak atsiri daun kelor yang berasal dari Jombang dengan KG-MS

12
sebagai penelitian awal untuk mengembangkan potensi manfaat
minyak atsiri di bidang kesehatan, kosmetik, maupun makanan.

Metode Penelitian
Alat yang digunakan untuk maserasi daun kelor yaitu
pipet, gelas beker, gelas vial kecil, gelas ukur, gelas ukur, labu
bundar, kertas saring, timbangan digital, corong kaca pipet,
mortar dan maserator. Alat untuk analisa komponen kimia daun
kelor menggunakan Kromatografi Gas Shimadzu tipe HP-
series II 5890 yang digabung dengan Spektroskopi Massa
(energi ionisasi 70 eV). Kolom kapiler yang digunakan
panjang 30 x 0.25 mm, tebal lapisan kolom 0,25 μm. Bahan
yang digunakan yaitu serbuk kering daun kelor dan metanol
(MeOH pure analysis).

D. Metode Analisa Kromatografi Gas– Spektroskopi Massa

(KG-SM)
1. Ekstraksi
Daun kelor dikeringkan dalam suhu ruang. Daun kelor
kering dihaluskan dengan mortar. Serbuk kering daun
kelor diambil 2 g dimasukkan ke dalam botol vial dan
ditambahkan pelarut MeOH sebanyak 10 mL. larutan
tersebut didiamkan selama 1 x 24 jam pada suhu ruangan.
Ekstrak yang dihasilkan disaring dengan menggunakan
metode dekantasi, dihasilkan ekstrak MeOH cair dan
residu.

2. Analisa kandungan kimia minyak atsiri dengan KG-SM

Ekstrak MeOH daun kelor diidentifikasi dengan
Kromatografi Gas Shimadzu tipe HP-series II 5890 yang

13
 digabung dengan Spektroskopi Massa (SM) (energi
ionisasi 70 eV). Ekstrak MeOH cair diambil 0.1 µL,
diinjeksikan. Berdasarkan hasil kromatogram menunjukkan
ada 15 komponen utama penyusun minyak atsiri daun
kelor. Masing-masing puncak dianalisis berat molekulnya
dengan pectrometer massa. Suhu injektor diatur 250 °C.
Suhu kolom diatur secara gradien: suhu inisial 50 °C
selama 15 menit, dinaikkan sebesar 2 °C/menit sampai
suhu 150 °C, suhu150 °C selama 10 menit, dinaikkan
sebesar2 °C/menit sampai suhu 220 °C, suhu 220 °C
selama 20 menit. Gas Helium (He) digunakan sebagai gas
pembawa. Fasa diam yang digunakan adalah 5% fenil /
metil polisiloksan.

Hasil Dan Pembahasan

Hasil analisis komponen kimia minyak atsiri dari daun kelor

dengan menggunakan KG-SM dapat dilihat pada Gambar 2. Jumlah
relatif dari masing- masing komponen minyak atsiri dapat .
Hasil analisis menunjukkan adanya 5 komponen penyusun dominan
minyak atisiri pada daun kelor yaitu Asam heksadekanoat metil
ester (no 3., 11.99%), Asam 9,12,15-Oktadekatrienoat (no
5.17.36%), Pitol (no 6, 5.42%), 7,10,13- asam Heksadekatrienoat
(no 8, 3.15%) dan Asam oktadekanoat stearat (no 9, 2.42%).
Berdasarkan hasil pencocokan data-data spektogram dari
masing-masing puncak utama dengan library research maka
dapat diketahui jenis senyawa kimia penyusunnya. Selain itu,
identifikasi senyawa kimia dapat dilakukan dengan
menginterpretasi fragmen-fragmen dalam spektogram yang
merupakan ciri khas dari suatu senyawa kimia.

14
Gambar 1.1. Kromatogram KG-MS ekstrak MeOH daun kelor

Gambar 1.2. Spektrum massa puncak 1

Gambar 1.3. Spektrum massa puncak 2

15
 74 O

OCH3
Gambar 1.4. Spektrum massa puncak 3

OH

Gambar 1.5. Spektrum massa puncak 4

Gambar 1.6 Spektrum massa puncak 5

16
 Spektogram puncak 1 (Gambar 1.1) menunjukkan adanya
senyawa asam 9,12,15-Oktadekatrienoat metil ester (asam linoleat)
dengan berat molekul (m/e) 292. Asam lineloat merupakan asam
lemak tak jenuh yang merupakan penyusun asam lemak omega 3.
Spektogram puncak 5 (Gambar 1.6) menunjukkan adanya senyawa
asam Asam 7,10,13- Heksadekatrienoat, metil ester dengan berat
molekul (m/e) 278.
Senyawa pitol ditunjukkan pada kromatogram puncak 3
(Gambar 1.4) dengan berat molekul 296. Senyawa ini merupakan
senyawa diterpen alkohol yang dapat digunakan sebagai prekursor
sintesis vitamin E dan Vitamin K1 dalam pabrik. Fragmentogram
yang khas yaitu pada kromatogram gambar 1.5 menunjukkan adanya
senyawa asam stearat. Fragmetogram m/z 73 merupakan ciri khas
untuk senyawa asam stearat. Asam stearat ini digunakan sebagai
bahan pembuatan sabun, lilin, plastik dan kosmetik.
Berdasarkan hasil analisis komponen senyawa kimia minyak
atsiri dari daun kelor ini menunjukkan bahwa minyak atsiri daun
kelor memiliki potensi untuk dikembangkan dan diteliti lebih lanjut
mengenai aktivitas kimia senyawa- senyawa kimia penyususunnya.

1.3.2 Kromatografi
Di tahun 1903 Tswett menemukan teknik kromatografi.
Teknik ini bermanfaat sebagai cara untuk menguraikan suatu
campuran. Dalam kromatografi, komponen-komponen terditribusi
dalam dua fase. Salah satu fase adalah fase diam. Transfer massa
antara fase bergerak dan fase diam terjadi bila molekul-moelkul
campuran serap pada permukaan partikel-partikel atau terserap di
dalam pori-pori partikel atau terbagi ke dalam sejumlah cairan
yang terikat pada permukaan atau di dalam pori. Ini adalah sorpsi
(penyerapan). Laju perpindahan suatu molekul zat tertentu di

17
 dalam kolom atau lapisan tipis zat penyerap secara langsung
berhubungan dengan bagian molekul-molekul tersebut antara fase
bergerak dan fase diam.
Walaupun arti dari istilah itu banyak dimengerti oleh ahli-ahli
kimia, suatu defenisi kromatografi yang baik sangat sulit
dirumuskan. Kromatografi adalah suatu metode pemisahan fisik,
dimana komponen-komponen yang dipisahkan didistribusikan
diantara dua fasa, salah satu fasa tresebut adalah suatu lapisan
stasioner dengan permukaan yang luas, yang lainnya sebagai flida
yang mengalir lembut sepanjang landasan stasioner.

1.3.3 Jenis-jenis Kromatografi

Fasa stasioner bisa berupa padatan maupun cairan, sedangkan
fasa bergerak bisa berupa cairan maupun gas. Jadi semua jenis
kromatografi yang diketahui diorganisisr jadi satu dalam empat
kategori seperti yang ditunjukkan dalam tabel berikut:

Tabel 1.1 Rangkuman Jenis-jenis Kromatografi

Dalam semua teknik kromatografi, zat-zat terlarut yang

dipisahkan bermigrasi sepanjang kolom, dan tentu saja dasar

18
 pemisahan terletak dalam laju perpindahan yang berbeda untuk
larutan yang berbeda.

