UNIVERCIDAD NACIONALDE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL1° Informe de Laboratorio

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE HIGIENE Y SEGURIDAD
INDUSTRIAL

“NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO. MATERIAL DE

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL. LIMPIEZA, DESINFECCIÓN
Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL”

PRIMER LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

DOCENTE: MSc. Blgo. ALVARO MARTÍN MARTÍNEZ VILA

Lima, Perú
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ÍNDICE

1. Resumen
2. Introducción
3. Objetivos
3.1 objetivo general
3.2 objetivos específicos
4. Marco teórico
5. Procedimiento experimental
6. Conclusiones
7. Recomendaciones
8. Apéndice
9. Fuentes de información

1. RESUMEN

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El trabajo que se presenta se realizó con la finalidad de conocer las normas del
laboratorio de microbiología, como también nos da a conocer una adecuada
limpieza, desinfección y esterilización de materiales, esto es muy importante para
un perfecto uso del laboratorio. Un adecuado uso de laboratorio de microbiología
nos ayudará a no contraer enfermedades, ya que en el laboratorio se trabajará con
microorganismos que originan enfermedades que pueden ser perjudiciales para la
salud. De igual forma el adecuado uso de los materiales del laboratorio nos
favorecerá en nuestro trabajo

2. INTRODUCCIÓN

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En el laboratorio de microbiología se trabaja con microorganismos infecciosos como

por ejemplo la salmonela que es causante de la enfermedad como la salmonelosis,
el simple hecho de manipular de una forma inadecuada los materiales que están o
se usaron para trabajar con este microorganismo puede generar diferentes
infecciones. Para ello las normas de seguridad y limpieza son de suma importancia,
yaqué con estas normas se pretende reducir a un nivel aceptable el riego inherente
a la manipulación de materiales que están contaminados.
La esterilización de los materiales es un mecanismo por el que se consigue la muerte
o eliminación de todos los microorganismos vivos de una muestra, medio, superficie
o material de trabajo. Un objeto esterilizado está, por lo tanto, totalmente libre de
microorganismos incluyendo sus formas de resistencia. No hay que confundir la
esterilización con la desinfección en la que no se eliminan todos los
microorganismos, sino únicamente aquellos que pueden causar enfermedad o
efectos nocivos sobre los productos en los que se encuentran (en alimentos,
cosméticos, etc.). Un objeto desinfectado, por lo tanto, no está estéril.

3. OBJETIVOS

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3.1 objetivo general

Conocer los aspectos básicos de bioseguridad y reglas generales para el

desarrollo de las actividades en el laboratorio de microbiología.

3.2 objetivos específicos

Reconocer las metodologías existentes en la desinfección de superficies e

implementos de laboratorio de microbiología.

Aplicar algunos métodos utilizados para la esterilización de medios de cultivo,

materiales y accesorios utilizados en el laboratorio de microbiología.

4. MARCO TEÓRICO

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REGLAMENTO Y NORMAS DE TRABAJO EN EL LABORATORIO

 Deberá usarse siempre un mandil blanco y limpio.

 Antes de comenzar cualquier trabajo, el alumno deberá lavarse las manos
usando agua y jabón y secarse con una toalla limpia.
 Los libros y cuadernos de notas nunca deben colocarse sobre la mesa de
trabajo.
 Antes de comenzarse el experimento, deberá leerse detenidamente el
experimento a realizarse.
 Queda terminantemente prohibido comer o fumara dentro del laboratorio.
 Por ningún motivo deberá llevarse el lápiz o cualquier objeto a la boca.
 La superficie de la mesa deber ser cuidadosamente desinfectada antes y
después del trabajo.
 El material usado (tubos, matraces, frascos, etc.,) debe colocarseinmediatam
ente en los recipientes dispuestos para este fin.
 Las asas de Kolle y pinzas infectadas, deberán ser esterilizadas por flameo
inmediatamente después de ser usadas.
 Está prohibido pipetear con la boca.
 Las pipetas y portaobjetos usados deberán ser colocados en los recipientes
que contengas solución desinfectante de fenol al 0,5%.
 Las envolturas, tapones de algodón etc. No deben tirarse nunca al suelo,
deben depositarse en recipientes para desperdicios.
 Todo accidente, tales como cortes en las manos, volcaduras de líquidoscont
aminados, absorción de los mismos al pipetear deberá informarseinmediata
mente.
 Antes de dejar el laboratorio se deberá ubicar cada cosa en su lugar y las
mesas convenientemente limpias.
 Terminado el trabajo deberá lavarse las manos con jabón desinfectante y
alcohol.
 No se manejarán las autoclaves o el material recién esterilizado si no se
dispone de guantes apropiados.

