Bioquímica II • 2019 • Ingeniería en Biotecnología

Docente a cargo: Dra. Natalia Bongiovani / JTP: Mg. Pablo Rado

Guía de Problemas N°1

Glucólisis y Fermentación

1. Cuando se agota el suministro de ATP de la célula, ¿cuál de las siguientes enzimas aumenta
en actividad?
a) Hexoquinasa
b) Piruvato quinasa
c) Glucoquinasa
d) Fosfofructoquinasa-1

2. Se obtuvo un extracto de levadura que se incubó en anaerobiosis en presencia de glucosa,

NAD+, ADP, buffer, Mg2+, Pi.
a) ¿Es necesario agregar algún otro producto a la mezcla de reacción para que la glucólisis
funcione?
b) ¿Cuáles serán los productos finales si se consumieron 8 moles de glucosa? ¿En qué
cantidad esperaría encontrarlos?

3. ¿Cuál es el objetivo metabólico de la producción de ácido láctico?

4. Se incuba glucosa con 14C en el C1, con las enzimas y los cofactores necesarios para la
glucólisis. ¿Cuál es la distribución del 14C en el piruvato formado?. Suponga que la
interconversión de gliceraldehído-3-P y dihidroxiacetona-P es muy rápida comparada
con los pasos subsiguientes.
5. En la degradación de trigliceridos (grasas) se obtiene glicerol. Este compuesto es
metabolizado por conversión a dihidroxiacetonafosfato, un intermediario glucolítico, mediante
dos reacciones enzimáticas.
a) Proponga una secuencia de reacciones para este metabolismo. ¿En qué se basa la
secuencia propuesta?
b) Escriba la ecuación neta de conversión de glicerol en piruvato de acuerdo a su esquema.

Glicerol

6. La concentración de lactato, en el plasma sanguíneo antes, durante y después de

una carrera de 400 metros, es mostrada en el gráfico. Considere que la concentración de
lactato en plasma solo se ve afectada por la acción del músculo y del hígado.
a) ¿Qué es lo que provoca el rápido aumento en la concentración de lactato?
b) ¿Por qué la concentración de lactato disminuye luego de terminar la carrera? ¿Por qué la
disminución se da más lentamente que el aumento?
c) ¿Dé una posible explicación para que la concentración de lactato sea diferente de cero
durante el estado de reposo?

1
 Bioquímica II • 2019 • Ingeniería en Biotecnología
Docente a cargo: Dra. Natalia Bongiovani / JTP: Mg. Pablo Rado

7. Las coenzimas derivadas de nicotinamida pueden someterse a reacciones de

oxidación-reducción con sustratos específicos en presencia de la deshidrogenasa apropiada.
En estas reacciones, NADH + H+ sirven como la fuente de hidrógeno, como se describió
anteriormente. Donde sea que la coenzima se oxide, un sustrato debe ser reducirse
simultáneamente:

Para cada una de las reacciones de (a) hasta (f), determinar si el sustrato ha sido
oxidado, reducido, o si no ha cambiado su estado de oxidación. Si ha ocurrido un cambio
redox, balancear la reacción con la cantidad necesaria de NAD+, NADH, H+, y H2O.

8. El consumo de alcohol (etanol), especialmente luego de ejercicio intenso, provoca

una deficiencia en los niveles de glucosa en sangre (hipoglucemia). El primer paso en el
metabolismo del etanol en el hígado es su oxidación a etanal, reacción catalizada por la
enzima hepática alcohol deshidrogenasa.
a) Explicar cómo esta reacción inhibe la transformación de lactato en piruvato.
b) ¿Por qué esto ocasiona hipoglucemia?

