Transplantasi sel islet. Sel islet merupakan sel terbesar dalam pankreas.

Dalam sel ini

terdapat sel beta yang menghasilkan insulin. Transplatansi sel islet mengambil sel dari organ
donor kemudian ditempatkan di pankreas kita

Sebagai salah satu kelenjar endokrin, pankreasbertanggung jawab dalam mengatur kadar
glukosadarah. Perubahan kadar glukosa dalam plasmamengakibatkan penyesuaian sekresi
insulin untukmengembalikan kadar glukosa darah pada rentang yangnormal. Insulin
merupakan hormon anabolik utamayang meningkatkan cadangan energi. Pada semua
sel,insulin meningkatkan kerja enzim yang mengubahglukosa menjadi bentuk cadangan
energi yang lebihstabil yaitu glikogen (Davani, 2003). Insulin memegangperanan penting
dalam proses metabolisme karbohidrat,lemak, dan protein. Gejala awal DM
berhubungandengan efek langsung dari kadar glukosa darah yangtinggi. Jika kadar glukosa
darah puasa sampai di atas160-180 mg/dl, maka glukosa akan dikeluarkan melaluiurin. Jika
kadarnya lebih tinggi lagi, ginjal akanmembuang air tambahan untuk mengencerkan
sejumlahbesar glukosa yang hilang. Karena ginjal menghasilkanurin dalam jumlah yang
berlebihan, maka penderitasering urinasi dalam jumlah yang banyak (poliuria).Akibatnya,
maka penderita merasakan haus yangberlebihan sehingga banyak minum (polidipsia
Sel induk pluripoten diinduksi atau Sel iPS atau Sel iPSC (bahasa Inggris: Induced
pluripotent stem cells) adalah sejenis sel punca pluripoten yang dapat dihasilkan langsung
dari sel dewasa. Teknologi iPSC dipelopori oleh laboratorium Shinya Yamanaka di Kyoto,
Jepang, ilmuwan yang pada 2006 memasukkan empat gen spesifik yang menyandi faktor
transkripsi dapat mengubah sel dewasa menjadi sel punca pluripoten.[1] Ia dianugerahi Hadiah
Nobel 2012 bersama dengan Sir John Gurdon "untuk penemuan bahwa sel dewasa dapat
diprogram ulang untuk menjadi pluripoten".[2]
Sel punca pluripoten menjanjikan di bidang pengobatan regeneratif.[3] Karena mereka dapat
berkembang biak tanpa batas waktu, serta dapat membentuk setiap jenis sel lain dalam tubuh
(seperti sel-sel neuron, jantung, pankreas, dan hati), mereka mewakili satu sumber sel yang
dapat digunakan untuk menggantikan sel yang hilang yang rusak atau penyakit.
Jenis sel punca pluripoten yang paling terkenal adalah sel punca embrionik (embryonic stem
cell, ESC). Namun, karena generasi sel punca embrionik melibatkan penghancuran (atau
setidaknya manipulasi)[4] dari embrio tahap pra-implantasi, ada banyak kontroversi seputar
penggunaannya. Lebih lanjut, karena sel-sel punca embrionik hanya dapat berasal dari
embrio, sejauh ini tidak layak untuk membuat sel punca embrionik yang cocok dengan
pasien.
Karena iPSC dapat diturunkan langsung dari jaringan dewasa, mereka tidak membutuhkan
embrio, tetapi dapat dibuat dengan cara yang sesuai dengan pasien, yang berarti bahwa setiap
individu dapat memiliki garis sel punca pluripoten sendiri. Pasokan sel autolog yang tidak
terbatas ini dapat digunakan untuk menghasilkan transplantasi tanpa risiko penolakan imun.
Sementara teknologi iPSC belum maju ke tahap di mana transplantasi terapeutik telah
dianggap aman, iPSC siap digunakan dalam upaya penemuan obat yang dipersonalisasi dan
memahami dasar penyakit spesifik pasien
Skema generasi sel punca pluripotent terinduksi (IPS). (1) Mengisolasi dan membiakan
sel donor. (2) Mengirimkan gen terkait sel punca ke dalam sel dengan vektor virus. Sel merah
menunjukkan sel yang mengekspresikan gen eksogen. (3) Panen dan kultur sel sesuai dengan
kultur sel ES, dengan menggunakan sel-sel pengumpan yang tidak aktif secara mitosis
(lightgray). (4) Sebagian kecil dari sel yang ditransfusikan menjadi sel iPS dan menghasilkan
koloni mirip ES

Cangkok Jaringan, atau disebut tissue graft, mengacu pada prosedur operasi untuk
memindahkan jaringan dari satu tempat ke tempat lain ke tubuh lain, atau dari makhluk lain,
tanpa mengambil darah dari jaringan tersebut. Sebagai gantinya, persediaan darah baru
tumbuh di lokasi resipien. Cangkok jaringan berbeda dengan flap, karena pada flap, jaringan
dipindahkan dengan suplai darah pada jaringan donor. Dalam beberapa kasus, cangkok
jaringan dibuat secara artifisial.

Klasifikasi cangkok jaringan bisa dibagi menjadi:

1. Autograf
2. Isograft
3. Alograft
4. Xenograft
Autograft adalah cangkok jaringan yang asal jaringannya adalah dari tubuh sendiri dan
ditransplantasikan ke jaringan yang sama tetapi lokasi lain dalam 1 individu yang sama.
Cangkok jaringan segar sangat direkomendasikan dalam jenis cangkok ini.

Isograft adalah cangkok jaringan yang asal jaringannya diambil dari individu satu ke individu
lain dengan konstitusi genetika yang sama. Sebagai contoh adalah cangkok antara kembar
identik.

Allograft adalah cangkok jaringan yang asal jaringannya diambil dari individu satu ke
individu lain yang berbeda konstitusi genetikanya tetapi dalam satu spesies.

Xenograft adalah cangkok jaringan yang asal jaringannya diambil dari individu satu ke
spesies yang berbeda. Contohnya dari binatang ke manusia.

Istilah grafting paling sering digunakan untuk mencangkok jaringan kulit, namun banyak
jaringan lain dapat dicangkokkan, seperti: tulang, saraf, tendon, pembuluh darah, lemak, dan
kornea.
Obat imunosupresan adalah obat yang kerap digunakan untuk mencegah reaksi penolakan
dari tubuh, ketika tubuh baru saja menerima organ baru melalui prosedur transplantasi.
Beberapa jenis obat imunosupresan ini digunakan untuk membuat imun mampu menerima
organ transplantasi, seperti hati, jantung, atau ginjal.

Karena fungsi obat imunosupresan adalah mencegah penolakan sistem imun terhadap organ
baru yang ditranspalantasi, obat ini juga disebut obat anti-rejection. Selain itu, fungsi obat
imunosupresan lainnya adalah digunakan untuk mengatasi gangguan autoimun seperti lupus,
psoriasis, dan rheumatoid arthritis.