1.3.4 Kromatografi Gas

Dalam kromatografi gas untuk mengikuti reaksi, senyawa
dilewatkan melalui zona reaksi dalam sistem tertutup antara tempat
injeksi sampel dan detektor. Reaksi berlangsung setelah melalui
tempat injeksi sampel. Reaksi seharusnya berlangsung seketika dan
hasil reaksi mempunyai waktu retensi normal, yaitu 8-10 detik.
Pengambilan suatu komponen senywa dengan gugusan tertentu
juga dapat dilakukan dengan membubuhkan dalam kolom
kromatografi, suatu reagen yang relatif untuk menahan komponen
tersebut. Untuk perbandingan dua kolom dengan instrumen pencatat
dapat dimanfatkan. Senyawaan dapat diubah menjadi bentuk lain
dengan beda waktu retensi, misalnya dengan melewatkan H2O pada
CaC2 dapat terbentuk CH=CH asetilena.
Volume pembawa yang diperlukan untuk menggerakkan pita zat
terlarut pada jeseluruhan panjang suatu kolom adalah volume retensi
(VR), yaitu besaran fundamental yang diukur dalam kromatografi
gas.

19
 BAB II
PROSEDUR KERJA

2.1. Alat dan Bahan

a. Alat
1. Beaker glass 100 ml : 4 buah
2. Labu ukur 25 ml : 2 buah
3. Labu ukur 50 ml : 1 buah
4. Labu ukur 100 ml : 2 buah
5. Labu ukur 250 ml : 1 buah
6. Neraca analitik : 1 buah
7. Spatula : 1 buah
8. Kaca arloji : 2 buah
9. Tabung reaksi : 2 buah
10. Rak tabung : 1 buah
11. Statif : 1 buah
12. Corong kaca : 1 buah
13. Batang pengaduk : 1 buah
14. Pipet ukur 10 ml : 1 buah
15. Penangas air : 2 buah
16. Bola hisap : 1 buah
17. Pipet ukur 1 ml : 1 buah
18. Petri dish : 1 buah
19. Pipet tetes : 1 buah
20. Mortar dan pestle : 1 buah
21. Botol vial 10 ml : 6 buah
22. Botol vial 1,5 ml : 4 buah
23. Glass chamber : 8 buah
24. Pipet mikro 10 µL : 3 buah
25. Corong pisah : 1 buah

20
 26. Kondensor : 1 buah
27. Labu soxhlet : 1 buah
28. Soxhlet : 1 buah
29. Labu vakum : 1 buah
30. Corong vakum : 1 buah
31. Aspirator : 1 buah
32. Micro kjeldahl : 1 buah
33. Heat Plate Paper chromatography : 1 buah
34. TLC Chamber UV : 1 buah
35. Oven : 1 buah
36. Desikator : 1 buah
37. Gelas ukur 50 ml : 1 buah

b. Bahan
1. Hablur KH2PO4 : 0,34 gram
2. Hablur K2HPO4.3H2O : 0,57 gram
3. Paracetamol generik 500 mg : 5 gram
4. Aquadest panas : 1 liter
5. Khloroform : 20 ml
6. Metil alkohol 60 % : 300 ml
7. Etil alkohol : 10 ml
8. Isopropil alkhohol : 10 ml
9. Kertas kromatografi : 8 lembar
10. Kertas saring whattman : 1 lembar
11. Larutan H2SO4 0,1 N : 5 tetes
12. Daun seledri : secukupnya
13. Aquadest : 1 liter
14. Aluminium foil : 1 gulung
15. Tissue gulung : 1 gulung

21
2.2. Prosedur Kerja
2.2.1. Prosedur Pembuatan Larutan Ekstrak Klorofil dari Daun Seledri
1. Daun seledri digerus hingga halus kemudian dimasukkan ke
dalam test tube hingga setengah bagian.
2. Pelarut khlorofom ditambahkan hingga berlebih satu ruas jari.
3. Larutan ekstrak diaduk dengan menggunakan spatula kemudian
ditutup dengan aluminium foil.

2.2.2. Prosedur Pembuatan Larutan Fasa Gerak

2.2.2.1. Metil Alkohol 60% Dalam Labu 250 ml
1. Larutan metil alkohol di ukur sebanyak 150 ml dengan
menggunakan gelas ukur dan dimasukkan ke dalam labu
250 ml.
2. Aquadest dimasukkan ke dalam labu hingga tanda batas
dan larutan dihomogenkan.

2.2.2.2. Pembuatan Larutan Dipotassium Hidrogen Fosfat Tri

Hidrat 0,1 M
1. Hablur K2HPO4.3H2O ditimbang sebanyak 0,57 gram
mengggunakan neraca analitik dengan wadah kaca arloji.
2. Hablur K2HPO4 yang telah ditimbang kemudian
dilarutkan ke dalam labu ukur 25 mL dengan aquades.
3. Aquades ditambahkan ke dalam labu ukur hingga tepat
mencapai batas.
4. Larutan dihomogenkan.

2.2.2.3. Pembuatan Larutan Potassium Dihidrogen Fosfat 0,1 M

1. Hablur KH2PO4 ditimbang sebanyak 0,34 gram
menggunakan neraca analitik pada wadah kaca arloji.

22
 2. Hablur KH2PO4 yang telah ditimbang kemudian
dilarutkan ke dalam labu ukur 25 ml dengan aquades.
3. Aquades ditambahkan ke dalam labu hingga mencapai
tanda batas pada labu ukur.
4. Campuran selanjutnya dihomogenkan.

2.2.2.4. Pembuatan Larutan Fase Gerak

1. Larutan K2HPO4.3H2O 0,1 M diambil sebanyak 25 ml
dengan menggunakan gelas ukur.
2. Selanjutnya larutan KH2PO4 diambil sebanyak 2 ml
dengan menggunakan gelas ukur.
3. Larutan KH2PO4 tersebut dimasukkan ke dalam labu
ukur yang sama.
4. Metanol 60 % ditambahkan ke dalam labu tersebut
sebanyak 50 mL.
5. Campuran dihomogenkan.

2.2.2.5. Pembuatan Larutan H2SO4 0,1 N

1. Larutan H2SO4.pekat dipipet sebanyak 0,27 ml dengan
pipet ukur 1 ml.
2. Larutan yang telah dipipet dimasukkan kedalam labu ukur
100 ml yang telah diisi 1/3 labu dengan aquadest.
3. Aquadest ditambahkan kedslam labu uku yang telah
berisi larutan H2SO4 sampai tanda batas.
4. Campuran dihomogenkan

2.2.3. Prosedur Pembuatan Larutan Internal Standar dari Internal Standar

Paracetamol Generik 500 mg Dalam Labu Ukur 100 ml
1. Paracetamol digerus dan ditimbang sebanyak 5,0000 g
menggunakan neraca analitik.

23
 2. Paracetamol yang telah ditimbang dilarutkan dengan aquadest
panas pada labu ukur 100 ml sampai sepertiga labu ukur.
3. Kemudian campuran dihomogenkan, lalu aquadest panas
ditambahkan kembali sampai tepat pada tanda batas labu ukur.
4. Lalu larutan dihomogenkan.
2.2.4. Prosedur Kerja Pembuatan Larutan Standar Kurva Kalibrasi
2.2.4.1. Pembuatan Larutan Standar Baku 200 ppm
1. Larutan induk paracetamol 50.000 ppm dipipet sebanyak
0,04 ml ke dalam botol vial 10 ml.
2. Metil alkohol 60% ditambahkan sebanyak 9.96 ml ke
dalam botol vial yang sama.
3. Botol vial ditutup.