2
 Bioquímica II • 2019 • Ingeniería en Biotecnología
Docente a cargo: Dra. Natalia Bongiovani / JTP: Mg. Pablo Rado

9. El Acidaminococcus fermentans es un microorganismo anaerobio que, a partir del

metabolismo de la glucosa, produce como productos finales butirato, butanol y un ácido
dicarboxílico. Este microorganismo posee un conjunto de enzimas similares a las de E. coli,
que le permiten degradar la glucosa hasta acetil-CoA, o de sintetizar glucosa a partir de
piruvato. Además, es capaz de realizar la síntesis de pentosas por intermedio de la ruta de las
pentosas fosfato y posee las enzimas de lo que se conoce como ciclo de Krebs en los
organismos aeróbicos, excepto la citrato sintasa, la aconitasa, la isocitrato
deshidrogenasa y la α-cetoglutarato deshidrogenasa. La ruta entre la glucosa y el butirato, o
el butanol, está esquematizada en la figura. El punto de bifurcación entre los dos
metabolismos está dado a nivel del butiril-CoA. En las rutas, que pueden ser consideradas
como dos caminos alternativos y paralelos de degradación de la glucosa, faltan algunos
intermediarios y todas las coenzimas. Si una molécula de glucosa fuera transformada en
butirato y la otra en butanol, tal como están escritas las rutas, el poder reductor no se
encontraría balanceado. Esto quiere decir que el microorganismo debe encontrar un
camino para regenerar sus coenzimas reducidas. En algunos organismos esto se logra
balanceando estequiométricamente dos rutas alternativas. En otros, debería existir un
camino diferente (o una ramificación alternativa de la ya existente) para la degradación
de la glucosa que consuma las coenzimas reducidas generadas.

Con estos pocos datos indique:

a) La ruta (con fórmulas desarrolladas) por la cual estos microorganismos fermentan la
glucosa hasta los productos finales indicados, incluyendo cofactores y actividades
enzimáticas.
b) Escriba la ecuación global de la ruta y diga cuál es el rendimiento energético y de poder
reductor de esta ruta, así como está escrita.
c) Explique claramente por qué, en este caso, el desequilibrio en la producción de
coenzimas reducidas con respecto a las oxidadas, no se puede balancear modificando
la estequiometría de la degradación de la glucosa por las dos rutas mostradas (la que
llega a butanol y la que llega a butirato).
d) Escriba la ruta alternativa que debe utilizar este organismo para regenerar las
coenzimas oxidadas. Para ello utilice sólo las enzimas que sabe que el microorganismo posee.
e) Finalmente, indique cuál es el nuevo balance redox y cuál es el rendimiento
energético final por molécula de glucosa degradada en este caso, escribiendo la
ecuación global final.

3
 Bioquímica II • 2019 • Ingeniería en Biotecnología
Docente a cargo: Dra. Natalia Bongiovani / JTP: Mg. Pablo Rado

f) Señale cuál o cuáles deberían ser los puntos de regulación de esta ruta. Para ello tenga en
cuenta cuáles de las enzimas deberían estar activas en el caso en que el
microorganismo estuviera realizando glucólisis o, en el caso contrario, gluconeogénesis.
g) Si esta bacteria estuviera compitiendo en un ambiente anaeróbico por una limitada
cantidad de glucosa con otra bacteria que pudiera realizar la ruta glucolítica desde
glucosa hasta lactato, ¿cuál cree que predominará? ¿Por qué? ¿Qué otras consideraciones
además de la energética se podrían tener en cuenta?
10. El metabolismo anaeróbico de la glucosa en los microorganismos del género
Pseudomonas, se produce por una vía diferente a la glucólisis. Sin embargo, esta ruta
utiliza la mayoría de los intermediarios y de las enzimas de la ruta glucolítica, con excepción
de tres intermediarios y tres enzimas. Además, se encontró que esta ruta utiliza tres
intermediarios no glucolíticos, una enzima nueva, dos enzimas, que en las bacterias que
realizan la glucólisis normal se utiliza en otra ruta, y una aldolasa con una especificidad
diferente a su homólogo de la glucólisis. Si se inhibe la actividad de esta aldolasa, se acumula
el sustrato 2-ceto-3-desoxi-6-fosfogluconato (este sustrato se obtiene en tres pasos
después de la glucosa-6-fosfato). Este es el único intermediario diferente a los
encontrados en las rutas de procesamiento conocidas de la glucosa (Glucólisis y otras).
Con estos pocos datos indique:
a) La ruta por la cual estos microorganismos fermentan la glucosa hasta etanol y CO2 como
únicos productos finales.
b) Escriba la ecuación global de la ruta.
c) Si esta bacteria estuviera compitiendo en un ambiente anaeróbico por una limitada
cantidad de glucosa con otra bacteria que pudiera realizar la ruta glucolítica, ¿Cuál cree Ud.
que predominará? ¿Por qué?