Motif utama teknologi enkapsulasi sel adalah untuk mengatasi masalah penolakan cangkok
yang ada dalam aplikasi rekayasa jaringan dan dengan demikian mengurangi kebutuhan
untuk penggunaan jangka panjang obat imunosupresif setelah transplantasi organ untuk
mengendalikan efek samping. Sangat penting bahwa mikrokapsul memiliki kekuatan
membran yang memadai (stabilitas mekanik) untuk menahan tekanan fisik
danosmotik seperti selama pertukaran nutrisi dan produk limbah. Mikrokapsul harus cukup
kuat dan tidak boleh pecah pada implantasi karena hal ini dapat menyebabkan penolakan
kekebalan terhadap sel-sel yang dienkapsulasi. [55] Misalnya, dalam
kasus xenotransplantasi , membran yang lebih stabil akan diperlukan dibandingkan
dengan alotransplantasi

Potensi menggunakan bioartificial pankreas , untuk pengobatan diabetes mellitus ,

berdasarkan sel-sel iskapsulasi di dalam membran semi permeabel sedang dipelajari secara
ekstensif oleh para ilmuwan. Alat-alat ini dapat menghilangkan kebutuhan akan obat-obatan
penekan kekebalan selain akhirnya menyelesaikan masalah kekurangan donor
organ. Penggunaan mikroenkapsulasi akan melindungi sel-sel pulau dari penolakan
kekebalan tubuh serta memungkinkan penggunaan sel-sel hewan atau sel-sel penghasil
insulin yang dimodifikasi secara genetik. [80] Diharapkan bahwa pengembangan
mikrokapsul enkapsulasi pulau ini dapat mencegah perlunya suntikan insulin yang diperlukan
beberapa kali sehari oleh pasien diabetes tipe 1. [66] Protokol Edmonton melibatkan
implantasi pulau-pulau manusia yang diekstraksi dari donor mayat dan telah menunjukkan
perbaikan terhadap pengobatan penderita diabetes tipe 1 yang rentan terhadap
ketidaksadaran hipoglikemik . [81] Namun, dua rintangan utama yang dihadapi dalam teknik
ini adalah terbatasnya ketersediaan organ donor dan dengan kebutuhan imunosupresen untuk
mencegah respon imun dalam tubuh pasien.

Beberapa penelitian telah didedikasikan untuk pengembangan pankreas bioartificial yang

melibatkan imobilisasi pulau Langerhans di dalam kapsul polimer. Upaya pertama menuju
tujuan ini ditunjukkan pada tahun 1980 oleh Lim et al. di mana sel isen xenograft
dienkapsulasi di dalam mikrokapsul alginat pollysine dan menunjukkan hasil in vivo yang
signifikan selama beberapa minggu. [3] Diperkirakan bahwa implantasi sel-sel yang
dienkapsulasi ini akan membantu mengatasi penggunaan obat imunosupresif dan juga
memungkinkan penggunaan sel xenograft sehingga menghindari masalah kekurangan donor.
Polimer yang digunakan untuk mikroenkapsulasi pulau adalah
alginat, [82] kitosan, [83] polietilen glikol (PEG), [84] agarosa, [85] natrium selulosa sulfat
dan poliakrilat yang tidak larut dalam air dengan alginat dan PEG menjadi polimer yang
umum digunakan. Dengan penelitian in vitro yang berhasil dilakukan dengan menggunakan
teknik ini, pekerjaan yang signifikan dalam uji klinis menggunakan pulau manusia dengan
mikroenkapsulasi sedang dilakukan. Pada tahun 2003, penggunaan mikrokapsul alginat /
PLO yang mengandung sel islet untuk uji coba klinis fase-1 diizinkan untuk dilakukan di
Universitas Perugia oleh Kementerian Kesehatan Italia. [54] Dalam penelitian lain, potensi
aplikasi klinis PEGilasi dan dosis rendah dari imunosupresan siklosporin A
dievaluasi. Percobaan yang dimulai pada tahun 2005 oleh Novocell, sekarang membentuk
fase I / II dari uji klinis yang melibatkan implantasi allograft pulau ke
situs subkutan . [86] Namun, telah ada penelitian kontroversial yang melibatkan uji klinis
manusia di mana Living Cell technologies Ltd menunjukkan kelangsungan hidup sel-sel
xenogenik fungsional yang ditransplantasikan tanpa obat imunosupresif selama 9,5
tahun. [87] Namun, persidangan menerima kritik keras dari Asosiasi Xenotransplantasi
Internasional karena berisiko dan prematur. [88] Namun, meskipun uji klinis sedang
dilakukan, beberapa masalah utama seperti biokompatibilitas dan imunoproteksi perlu
diatasi. [89]

Alternatif potensial untuk mengenkapsulasi pulau-pulau terpencil (baik yang berasal dari
allo-atau xenogenik) juga sedang dieksplorasi.Dengan menggunakan teknologi natrium
selulosa sulfat dari Austrianova Singapura, garis sel islet dienkapsulasi dan ditunjukkan
bahwa sel-sel tersebut tetap hidup dan melepaskan insulin sebagai respons terhadap
glukosa. [90] Dalam studi pra-klinis, sel yang diimplantasikan dan dienkapsulasi mampu
mengembalikan kadar glukosa darah pada tikus diabetes selama 6 bulan.
obat-obat imunosupresif dapat menimbulkan efek samping yang sangat berat

Kultur sel 3D adalah lingkungan buatan artifisial di mana sel biologis diizinkan tumbuh atau
berinteraksi dengan lingkungannya di ketiga dimensi. Tidak seperti lingkungan 2D
(misalnya cawan Petri ), kultur sel 3D memungkinkan sel in vitro tumbuh di semua arah,
mirip dengan bagaimana mereka akan in vivo . [1] Kultur tiga dimensi ini biasanya ditanam
dalam bioreaktor, kapsul kecil tempat sel dapat tumbuh menjadi spheroid, atau koloni sel
3D. Sekitar 300 spheroid biasanya dibiakkan per bioreaktor
Pada awal pembentukannya, sel-sel endokrin pada pankreas dihasilkan dari tunas (buds) yang
muncul pada sel-sel epitel pada saluran pakreas atau disebut juga dengan epithelium duct
cells. Tunas tersebut kemudian tumbuh hingga membentuk struktur spheroid. Setelah
berbentuk spheroid, kumpulan sel tersebut kemudian bermigrasi ke dalam jaringan acinar,
mengalami angiogenesis (pembentukan pembuluh darah) dan menjadi matang (mature).
Kematangan selsel endokrin tersebut ditandai dengan kemampuan sel-sel tersebut untuk
menghasilkan hormon dan mensekresikannya ke dalam pembuluh darah.

Sel-sel endokrin/pulau-pulau Langerhans merupakan suatu kumpulan sel yang terdiri dari 5
tipe sel yang berbeda, yaitu sel alfa (α) yang mensekresikan hormon glukagon, sel beta (β)
mensekresikan insulin, sel delta (δ) mensekresikan somatostatin, sel PP mensekresikan
pancreatic polypeptide, serta sel epsilon (ε) yang mensekresikan ghrelin (Murtaugh et al.
2007). Namun, sel epsilon hanya dapat ditemukan pada saat pembentukan dan perkembangan
pankreas. Setelah kelahiran jumlah sel tersebut akan menurun hingga akhirnya menghilang.
Hal tersebut menyebabkan sel-sel epsilon tidak banyak diketahui. Insulin merupakan protein
yang dihasilkan oleh sel beta dari pulau-pulau Langerhans pankreas.
Pada proses sintesis insulin, gen insulin akan ditranskripsikan menjadi mRNA yang
kemudian akan ditranslasi menjadi prekursor protein yang disebut preproinsulin.
Preproinsulin tersusun dari 4 bagian dengan urutan sebagai berikut, rantai A, C-peptide,
rantai B dan signal peptide (berupa hydrophobic N-terminal). Signal peptide adalah suatu
peptida yang terdapat pada prekursor protein dan merupakan karakteristik dari protein yang
akan disekresikan oleh hewan, tumbuhan maupun bakteri. Signal peptide pada prekursor
protein tersebut menyandi tujuan atau tempat dimana prekursor protein akan dibawa dan
mengalami proses selanjutnya (post-translation process). Ketika disekresikan ke dalam sitosol
signal peptide akan berinteraksi dengan signal recognition particle (SRP), yaitu partikel
ribonucleoprotein di dalam sitosol yang akan memfasilitasi pemisahan rantai polipeptida
sehingga dihasilkan proinsulin (rantai A, C-peptide, dan rantai B). Proinsulin kemudian akan
ditranslokasikan ke dalam lumen retikulum endoplasmik (RE) melalui peptide-conducting
channel dan mengalami perubahan bentuk sehingga menghasilkan bentuk dasar dari insulin
akibat ikatan sulfida yang terbentuk antara sulfid pada rantai A dan B. Setelah itu, proinsulin
kemudian dibawa menuju golgi aparatus (badan golgi) untuk dikemas dan kemudian dilepas
ke dalam sitoplasma berupa kantung-kantung yang nantinya akan disekresikan (secretory
vesicles). Di dalam secretory vesicles tersebut proinsulin mengalami proses pematangan yaitu
pemisahan rantai insulin dengan peptida penghubungnya (connecting peptide atau C-peptide)
sehingga dihasilkan insulin dan C-peptide (Gambar 2). Keduanya kemudian akan
disekresikan secara bersamaan ke dalam darah pada saat terjadi peningkatan glukosa dalam
darah (Bosher 2001 & Steiner 2008).