ESTERILIZACION

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Se denomina esterilización al proceso por el cual se obtiene un producto libre de

microorganismos viables. El proceso de esterilización debe ser diseñado, validado y
llevado a cabo para asegurar que es capaz de eliminar la carga microbiana del
producto o un microorganismo más resistente.

Dado que la esterilidad no se puede demostrar de manera absoluta, sin causar la

destrucción completa de todas las unidades del lote de producto terminado; se define
la esterilidad en términos probabilísticos, en donde la probabilidad de que una unidad
de producto esté contaminada es aceptablemente remota. Se considera que un
producto crítico es estéril, cuando la probabilidad de que un microorganismo esté
presente en forma activa o latente es igual o menor de 1 en 1.000.000 (coeficiente de
seguridad de esterilidad 10-6).

Los agentes que matan microbios son denominados microbicidas (cida= “matar”) o
más comúnmente denominados “germicidas”. Si el agente específicamente destruye
bacterias, es llamado bactericida; si mata hongos es denominado fungicida. Tras una
exposición del objeto esterilizado al aire o a sus alrededores, éste se habrá
contaminado de nuevo con microorganismos.

CONTROL MICROBIANO MEDIANTE AGENTES FÍSICOS

CALOR: La exposición al agua en ebullición durante 10 minutos es suficiente para

destruir células vegetativas, pero no es suficiente para destruir endosporas. No
esteriliza.

La eficacia del calor como agente antimicrobiano, se puede expresar como el Tiempo
de muerte térmico (TMT), que se define como el tiempo más corto necesario para
destruir los microorganismos en una suspensión, a una temperatura específica y en
condiciones definidas. Sin embargo, como la destrucción es logarítmica no es posible
eliminar completamente los microorganismos de una muestra.
Existen diversos métodos de control de microorganismos por medio del calor:

A. ESTERILIZACIÓN POR VAPOR (CALOR HÚMEDO O AUTOCLAVE): El agua es

llevada a punto de ebullición de manera que el vapor llena la cámara, desplazando el

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aire frío. Cuando todo el aire es expulsado, se cierran las válvulas de seguridad y el
vapor satura toda la cámara, por lo que incrementa la presión, hasta que se alcanzan
los valores deseados (121°C y 15 lb presión).
En estas condiciones se destruyen todas las células vegetativas y endosporas en un
tiempo que por lo general es de 15 minutos. Se piensa que el calor húmedo degrada
los ácidos nucleicos, desnaturaliza proteínas y además alterar las membranas
celulares.
Si no se cumplen las condiciones adecuadas, no hay esterilización. Para controlar el
buen funcionamiento del equipo, se pueden incluir con la esterilización un control
biológico o un indicador químico.
El indicador biológico consiste en una ampolla estéril con un medio y un papel cubierto
con esporas de Bacillus stearothermophilus o Clostridium. Luego de la esterilización
se rompe la ampolla y se incuba por unos días. El indicador químico consiste en una
cinta especial con letras o líneas que cambian de color después del tratamiento
suficiente con calor.
B. PASTEURIZACIÓN: Se utiliza para sustancias o medios que no pueden ser
calentadas a más de su temperatura de ebullición. Un calentamiento breve a 55 o
60°C destruirá los microorganismos patógenos y disminuye los causantes de la
descomposición de la sustancia. NO esteriliza. Existen variaciones que son utilizadas
en la industria de la leche: la pasteurización rápida (HTST high temperature short-
term) que consiste en calentar a 72°C por 15 segundos. Y la pasteurización a
temperatura ultra elevada (UTH ultrahigh temperature) que calienta a 140-150°C por
1 a 3 segundos.
C. TINDALIZACIÓN O ESTERILIZACIÓN FRACCIONADA AL VAPOR: se utiliza
para químicos o material biológico que no puede llevarse a más de 100°C. Se calienta
a una temperatura de 90°C a 100°C durante 30 minutos por tres días consecutivos y
se incuba a 37°C entra cada calentamiento. El primer calentamiento destruye células
vegetativas, pero no esporas, por lo que germinan a 37ºC y luego son eliminadas con
el siguiente calentamiento.
D. CALOR SECO: Se utilizan hornos o estufas a una temperatura de 160-170°C por
2 o 3 horas. Es menos efectivo que el calor húmedo, pero no corroe utensilios
metálicos. Es lenta y no se puede utilizar para material termo sensible.