Nota: Escriba todas las fórmulas de los intermediarios que mencione, indique, siempre que le sea
posible todos los cofactores y coenzimas que deberían ser utilizados por cada enzima en la ruta.

Gluconeogénesis, Vía Pentosas Fosfato y Glucogenogénesis

1. En una célula que opera en anaerobiosis.

¿Cuál es el rendimiento energético en moléculas de ATP (o equivalentes en enlaces de alta
energía) por glucosa convertida en lactato? Si la glucosa proviene de:
A. glucosa libre.
B. glucógeno.
C. glucógeno, teniendo en cuenta el gasto para su síntesis. Para este caso indique cuáles
son todos los compuestos que poseen enlaces de alta energía.
Recuerde que la síntesis de glucógeno se produce por una vía que utiliza un intermediario
azúcar-nucleótido.
2. Una muestra de glucógeno de un paciente con enfermedad hepática es incubada
con ortofosfato, glucógeno fosforilasa y la enzima desramificante. La relación [glucosa-
1-P]/[glucosa] obtenida es 10 veces mayor a la obtenida en una persona sin la enfermedad.
En la figura se muestra un resumen de las vías de degradación de glucógeno.

4
 Bioquímica II • 2019 • Ingeniería en Biotecnología
Docente a cargo: Dra. Natalia Bongiovani / JTP: Mg. Pablo Rado

¿Cuál es la deficiencia enzimática más probable en este paciente?

3. Un procedimiento común para determinar la efectividad de compuestos como
precursores de glucosa en mamíferos es mantener a un animal sin comer hasta que
los depósitos de glucógeno en el hígado sean completamente consumidos y entonces
administrar el compuesto incógnita. Un sustrato que produce un aumento neto en el
glucógeno hepático es llamado glucogénico, porque previamente debe ser convertido en
glucosa-6-P.
Indicar cuál de los siguientes compuestos es glucogénico, y escribir las reacciones que
ocurren hasta entrar en la gluconeogénesis:
a) Succinato
b) Glicerol
c) Acetil-CoA
d) Piruvato
4. Los siguientes son tres casos clínicos. En cada uno de ellos se debe determinar cuál es la
enzima defectuosa y diseñar un tratamiento apropiado, a partir de la lista detallada más abajo.
Caso A. La ingesta de leche provoca al paciente vómitos y diarrea. Se le hace un test de
tolerancia a lactosa. El paciente ingiere una cantidad estándar de lactosa y luego se miden las
concentraciones de galactosa y glucosa en plasma sanguíneo a varios intervalos.
a) En los individuos tolerantes a la lactosa, los niveles aumentan hasta llegar al máximo a
la hora y luego disminuyen. Explicar por qué.
b) Los niveles de galactosa y glucosa sanguíneos del paciente no aumentan durante el test.
Explicar por qué.
Caso B. El paciente desarrolla vómitos y diarrea luego de la ingesta de leche. En un
ensayo se determinó que su sangre tiene bajos niveles de glucosa, pero en otro ensayo se
detectó que los niveles de azúcares reductores son mucho más altos que los normales. Un
análisis de orina revela la presencia de galactosa en la orina.
c) ¿Cuál es la enzima defectuosa y cuál es el tratamiento adecuado?
d) ¿Por qué los niveles de azúcares reductores son altos en sangre?
e) ¿Por qué aparece galactosa en la orina?
Caso C. El paciente es letárgico y su hígado se encuentra agrandado. Una biopsia
hepática muestra excesivas cantidades de glucógeno. Además, los niveles de glucosa
en sangre son más bajos que los normales.
f) ¿Cuál es la enzima defectuosa y cuál es el tratamiento adecuado?
g) ¿Por qué el paciente tiene los niveles de glucosa sanguíneos bajos?