Singkatnya Proses sintesis insulin. (a) proinsulin dalam retikulum endoplasma membentuk
bentuk dasar insulin, terjadi ikatan sulfida antar sulfid pada rantai A dan B, (b) proinsulin
kemudian dikemas oleh badan golgi berupa kantung (vesicles), (c) dalam vesicles proinsulin
mengalami pematangan membentuk insulin dan C-peptide dan siap disekresikan oleh
secretory granules

Imu-nohisto(sito)kimia (IHSK) (Immunohisto(cyto)chemistry, IHC) proses untuk menetap-

kan lokasi dan jenis protein (antigen) ter- sebut di dalam sel-sel jaringan
Prinsip IHSK adalah bahwa antibodi akan ber-ikatan secara spesifik dengan antigen. Anti-
bodi akan “mencari“ lokasi antigen, dan ber-ikatan dengan antigen. Tempat antigen
dapatditentukan bila kita dapat mengetahui di-mana ikatan antibodi-antigen. Bila
kandunganprotein (antigen) yang terdapat di dalam sel-sel (tumor) diketahui, diagnosis dapat
ditentu-kan, dan selanjutnya untuk merencanakanpengobatan dan meramalkan prognosis
imunostaining adalah penggunaan metode berbasis antibodi untuk
mendeteksi protein spesifik dalam sampel. Istilah "imunostaining" pada awalnya digunakan
untuk merujuk pada pewarnaan imunohistokimia bagian jaringan, seperti yang pertama kali
dijelaskan oleh Albert Coons pada tahun 1941. [1] Namun, imunostaining sekarang
mencakup berbagai teknik yang digunakan dalam histologi ,biologi sel , dan biologi
molekuler yang menggunakan metode pewarnaan berbasis antibodi.
Pewarnaan imunohistokimia atau pewarnaan IHC pada bagian-
bagian jaringan (atau imunositokimia , yang merupakan pewarnaan sel ), mungkin
merupakan teknik immunostaining yang paling umum diterapkan. [2] Sementara kasus
pewarnaan IHC pertama menggunakanpewarna fluoresen (lihat imunofluoresensi ), metode
non-fluoresen lainnya menggunakan enzim seperti peroksidase (lihat pewarnaan
imunoperoksidase ) dan alkali fosfatase sekarang digunakan. Enzim ini mampu
mengkatalisasi reaksi yang memberikan produk berwarna yang mudah dideteksi
oleh mikroskop cahaya. Atau, elemen radioaktif dapat digunakan sebagai label, dan
imunoreaksi dapat divisualisasikan dengan autoradiografi . [3]
Intraperitoneal adalah pemberian obat pada rongga peritoneal, di sekitar daerah
abdomen/perut.

Hipodermis adalah salah satu lapisan dari bebarapa lapisan yang terdapat
pada kulit.[1] Hipodermis ini merupakan lapisan kulit lemak atau jaringan ikat yang
merupakan rumah dari kelenjar keringat dan lemak dan juga sel-sel kolagen.[2][3] Lapisan
Hipodermis ini dikenal juga sebagai sebagai jaringan subkutis atau subkutan
Kapsul ginjal memiliki tekstur halus, transparan, yang dikelilingi membran fibrosa,
membungkus, dan melindungi ginjal. Setiap ginjal memiliki kapsul ginjal (lapisan luar), yang
membantu untuk mempertahankan bentuk ginjal serta melindunginya dari kerusakan. Kapsul
ginjal itu sendiri dikelilingi oleh jaringan lemak yang juga membantu melindungi ginjal dari
kerusakan karena tekanan atau gerakan tiba-tiba.

Kapsul ginjal adalah lapisan fibrosa yang keras yang mengelilingi ginjal dan ditutupi oleh
lapisan lemak perirenal yang dikenal sebagaikapsul adiposa ginjal . Kapsul adiposa kadang-
kadang termasuk dalam struktur kapsul ginjal. Ini memberikan perlindungan dari trauma dan
kerusakan. Kapsul ginjal dikelilingi oleh fasia ginjal . Melapisi fasia ginjal dan antara ini
dan fasia transversal adalah daerah lemak pararenal

Fibrosa adalah tulang rawan yang memiliki sifat campuran (intermediet) antara hialin dengan
elastis. Tulang kartilago disusun oleh serat kolagen kasar. Sementara intisari dasarnya tidak
terlihat dengan jelas. Penyebarannya terdapat diantara tulang veterbrae dan ligamen
(penghubung antara tulang dan otot).

Metode 1.
Garis iPSC manusia TkDN4-M adalah hadiah baik dari Dr. M. Ohtsuat dari Institut Ilmu
Kedokteran, Universitas Tokyo. IPSC yang disimpan beku dicairkan dan dikultur seperti
dijelaskan sebelumnya [5] dalam media hiPS (DMEM / F12 Ham; Wako) dengan adanya
penggantian serum KO 20% (KSR; GIBCO), 1x asam amino tidak esensial (NEAA; Wako) ,
55mM 2-mercaptethanol (2-ME, GIBCO) dan7,5 ng / ml rekombinan faktor pertumbuhan
fibroblast manusia 2 (FGF2) (Peprotech) pada sel pengumpan SNL yang diolah dengan
mitomycin-C (Wako) untuk mempertahankan keadaan yang tidak berbeda. IPSC berbudaya
dipisahkan dengan larutan CTK dan diunggulkan pada kepadatan 1 106 sel / ml dalam reaktor
tipe aspinner (Biott) yang mengandung 30 ml mTeSR 1 (Veritas) dengan inhibitor ROCK 10
mM (Y-27632; Cayman Chemical) dengan laju arotasi 45 rpm. Spheroids dibentuk oleh
agregasi sel selama 2 hari-kultur dan kemudian dikultur dalam media hiPS selama 1 hari
sebelum memulai diferensiasi. Protokol diferensiasi terdiri dari 6 tahap yang dijelaskan
sebelumnya [6]; garis besar skematis yang diterbitkan dalam Gambar. 1A.
Gambar. 1. Tinjauan protokol diferensiasi untuk sel iPS dan pembentukan alginatefiber. A:
Ringkasan 6 tahap diferensiasi meniru proses perkembangan pankreas. B: Imunostaining
spheroid mirip pulau di tahap beta. merah; sel positif C-peptida manusia, b: hijau; sel positif
glukagon, c: biru; pewarnaan nuklir dengan DAPI. Skala bar¼200mm.C: Pembentukan
alginatefiber. Spheroid mirip pulau kecil yang berasal dari iPS manusia dicampur dengan
alginat dan disuntikkan ke dalam larutan barium klorida, yang mengarah ke pembentukan
enkapsulasi serat yang lebih lunak