2.2.4.2. Pembuatan Larutan Standar Baku 400 ppm

1. Larutan paracetamol 50.000 ppm dipipet sebanyak 0,08
mL ke dalam botol vial 10 ml.
2. Metil alkohol 60% ditambahkan sebanyak 9,92 ml ke
dalam botol yang sama.
3. Botol vial ditutup.

2.2.4.3. Pembuatan Larutan Standar Baku 600 ppm

1. Larutan paracetamol 50.000 ppm dipipet sebanyak 0,12 ml
ke dalam botol vial 10 ml.
2. Metil alkohol 60% ditambahkan sebanyak 8,88 ml ke
dalam botol yang sama.
3. Botol vial ditutup.
2.2.4.4. Pembuatan Larutan Standar Baku 800 ppm
1. Larutan paracetamol 50.000 ppm dipipet sebanyak 0,16
mL ke dalam botol vial 10 ml.

24
 2. Metil alcohol 60% ditambahkan sebanyak 0,84 ml ke
dalam botol yang sama.
3. Botol vial ditutup.

2.2.5. Prosedur Pembuatan Larutan Uji Fase Gerak

1. Paracetamol digerus dan ditimbang sebanyak 5,0000 g
menggunakan neraca analitik dan yang tertimbang 5,0177 g.
2. Paracetamol yang telah ditimbang dilarutkan dengan aquades
panas pada labu ukur 100 ml sampai sepertiga labu ukur.
3. Kemudian campuran dihomogenkan, lalu aquades panas
ditambahkan kembali sampai tepat pada tanda batas labu ukur.
4. Lalu larutan dihomogenkan.
5. Larutan paracetamol disaring menggunakan kertas saring
whatman dengan bantuan alat aspirator.
6. Larutan paracetamol yang telah disaring dituang ke dalam corong
pisah. Endapan paracetamol dibuang dan larutan paracetamol
yang berada didalam corong pisah dihomogenkan selama 15
menit.
7. Larutan paracetamol yang telah dihomogenkan ditambahkan
H2SO4 0,1 N sebanyak 5 tetes. Lalu ditambahkan larutan standar
100 ml dan didiamkan selama 30 menit.
8. Endapan paracetamol yang masih ada didalam corong pisah
dikeluarkan ke dalam botol vial besar.
9. Larutan paracetamol yang masih berada didalam corong pisah
dituang ke dalam labu destilasi dan dipasang kondensor.

25
 2.2.6. Pembuatan Larutan Standar Alkohol Secara Gas
Chromatography
1. Botol vial disiapkan sebanyak 4 buah dan diberi label.
2. Untuk larutan internal standar 20 ppm. Larutan etil alkohol
dipipet sebanyak 20 µL, metil alkohol sebanyak 40 µL, iso-propil
40 µL, dan aquadest destilat sebanyak 0,9 mL.
3. Untuk larutan internal standar 4 ppm. Larutan etil alkohol dipipet
sebanyak 40 µL, metil alkohol sebanyak 30 µL, iso-propil 30 µL,
dan aquadest destilat sebanyak 0,9 mL.
4. Untuk larutan internal standar 60 ppm. Larutan etil alkohol
dipipet sebanyak 60 µL, metil alkohol sebanyak 20 µL, iso-propil
20 µL, dan aquadest destilat sebanyak 0,9 mL.
5. Untuk larutan internal standar 80 ppm. Larutan etil alkohol
dipipet sebanyak 80 µL, metil alkohol sebanyak 10 µL, iso-propil
10 µL, dan aquadest destilat sebanyak 0,9 mL.
6. Botol vial yang sudah berisi larutan di grinder sampai terbentuk
twister.
2.2.7. Prosedur Injeksi Gas Chromatography (GC)
a. Injeksi Larutan Standard
1. Mengecek dan menyalakan alat.
2. Membuka aliran gas dari tabung gas.
3. Menyalakan compressor.
4. Menginjeksikan larutan standar sebanyak 2 µL
5. Mengamati hasil pada detector.
b. Injeksi Sampel
1. Mengecek dan menyalakan alat.
2. Membuka aliran gas dari tabung gas.
3. Menyalakan compressor.
4. Menginjeksikan sampel sebanyak 2µL.
5. Mengamati hasil pada detector.

26
2.2.8. Prosedur High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
a. Set semua alat
1. Kecepatan aliran pada 0 mL per menit.
2. Tekanan pada 0 kgf/cm2.
3. Pumpt reset pada constan flow.
4. Diset UV-Visible spektrofotometry detector pada panjang
gelombang 254 nm.
5. Dipakai lamp D2.
6. Ditekan tombol absorbansi dan reson standart (kepekaan
absorbansi 0,02).
7. Dihubungkan system dengan arus listrik.
8. Power detector UV-Visible spektrofotometry ke posisi ON.
9. Power recorder ke posisi ON.
10. Drain valve diputar kekiri.
11. Pada ujung pipa pembuangan dipasang disposible syringe.
12. Flow rate diatur pada 5 mL/ menit.
13. Pump pada posisi ON sambil di isap dengan disposible syringe
untuk mempercepat keluarnya udara dari ada cairan pembawa.
14. Setelah 10 mL pump dimatikan.
15. Disposible syringe dilepaskan dari ujung pipa.
16. Ujung pipa dimasukkan kedalam elemeyer.
17. Pump ke posisi ON lagi untuk memastikan udara tidak ada lagi
dalam pipa aliran.
18. Lalu pump diset ke OFF.
19. Katup pembuangan ditutup (diputar kearah kanan).
20. Lalu flow rate dinaikkan ke 1 mL / menit.
21. Hidupkan pump, tekanan akan naik sampai kira-kira 1 x 100
Kgf/cm2, cairan carier mengalir injector.
22. Analisa dilakukan pada flowrate 2 mL / menit.

27
b. Menchek stabil tidaknya alat
1. Dicari base line, dengan menekan tombol ZERO pada detector.
2. Diturunkan posisi pen.
3. Posisi drive ke ON.
c. Injeksi Fase Gerak
1. Ditekan tombol ZERO.
2. Ditekan tombol MARK.
3. Untuk injeksi, injector diputar keposisi LOAD.
4. Diumasukkan fase gerak kedalam injector ke posisi inject.
5. Dihidupkan chart drive.
d. Injerks serum
1. Ditekan tombol ZERO.
2. Ditekan tombol MARK
3. Injector diputar keposisi LOAD.
4. Dimasukkan serum kedalam injector dengan ulsyringe.
5. Injector diputar keposisi inject.
6. Dihidupkan chart drive.
e. Mematikan Alat
1. Recorder ke posisi OFF.
2. UV-Visible spektrofotometry keposisi OFF.
3. RID ke posisi OFF.
4. Pump ke posisi OFF.
5. Flow rate diturunkan 1 mL / menit.
6. Pump dihidupkan lagi, kemudian diatur ke OFF lagi.
7. Flow rate diturunkan perlahan-lahan hingga 0 mL / menit.
8. Lalu kolom dicuci dengan CH3OHs.

28
2.2.9. Persiapan Uji Ekstrak Chlropyl Secara Paper Chromatography
1. Cairan Klorofil dituang ke cawan dengan sedikit daun.
2. Paper Chromatography yang telah diberi tanda ditandai pada
dengan spidol Chromatography tiap titik kiri (hujau tua)dan
titik kanan(hijau muda).
3. Pada titik diruas kiri ditetesi dengan pelarut dari chamber
dengan menggunakan spottest.
4. Pada titik diruas tengah ditetesi dengan cairan dari cawan
dengan menggunakan spottest.
5. Pada titi diruas kanan ditetesi dengan serat dari cawan dengan
menggunakan spottest.
6. Paper Chromatography dimasukkan kedalam chamber yang
berisi pelarut (khloroform,aseton,n-hexane dan aseton+n-
Hexane)
7. Chamber ditutup dengan cawan petridish kemuduan
didiamkan 30 menit.
8. Setelah 30 menit, cawan petridish dibuka lalu Paper
Chromatography dipanaskan pada heating PLC.pola yang
terbentuk ditandai dan diukur ketinggiannya.
9. Pola yang tidak terlihat dimasukkan ke TLC Spray Chamber
lalu diamati pola pada Paper Chromatography.

