4/2/2019
PHYTOCHEMICAL SCREENING
PROGRAM STUDI S1-FARMASI
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SENIOR MEDAN
2018/2019
CONT
 Karena tujuannya untuk mengetahui golongan
senyawa yang terkandung dalam sampel, maka
untuk ekstraksi awal harus digunakan pelarut
yang dapat melarutkansenyawa-senyawa
yang bersifat polar, semipolar, maupun
nonpolar.
 Akan tetapi skrining fitokimia tidak hanya
dilakukan dalam sampel (ekstrak), simplisia jg
dapat dilakukan dgn menambahkan pereaksi
langsung
CONT
 Dengan penemuan opium alkaloid, morfin, ahli kimia
mulai menargetkan obat-obatan herbal untuk
senyawa bioaktif (disebut sebagai phytochemical).
 Fitokimia dapat memengaruhi kesehatan, tetapi
bukan nutrisi esensial. Sebagian besar phytochemical
yang digunakan dalam industri farmasi modern
adalah metabolit sekunder.
 Faktor-faktor yang muncul seperti resistensi obat,
efektivitas biaya dan efek samping dari obat sintetik
telah menyebabkan kebangkitan phytomedicine.
PENDAHULUAN
 Skrining fitokimia merupakan penelitianpendahuluan
yang bertujuan untuk mengetahuigolongan senyawa
kimia yang terkandung dalamtanaman, yang biasanya
punya aktivitas biologi,secara tepat dan teliti.
 Skrining fitokimia merupakan analisis kualitatif
terhadap senyawa-senyawa metabolit sekunder. Suatu
ekstrak dari bahan alam terdiri atas berbagai macam
metabolit sekunder yang berperan dalam aktivitas
biologinya.
 Senyawa-senyawa tersebut dapat diidentifikasi dengan
pereaksi-pereaksi yang mampu memberikan ciri khas
dari setiap golongan dari metabolit sekunder (Harborne,
1987).
CONT
 Fitokimia didefinisikan sebagai studi tentang
komposisi kimia dari tanaman obat atau obat phyto.
 Ekstrak herbal dan fitokimia terstandar dalam
permintaan tinggi untuk penelitian terapan serta
penggunaan komersial.
 Sebelum tersedianya obat-obatan sintetis, phytodrugs
atau obat herbal adalah pengobatan utama
 Beberapa faktor termasuk kurangnya obat-obatan
darurat, pembedahan, penelitian dan standardisasi,
menyebabkan penurunan phytomedicine.
CONT
 Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) telah
mengidentifikasi semakin populernya
phytomedicine.
 Beberapa artikel dan dokumen telah
diterbitkan menyoroti masa depan
phytomedicine. Studi praklinis atau
nonfarmakologis yang diterbitkan dalam jurnal
indeks telah menunjukkan kegunaan ekstrak
herbal dan fitokimia terstandarisasi.
1
 4/2/2019

EKSTRAKSI PEMBAGIAN EKSTRAKSI

 Didefenisikan sebagai penyarian komponen-komponen
aktif dari simplisia (tanaman, hewan, pelikan (mineral)) Berdasarkan bentuk yang akan diekstraksi:
dengan menggunakan pelarut tertentu.
 Ekstraksi padat - cair, digunakan untuk
 Hasil yang diperoleh berupa ekstrak.
melarutkan zat yang dapat larut dari campurannya
 Simplisia => Bahan alamiah yang dipergunakan sebagai
obat yang belum mengalami pengolahan apapun juga dengan zat padat yang tidak dapat larut.
dan kecuali dikatakan lain, berupa bahan yang telah
dikeringkan
 Ekstrak => sediaan kental yang diperoleh dengan cara
mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia
menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua
atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa yang
tersisa diperlakukan sedemikian rupa sehingga
memenuhi baku yang telah ditetapkan

 Ekstraksi cair - cair, digunakan untuk memisahkan

SISTEM KONTAK GANDA
dua zat cair yang saling bercampur, dengan
menggunakan pelarut yang dapat melarutkan salah Solven Ekstrak 1 Solven Ekstrak 2
satu zat

Pemisahan Pemisahan
Pencampuran Pencampuran (Separator)
(Separator)
(Mixer) (Mixer) 2
1
1 2