Metode 2
Setelah sentrifugasi, 6 103 spheroid termasuk kira-kira total sel-sel yang diturunkan 106iPSC
secara total dicuci dalam larutan garam. Kemudian 0,75 ml PRONOVA SLG100
(NOVAMATRIX) ditambahkan ke pahlawan ini dan dicampur dengan baik dengan pipet.
Campuran dimasukkan ke dalam jarum suntik 1 ml dengan jarum 20G dan disuntikkan ke
dalam 15 ml tabung berbentuk kerucut yang berisi 10 ml barium klorida 0,1 M, yang
membentuk formasi tofiber. Thefiber direndam dalam larutan selama 3e5 menit pada suhu
kamar untuk cross-linking (Gbr. 1C). Kemudian dicuci dengan amino tiga kali dan direndam
dalam media kultur semalaman, kemudian siap untuk percobaan transplantasi. Untuk studi
ekspresi gen, total 4 sel yang diturunkan 106iPSC dimasukkan ke dalam alginatefiber dengan
cara yang sama.
Metode 3
Penelitian pada hewan dilakukan sesuai dengan protokol yang disetujui oleh Komite
Perawatan dan Penggunaan Hewan di Pusat Nasional untuk Kesehatan dan Kedokteran
Global. Untuk menginduksi tikus model diabetes, tikus NOD / SCID jantan berusia 8 minggu
(Japan Clea) disuntikkan secara intravena dengan streptozotocin 130 mg / kg (STZ; Sigma).
Kadar glukosa afterblood meningkat lebih dari 350 mg / dl, satu atau dua potong serat alginat
ditransplantasikan ke ruang intraperitoneal atau sub-kulit dari mencit diabetes NOD / SCID
menggunakan forceps (n¼2 per batch). Spheroids dari setidaknya dua kelompok berbeda
diperiksa untuk percobaan hewan. Untuk studi ekspresi gen, setiap alginatefiber
ditransplantasikan ke ruang intraperitoneal atau subkutan mencit NOD / SCID tanpa STZ.
Kadar glukosa darah puasa diperiksa satu atau dua kali melalui pembuluh darah
menggunakan alat tes glukosa (Glutest Neo Sensor, Sanwa Chemical) . Sampel darah
dikumpulkan dalam kapiler yang dilapisi heparin dari vena ekor setiap 2 atau 4 minggu, dan
plasma diperoleh setelah sentrifugasi (10 menit, 4 C, 800 g). Mereka dibekukan pada suhu 80
C sampai digunakan. Tikus dibunuh 4e16 minggu setelah transplantasi alginat, dan
cangkokan dianalisis secara histologis

Metode 4
Spheroids dikumpulkan setelah proses diferensiasi. Serat serat diambil dari tikus 14 atau 16
minggu setelah transplantasi. Sampel-sampel ini diperbaiki dalam paraformaldehyde 4%,
tertanam dalam parafin, dan dipotong menjadi bagian 3-mm. Pewarnaan hematoxylin
andeosin dilakukan sesuai dengan protokol standar. Untuk imunostaining, bagian diinkubasi
dengan anti-badan primer (diencerkan dalam saline fosfat-buffered [PBS], 1,5% goatserum)
semalam pada suhu 4 C di ruang yang dilembabkan. Antibodi primer adalah tikus anti-C-
peptida (1: 200; DSHB, University of Iowa) dan kelinci anti-proglucagon (1: 300; Teknologi
Signaling Cell). Bagian dicuci dengan PBS dan kemudian diinkubasi dengan antibodi
sekunder terkonjugasi afluoresensi, IgA 594 terkonjugasi kambing anti-tikus IgG (1: 400;
Invitrogen) atau Alexa Fluor488 terkonjugasi kambing anti-kelinci IgG (1: 400; Invitrogen),
for120 min pada suhu kamar. Slide dihitung dengan 40,60-diamidino-2-phenylindole (DAPI;
Invitrogen) sebelum dipasang dengan Fluoromount (Diagnostic Biosystems).

Metode 5
Menggunakan Isogen (Wako), kami mengekstraksi RNA dari spheroid yang telah dikemas
dalam serat alginat dan diambil 4, 8 dan 12 minggu setelah transplantasi. Kami melakukan
analisis qRT-PCR dari beberapa gen: UCN3, PCSK1, PCSK2, SLC30A8, ABCC8, KCNJ11
dan GJD2. Detail primer gen-gen tersebut tercantum pada Tabel 1. ThecDNA disintesis
dengan transkriptase balik PrimeScript II menggunakan non-acak dan oligos (dT18). Reaksi
RT-PC kuantitatif dilakukan pada CFX96Touch Deep Well (Bio-Rad) menggunakan GoTaq
qPCR master mix (Promega). Kuantifikasi relatif dilakukan terhadap kurva standar, dan
tingkat ekspresi gen target dinormalisasi terhadap gen pemelihara rumah, atau antisim
decarboxylase ornithine (OAZ1)

Metode 6
Konsentrasi C-peptida dan glukagon manusia dalam plasma tikus ditentukan menggunakan
kit ELISA C-peptida ultrasensitif manusia (Mercodia) dan kit ELISA glukagon (Mercodia)

Metode 7
Empat belas minggu setelah transplantasi, 2 tikus yang ditransplantasi secara intraperitoneal,
satu tikus yang ditransplantasi secara subkutan dan tikus kontrol DM yang diinduksi-STZ
dipuasakan selama 4 jam, dan glukosa darah diukur setiap 5 menit selama 60 menit pertama
dan 70,80, 90, 120 menit setelah pemberian larutan glukosa secara oral (2,0 g / kg)

Metode 8
analisis statistik Data dinyatakan sebagai rata-rata ± SEM. Untuk perbandingan set data
diskrit, t-test Student tidak berpasangan digunakan. P <0,05 dianggap signifikan

result 1
Sel TkDN4-M iPSC manusia dibedakan menjadi spheroid mirip pulau dengan diameter 200 ±
50mm oleh protokol kultur suspensi 6 langkah asli kami seperti yang dijelaskan sebelumnya
(Gbr.1A) [6]. Sel positif C-peptida manusia dan sel positif glukagon terdeteksi pada spheroid
(Gbr. 1B). Sekitar 6 103 spheroid, yang mungkin mengandung total 6 106 sel yang
diturunkan dari iPSC, dicampur dengan 0,75 ml alginat dan disuntikkan ke dalam larutan
barium klorida 0,1 M untuk hubungan silang untuk membentuk alginatfiber yang
dienkapsulasi. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 1C, serat seperti benang tunggal yang
diameternya sekitar 2 mm dihasilkan. Para spheroids ditempatkan dalam barisan di bagian
tengah thefiber.

Result 2
Dalam penelitian sebelumnya, kami mengkonfirmasi bahwa sekitar 6.106 sel mirip pulau
turunan iPS cukup untuk memperbaiki hiperglikemia pada tikus diabetes ketika mereka
ditransplantasikan di bawah kapsul ginjal [6]. Kami juga menyadari bahwa lebih dari 250 pM
level C-peptida manusia dalam plasma tikus diperlukan untuk mengontrol glukosa darah
mereka tanpa insulin tikus. Kami berhipotesis bahwa lebih banyak sel akan dibutuhkan dalam
serat yang dienkapsulasi daripada dalam bentuk telanjang untuk mencapai tingkat C-peptida
manusia dalam plasma tikus, karena sel yang dienkapsulasi tidak menghubungi sel endotel
secara langsung, sehingga C-peptida yang dikeluarkan mencapai aliran darah hanya dengan
difusi. Untuk memeriksa jumlah optimal sel-sel enkapsulasi yang diperlukan dalam
percobaan pada hewan, kami membandingkan dua dosis, 6 106 sel dan 1.22 sel, dengan
mentransplantasikan satu potong serat dalam kasing sebelumnya dan dua potong offiber pada
yang terakhir ke dalam ruang intraperitoneal STZ tikus NOD / SCID diabetes yang diinduksi.
Seekor tikus yang ditransplantasikan dengan 1.22 sel akan memperbaiki hiperglikemia dan
mempertahankan kadar glukosa darah tidak puasa sekitar 100 mg / dl hingga 60 hari setelah
operasi (Suppl. Gambar 1A). Tingkat C-peptida manusia dalam plasma mereka secara
konstan sekitar 250 pM (Suppl.Fig.1B). Sebaliknya, tikus yang ditransplantasikan dengan sel-
sel 106 mempertahankan tingkat glukosa darah yang cukup tinggi yang menunjukkan antara
300 dan 400 mg / dl, meskipun kami mendeteksi peptida C manusia dalam plasma pada level
sekitar 100 pM (Suppl. Gambar 1A dan B). ). Ketika kami membandingkan jumlah sel
enkapsulasi yang sama dengan tikus yang diberi NOD / SCID innon yang diobati, kadar C-
peptida manusia dalam plasma mereka selalu dua kali lebih tinggi pada tikus yang telah
ditransplantasikan dengan sel 1.210 sel dibandingkan pada sel tikus dengan sel 106 ( Gambar
1D). Hasil ini menunjukkan bahwa kadar C-peptida manusia pada mencit plasma berkorelasi
dengan jumlah sel yang ditanamkan dan bahwa 1,210 sel sel merupakan fortransplantasi
optimal