29
 BAB III

GAMBAR RANGKAIAN
3.1 Gambar Alat

Gambar 3.1 Corong Buchner Filter Gambar 3.2 Sokhlet

Gambar 3.3 Botol Vial Gambar 3.4 Oven

30
Gambar 3.5 Corong Pisah Gambar 3.6. Botol Vial 1,5 ml

Gambar 3.7 Pipet Mikro Gambar 3.8 Pompa vacum

31
Gambar 3. 9. Bola Hisap Gambar 3.10. Neraca Analitik

Gambar 3.11. Cawan Petri Gambar 3.12. Spatula

Gambar 3.13. Pipet tetes Gambar 3.14. Pipet volume

Gambar 3.15. Gelas ukur Gambar 3.16. Statif dan Klem

32
Gambar 3.17. Beakerglass Gambar 3.18. Labu Ukur

Gambar 3.19. Corong Kaca

33
3.2 Gambar Rangkaian
a. Gas Chromatography (GC)

b. High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

34
3.3 Keterangan Gambar
a. Gas Chromatography (GC)
1. Gas pengangkut/pemasok gas
Gas pengangkut (carrier gas) ditempatkan dalam silinder
bertekanan tinggi. Biasanya tekanan dari silinder sebesar 150 atm.
2. Pengatur aliran dan pengatur tekanan
Ini disebut pengatur atau pengurang Drager. Drager bekerja
baik pada 2,5 atm, dan mengalirkan massa aliran dengan tetap.
Tekanan lebih pada tempat masuk dari kolom diperlukan untuk
mengalirkan cuplikan masuk ke dalam kolom.
3. Tempat injeksi(The injection port)
Dalam pemisahan dengan GLC cuplikan harus dalam bentuk
fase uap. Gas dan uap dapat dimasukkan secara langsung.
4. Kolom
Kolom merupakan jantung dari kromatografi gas. Bentuk
dari kolom dapat lurus, bengkok, misal berbentuk V atau W, dan
kumparan/spiral.Biasanya bentuk dari kolom adalah kumparan.
Tabung ini dapat terbuadari tembaga (murah dan mudah
diperoleh), Plastik (teflon) dipakai pada suhu yang tidak terlalu
tinggi, Baja (stainless steel) mahal,Alumunium, dan Gelas.
5. Detektor
Detektor berfungsi sebagai pendeteksi komponen-komponen
yang telah dipisahkan dari kolom secara terus-menerus, cepat,
akurat, dan dapat melakukan pada suhu yang lebih tinggi.
6. Oven kolom
Kolom terletak didalam sebuah oven dalam instrumen. Suhu
oven harus diatur dan sedikit dibawah titik didih sampel.
7. Rekorder
Rekorder berfungsi sebagai pengubah sinyal dari detektor
yang diperkuat melalui elektrometer menjadi bentuk kromatogram.

35
 Dari kromatogram yang diperoleh dapat dilakukan analisis kualitatif
dan kuantitatif.
b. High Performance Liquid Chromatoraphy (HPLC)
1. Wadah Fase gerak dan Fase gerak
Wadah fase gerak harus bersih dan lembam (inert).Wadah
pelarut kosong ataupun labu laboratorium dapat digunakan
sebagai wadah fase gerak.Wadah ini biasanya dapat menampung
fase gerak antara 1 sampai 2 liter pelarut.Fase gerak atau eluen
biasanya terdiri atas campuran pelarut yang dapat bercampur yang
secara keseluruhan berperan dalam daya elusi dan resolusi.
2.Pompa
Pompa yang cocok digunakan untuk HPLC adalah pompa
yang mempunyai syarat sebagaimana syarat wadah pelarut yakni:
pompa harus inert terhadap fase gerak. Bahan yang umum
dipakai untuk pompa adalah gelas, baja tahan karat, Teflon, dan
batu nilam.Pompa yang digunakan sebaiknya mampu
memberikan tekanan sampai 5000 psi dan mampu mengalirkan
fase gerak dengan kecepatan alir 3 mL/menit.
3. Tempat penyuntikan sampel
Sampel-sampel cair dan larutan disuntikkan secara langsung
ke dalam fase gerak yang mengalir di bawah tekanan menuju
kolom menggunakan alat penyuntik yang terbuat dari tembaga
tahan karat dan katup teflon yang dilengkapi dengan keluk
sampel (sample loop) internal atau eksternal.
4. Kolom dan Fase diam
Ada 2 jenis kolom pada HPLC yaitu kolom konvensional
dan kolom mikrobor. Kolom merupakan bagian HPLC yang
mana terdapat fase diam untuk berlangsungnya proses pemisahan
solut/analit.

36
5. Detektor HPLC
Detektor pada HPLC dikelompokkan menjadi 2 golongan
yaitu: detektor universal (yang mampu mendeteksi zat secara
umum, tidak bersifat spesifik, dan tidak bersifat selektif) seperti
detektor indeks bias dan detektor spektrometri massa; dan
golongan detektor yang spesifik yang hanya akan mendeteksi
analit secara spesifik dan selektif, seperti detektor UV-Vis,
detector fluoresensi, dan elektrokimia.

37
 BAB IV
DATA PENGAMATAN

4.1. Standar HPLC Kelompok I

Tabel 4.1 Data Pengamatan Standart HPLC I
Ret Tailing Theoritical
Peak Area Height HETP Resolution
Time factor Plate
211,2
1 2,805 125772 10255 0,600 0,00 1183
5
174,4
2 3,286 1803521 156543 0,638 1,39 1433
3
3 4,459 294588 22978 0,574 76,50 3,76 3268
4 5,933 26105 2301 0,648 55,20 4,18 4529
Total 2249986

4.2 Standart HPLC Kelompok II

Tabel 4.2. Data Pengamatan Standart HPLC II
Peak Ret Area Height Tailing HETP Resolution Theoritical
Time factor Plate
1 2,797 86173 10183 0,869 446,27 0,00 560
2 3,307 1286754 116188 0,664 186,38 1,41 1341
3 4,437 248365 17773 0,526 65,03 3,95 3844
4 5,983 17641 1700 0,709 64,88 4,01 3853
Total 1638933 145845

38
 4.3 Standart GC Kelompok I
4.3.1. Standart EtOH 10%
Tabel 4.3. Data Pengamatan standart EtOH 10%
Peak Peak
Peak Ret.Time Area Height Conc Units
Start End

1 1,132 1,083 1,195 1078 383 0,000

2 1,249 1,195 1,321 1223 376 0,000

3 1,379 1,321 1,480 1385 379 0,000

4 1,550 1,480 1,722 2156 441 0,000

5 1,842 1,727 1,951 1153 150 0,000

6 2,609 2,054 2,684 2107 44 0,000

7 4,210 3,878 4,242 1970 79 0,000

8 6,323 5,502 8,041 816436245 24069513 0,000

9 8,594 8,041 9,436 2426568 48677 0,000

Total 818873885

4.3.2. Standart EtOH 20%

Tabel 4.4. Data Pengamatan Standart EtOH 20%

Peak Peak
Peak Ret.Time Area Height Conc Units
Start End

1 1,608 1,541 1,681 1698 492 0,000

39
 2 1,759 1,681 1,839 2477 584 0,000

3 1,929 1,844 2,045 3000 619 0,000

4 4,182 3,850 4,317 5600 280 0,000

5 6,260 5,451 9,404 1725614191 51889732 0,000

6 8,475 8,102 9,208 737192 22941 0,000

Total 1726364158

4.3.3. Standart EtOH 30%

Tabel 4.5. Data Pengamatan Standart EtOH 30%
Peak Ret.Time Peak Peak Area Height Conc. Units
1 6,265 5,475
Start 9,455
End 2677649268 80725119 0,000
2 8,438 8,298 9,063 290391 10580 0,000
3
Total 2677939659