Simplisia fraksinasi 1 fraksinasi 2

SIFAT PELARUT DALAM PROSES EKSTRAKSI PEMBAGIAN EKSTRAKSI

 Solut mempunyai kelarutan yang besar dalam solven,
Berdasarkan proses pelaksanaannya:
 Tidak mudah menguap pada saat ekstraksi,
 Ekstraksi berkesinambungan (Continous
 Pelarut tidak bereaksi dengan komponen aktif
extraction) => pelarut yang sama dipakai
 Mudah dipisahkan dari solut, sehingga dapat
dipergunakan kembali,
berulang-ulang sampai proses ekstraksi
selesai
 Tidak bersifat racun dan tidak mudah terbakar,
 Tersedia dan tidak mahal.  Ekstraksi bertahap (Bath extraction) =>
pelarut yang digunakan selalu yang baru
sampai proses ekstraksi selesai.

2

JENIS-JENIS EKSTRAKSI
 Ekstraksi Dingin
a) Maserasi => pengrendaman sampel
(simplisia; serbuk) dengan pelarut pada suhu
rungan
b) Perkolasi => proses pengaliran pelarut
melewati sampel (simplisia; serbuk) pada
bejana percolator
KONTROL MUTU SIMPLISIA
 Simplisia sebagai produk pertanian atau tumbuhan
liar memiliki kualitas mutu yang dipengaruhi oleh:
 Variasi bibit: Identitas (spesies)
 Tempat tumbuh dan iklim: lingkungan (tanah dan
atmosfer), energi (cuaca, temperatur, cahaya)
dan materi (air, senyawa organik dan anorganik)
 Proses tumbuh (fertilizer, pestisida,...)
 Kondisi panen (umur dan cara): Periode
pemanenan hasil tumbuhan: dimensi waktu
terkait metabolisme pembentukan senyawa
terkandung
STANDARDISASI MUTU SIMPLISIA
Acuan: Materia Medika Indonesia
Kebenaran jenis (identifikasi
spesies tumbuhan)
 Parameter makroskopik: deskripsi morfologis simplisia
 Parameter mikroskopik: mencakup pengamatan terhadap
penampang melintang simplisia atau bagian simplisia dan
terhadap fragmen pengenal serbuk simplisia
 Reaksi identifikasi: Reaksi warna untuk memastikan
identifikasi dan kemurnian simplisia (terhadap irisan/serbuk
simplisia)
4/2/2019
 Ekstraksi Panas
a) Refluks => ekstraksi yang dilakukan pada suhu titik
didih pelarut pd waktu tertentu dengan sejumlah
pelarut tertentu secara kontiniu
b) Soxhlet => ekstraksi dengan pelarut refluks
c) Digesti => ekstraksi yang dilakukan dengan
maserasi kinetic (pengadukan kontiniu) pada suhu
lebih tinggi dari suhu ruangan umumnya dilakukan
pada suhu 40-50 oC
d) Infundasi => proses ekstraksi deilakukan dengan
cara merebus sampel pada suhu 90 oC Soxhletasi
e) Dekok => Dekoksi merupakan proses ekstraksi yang
mirip dengan proses infundasi, hanya saja infuns
yang dibuat membutuhkan waktu lebih lama (≥ 30
menit) dan suhu pelarut sama dengan titik didih air digesti
Infundasi
Proses pasca panen dan preparasi akhir:
1. Untuk simplisia dari tumbuhan hasil
budidaya, dipengaruhi juga oleh proses GAP
(Good Agricultural Practice)
2. Untuk simplisia dari tumbuhan liar (wild
crop), dipengaruhi juga oleh proses
pengeringan yang umumnya dilakukan di
lapangan.
3. Penyimpanan bahan tumbuhan: berpengaruh
pada stabilitas bahan (kontaminasi biotik
dan abiotik)
CONT
 Kemurnian (bebas dari kontaminasi
kimia, biologis): tidak selalu mungkin
memperoleh simplisia sepenuhnya murni.
Bahan asing yang tidak berbahaya dalam
jumlah sangat kecil pada umumnya tidak
merugikan
 Harus bebas dari serangga, fragmen hewan/kotoran hewan
 Tidak boleh menyimpang bau dan warnanya
 Tidak boleh mengandung lendir dan cendawan atau menunjukkan
tanda-tanda pengotoran lain
 Tidak boleh mengandung bahan lain yang beracun/berbahaya
3
 4/2/2019