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E. INCINERACIÓN: Destruye por completo los microorganismos. (Calentar las asas

en los mecheros).
F. TEMPERATURAS BAJAS: Refrigeración y congelación, son únicamente
bacteriostáticos. En general, el metabolismo de las bacterias está inhibido a
temperaturas por debajo de 0° C. Sin embargo, estas temperaturas no matan a los
microorganismos, sino que pueden conservarlos durante largos períodos de tiempo.
Esta circunstancia es aprovechada también por los microbiólogos para conservar los
microorganismos indefinidamente. Los cultivos de microorganismos se conservan
congelados a -70° C o incluso mejor en tanques de nitrógeno líquido a -196° C.
G. DESECACIÓN: Es de efecto bacteriostático y las esporas permanecen viables.

FILTRACIÓN: es utilizada para materiales termosensibles.

A. FILTROS DE PROFUNDIDAD: Se utilizan materiales fibrosos o granulados que
forman una capa gruesa con canales de diámetro muy pequeño. La solución es
aspirada al vacío y los microorganismos quedan retenidos o son adsorbidos por el
material. Se utilizan diatomeas, porcelana no vidriada, asbestos.
B. FILTROS DE MEMBRANA: Son circulares con un grosor de 0.1 mm y con poros
muy pequeños, de unos 2 μm por lo que los microorganismos no pueden atravesarlo.
Se fabrican de acetato de celulosa, policarbonato, fluoruro de polivinilo u otros
materiales sintéticos.

CONTROL MICROBIANO MEDIANTE AGENTES QUIMICOS

a. FENOLES: el primer desinfectante y antiséptico utilizado, en 1867 Joseph Lister

los empleo para reduci rel riesgo de la infección de las cirugías. Hasta ahora los
fenoles y sus derivados (cresol, xilenol) son utilizados como desinfectantes en
laboratorios y hospitales. Elimina micobacterias, eficaz aún en presencia de materia
orgánica y permanece activo en la superficie después de mucho tiempo de su
aplicación. Desnaturaliza proteínas y altera la membrana. Tiene olor desagradable y
puede producir irritaciones cutáneas.

b. ALCOHOLES: No elimina esporas, pero son bactericidas y fungicidas y algunas

veces viricida (virus que contienen lípidos), son comúnmente utilizados

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principalmente el etanol y el isopropanol en concentraciones de 70-80%. Tienen el

mismo modo de acción de los fenoles.
c. METALES PESADOS: mercurio, arsénico, plata, zinc y cobre. Son bacteriostáticos
ya que el metal se combina con los grupos sulfihidrilos de las proteínas inactivándolas
o precipitándolas. Son tóxicos. Ejemplos: sulfato de cobre (alguicida) y nitrato de plata
(gonorrea oftálmica en niños)
d. HALÓGENOS: Yodo: antiséptico cutáneo. Oxida componentes celulares y forma
complejos con las proteínas. En altas concentraciones puede destruir algunas
esporas. Puede lesionar la piel, dejar manchas y desarrollar alergias.

RADIACIÓN:
a. ULTRAVIOLETA: Es letal para todas las clases de microorganismos por su
longitud de onda corta y su alta energía. Es letal a 260 nm ya que es la longitud de
onda que es más efectivamente absorbida por el ADN. El mecanismo primario del
daño al ADN es la formación de dímeros de timina lo que inhibe su función y
replicación. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.
b. IONIZANTE: Niveles bajos pueden producir mutaciones e indirectamente resultar
en la muerte, niveles altos son letales. Específicamente causan una serie de cambios
en las células: ruptura de puentes de hidrógeno, oxidación de dobles enlaces,
destrucción de anillos, polimerización de algunas moléculas, generación de radicales
libres. La mayor causa de muerte es la destrucción del ADN. Es excelente
esterilizante y con penetración profunda en distintos materiales, por lo que se utilizan
para esterilizar materiales termolábiles (termosensibles) como jeringas desechables,
sondas, etc.