4.3.4. Sampel X1
Tabel 4.6. Data Pengamatan Sampel X1
Peak Ret. Peak Peak Area Height Conc. Units
Time Start End
1 0,374 0,169 0,467 1837 129 0,000
2 1,118 1,004 1,424 61824 3442 0,000
3 1,461 1,424 1,583 8973 1254 0,000
4 1,613 1,583 1,662 1116 304 0,000
5 2,521 1,662 2,549 7315 464 0,000
6 2,599 2,549 2,628 1688 371 0,000
7 2,769 2,628 2,824 2345 177 0,000
8 5,425 4,952 5,647 75188 2739 0,000

40
 9 6,508 5,769 9,446 73649887 2055638 0,000
10 8,730 8,349 9,371 314337 12830 0,000
Total 74124510

4.4. Standart GC Kelompok II

4.4.1. Standart EtOH 10%
Tabel 4.7. Data Pengamatan Standart EtOH 10%
Peak Peak
Peak Ret.Time Area Height Conc Units
Start End

1 0,051 0,010 0,117 1753 584 0,000

2 6,233 5,470 8,102 789709174 23643431 0,000

3 8,550 8,237 9,213 389701 12834 0,000

Total 790100628

4.4.2. Standart EtOH 20%

Tabel 4.8. Data Pengamatan Standart EtOH 20%
Peak Peak
Peak Ret.Time Area Height Conc Units
Start End

1 0,041 0,010 0,113 1006 378 0,000

2 2,829 2,301 2,889 2823 54 0,000

3 6,233 5,437 9,479 1718241017 51619350 0,000

4 8,394 8,312 9,031 164744 4705 0,000

Total 1718409590

41
4.4.3. Standart EtOH 30%
Tabel 4.9. Data Pengamatan Standart EtOH 30%
Peak Ret.Time Peak Peak Area Height Conc. Units
1 5,353 5,027
Start 5,428
End 11448 613 0,000
2 6,258 5,470 9,479 2619420497 78821134 0,000
3 8,441 8,335 9,031 231584 8218 0,000
Total 2619663529

4.4.4. Sampel X2
Tabel 4.10. Data Pengamatan Sampel X2
Peak Ret. Peak Peak Area Height Conc. Units
Time Start End
1 5,129 4,728 5,605 145056 6264 0,000
2 6,372 5,694 8,064 30799682 879665 0,000
3 8,626 9,282 9,282 382751 13832 0,000
Total 31327489

42
4.5. Pengamatan Kertas Kromatografi
4.5.1. Kelompok I
1. Aseton

2. Hexane

3. Aseton + Hexane

4. Kloroform

43
4.5.2. Kelompok II
1. Aseton

2. Hexane

3. Aseton + Hexane

4. Kloroform

44
 BAB V
ANALISA DATA

5.1 Preparasi Kromatografi untuk HPLC

5.1.1 Pembuatan Larutan Standard dari Internal Standar
Paracetamol Generic 50 mg dalam 100 ml

Dik : Berat kaca arloji kosong = 27,2490 gram

Berat kaca arloji + paracematamol = 32,2497 gram
Berat paracetamol = 5,0007 gram
Volume larutan = 100 ml
Dit : ppm…..?
Jawab :
berat zat terlarut
ppm = x 106 mg/l
volume larutan
5,0007 𝑚𝑔
= x 106 mg/l
100

= 50.007 ppm

Pembuatan Larutan Standar Kurva Kalibrasi 200, 400, 600, 800 ppm

a. 200 ppm
V1.N = V2.N2
V1.50000 ppm = 10 ml . 200 ml
V1 = 0,04 ml
MeOH 60% = 10 ml - 0,04 ml
= 9,96 ml

b. 400 ppm
V1.N1 = V2.N2
V1.50000 ppm = 10 ml . 400 ppm
V1 = 0,06 ml

45
 MeOH 60% = 10 ml - 0,06 ml
MeOH 60% = 10 ml - 0,04 ml
= 9,94 ml
c. 600 ppm
V1.N1 = V2.N2
V1.50000 ppm = 10 ml . 600 ppm
V1 = 0,12 ml

MeOH 60% = 10 ml - 0,12 ml

= 9,88 ml
d. 800 ppm
V1.N1 = V2.N2
V1.50000 ppm = 10 ml . 800 ppm
V1 = 0,16 ml
MeOH 60% = 10 ml - 0,16ml
= 9,84 ml

5.2 Pembuatan Fase Gerak HPLC

5.2.1 Pembuatan Potasium Dihidroposfat
Dik : N = 0,1 M
V = 100 ml
BM = 228 g/mol

Dit : gram…..?
𝑔𝑟𝑎𝑚
Jawab: N = 𝐵𝑀 𝑋 𝑉(𝑙)

gram = N x BM x V(l)
= 0,1 mol/l x 228 g/mol x 0,1 l
= 2,28 gram
Berat kaca arloji kosong = 28,2490 gram
Berat kaca arloji + Potasium Dihidroposfat = 30,5296 gram

46
 Jadi, berat Potasium Dihidroposfat yang ditimbang = 2,2806 gram
5.2.2 Pembuatan Larutan Sampel (Paracetamol)
Dik : g sampel = 500 mg
Vol. sampel = 100 Ml
Dit : ppm..?
Jawab :
500 𝑚𝑔
ppm = 0,1 𝐿

= 5000 ppm
5.2.3 Pembuatan Metil Alkohol
volume terlarut
Dik : MeOH 60% v⁄v = volume larutan x 100%

volume terlarut
60% = x 100%
250 ml

15000 ml
volume terlarut =
100

volume terlarut = 150 ml

5.3 Ekstraksi Klorofil dari Daun Kangkung

Nama sampel : Daun kangkung
Nama pelarut : n-heksan
Ketinggian sampel klorofil : B1 Clp 1 = 5 cm
B2 Clp 2 = 5 cm
Ketinggian sampel setelah ekstraksi : B1 Clp 1 = 6 cm
B2 Clp 2 = 6 cm

5.4 Perhitungan Massa Larutan Standard

5.4.1 Larutan standard EtOH 10%
10% = 10% x 10 ml = 1ml
Met = 4 ml, Et= 1ml, Ipa= 5 ml

47
 Massa = V x density
m Methanol = 0,79 gr/ml x 4 ml

= 3,16 gr

m Ethanol = 0,789 gr/ml x 1 ml

= 0,789 gr

M Iso propyl alkohol = 0,786 gr/ml x 5 ml

= 3,93 gr

Molalitas
3,16 𝑔𝑟 1000 𝑔𝑟/𝑘𝑔
Metanol = 32 𝑔𝑟/𝑚𝑜𝑙 x 7,879 𝑔𝑟

= 12,53 M
0,789 𝑔𝑟 1000 𝑔𝑟/𝑘𝑔
Etanol = 46 𝑔𝑟/𝑚𝑜𝑙 x 7,879 𝑔𝑟

= 2,17 M
3,93 𝑔𝑟 1000 𝑔𝑟
Ipa = 60 𝑔𝑟/𝑚𝑙 x 7,879 𝑔𝑟/𝑚𝑙

= 8,31 M
5.4.2 Larutan standard EtOH 20%
20% = 20% x 10 ml = 2ml
Met = 3 ml, Et= 2ml, Ipa= 5 ml
Massa = V x density
m Methanol = 0,79 gr/ml x 3 ml
= 2,37gr
m Ethanol = 0,789 gr/ml x 2 ml