Result 3
Selanjutnya, kami memeriksa apakah situs yang ditransplantasikan memengaruhi kemanjuran
spheroid mirip pulau. Kami mentransplantasikan dua potong serat yang mengandung total 1,2
107 sel, baik secara intraperitoneal atau subkutan (masing-masing n¼4). Kadar glukosa darah
tikus yang ditransplantasi secara intraperitoneal menurun dengan mantap dan tetap sekitar
100 mg / dl 4 minggu setelah transplantasi (Gbr. 2A). Tingkat C-peptida manusia dalam
plasma mereka sekitar 300 pM sampai 12 minggu setelah transplantasi (Gbr. 2C). Di sisi lain,
kadar glukosa darah tikus yang ditransplantasikan secara subkutan lebih dari 250 mg / dl,
meskipun kadar C-peptida manusia dalam plasma tetap sekitar 200 pM sampai 12 minggu
setelah transplantasi (Gambar 2A, C). Kadar glukagon plasma hampir sama antara kedua
kelompok (Gambar. 2D).
Tes toleransi glukosa oral dilakukan 14 minggu setelah transplantasi menggunakan 2 tikus
yang ditransplantasi secara intraperitoneal, tikus yang ditransplantasikan secara subkutan, dan
satu tikus kontrol diabetes. Kadar glukosa darah tikus yang ditransplantasikan secara
intraperitoneal memuncak pada 15 menit setelah pemberian glukosa dan di bawah 100 mg /
dl setelah 30 menit (Gbr. 2B). Sebaliknya, kadar glukosa darah tikus yang ditransplantasikan
secara subkutan memuncak pada 30 m setelah pemuatan glukosa dan secara bertahap
diturunkan menjadi 200 mg / dl setelah 120 menit (Gbr. 2B). Kadar glukosa darah tikus
kontrol DM memuncak pada batas atas (600 mg / dl) dan tidak kembali ke tingkat awal 120
menit (Gbr. 2B)

Result 4
Kami mengambil serat 14 atau 16 minggu setelah transplantasi. Diperlihatkan dalam Gambar.
3A, serat yang ditransplantasikan secara intraperitoneal berbaur dengan saluran usus tetapi
diambil dengan mudah dengan forsep tanpa adhesi (Gbr. 3B). Sebaliknya, serat yang
ditransplantasikan secara subkutan dikelilingi oleh membran afibrous (Gambar 3D), dan serat
diambil setelah memotong membran (Gambar 3E). Serat yang dienkapsulasi difiksasi dalam
paraformaldehyde 4%, disematkan dalam parafin, dan dipotong menjadi bagian 3-mm.
Pewarnaan hematoxylin andeosin mengungkapkan bahwa lebih dari 90% spheroid bertahan
dalam serat yang ditransplantasikan secara intraperitoneal (Gbr. 3C). Tidak kontras, sekitar
70% dari spheroids bertahan di serat yang ditransplantasikan secara subkutan (Gbr. 3F).
Analisis imunohistokimia mengungkapkan bahwa tidak ada perbedaan dalam frekuensi sel
positif C-peptida manusia antara serat yang ditransplantasikan secara intraperitoneal dan
subkutan (Gambar 3GeI).

Result 5
Kami membandingkan profil ekspresi gen dari sel mirip pulau yang berasal dari iPS setelah
transplantasi antara pemberian intraperitoneal dan subkutan. Kami mengekstraksi RNA dari
serat enkapsulasi yang dikumpulkan 4, 8, dan 12 minggu setelah transplantasi. Kami
melakukan analisis qRT-PCR dari beberapa gen, UCN3, PCSK1, PCSK2, SLC30A8,
ABCC8, KCNJ11 dan GJD2, yang semuanya terkait dengan fungsi sel b pankreas. Kami
memeriksa tiga kelompok berbeda, dan kami pada dasarnya memperoleh pola ekspresi yang
hampir sama pada sampel intraperitoneal dan subkutan (Gambar 4A dan B). Meskipun kami
tidak menemukan perbedaan kadar glukagon plasma yang jelas antara kedua kelompok, tikus
yang ditransplantasi secara intraperitoneal memiliki kadar C-peptida manusia yang lebih
tinggi dalam plasma mereka daripada yang ditransplantasikan secara subkutan (Gambar 4C,
D).