5
 Bioquímica II • 2019 • Ingeniería en Biotecnología
Docente a cargo: Dra. Natalia Bongiovani / JTP: Mg. Pablo Rado

Enzima defectuosa
• Fosfofructokinasa-1 muscular
• Fosfomanosa isomerasa
• Galactosa-1-fosfato uridil transferasa
• Glucógeno fosforilasa hepática
• Triosa kinasa
• Lactasa de células epiteliales intestinales
• Maltasa de células epiteliales intestinales

Posible tratamiento
Alimentación regularmente administrada.
Dieta libre de grasas
Dieta baja en lactosa
Grandes dosis de niacina
5. La vía de pentosas fosfato es muy versátil y permite obtener distintos productos
según las necesidades fisiológicas. Comente en qué situaciones y que reacciones utilizaría si
la ruta de las pentosas fosfato prioriza los siguientes casos:
a) Fabricación de NADPH y pentosas fosfato en cantidades aproximadamente iguales.
b) Fabricación principal o única de NADPH.
c) Fabricación principal o única de pentosas fosfato.

6. Responda:
a) ¿Qué diferencia hay entre una isomerasa y una mutasa?
b) ¿Entre una quinasa y una fosforilasa?
c) ¿Entre una sintasa y una sintetasa?
d) ¿Cuál es la principal diferencia entre la transcetolasa y la transaldolasa?
e) ¿En qué difiere la fosforólisis de la hidrólisis?

7. Una muestra de tejido fue obtenida post mortem del cuerpo de un paciente que se creía
que era genéticamente deficiente en una enzima del metabolismo de carbohidratos. Un
homogenato de la muestra de hígado tuvo las siguientes características:
• Degrada glucógeno a glucosa-6-fosfato.
• No sintetiza glucógeno a partir de ningún azúcar.
• No puede utilizar galactosa como fuente de energía.
• Es capaz de sintetizar glucosa-6-fosfato desde lactato.

¿Cuál de las siguientes enzimas es la deficiente? Justifique.

Glucógeno Fosforilasa
Fructosa 1,6-bis Fosfatasa
UDP-Glucosa Pirofosforilasa

6
 Bioquímica II • 2019 • Ingeniería en Biotecnología
Docente a cargo: Dra. Natalia Bongiovani / JTP: Mg. Pablo Rado

Ciclo de Krebs, Ciclo de Glioxilato, Fosforilación Oxidativa

1. Se crece en aerobiosis un cultivo de Escherichia coli, en un medio que contiene acetato

como única fuente de C y energía. En estas condiciones:
a) ¿Cuántos moles de ATP (o equivalentes en enlaces de alta energía) consumirán las
bacterias para sintetizar en forma neta un mol de glucosa?
b)¿Cuántos moles de ATP (o equivalentes en enlaces de alta energía) se producirán
por mol de acetato degradado?
c) Escriba un posible mecanismo de acción de la enzima acetato-tioquinasa.
Recuerda que E. coli cuenta con una enzima llamada acetato tioquinasa que cataliza la
incorporación de una coenzima-A para formar un tioester con el acetato. Esta reacción da
como producto Acetil-CoA y consume un ATP que se hidroliza dando AMP y PPi.
2. ¿En qué parte de una célula eucariota se lleva a cabo el ciclo del ácido cítrico? ¿Difiere esta
parte del sitio donde se lleva a cabo la glucólisis?
3. ¿Cuáles son las semejanzas y diferencias entre las reacciones catalizadas por la piruvato
deshidrogenasa y la α-cetoglutarato deshidrogenasa?
4. ¿Cuáles son las principales diferencias entre las oxidaciones en el ciclo del ácido cítrico
donde se emplea NAD + como aceptor de electrones y las demás donde se usa FAD?
5. Los intermediarios de la glucólisis están fosforilados, pero los del ciclo del ácido cítrico no.
¿Por qué?
6. El acetil-CoA y el succinil-CoA son tioésteres de alta pero su energía química se emplea
para distintas cosas. Explique.
7. El oxalacetato es formado en el último paso del ciclo del ácido cítrico por la
oxidación del malato dependiente de NAD+.
a) ¿Puede ocurrir una síntesis neta de oxalacetato a partir de acetil-CoA usando solo
las enzimas y cofactores del ciclo del ácido cítrico, sin agotar los intermediarios del
ciclo? Explicar.
b) ¿Cómo es reemplazado el oxalacetato (para reacciones biosintéticas) que se pierde del
ciclo?
8. Señale el mecanismo de acción de un inhibidor de la transferencia electrónica, un ionóforo,
un inhibidor de la ATPasa y un desacoplante de la fosforilación.
9. El Xilano es un polisacárido que forma parte de la pared de algunas algas, plantas y en
particular la membrana externa de algunos frutos. También es posible encontrarlo en
microorganismos, en algunos también formando parte de la pared y en otros, los
xilanóforos, que lo utilizan como polisacárido de reserva. El monómero del Xilano es la
pentosa Xilosa, unida por enlaces beta-1,4.