48
5.5 Perhitungan Regresi Linear Sederhana
5.5.1 Kelompok 1
No X Y X2 Y2 XY
15818595984 25154400
1 200 125772 40000

3,25269 x 1012 721408400

2 400 1803521 160000

86782089744 176752800
3 600 294588 360000

681471025 20884000
4 800 26105 640000

944199600
Σ=4 2000 2249986 1200000 3,35597 x 1012

Tabel 5.4.1. Tabel Perhitungan Regresi Linear

𝑛𝛴 (𝑥𝑦)−(𝛴𝑥)(𝛴𝑦)
b = 𝑛 𝛴𝑥 2 − 𝛴(𝑥)2

4 (944199600)−(2000) (2249986)
= 4 (1200000)−(4000000)

−723173600
= 800000

= -903,967

𝑦−𝑏𝑥
a = 𝑛

2249986+903,967 (2000)
= 4

= 1014480

49
 Jadi, didapat persamaan regresi sebesar :

Y = 1014480 – 903,967x

Perhitungan Koefisien Korelasi

𝐧 ∑ 𝐱.𝐲−∑ 𝐱.∑ 𝐲
R=
√[ 𝐧 ∑ 𝐱 𝟐 − (∑ 𝐱)𝟐 ] [ 𝐧 ∑ 𝐲 𝟐 − (∑ 𝐲)𝟐 ]

4 (944199600)−(2000) (2249986)
=
√[4 (1200000)−(4000000) ] [4(3,35597 x 1012 −5,062437 𝑥 1012

−723173600
=
√(800000)(−1,706467 x 1012 )

−723173600
= 𝟏𝟏𝟔𝟖𝟒𝟎𝟔𝟒𝟑𝟔

= -0,6189

R2 = (-0,6189)2

= 0,3830

Grafik x vs y
2000000
1800000
1600000
1400000
Luas area

1200000
1000000
800000 Series1
600000 Linear (Series1)
400000 y = -903.97x + 1E+06
200000 R² = 0.0782
0
0 200 400 600 800 1000
Konsentrasi

50
5.5.2 Kelompok II

No X Y X2 Y2 XY
7425785929 17234600
1 200 86173 40000

1,65574 x 514701600
2 400 1286754 160000
1012
61685173225 149019000
3 600 248365 360000

311204881 14112800
4 800 17641 640000

1638933 1,72516 x 695068000

Σ=4 2000 1200000
1012
Tabel 5.2. Tabel Perhitungan Regresi Linear

𝑛𝛴 (𝑥𝑦)−(𝛴𝑥)(𝛴𝑦)
b = 𝑛 𝛴𝑥 2 − 𝛴(𝑥)2

4 (695068000)−(2000) (1638933)
= 4 (1200000)−(4000000)

−497594000
= 800000

= -621,9925

𝑦−𝑏𝑥
a = 𝑛

1638933+621,9925 (2000)
= 4

= 720729,5

Jadi, didapat persamaan regresi sebesar :

51
Y = 720729,5 – 621,9925x

Perhitungan Koefisien Korelasi

𝐧 ∑ 𝐱.𝐲−∑ 𝐱.∑ 𝐲
R=
√[ 𝐧 ∑ 𝐱 𝟐 − (∑ 𝐱)𝟐 ] [ 𝐧 ∑ 𝐲 𝟐 − (∑ 𝐲)𝟐 ]

4 (695068000)−(2000) (1638933)
=
√[4 (1200000)−(4000000) ] [4(1,72516 x 1012 − 2,68610 𝑥 1012 )]

−497594000
=
√(800000)(4,21454 x 1012 )

−497594000
= 𝟏𝟖𝟑𝟔𝟐𝟎𝟎𝟒𝟐𝟓

= -0,2709

R2 = (-0,2709)2

= 0,0733

52
 Grafik x vs y
1400000
1200000
1000000
Luas area

800000
600000 Series1
400000 Linear (Series1)
y = -621.99x + 720730
200000 R² = 0.0734
0
0 200 400 600 800 1000
Konsentrasi

5.6 Perhitungan Gas Chromatography (GC)

5.6.1 Pembuatan Larutan Standar Kurva Kalibrasi Dengan Etil Alkohol
Sebagai Larutan Standar

1. GC 20 %
𝐺𝐶 1 = 20 % = 100 − 20 = 80
𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 = 20 µ𝑙
𝑀𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 = 40 µ𝑙
𝐼𝑠𝑜𝑝𝑟𝑜𝑝𝑖𝑙 𝐴𝑙𝑘𝑜ℎ𝑜𝑙 = 40 µ𝑙
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 = 100 µ𝑙 = 0,1 𝑚𝑙
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑃𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 = 1 𝑚𝑙 − 0,1 𝑚𝑙 = 0,9 𝑚𝑙
2. GC 40 %
𝐺𝐶 2 = 40 % = 100 − 40 = 60
𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 = 40 µ𝑙
𝑀𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 = 30 µ𝑙
𝐼𝑠𝑜𝑝𝑟𝑜𝑝𝑖𝑙 𝐴𝑙𝑘𝑜ℎ𝑜𝑙 = 30 µ𝑙
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 = 100 µ𝑙 = 0,1 𝑚𝑙
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑃𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 = 1 𝑚𝑙 − 0,1 𝑚𝑙 = 0,9 𝑚𝑙
3. GC 60 %

53
 𝐺𝐶 3 = 60 % = 100 − 60 = 40
𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 = 60 µ𝑙
𝑀𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 = 20 µ𝑙
𝐼𝑠𝑜𝑝𝑟𝑜𝑝𝑖𝑙 𝐴𝑙𝑘𝑜ℎ𝑜𝑙 = 20 µ𝑙
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 = 100 µ𝑙 = 0,1 𝑚𝑙
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑃𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 = 1 𝑚𝑙 − 0,1 𝑚𝑙 = 0,9 𝑚𝑙
4. GC 80 %
𝐺𝐶 4 = 80 % = 100 − 80 = 20
𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 = 80 µ𝑙
𝑀𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 = 10 µ𝑙
𝐼𝑠𝑜𝑝𝑟𝑜𝑝𝑖𝑙 𝐴𝑙𝑘𝑜ℎ𝑜𝑙 = 10 µ𝑙
𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 = 100 µ𝑙 = 0,1 𝑚𝑙
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑃𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 = 1 𝑚𝑙 − 0,1 𝑚𝑙 = 0,9 𝑚𝑙
5.6.1 Perhitungan Massa Larutan Standard
1. Larutan standard 20 ppm
V = 20 µl = 0,02 ml
Massa = V x ρ
a. Massa Metanol = 0,02 ml x 0,793 gr/ml
= 0,01586 gr
b. Massa Etanol = 0,02 ml x 0,791 gr/ml
= 0,01582 gr
c. Massa Isopropyl Alkohol = 0,02 ml x 0,786 gr/ml
= 0,01572 gr
d. Massa Total = Metanol + Etanol + Isopropyl Alkohol
= (0,01586 + 0,01582 + 0,01572) gr
= 0,0474 gr
Volume Total = 0,02 ml x 3 = 0,06 ml
Volume Injeksi = 20 µl = 2 x 10-3
Konsentrasi Standard 20 ppm