CONT
 Aturan penstabilan: wadah, penyimpanan, trasportasi SYARAT BAKU SIMPLISIA
 Pengawetan: Simplisia nabati boleh diawetkan dengan
penambahan kloroform, karbon tetraklorida, etilenoksida atau  Kadar air: tidak lebih dari 10%
bahan pengawet lain yang cocok, yang mudah menguap dan tidak
meninggalkan sisa  Angka lempeng total: tidak lebih dari 10
 Wadah dan bungkus: tidak boleh mempengaruhi bahan yang  Angka kapang dan khamir: tidak lebih dari 10
disimpan baik secara kimia/fisika, tertutup baik dan rapat.
 Mikroba patogen: Negatif
 Penyimpanan: agar dihindari dari cahaya dan penyerapan air.
 Aflatoksin: tidak lebih dari 30 bagian per juta
 Simplisia sebagai bahan/produk yang dikonsumsi
manusia sebagai obat:
 Mutu, aman, manfaat Sari Jamu:
 Simplisia sebagai bahan dengan kandungan kimia yang  Diperbolehkan mengandung etanol tidak lebih dari 1%
bertanggungjawab terhadap respon biologis: harus v/v (20oC)
memiliki spesifikasi kimia yaitu informasi komposisi (jenis  Kadar metanol: tidak lebih dari 0,1% dari kadar etanol
dan kadarnya) senyawa kandungan.

FAKTOR YANG MEMPENGARUHI  Faktor Kimia:

MUTU EKSTRAK  Faktor internal:
 Jenis
senyawa aktif dalam bahan
 Faktor Biologi: Bahan asal tumbuhan  Komposisi kualitatif senyawa aktif
 Identitas (spesies)
 Komposisi kuantitatif senyawa aktif
 Lokasi tumbuhan asal: lingkungan (tanah dan atmosfer), energi (cuaca,
temperatur, cahaya) dan materi (air, senyawa organik dan anorganik)  Kadar total rata-rata senyawa aktif
 Periode pemanenan hasil tumbuhan: dimensi waktu terkait metabolisme  Faktor eksternal:
pembentukan senyawa terkandung
 Metode ekstraksi
 Penyimpanan bahan tumbuhan: berpengaruh pada stabilitas bahan
(kontaminasi biotik dan abiotik)  Perbandingan ukuran alat ekstraksi
 Umur tumbuhan dan bagian yang digunakan (diameter dan tinggi alat)
 Untuk simplisia dari tumbuhan hasil budidaya, dipengaruhi juga oleh  Ukuran, kekerasan dan kekeringan bahan
proses GAP (Good Agricultural Practice)
 Pelarut yang digunakan dalam ekstraksi
 Untuk simplisia dari tubuhan liar (wild crop), dipengaruhi juga oleh proses
pengeringan yang umumnya dilakukan di lapangan.  Kandungan logam berat

 Kandungan pestisida

 Mutu ekstrak berkaitan dengan senyawa kimia yang

dikandung karena respon biologis yang diakibatkan
PARAMETER NON SPESIFIK
oleh ekstrak disebabkan oleh senyawa kimia
 Ditinjau dari asalnya, senyawa kimia dalam ekstrak  Kadar air dan Susut Pengeringan
terbagi menjadi:  Kadar abu
 Senyawa kandungan asli dari tumbuhan asal: senyawa
 Sisa Pelarut
yang memang sudah ada sejak masa tumbuhan tsb
hidup  Residu Pestisida
 Senyawa hasil perubahan dari senyawa asli: Dari
 Cemaran logam berat
penelitian telah diprediksi terjadinya perubahan kimia
senyawa asli karena sifat fisikokimia yang labil  Cemaran mikroba
 Senyawa kontaminasi: polutan atau aditif
 Kadar Sari Larut Air dan Larut
 Senyawa hasil interaksi kontaminasi dengan senyawa asli
atau senyawa perubahan Etanol

4
 4/2/2019

UJI KANDUNGAN KIMIA EKSTRAK

PARAMETER SPESIFIK
 Pola kromatogram: KLT, KCKT, KG
 Identitas:  Kadar Total Golongan Kandungan Kimia:
Meliputi deskripsi tata nama, bagian spektrofotometri, titrimetri, volumetri, gravimetri
tumbuhan yang digunakan dan senyawa dll:
identitas.  Golongan minyak atsiri
 Golongan steroid
 Organoleptik  Golongan tanin
Golongan flavonoid
Meliputi penggunaan panca indera untuk 

 Golongan triterpenoid (saponin)

mendeskripsikan bentuk (padat, serbuk,  Golongan alkaloid
kental, cair), warna, bau dan rasa  Golongan antrakinon