7
 Bioquímica II • 2019 • Ingeniería en Biotecnología
Docente a cargo: Dra. Natalia Bongiovani / JTP: Mg. Pablo Rado

La síntesis de Xilano en los xilanóforos, es análoga a la síntesis de otros polisacáridos

(almidón, celulosa, etc.) en otros organismos y puede realizarse a partir de Xilosa o de glucosa.
La particularidad en este último caso es que estos microorganismos carecen de una ruta
glucolítica completa, y la ruta que va entre la glucosa y el Xilano es parte de la ruta de
degradación de los azúcares de 6 carbonos. Un derivado de la glucosa sufre sólo dos tipos de
transformaciones para convertirse en un derivado de la Xilosa. Uno de sus átomos de carbono
es oxidado y luego se produce una descarboxilación.
Los xilanóforos son microorganismos anaerobios y el producto final del metabolismo de los
azúcares es el ácido acético. La degradación del Xilano llega, utilizando una vía análoga
a la degradación del glucógeno, hasta xilulosa-5-fosfato. Este compuesto se degrada por
una enzima (xilulosa-5-fosfato liasa) que contiene tiamina-pirofosfato como cofactor,
generando un compuesto de 2C y otro de 3C. Estos compuestos se transforman, uno en
acetil-CoA y el otro en glioxilato, los que continúan metabolizándose para generar
nuevamente un acetil-CoA, el que se convierte en el producto final.
El poder reductor generado, es canalizado hacia un sistema de transporte electrónico muy
sencillo que se ubica en la membrana de una organela denominada hidrogenosoma y cuyo
aceptor final son los H+. Este sistema de transporte consta de un único complejo. Este
complejo tiene una constitución semejante a la del complejo I de la membrana mitocondrial
de eucariotes, posee una NADH oxidoreductasa, con FMN como cofactor, y una proteína de
Fe-S. Los electrones se ceden a un par de H+ para formar H2 como producto final. La
estequiometría de translocación de H+ en este complejo es de 2,5 H+ por cada dos electrones
que lo atraviesan.
Con estos datos indique:
a) La ruta (con fórmulas desarrolladas) por la cual estos microorganismos fermentan la
xilosa y la glucosa hasta el acetato. ¿Cuál es la actividad catalítica de las enzimas de su
esquema? ¿Cuáles son los cofactores y coenzimas que utilizan?
b) Indique cuáles de los compuestos utilizados en este metabolismo tienen enlaces de alta
energía que puedan ser utilizados para la síntesis de ATP por medio de reacciones acopladas.
c) Escriba la ecuación global de la ruta de degradación de la glucosa.
d) Cuál es el rendimiento energético y de poder reductor de esta ruta.
e) Realice un esquema (lo más completo posible) del transporte electrónico de la
membrana del hidrogenosoma de este microorganismo.
f) Indique en este complejo como sería posible explicar la estequiometría de la transferencia
de protones mencionada utilizando mecanismos conocidos en otros sistemas.
g) Describa la hipótesis quimiosmótica de la fosforilación oxidativa.
h) Considerando la conversión final del poder reductor transportado por las coenzimas
reducidas en el último aceptor de la cadena, indique como sería la ecuación global final del
metabolismo de este microorganismo incorporando los sustratos y productos necesarios.
i) Si los xilanóforos estuvieran compitiendo en un mismo nicho ecológico por una limitada
cantidad de glucosa con otros organismos (aeróbicos o anaeróbicos) que consumieran
la glucosa ¿cuál cree Ud. que predominará? ¿Por qué?