54
𝑋1 𝑋2
=
𝑉1 𝑉2
0,0474 𝑋2
=
0,06 0,002
𝑋2 = 0,00158 𝑔𝑟

2. Larutan standard 40 ppm

V = 40 µl = 0,04 ml
Massa = V x ρ
a. Massa Metanol = 0,04 ml x 0,793 gr/ml
= 0,03172 gr
b. Massa Etanol = 0,04 ml x 0,791 gr/ml
= 0,03164 gr
c. Massa Isopropyl Alkohol = 0,04 ml x 0,786 gr/ml
= 0,03144 gr
d. Massa Total = Metanol + Etanol + Isopropyl Alkohol
= (0,03172 + 0,03164 + 0,03144) gr
= 0,0948 gr
Volume Total = 0,04 ml x 3 = 0,12 ml
Volume Injeksi = 20 µl = 2 x 10-3
Konsentrasi Standard 40 ppm
𝑋1 𝑋2
=
𝑉1 𝑉2
0,0948 𝑋2
=
0,12 0,002
𝑋2 = 0,00158 𝑔𝑟

3. Larutan standard 60 ppm

V = 60 µl = 0,06 ml
Massa = V x ρ
a. Massa Metanol = 0,06 ml x 0,793 gr/ml

55
 = 0,04758 gr
b. Massa Etanol = 0,06 ml x 0,791 gr/ml
= 0,04746 gr
c. Massa Isopropyl Alkohol = 0,06 ml x 0,786 gr/ml
= 0,04716 gr
d. Massa Total = Metanol + Etanol + Isopropyl Alkohol
= (0,04758 + 0,04746 + 0,04716) gr
= 0,1422 gr
Volume Total = 0,06 ml x 3 = 0,18 ml
Volume Injeksi = 20 µl = 2 x 10-3
Konsentrasi Standard 20 ppm
𝑋1 𝑋2
=
𝑉1 𝑉2
0,1422 𝑋2
=
0,18 0,002
𝑋2 = 0,00158 𝑔𝑟

4. Larutan standard 80 ppm

V = 80 µl = 0,08 ml
Massa = V x ρ
a. Massa Metanol = 0,08 ml x 0,793 gr/ml
= 0,06344 gr
b. Massa Etanol = 0,08 ml x 0,791 gr/ml
= 0,06328 gr
c. Massa Isopropyl Alkohol = 0,08 ml x 0,786 gr/ml
= 0,06288 gr
d. Massa Total = Metanol + Etanol + Isopropyl Alkohol
= (0,06344 + 0,06328 + 0,06288) gr
= 0,1896 gr
Volume Total = 0,08 ml x 3 = 0,24 ml

56
 Volume Injeksi = 20 µl = 2 x 10-3
Konsentrasi Standard 80 ppm
𝑋1 𝑋2
=
𝑉1 𝑉2
0,1896 𝑋2
=
0,24 0,002
𝑋2 = 0,00158 𝑔𝑟

5.6.2 Perhitungan Regresi Linier Sederhana

a. Kelompok I
n X Y X2 Y2 XY
1 20 668158116 400 4,4643526798 x 1017 13363162320
17
2 40 1718409590 1600 29,52931519 x 10 68736383600
17
3 60 2619663529 3600 68,626370052 x 10 157179811740
∑ 120 5006231235 5600 102,62003792 x 1017 239279357660

Tabel 5.6.2 Tabel Perhitungan Regresi Linier

Persamaan yang digunakan untuk mendapatkan garis linier adalah :

y = a + bx
Dimana nilai b pada persamaan tersebut dengan menggunakan rumus
sebagai berikut :
n(ΣXY) − ((ΣX)(ΣY))
𝑏=
n(ΣX 2 ) − (ΣX)2
3(239279357660) − ((120)(5006231235))
𝑏=
3(5600) − (120)2
117090324780
𝑏=
2400

57
𝑏 = 48787635,325

Maka nilai a :

ΣY ΣX
𝑦̅ = ;𝑥=
𝑛 𝑛

5006231235 120
𝑦̅ = ; 𝑥̅ =
3 3

𝑦̅ = 1668743745 ; 𝑥̅ = 40

Jadi :

𝑎=𝑦− 𝑏𝑥
𝑎 = 1668743745 − (48787635,325) (40)
𝑎 = −282761668
Maka dari hasil perhitungan yang diperoleh di dapat persamaan
regresi:
y = a + bx menjadi y = −282761668 + 48787635,325x
Jadi, Konsentrasi sampel X5 adalah :
y = −282761668 + 48787635,325x
2495993290 = −282761668 + 48787635,325x
x = 56,956131 ppm

58
 Grafik x vs y
3E+09
y = 5E+07x - 3E+08
2.5E+09 R² = 0.9981
2E+09
Luas area

1.5E+09
Series1
1E+09 Linear (Series1)
500000000

0
0 20 40 60 80
Konsentrasi

b. Kelompok II
n X Y X2 Y2 XY
1 20 668158116 400 4,4643526798 x 1017 13363162320
2 40 1718409590 1600 29,52931519 x 1017 68736383600
17
3 60 2619663529 3600 68,626370052 x 10 157179811740
∑ 120 5006231235 5600 102,62003792 x 1017 239279357660
Tabel 5.6.2 Tabel Perhitungan Regresi Linier

Persamaan yang digunakan untuk mendapatkan garis linier adalah :

y = a + bx
Dimana nilai b pada persamaan tersebut dengan menggunakan
rumus sebagai berikut :
n(ΣXY) − ((ΣX)(ΣY))
𝑏=
n(ΣX 2 ) − (ΣX)2
3(239279357660) − ((120)(5006231235))
𝑏=
3(5600) − (120)2
117090324780
𝑏=
2400
𝑏 = 48787635,325

Maka nilai a :

59
 ΣY ΣX
𝑦̅ = ;𝑥=
𝑛 𝑛

5006231235 120
𝑦̅ = ; 𝑥̅ =
3 3

𝑦̅ = 1668743745 ; 𝑥̅ = 40

Jadi :

𝑎=𝑦− 𝑏𝑥
𝑎 = 1668743745 − (48787635,325) (40)
𝑎 = −282761668
Maka dari hasil perhitungan yang diperoleh di dapat persamaan
regresi:
y = a + bx menjadi y = −282761668 + 48787635,325x
Jadi, Konsentrasi sampel X4 adalah :

y = −282761668 + 48787635,325x
98540447 = −282761668 + 48787635,325x
x = 7,81554819 ppm

Grafik x vs y
3E+09
y = 5E+07x - 3E+08
2.5E+09 R² = 0.9981
2E+09
Luas area

1.5E+09
Series1
1E+09 Linear (Series1)
500000000

0
0 20 40 60 80
Konsentrasi

60
5.7 Uji presisi Retensi Waktu
Tabel 5.7.1 Analisis Presisi Retensi Waktu Pada HPLC
Konsentrasi
No Injeksi Ret. Time Area
(ppm)
1. B3LCs1 200 3,2860 1807703
2. B4LCs1 200 3,2860 1808011
3. B3LCs2 400 3,3070 1285908
4. B4LCs2 400 3,3070 1286754
5. B3LCs3 600 3,3110 850711
6. B4LCs3 600 3,3110 850067
Average 3,3013 1314859
SD 0,01201111 428762,6672
RSD 0,36382591 32,60902251

Tabel 5.7.2 Analisis Presisi Retensi Waktu Pada Gas Cromatography

Konsentrasi
No Injeksi Ret. Time Area
(%)
1. Gcd 3 10 6,3230 816436245
2. Gcd 4 10 6,2870 6678598560
3. Gcd 3 20 6,2600 1725614191
4. Gcd 4 20 6,2330 1718241017
5. Gcd 3 40 6,2650 2677649268
6. Gcd 4 40 6,2580 2619420497
Average 6,2710 2705993296
SD 0,030757113 2063836933
RSD 0,490465843 76,26910737