Discus

Dalam penelitian ini, kami mendemonstrasikan bahwa sel yang ditanam secara
intraperitoneal yang dienkapsulasi dalam serat alginat memperbaiki hiperglikemia dan
mempertahankan kadar C-peptida manusia yang konstan dalam plasma tema sampai 12
minggu setelah transplantasi. Selain itu, serat alginat ini diambil dengan mudah dengan
forsep tanpa adhesi. Sebaliknya, sel-sel yang ditransplantasikan secara subkutan tidak
membalikkan hiperglikemia, karena serat-seratnya seluruhnya dikelilingi oleh selaput
berserat. Hasil kami sebelumnya menunjukkan bahwa 6x106 sel mirip pulau yang berasal
dari sel iPS manusia cukup untuk pembalikan tikus diabetes hiperglikemiain ketika
ditransplantasikan di bawah kapsul ginjal dalam bentuk telanjang. Dalam penelitian ini, dua
kali lebih banyak sel diperlukan untuk pembalikan ketika dienkapsulasi dalam serat alginat
dan ditransplantasikan secara intraperitoneal. Dulong dan Legallais memperkirakan bahwa,
dalam perangkat serat yang diameternya 2 mm, dua hingga delapan kali lebih banyak sel
akan diperlukan untuk implantasi daripada sel telanjang [13]. Dapat mencapai jumlah sel
minimal yang diperlukan untuk perangkat berdasarkan pada perhitungan mereka, karena
kami tidak kehilangan sel yang ditransplantasikan ke nekrosis.
Khususnya, dalam kasus transplantasi subkutan, kami mampu mendeteksi C-peptida manusia
(sekitar 180 pM) dalam plasma tikus 12 minggu setelah transplantasi, menunjukkan bahwa
sel yang ditransplantasikan masih berfungsi. Pewarnaan HE memastikan bahwa sel-sel yang
dienkapsulasi bertahan bahkan jika mereka ditutupi dengan membran yang mengandung
serat. Selain itu, analisis imunohistokimia mengungkapkan bahwa sel positif C-peptida tetap
layak 12 minggu setelah transplantasi. Iwata et al. berfokus pada difusi oksigen dalam suatu
perangkat dan menunjukkan bahwa pankreas bioartificial bola memungkinkan untuk memilih
kisaran ketebalan membran yang lebih luas daripada silinder dan planarone [14]. Kami tidak
menemukan adanya nekrosis sentral, satu tanda hipoksia, dalam spheroid yang dienkapsulasi,
menunjukkan bahwa konsentrasi oksigen minimal dipertahankan. Hasil OGT menunjukkan
bahwa sel yang ditransplantasikan secara subkutan tidak merespon dengan cepat terhadap
evolusi glukosa darah, dan butuh waktu lama untuk kembali ke kadar glukosa darah dasar;
pola ini jelas berbeda dari sel yang ditransplantasikan secara intraperitoneal.
Perbedaannya mungkin disebabkan oleh membran fibrosa dan / atau karena inferioritas
fungsional sel-sel individual. Pada tikus yang ditransplantasikan secara intraperitoneal, kadar
glukosa darah sudah sangat rendah sebelum OGTT setelah 1,5 jam. Kami berhenti mengukur
konsentrasi glukosa darah pada 90 menit dan kemudian memberikan glukosa pada tikus,
karena kami harus menghindari puasa lebih lanjut mengingat kesejahteraan hewan. Kadar
glukosa darah di dalam mikrosper transplantasi intraperitoneal dijelaskan oleh produksi
insulin yang berlebihan dari sel-sel yang dienkapsulasi. Salah satu kemungkinan penyebab
kelebihan insulin mungkin karena keadaan sel beta yang belum matang. Kami sebelumnya
melaporkan bahwa sel-sel mirip pulau yang berdiferensiasi menghasilkan jumlah tertentu
(lebih dari 2000 pM / jam / 106 sel) C-peptida bahkan dalam kondisi glukose rendah (2 mM)
in vitro sebelum transplantasi [6]. Uji sekresi insulin yang distimulasi glukosa
mengungkapkan bahwa sel-sel tidak merespon dengan baik terhadap glukosa yang tinggi,
menunjukkan keadaan yang belum matang. Sel-sel ini di alginatefiber dapat terus
memproduksi insulin in vivo bahkan dalam glukosa darah rendah karena keterlambatan
pematangan. Kemungkinan lain adalah keterlambatan penginderaan dan respons glukosa
karena sel yang dikemas tidak secara langsung menghubungi sel endotel. Diperlukan waktu
untuk insulin untuk dimasukkan ke dalam aliran darah dengan difusi setelah dikeluarkan dari
serat dan oleh karena itu sel beta dapat menghasilkan lebih banyak insulin daripada yang
dibutuhkan. Ketika kami mentransplantasikan sel-sel mirip pulau telanjang yang dibedakan
dengan protokol yang sama seperti percobaan ini di bawah kapsul ginjal di mana sel-sel dapat
menghubungi sel endotel secara langsung, puncak kadar glukosa darah dalam OGTT adalah
pada 15 menit [6]. Sebaliknya, puncak kadar glukosa darah dalam OGTT pada tikus yang
ditransplantasi secara intraperitoneal adalah 30 menit seperti yang ditunjukkan pada Gambar.
2B. Hasil ini mendukung keterlambatan penginderaan glukosa dan respons pada alginatefiber
Beberapa penulis merekomendasikan ruang intraperitoneal sebagai tempat transplantasi
[15e18]; yang lain, ruang subkutan [19,20]. Secara umum, dari sudut pandang keamanan,
lebih mudah dan lebih baik untuk mengambil perangkat dari ruang subkutan daripada dari
ruang intraperitoneal. Perkembangan prosedur bedah laparoskopi telah membuat operasi
perut menjadi kurang invasif. An et al. telah melaporkan bahwa mereka mampu mengambil
alginatefiber paksa dengan operasi laparoskopi pada model anjing [21]. Di kedua situs, reaksi
benda asing adalah masalah utama dari implantasi alat, karena respons benda asing inflamasi
yang mengarah ke pertumbuhan berlebih fibrotik perikapsular sering menyebabkan kematian
sel pulau kecil yang dienkapsulasi mikro dan kegagalan cangkok [7,22,23]. Reaksi benda
asing biasanya diprovokasi oleh makrofag dan menyebabkan pertumbuhan fibrotik
perikapsular. Paredes Juarez et al. mencatat bahwa kita harus mempertimbangkan aspek
imunologis dan teknis dalam penerapan sistem mikroenkapsulasi berbasis alginat, karena
reaksi imun berbeda antara spesies terhadap pola molekul terkait bahaya (DAMPS) dan pola
molekuler terkait patogen (PAMP) [24]. Kami menggunakan tikus immunocompromised
(NOD / SDID) untuk percobaan transplantasi, karena kami ingin menghindari peradangan
yang disebabkan oleh xeno-antigen. Menilai dari hasil serat yang ditransplantasikan secara
intraperitoneal, yang diambil tanpa sel yang melekat, kami berhasil mencegah peradangan
tersebut. Oleh karena itu, alasan pertumbuhan berlebih fibrotik perikapsular dalam kasus
serat yang ditransplantasikan secara subkutan tidak dapat dijelaskan oleh xeno-antigen.
Penyebab yang mungkin adalah bentuk serat. Serat transplantasi intraperitoneal tersebar di
rongga perut dengan gerakan peristaltik, dan mereka bercampur dengan organ visceral tanpa
adhesi. Sebaliknya, serat yang ditransplantasikan secara subkutan tetap dalam kelompok di
lokasi yang ditransplantasikan; dengan demikian mereka dapat dikenali sebagai benda asing
raksasa oleh makrofag.
Meskipun kami membuktikan efektivitas sel yang ditransplantasikan hingga 16 minggu dan
mengambil serat tanpa kerusakan, kekhawatiran lain adalah bagaimana mempertahankan efek
jangka panjang dari serat yang ditransplantasikan. Serat alginat diketahui menjadi rapuh
secara bertahap, karena perlahan-lahan kehilangan kation yang sangat diperlukan untuk
mempertahankan gel. Mustahil untuk mengikuti efektivitasnya yang lebih lama dalam
prosedur eksperimental kami saat ini, karena tikus NOD / SCID hanya hidup sekitar 6 bulan
karena timoma. . Kita perlu mempekerjakan tikus lain, seperti NOG, dan memodifikasi
alginatefiber untuk meningkatkan kekuatannya untuk penggunaan jangka panjang. Selain itu,
Morch et al. melaporkan bahwa manik-manik alginat G tinggi mengakumulasi konsentrasi
barium yang lebih tinggi setelah paparan larutan pembentuk gel yang mengandung barium
daripada manik-manik alginat M tinggi [27]. Menurut hasil mereka dari tikus, mereka
memperkirakan kebocoran barium ketika mereka memberikan 60 ml alginat ke 70 kg orang.
Nilainya 0,03 mg barium / kg, yang sekitar 1,5 kali lebih tinggi dari nilai asupan yang dapat
ditoleransi yang direkomendasikan oleh WHO. Kita perlu mempertimbangkan metode
pembentuk gel karena mereka merekomendasikan untuk membuat manik-manik alginat yang
di gel dengan kombinasi kalsium (50 mM) dan konsentrasi rendah barium (1 mM) untuk
mengurangi kebocoran barium
Baru-baru ini ViaCyte melakukan uji klinis menggunakan prekursor sel beta pankreas (PEC-
01 ™) yang dibedakan dari sel-sel ES manusia dengan implantasi kulit dalam perangkat
medis yang dapat diambil (sistem pengiriman Encaptra®cell). Mereka melaporkan dalam
siaran pers “Percobaan pertama STEP ONE pada manusia adalah mengevaluasi keamanan
dan kemanjuran PEC-Encap ViaCyte (a.k.a. VC-01 ™) kandidat produk, terapi penggantian
sel yang diturunkan dari sel punca, yang dienkapsulasi. Meskipun dibatasi oleh tingkat
pengerjaan yang rendah karena respons sel tubuh asing, diferensiasi menjadi sel pulau
endokrin diamati pada kedua 12 minggu dan dua tahun eksplan. ViaCyte sedang
memodifikasi Sistem Pengiriman Sel Encaptra untuk meningkatkan potensi untuk pengerjaan
jangka panjang

