REVIEW JURNAL 1

I. Judul : Spektrometri Massa dalam Analisis Struktur Flavonoid

II. Tujuan :
Mengetahui struktur Flavonoid pada suatu tanaman dengan menggunakan spektrometri
massa

III. Abstrak :
Flavonoid merupakan metabolit sekunder tanaman yang sangat umum dan luas.
Flavonoid memiliki berbagai macam aktivitas biologis dan fisiologis serta bertindak
sebagai senyawa penanda kemotaksonomi. Karena itu, flavonoid telah banyak diteliti
baik di masa lalu ataupun beberapa tahun terakhir. Pentingnya flavonoid semakin
meningkat. Dalam pencarian senyawa baru, dan juga di kontrol kualitas, dibutuhkan
metodologi yang dapat diandalkan untuk analisis flavonoid. Spektrometri massa
memiliki peran yang tak ternilai karena sensitivitas yang tinggi dan kemungkinan
kopling dengan cairan kromatografi. Di dalam spektrometer massa, kemampuan
kopling dengan cairan kromatografi dan sensitivitas yang tinggi menjadi pokok utama
yang penting dalam analisis dengan menggunakan spektrometri massa. Sebuah
penelitian saat ini telah ditemukan metodologi spektrometri massa yang dapat
digunakan untuk menganalisis dan menjelaskan struktur flavonoid. Persiapan sampel,
kromatografi cair / analisis spektrometri massa dan kedua persyaratan pada prosedur
spektrometri massa (sensitivitas yang tinggi & kemampuan kopling dengan cairan
kromatografi) digunakan untuk mengkarakterisasi flavonoid aglikon, O-glikosida, C-
glikosida dan glikosida terasilasi.