5.7.1. Mengukur Besar Puncak Kromatogram

a. Pengukuran Tinggi Puncak (Kelompok 1)
1. B3LCs1
Tinggi puncak (H) = 610 mm
2. B3LCs2
Tinggi puncak (H) = 570 mm

61
 3. B3LCs3
Tinggi puncak (H) = 600 mm
b. Pengukuran Tinggi Puncak (Kelompok 2)
1. B4LCs1
Tinggi puncak (H) = 610mm
2. B4LCs2
Tinggi puncak (H) = 570 mm
3. B4LCs3
Tinggi puncak (H) = 600 mm

5.7.2 Pengukuran Luas Puncak (kelompok 1)

a. B3LCs1
(W) = 40 mm
Luas Puncak = ½ WH
= 1/2. 40 mm. 610 mm
= 12.200 mm2

b. B3LCs2
(W) = 50 mm
Luas Puncak = ½ WH
= ½. 50 mm. 570 mm

= 14.250 mm2

c. B3LCs3
(W) = 50 mm
Luas Puncak = ½ WH
= ½. 50 mm. 600 mm
= 15.000 mm2

62
5.7.2 Pengukuran Luas Puncak (kelompok 2)
1. B4LCs1
(W) = 40 mm
Luas Puncak = ½ WH
= ½. 40 mm. 610 mm
=12.200 mm2
2. B4LCs2
(W) = 50 mm
Luas Puncak = ½ WH
= ½. 50 mm. 570 mm
= 14.250 mm2
3. B4LCs3
(W) = 50 mm
Luas Puncak = ½ WH
= ½. 50 mm. 600 mm
= 15.000 mm2
5.7.3 Selektivitas dan Efesiensi Pemisahan

a. Analisa Efisiensi pemisahan (Kelompok 1)

1. B3LCs1
𝑅𝑡 2
N = 16 ( 𝑊 )
3,286
= 16 ( )2
40

= 0,1079
2. B3LCs2
𝑅𝑡
N = 16 ( 𝑊 )2

3,307 2
= 16 ( )
50

= 0,0699

63
 3. B3LCs3
𝑅𝑡
N = 16 ( 𝑊 )2

3,311 2
= 16 ( )
50

= 0,0701

b. Analisa Efisiensi pemisahan (Kelompok 2)

1. B4LCs1
𝑅𝑡
N = 16 ( 𝑊 )2
3,286 2
= 16 ( )
40

= 0,1079
2. B4LCs2
𝑅𝑡
N = 16 ( 𝑊 )2
3,307 2
= 16 ( )
50

= 0,0699
3. B4LCs3
𝑅𝑡
N = 16( 𝑊 )2
3,311 2
= 16 ( )
50

= 0,0701

5.7.4 Analisa Faktor Kapasitas

a. Analisa Faktor Kapasitas Kelompok 1
1. B3LCs1
𝑡𝑟− t0
K’ = t0

210 𝑚𝑚− 180mm

K’ = 180 mm

= 0,1666

64
 2. B3LCs2
𝑡𝑟− t0
K’ = t0

210 𝑚𝑚− 180mm

K’ = 180 mm

= 0,1666

3. B3LCs3
𝑡𝑟− t0
K’ = t0

210 𝑚𝑚− 180mm

K’ = 180 mm

= 0,1666

b. Analisa Faktor Kapasitas Kelompok 2

1. B4LCs1
𝑡𝑟− t0
K’ = t0

210 𝑚𝑚− 180mm

K’ = 180 mm

= 0,1666

2. B4LCs2
𝑡𝑟− t0
K’ = t0

210 𝑚𝑚− 180mm

K’ = 180 mm

= 0,1666

3. B4LCs3
𝑡𝑟− t0
K’ = t0

210 𝑚𝑚− 180mm

K’ = 180 mm

= 0,1666

65
5.8 Perhitungan Nilai Rf Pada Percobaan Kertas
a. Sampel Daun Sawi
1. Chamber ke-1 (Pelarut Aseton)
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝐴𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡
𝑅𝑓 =
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝑆𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡

8 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = =1
8 𝑐𝑚

2. Chamber ke-2 (Pelarut Kloroform)

𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝐴𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡
𝑅𝑓 =
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝑆𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡

6,5 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,81
8 𝑐𝑚

3. Chamber ke-3 (Pelarut n-Hexane)

𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝐴𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡
𝑅𝑓 =
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝑆𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡

3,6 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,45
8 𝑐𝑚

4. Chamber ke-4 (Pelarut Aseton : n-Hexane)

𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝐴𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡
𝑅𝑓 =
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝑆𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡

5,2 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,65
8 𝑐𝑚

b. Daun Seledri
1. Chamber ke-1 (Pelarut Aseton)
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝐴𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡
𝑅𝑓 =
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝑆𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡

8 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = =1
8 𝑐𝑚

66
2. Chamber ke-2 (Pelarut Kloroform)
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝐴𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡
𝑅𝑓 =
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝑆𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡

6,8 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,85
8 𝑐𝑚

3. Chamber ke-3 (Pelarut n-Hexane)

𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝐴𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡
𝑅𝑓 =
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝑆𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡

0,3 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,0375
8 𝑐𝑚

4. Chamber ke-4 (Pelarut Aseton : n-Hexane)

𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝐴𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡
𝑅𝑓 =
𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝐾𝑒𝑡𝑖𝑛𝑔𝑔𝑖𝑎𝑛 𝑆𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡

4,1 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,51
8 𝑐𝑚

67
 BAB VI
KESIMPULAN DAN SARAN

6.1. Kesimpulan
Dari percobaan dan perhitungan yang telah dilakukan dapat
disimpulkan bahwa :
1. Persamaan regresi linear sederhana HPLC kelompok 1 diperoleh y = -
621,99x +720730 dan persamaan regresi linear sederhana HPLC
kelompok 2 diperoleh y = 1x106 −903,97 x.
2. Persamaan linear GC kelompok 1 diperoleh y = −3𝐸 + 08 − 5𝐸 +
07𝑥x dan persamaan linear GC kelompok 2 diperoleh y = 5𝐸 +
07𝑥 − 3𝐸 + 08x. .
3. Dari harga koefisien korelasi yang diperoleh pada HPLC dan GC
kelompok 1 serta kelompok dapat disimpulkan bahwa konsentrasi
dan luas area memiliki hubungan yang erat.
4. Dari perhitungan Rf pada percobaan kertas kromatografi diperoleh
bahwa nilai Rf dengan pelarut aseton lebih besar daripada pelarut
aseton + n-hexane, n-hexane dan kloroform.

6.2. Saran
Dalam praktikum disarankan menggunakan sampel yang lain untuk
menghasilkan data yang lebih bervariasi. Dan dengan adanya data yang
akurat dan lebih lengkap akan memudahkan dalam pengolahan data.

68
 DAFTAR PUSTAKA

Barus, Adil. 2019. Diktat Kimia Analisa Instrument. Medan : PTKI Medan.

Day Jr., R.A., A.L. Underwood. 2013. Analisa Kimia Kuantitatif. Jakarta:
Erlangga.

Khopkar S.M. 1990. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta : Penerbit Universitas
Indonesia.

Pirdaus, Purna, dkk. 2018.Verifikasi Metode Analisis Logam Pb, Cd, Cl, Cu, Ni,
Co, Fe, Mn, dan Ba pada Air Menggunakan Inductivly Coupled
Plasma-Optical Emission Spektrofotometer (ICP-OES). Lampung:
Universitas Lampung.

69