Meskipun ViaCyte tidak menggunakan alginat untuk perangkat makro, beberapa laporan
telah meneliti menghindari reaksi benda asing terhadap perangkat alginat [28e30]. Vegas, A.
J et al. melaporkan bahwa manik-manik alginat dengan tiga analog yang mengandung triazol
secara substansial mengurangi reaksi benda asing di kedua tikus dan, setidaknya selama 6
bulan, pada primata non-manusia [31,32]. Baru-baru ini, Alagpulinsa, D. A. et al. melaporkan
bahwa alginat-mikroenkapsulasi dari sel beta yang berasal dari sel manusia dengan CXCL12
memperpanjang kelangsungan hidup dan fungsinya pada tikus C57BL / 6 yang
imunokompeten tanpa penekanan icimunosupresi sistem
Barron dan He melaporkan bahwa metode yang paling menonjol dan sukses dalam aplikasi
klinis adalah metode electrospray coaxial yang sistemnya terdiri dari dua pompa jarum suntik
untuk mendorong cairan yang mengandung sel dan larutan alginat, yang mengarah ke
mikrokapsul yang terdiri dari cairan inti berair dengan sel-sel hidup yang dikelilingi oleh sel-
sel hidup yang dikelilingi oleh sel hidup. cangkang hidrogel alginat [34]. Basta et al.
melaporkan 4 kasus pasien diabetes tipe 1 yang menerima transplantasi intraperitoneal pulau
kecil manusia yang dienkapsulasi. Mereka menggunakan sistem enkapsulasi alginat / poli-
aminoasid dan volume graft total yang disuntikkan tidak melebihi 100 ml. Semua pasien
menunjukkan respons forserum C-peptide positif selama 3 tahun [35]. Jika kita membidik
percobaan aklinis, kita akan membutuhkan sel 2000 kali lebih banyak daripada yang kita
lakukan di rumah, yang berarti kita harus menyediakan sejumlah besar sel dan alginat. Kita
akan membutuhkan 3.000 ml alginat untuk serat, yang tampaknya tidak realistis. Namun,
dalam uji klinis pertama pada manusia, jika kita menetapkan tujuan untuk mempertahankan
tingkat garis dasar sekresi insulin pada pasien diabetes tipe 1, sepertiga puluh dosis terapi
akan diperlukan untuk tujuan itu, sekitar 100 ml alginat yang sebanding dengan sebelumnya.
uji klinis [35]. Sangat penting bagi pasien-pasien tersebut untuk menjaga tingkat
insulinsecretion tingkat dasar untuk mengurangi risiko episode hipoglikemik. Di sisi lain, kita
harus mempertimbangkan kemungkinan pembentukan teratoma ketika kita menggunakan
sejumlah besar sel, terutama yang berasal dari sel induk berpotensi majemuk. Kami
mengamati bahwa ukuran spheroid tidak meningkat dalam alginatefiber setelah transplantasi
menjadi tikus, menunjukkan bahwa sel-sel yang berkembang biak sedikit, jika ada. Selain itu,
spheroids tidak bergabung satu sama lain dalam alginatefiber, yang juga harus menurunkan
risiko pembentukan teratoma. Selain itu, wewere mampu menghilangkan alginatefiber
dengan mudah, yang bersifat adva-geous, karena retrievabilitas juga penting dalam terapi
menggunakan perangkat. Hasil ini menunjukkan bahwa menggunakan alginatefiber
menjanjikan, karena tidak hanya imunosupresif tetapi juga lebih aman dalam hal
retrievabilitas. Di masa depan kita harus lebih meningkatkan fungsi sel yang diturunkan dari
iPS untuk mengurangi jumlah sel yang dibutuhkan dan biaya persiapan sel

Saline fosfat-buffered (disingkat PBS ) adalah larutan buffer yang biasa digunakan
dalam penelitian biologi . Ini adalah larutan garam berbasis air yang mengandung disodium
hidrogen fosfat , natrium klorida dan, dalam beberapa formulasi, kalium klorida dan kalium
dihidrogen fosfat . Buffer membantu menjaga pH konstan. Konsentrasi osmolaritas dan ion
larutan sesuai dengan yang ada di tubuh manusia ( isotonik ).
PBS memiliki banyak kegunaan karena isotonik dan tidak beracun untuk sebagian besar
sel. Penggunaan ini termasuk pengenceran zat dan pembilasan wadah sel. PBS
dengan EDTA juga digunakan untuk melepaskan sel yang menempel dan
bergerombol. Namun, logam - logam yang berkivalen seperti seng , tidak dapat ditambahkan
karena ini akan menghasilkan presipitasi. Untuk jenis aplikasi ini, buffer Gooddisarank

Antibodi sekunder terkonjugasi pewarna-neon menyediakan alat untuk mengidentifikasi

protein dalam banyak aplikasi termasuk pencitraan sel neon, western blotting,
imunohistokimia dan banyak lagi. Keuntungan menggunakan antibodi sekunder berlabel
fluoresensi termasuk sinyal yang lebih cerah, kemampuan multiplexing, dan kemudahan
penggunaan. Jelajahi portofolio kami dari antibodi sekunder Alexa Fluor, sekunder sekunder
(seperti FITC dan TRITC), dan pilihan sekunder dan enzim kami yang diberi label biotin.
Antibodi primer dapat sangat berguna untuk mendeteksi biomarker untuk penyakit seperti
kanker, diabetes, penyakit Parkinson dan Alzheimer dan mereka digunakan untuk studi
penyerapan, distribusi, metabolisme, dan ekskresi (ADME) dan resistensi multi-obat (MDR)
) agen terapi.

Antibodi primer berikatan dengan antigen (berwarna merah). Antibodi sekunder berlabel
(berwarna hijau), kemudian berikatan dengan antibodi primer. Label tersebut kemudian
digunakan untuk mendeteksi antigen secara tidak langsung.
Sekunder
Antibodi sekunder menyediakan deteksi dan amplifikasi sinyal bersamaan dengan
memperluas kegunaan antibodi melalui konjugasi ke protein. [1] . Antibodi sekunder sangat
efisien dalam imunolabeling . Antibodi sekunder berikatan dengan antibodi primer, yang
terikat langsung dengan antigen target. Dalam immunolabeling, domain Fab antibodi primer
berikatan dengan antigen dan mengekspos domain Fc -nya ke antibodi sekunder. Kemudian,
domain Fab antibodi sekunder mengikat domain Fc antibodi primer. Karena domain Fc
konstan dalam kelas hewan yang sama, hanya satu jenis antibodi sekunder yang diperlukan
untuk mengikat banyak jenis antibodi primer. Ini mengurangi biaya dengan memberi label
hanya satu jenis antibodi sekunder, daripada melabeli berbagai jenis antibodi
primer. Antibodi sekunder membantu meningkatkan sensitivitas dan penguatan sinyal karena
beberapa antibodi sekunder mengikat pada antibodi primer
Antibodi primer (tidak berlabel) dan antibodi sekunder (berlabel). Antibodi primer bertugas
mengenali antigen yang diidentifikasi pada jaringan (first layer), sedangkan antibodi
sekunder akan berikatan dengan antibodi primer (second layer)

C-Peptide adalah zat, rantai pendek asam amino, yang dilepaskan ke dalam darah sebagai
produk sampingan dari pembentukan insulin oleh pankreas. C-peptida diproduksi pada
tingkat yang sama dengan insulin sehingga berguna sebagai penanda produksi insulin.
Tes ini mengukur jumlah C-peptide dalam darah. Dengan mengukur jumlah C-peptida dalam
darah menunjukkan berapa banyak insulin yang diproduksi, sehingga bisa digunakan untuk
menentukan tipe diabetes.
Insulin adalah hormon yang bertanggung jawab untuk menurunkan tingkat glukosa (gula)
dalam darah. Insulin dihasilkan oleh sel-sel beta (sel khusus di pankreas). Ketika kita makan,
tubuh kita mulai memecah makanan menjadi glukosa dan nutrisi lainnya.