IV. Tinjauan Pustaka :

Diperkirakan sekitar 2% dari seluruh karbon hasil fotosintesis pada tanaman
diubah menjadi flavonoid atau senyawa terkait. Dengan beberapa pengecualian, hanya
tanaman yang memiliki kemampuan untuk biosintesis flavonoid, hewan dan jamur
tidak memiliki kemampuan biosintesis flavonoid. Flavonoid terdapat pada semua
bagian tanaman. Flavonoid aglikon ditemukan di eksudat seperti tepung atau lilin pada
daun, kulit dan tunas, atau kristal dalam sel kaktus. Dalam kebanyakan kasus, flavonoid
yang ada pada vakuola bunga, daun, batang atau akar merupakan suatu glikosida.
Flavonoid terdiri dari pigmen berwarna pada bunga, tapi dapat juga bertindak sebagai
inhibitor enzim, sebagai sistem pertahanan pada tumbuhan dari paparan radiasi
ultraviolet dan serangga, dan sebagai kelat / penarik logam yang berbahaya bagi
tanaman. Flavonoid juga terlibat dalam fotosensitasi dan perpindahan energi,
morfogenesis dan penentuan jenis kelamin, fotosintesis, dan regulasi hormon
pertumbuhan pada tanaman. Karena ada kecenderungan kuat untuk menghasilkan
sejenis flavonoid, umumnya flavonoid digunakan sebagai penanda kemotaksonomi.
Hampir semua kelompok flavonoid memiliki kemampuan sebagai antioksidan.
Flavonoid dapat mengganggu setidaknya 3 sistem produksi radikal bebas yang
berbeda. Karena potensi redoks pada flavonoid lebih rendah, maka flavonoid mampu
mengurangi oksidasi radikal bebas dengan membentuk radikal flavonoid yang kurang
reaktif sehingga mencegah peroksidasi lipid. Misalnya, radikal bebas yang mengarah
ke selular akan merusak membran dan akhirnya menyebabkan kematian sel.
Flavonoid juga dapat menguraikan nitrat oksida dalam kombinasi dengan
radikal bebas superoksida yang sifatnya sangat merusak peroxynitrite, dan juga
menghambat xantin oksida (sumber hayati yang penting dari radikal superoksida).
Radikal superoksida dapat bereaksi dengan hidrogen peroksida, yang menimbulkan
efek lebih beracun dari radikal hidroksil, reaksi ini disebut reaksi Fenton yang
dikatalisis oleh besi dan dapat dihambat oleh quercetin, yang memiliki efek kelat besi.
Flavonoid digunakan dalam pencegahan penyakit kanker, demensia, aterosklerosis dan
jantung koroner. Flavonoid juga berinteraksi dengan berbagai sistem enzimatik,
misalnya penghambatan flavonoid oleh enzim siklooksigenase dan lipoxygenase. Hal
ini menyebabkan penurunan aktivasi platelet dan agregasi yang memberikan kontribusi
untuk perlindungan terhadap penyakit kardiovaskular dan juga untuk aktivitas
antiinflamasi oleh flavonoid. Banyak aktivitas biologis lain yang dikaitkan dengan
flavonoid misalnya, antivirus ; antimikroba ; antihepatotoksis ; antiosteoporotic, anti
alergi, antispasmodic dan aktivitas antiulcer. Baru-baru ini telah dipublikasikan
beberapa ulasan mengenai mekanisme aksi dan potensi flavonoid untuk berbagai terapi.
Data pada absorpsi, metabolisme dan ekskresi dietary flavonoid masih jarang
ditemukan dan terkadang masih diperdebatkan, apakah glikosida flavonoid atau aglikon
nya saja yang dapat melewati dinding usus . Tetapi sangat relevan dan menguntungkan
untuk kesehatan manusia. Deglycosylation merupakan langkah paling pertama selama
transfer flavonoid ke dalam sirkulasi, konsisten dengan aktivitas β-glikosidase yang
kuat dalam sel epitel intestine kecil. Setelah proses absorpsi, flavonoid secara luas di
dimetabolisme, yaitu kelompok hidroksil yang terkonjugasi dengan asam glukuronat,
sulfat atau kelompok metil. Dalam usus besar, mikroorganisme dapat mendegradasi
flavonoid tidak terserap dan flavonoid terkonjugasi diekskresikan dalam empedu,
bioavailabilitas antar-individu bervariasi karena komposisi yang diserap oleh
mikroflora usus juga berbeda. Asupan flavonoid antar negara berbeda-beda, tergantung
pada kebiasaan diet. Sumber makanan flavonoid utama adalah buah-buahan dan
minuman (Jus buah, anggur merah, teh, kopi dan bir) dan untuk kandungan flavonoid
yang lebih rendah pada bumbu dan sayuran.
Untuk mengetahui hubungan antara struktur, aktivitas dan kontrol kualitas
makanan, diperlukan akses dengan metode yang cepat dan handal untuk analisis dan
identifikasi dari senyawa polifenol alami dalam semua bentuk flavonoid.
Teknik spektrometri massa modern sangat cocok untuk analisis flavonoid
tanaman dan bahan makanan serta memiliki memainkan peran kunci dalam analisis,
karena dapat memberikan informasi struktural yang signifikan pada jumlah sampel
murni yang kecil maupun pada campuran. Teknik spektrometri massa yang dapat
digunakan untuk analisis glikosida flavonoid telah ditinjau oleh kromatografi Stobiecki.
Liquid digabungkan dengan spektrometri massa (LC / MS) merupakan alat yang sangat
kuat untuk analisis produk alami. Spektrometer massa adalah detektor universal yang
dapat mencapai sensitivitas sangat tinggi dan memberikan informasi pada massa
molekul dan fitur struktural. Informasi struktural yang lebih rinci
selanjutnya dapat diperoleh dengan beralih ke spektrometri massa tandem (MS / MS)
dalam kombinasi dengan Collision Induced Disociation (CID).
Berkenaan dengan karakterisasi struktur flavonoid, informasi yang dapat
diperoleh adalah bagian aglikon ; jenis karbohidrat (mono-, di-, tri- atau tetrasakarida
dan heksosa, deoxyhexoses atau pentosa) atau substituen yang lain ; penugasan
stereokimia unit monosakarida terminal ; urutan bagian glycan ; hubungan
interglycosidic dan lampiran poin dari substituen untuk aglycone tersebut. Dalam jurnal
ini, tersedia metodologi spektrometri massa untuk memperoleh informasi struktural
pada flavonoid.
Flavonoid dibentuk oleh serangkaian reaksi kondensasi antara asam
hydroxycinnamic (B-ring dan atom karbon 2, 3 dan 4 dari C-ring) dan residu malonyl
(A-ring), menimbulkan struktur dasar C6-C3-C6 (Skema 1). Jembatan tiga karbon
antara cincin fenil umumnya disiklisasi untuk membentuk sebuah cincin ketiga (C-
ring). Menurut siklisasi dan derajat ketidakjenuhan dan oksidasi segmen tiga karbon,
flavonoid diklasifikasikan menjadi beberapa kelompok. Struktur dasar dari kelas utama
flavonoid ditunjukkan pada Gambar 1. Saat ini dilaporkan ada sekitar 400 aglikon
flavon, 450 aglikon flavonol, 350 flavanone aglikon, 300 aglikon isoflavon, 19
anthocyanidins dan 250 aglikon chalcone.
Pada tumbuhan, flavonoid dapat terjadi dalam berbagai bentuk yang
dimodifikasi sesuai dengan hidroksilasi tambahan, metilasi dan yang paling penting
glikosilasi. Kadang-kadang kelompok aromatik dan asam alifatik, sulfat, prenyl,
methylenedioxyl atau isoprenyl juga melekat pada inti flavonoid dan glikosida.
Flavonoid umumnya terjadi sebagai flavonoid Oglycosida, di mana satu atau lebih
gugus hidroksil dari aglycone terikat pada gula dengan pembentukan glikosidik O-C
obligasi, yang merupakan ikatan hemiasetal asam.
Pengaruh glikosilasi adalah untuk membuat flavonoid kurang
reaktif dan lebih larut dalam air, sehingga glikosilasi dapat dianggap sebagai bentuk
penting dari perlindungan pada tanaman untuk mencegah kerusakan sitoplasma dan
untuk menyimpan flavonoid aman di sel vakuola. Pada prinsipnya, setiap kelompok
hidroksil dapat di glikosilasi pada posisi tertentu yang disukai misalnya, kelompok 7-
hidroksil di flavon ; flavanon dan isoflavon ; 3 dan 7-hidroksil di flavonols dan
flavanols ; 3 dan 5-hidroksil di anthocyanidins pada situs glikosilasi umum (Gbr. 1).
5-O-Glikosida jarang untuk senyawa dengan gugus karbonil pada posisi 4,
karena kelompok 5-hidroksil berpartisipasi dalam ikatan hidrogen berdekatan dengan
kelompok 4-karbonil.
Glikosilasi dapat terjadi secara langsung dengan menghubungkan gula ke inti
dasar flavonoid melalui ikatan tahan asam C-C, untuk membentuk flavonoid C-
glikosida. Flavonoid C-glikosida umumnya dibagi lagi menjadi mono-C-
glycosylflavonoids, di-C-glycosylflavonoids dan Cglycosylflavonoid- O-glycosides.
Dalam kategori terakhir, gula menghidrolisis kelompok hidroksil fenolik atau
kelompok hidroksil residu C-glikosil. Saat ini, C-glikosilasi hanya ditemukan di C-6
dan / atau C-8 posisi inti flavonoid.
V. ISI
1. Pesiapan Sampel