 Kandungan kimia  Kadar kandungan kimia tertentu: senyawa

Untuk memberikan gambaran awal jumlah identitas atau senyawa kimia utama atau senyawa
senyawa terkandung aktif
 Densitometer, KG, KCKT

PROSEDUR UJI FITOKIMIA  Steroid/triterpenoid

 Terpenoid
Pada plat tetes, sejumlah sampel di oles pada plat
tetes kemudian ditambahkan vanillin dan 2 tetes
asam sulfat pekat (H2SO4 (p) p.a). Diamati perubahan
warna yang terjadi. Senyawa golongan terpenoid
positif jika terjadi warna merah sampai ungu
+
-
Pada plat tetes, sejumlah sampel dioles pada plat tetes,
kemudian ditambahkan asam asetat anhidrid sampai
terendam selama 5 menit, kemudian ditambahkan 1 tetes
asam sulfat pekat. Diamati perubahan warna yang terjadi.
Senyawa golongan steroid positif jika terjadi warna hijau
kebiruan dan senyawa golongan triterpenoid berwarna
merah sampai ungu.

+
+
+

 Saponin
Sejumlah sampel di masukkan kedalam
tabung reaksi, kemudian ditambahkan
aquadest sampai terendam dan dipanaskan
dalam waterbath 100oC selama 15 menit.
Setelah dingin dikocok kuat-kuat arah vertical.
Senyawa golongan saponin positif jika
terbentuk busa yang mantap.
 Fenol
Pada plat tetes, sejumlah sampel dioleskan
pada plat tetes kemudian ditambahkan
larutan FeCl3 (10% b/v dalam etanol).
Diamati perubahan warna yang terjadi.
Senyawa golongan fenol positif jika terjadi
warna hitam, ungu, hijau,

+
+
+

- -
-

5
 4/2/2019

 Flavonoid  Tannin

Sejumlah sampel dimasukkan kedalam Sejumlah sampel dimasukkan kedalam

tabung reaksi dan ditambahkan butiran Mg. tabung reaksi. Kemudian ditambahkan
Kemudian ditambahkan HCl 2N sampai larutan HCl 2N sampai terendam dan
dipanaskan dalam waterbath 100 C
terendam dan dipanaskan pada waterbath
selama 15 menit. Setelah dingin
100 C selama 15 menit. Setelah dingin
ditambahkan 5 tetes amil alcohol.
ditambahkan 5 tetes amyl alcohol. Senyawa
Senyawa golongan tannin positif jika
golongan flavonoid positif jika terjadi warna
terbentuk warna merah-jingga pada
merah sampai jingga pada lapisan amil lapisan amil alkohol
alcohol.

- - -/+
- - -

Cara memilih Teknik pemisahan

 Alkaloid
Sejumlah sampel dibasakan dengan
1. Pilih langkah terbesar pada step pertama jika
menggunakan Ammonia 10%, kemudian di mungkin termurah. Misal ekstraksi pelarut
ekstraksi dengan pelarut organik kloroform.
Filtrat kloroform diambil dan ditambahkan HCl 2. Pilih proses pemisahan yang didasarkan pada
perbedaan sifat fisika. Misal muatan (pertukaran
2N, kemudian lapisan air diambil dan ion), ukuran (filtrasi gel, sentrifugasi)
direaksikan dengan reagen Dragendorf.
Senyawa golongan alkaloid positif jika 3. Pilih proses dimana mengeksploitasi perbedaan
terbesar sifat fisika antara analit/produk dengan
terbentuk endapan berwarna merah bata. matriks/pengotor
4. Pilih langkah termahal pada saat terakhir, misal
HPLC

- -
+

1. Diagram Alir Isolasi

2. Isolasi Senyawa Model /Lead Compound
Bahan alam
- biasanya punya efek
simplisia Penapisan fitokimia - tidak harus dominan
Ekstraksi

Ekstrak 3. Bahan Baku sediaan

Fraksinasi
Hasil ekstrak dapat digunakan untuk
Fraksi membuat sediaan
Pemisahan/ pemurnian

Isolat
4. Uji farmakologi  pada hewan coba
Karakterisasi & Identifikasi

Struktur kimia

6
 4/2/2019

Bahan alam

Simplisia

Ekstrak Uji efek

Sub-fraksi
Fraksi

Sub-fraksi Sub-fraksi
Fraksi

Sub-fraksi Uji efek

TERIMAKASIH
Isolat Isolat Isolat Isolat Uji efek