Dalam hal ini, pankreas memproduksi insulin, yang memungkinkan sel untuk menyerap
glukosa dari darah. C-peptida adalah produk sampingan yang dibuat ketika insulin
diproduksi. Karena itu, mengukur jumlah C-peptida dalam darah menunjukkan berapa
banyak insulin yang diproduksi. Umumnya, produksi C-peptida yang tinggi menunjukkan
produksi insulin yang tinggi pula, dan sebaliknya. C-peptida normal (normal 1,1 – 4,4 ng/ml)
Endotelium merujuk pada sel yang melapisi permukaan dalam pembuluh darah dan
pembuluh limfa,[1] membentuk antarmuka antara darah atau limfa yang bersirkulasi di dalam
lumen dengan dinding pembuluh lainnya. Endotelium merupakan lapisan tipis sel epitel pipih
selapis yang disebut sel endotel. Sel endotel yang kontak langsung dengan darah disebut sel
endotel vaskular, sedangkan sel endotel yang kontak langsung dengan limfa disebut sebagai
sel endotel limfatik.

Sel endotel vaskular melapisi seluruh sistem peredaran darah, dari jantung hingga kapiler
terkecil. Sel ini memiliki fungsi unik dalam biologi vaskular. Fungsi sel ini meliputi filtrasi
cairan (seperti pada glomerulus ginjal), tonus pembuluh darah, hemostasis, pengerahan
neutrofil, dan lalu lintas hormon. Endotelium permukaan dalam ruang jantung disebut
endokardium.

Oral glucose tolerance test (OGTT) atau tes toleransi glukosa oral adalah tes yang berfungsi
untuk mengukur kemampuan zat gula (glukosa) yang berfungsi sebagai sumber energi utama
bagi tubuh

Pembahasan 1
Sekitar 6 x 103 spheroid terkandung dari total 6 x 106 sel iPSC yang terdiferensiasi, dicampur
dengan 0,75 ml alginat dan disuntikkan ke dalam larutan barium klorida 0,1 M untuk untuk
membentuk alginatfiber yang dienkapsulasi. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 1C,
dihasilkan seperti benang tunggal yang diameternya sekitar 2 mm. Spheroids ditempatkan
pada garis di bagian tengah serat.

Pembahasan 2
Pada penelitian sebelumnya, dihasilkan bahwa sekita 6x106 sel mirip sel islet dari diferensiasi
iPS cukup untuk menangani hiperglikemia pada tikus diabetes ketika ditranplatasikan pada
bagian bawah kapsul ginjal. Selain itu dilaporkan pula, > 250 pM C-peptida dalam plasma
tikus diperlukan untuk mengontrol glukosa darah tikus tanpa insulin tikus. Peneliti
berhipotesis bahwa akan dibutuhkan lebih banyak sel ketika dienkapsulasi untuk mencapai
tingkat C-peptida dalam plasma tikus. Karena sel-sel yang dienkapsulasi tidakberkontak
langsung dengan sel-sel endotel, sehingga C-peptida yang dikeluarkan mencapai aliran darah
hanya dengan difusi. Untuk memeriksa jumlah optimal sel-sel yang dienkapsulasi yang
diperlukan dalam percobaan pada hewan, kami membandingkan dua dosis yaitu 6 x 106 dan
1,2 x 107 sel. Seekor tikus yang ditransplantasikan dengan 1.2 x 107 sel memperbaiki
hiperglikemia dan mempertahankan kadar glukosa darah tidak puasa sekitar 100 mg / dl
hingga 60 hari setelah operasi. Level C-peptida manusia dalam plasmanya konstan sekitar
250 pM. Sebaliknya, tikus yang ditransplantasikan dengan sel-sel 6x106 menghasilkan tingkat
glukosa darah yang cukup tinggi yang menunjukkan antara 300 dan 400 mg / dl, meskipun
kami mendeteksi peptida C manusia dalam plasma pada level sekitar 100 pM. Ketika
membandingkan jumlah sel enkapsulasi yang sama pada tikus NOD / SCID yang tidak
diobati, kadar C-peptida manusia dalam plasma mereka selalu dua kali lebih tinggi pada tikus
yang telah ditransplantasikan dengan 1,2x107 sel dibandingkan pada tikus dengan 6x106 sel.
Hasil ini menunjukkan bahwa kadar C-peptida manusia pada plasma tikus berkorelasi dengan
jumlah sel yang ditransplantasikan dan sel 1.2x107 sel merupakan jumlah transplantasi sel
yang optimal.

Discus
Dalam penelitian ini, kami menunjukkan bahwa sel yang ditransplantasi secara
intraperitoneal yang dikemas dalam serat alginat memperbaiki hiperglikemia dan
mempertahankan kadar C-peptida manusia yang konstan dalam plasma tikus sampai 12
minggu setelah transplantasi. Selain itu, serat alginat ini diambil dengan mudah dengan
forsep tanpa adhesi. Sebaliknya, sel-sel yang ditransplantasikan secara subkutan tidak
membalikkan hiperglikemia, karena serat-seratnya seluruhnya dikelilingi oleh membran
fibrosa. Peristiwa ini dikarenakan, transplantasi serat pada intraperitoneal tersebar di rongga
perut melalui gerakan peristaltik, dan bercampur dengan organ visceral. Sebaliknya, serat
yang ditransplantasikan secara subkutan tetap di lokasi yang ditransplantasikan; dengan
demikian serat tersebut dikenali oleh makrofag sebagai benda asing sehingga menyebabkan
pembentukan fibrotik berlebih. Pada proses fibrosis makrofag akan mensekresikan fibroblast
growth factor, platelet derived growth factor (PDGF) dan TGF-β (transforming growth factor
beta) yang akan merangsang fibroblas menghasilkan kolagen dan elastin

Pada proses fibrosis, makrofag bekerja dengan cara mensekresikan faktor yang
akanmerangsang pembentukan kolagen dan elastin oleh fibroblas. Faktor tersebut
adalahfibroblast growth factor, platelet derived growth factor (PDGF) dan yang utama
adalahTGF-β (transforming growth factor beta). Faktor-faktor ini akan ditangkap oleh
selfibroblas sebagai suatu tanda untuk memproduksi kolagen dan elastin. Hal ini
sesuaidengan prinsip: makrofag hampir selalu ditemukan di dekat kolagen yang
diproduksimiofibroblas
Hasil OGTT menunjukkan bahwa sel-sel ditransplantasikan pd subkutan tidak merespon
dengan cepat ke ketinggian glukosa darah, dan butuh waktu lama untuk kembali ke tingkat
glukosa darah basal; pola ini jelas berbeda dari yang sel intraperitoneal ditransplantasikan.
Kadar glukosa darah pada transplantasi intraperitoneal lebih rendah karena tikus yang
ditranplantasi scr intraperitoneal kadar glukosa darah awal memang sudah rendah,
kemungkinan lain adalah produksi insulin yang berlebihan dari sel-sel yang dienkapsulasi.
Salah satu kemungkinan penyebab kelebihan produksi insulin mungkin karena keadaan sel
beta yang belum matang. Uji sekresi insulin yang distimulasi glukosa mengungkapkan bahwa
sel-sel tidak merespon dengan baik terhadap glukosa yang tinggi, menunjukkan keadaan sel
yang belum matang. Sel-sel yang dienkapsulasi dg alginafiber akan terus memproduksi
insulin bahkan dalam glukosa darah rendah karena keterlambatan pematangan sel.
Kemungkinan lain adalah keterlambatan respon glukosa karena sel yang dienkapsulasi tidak
berkontak langsung dengan sel endotel. Diperlukan waktu untuk insulin dimasukkan ke
dalam aliran darah melalui difusi setelah dikeluarkan dari serat dan oleh karena itu sel beta
dapat menghasilkan lebih banyak insulin daripada yang dibutuhkan.