Kebutuhan untuk persiapan sampel sangat bergantung pada jenis sampel

dan teknik analisis yang digunakan. Berbagai prosedur dapat digunakan untuk
persiapan sampel dan pembersihan sampel flavonoid, seperti yang baru-baru ini
ditinjau oleh Robards dan Co-workers. Prosedur harus memungkinkan pemulihan
flavonoid secara kuantitatif untuk menghindari perubahan kimia atau degradasi.
Karena selektivitas tinggi massa spektrometri, terutama dalam kombinasi dengan
LC atau MS / MS, tidak diperlukan persiapan sampel yang luas. Sampel flavonoid
dapat dibuat dengan homogenisasi, ekstraksi cair serta filtrasi dan atau sentrifugasi.
Kondisi ekstraksi yaitu suhu, pH dan pelarut ekstraksi, bisa berengaruh cukup besar
pada pengolahan jenis dan jumlah isolasi flavonoid. Terkadang memerlukan
pemurnian untuk memperkaya flavonoid tertentu, fraksi flavonoid, untuk
membuang komponen matriks campur, untuk menghilangkan senyawa yang sangat
lipofilik yang dapat menyerap pada fase terbalik (RP) kolom LC. Saat ini, ekstraksi
fase padat (SPE) adalah metode pilihan. Penggunaan mini-cartridge, biasanya diisi
dengan bahan RP C18, yang memungkinkan pemurnian sederhana dengan cepat
dan prakonsentrasi flavonoid. Solusi menarik dari sampel dan eluen yang
diasamkan adalah untuk menekan ionisasi dari flavonoid dan dengan demikian
meningkatkan penyimpanan flavonoid. Prosedur identik dapat digunakan sebagai
metode penghilangan garam.

Teknik persiapan sampel yang terbaru misalnya, supercritical fluid

extraction (SFE), pressurized liquid extraction (PLE) dan solid-phase
microextraction (SPME), juga memiliki cara untuk menganalisis flavonoid. Teknik
terbaru ini lebih mudah dan otomatis, serta penggunaan pelarut dalam analisis
dapat dihemat, sehingga dapat meminimalkan penggunaan pelarut yang dapat
menyebabkan perubahan dan degradasi senyawa sampel.