5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Materiales de laboratorio

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 Matraz de Enlermeyer.  Autoclave.

 Probeta.  Esterilizador.
 Vaso de precipitados.  Centrífuga.
 Pipeta.  Microscopio óptico.
 Tubos de ensayo.  Frigorífico o cámaras.
 Placas Petri.  Refrigeradas.
 Balanza digital.  Contador de colonias.
 Baño María.  Asas de siembra.
 Incubadora.  Ph-metros.
 Laminas portaobjetos.  Cucharas y espátulas.
 Ozono.  Mechero
 Cámara de neubauer.
Materiales de limpieza

 Iodo
 Fenol y compuestos fenólicos al 5%
 Alcohol Isopropílico al 70%

Medios de cultivo
 Caldo nutritivo  Agar nutritivo
 Caldo BHI  Agar SS
 Agar plate count  Caldo de selenito
 Agua peptonada  Medio S.I.M.
 Agar B de king
 Agar urea
 Agar brucella
 Gelatina nutritiva
 Agar glucosado
 Indol y nitritos
 Agar de kligler
 Caldo lactosado
 Agar manitol
 Agar mcconkey
 Agar EMB
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CALOR HÚMEDO:

El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos efectos

se deben principalmente a dos razones:

 El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas son
producidas por reacciones que eliminan agua.

 El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado

que el aire.

AUTOCLAVE
Se realiza la esterilización por el vapor de agua a presión. El modelo más usado es el
de Chamberland. Esteriliza a 120º a una atmósfera de presión (estas condiciones
pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos.

EQUIPO:
Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metálica, que en la
parte inferior recibe calor por combustión de gas o por una resistencia eléctrica, esta se
cierra en la parte superior por una tapa de bronce. Esta tapa posee tres orificios, uno
para el manómetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete y el tercero, para
una válvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte.

FUNCIONAMIENTO:
Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se
disponen sobre una rejilla de metal. Se cierra asegurando la tapa, sin ajustar los bulones
y se da calor, dejando abierta la válvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y
comience la salida de vapor en forma de chorro continuo y abundante.

TYNDALIZACIÓN:
Esterilización por acción discontinua del vapor de agua, se basa en el principio de Tyndal
Las bacterias que resisten una sesión de calefacción, hecha en determinadas
condiciones, pueden ser destruidas cuando la misma operación se repite con intervalos
separados y en varias sesiones. Se efectúa por medio de la autoclave de Chamberland,
dejando abierta la válvula de escape, o sea funcionando a la presión normal. Puede
también realizarse a temperaturas más bajas, 56º u 80º ocupara evitar la
descomposición de las sustancias a esterilizar, por las temperaturas elevadas.

IONIZANTES:
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los ácidos nucleicos,
estructuras proteicas y lipídicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los
microorganismos.

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Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolábiles

(termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala
industrial por sus costos.

RAYOS ULTRAVIOLETAS:
Afectan a las moléculas de DNA de los microorganismos. Son escasamente
penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilización en
quirófanos.

RAYOS GAMMA:
Su empleo está basado en los conocimientos sobre la energía atómica. Este tipo de
esterilización se aplica a productos o materiales termolábiles y de gran importancia en
el campo industrial. Puede esterilizar antibióticos, vacunas, alimentos, etc.

6. CONCLUSIONES
 Se logró reconocer la utilización sus funciones en los materiales y equipos de
trabajo del laboratorio de microbiología a través del contacto directo.
 La esterilización de los materiales es el punto más importante para evitar las
posibles contaminantes de microorganismos y la aparición de hongos durante el
desarrollo del trabajo además de ser útil para su nueva utilización.
 Algunos materiales son no reutilizables dado que se llegan a contaminar de
microorganismos no deseados.

7. RECOMENDACIONES
 Mantener un control de reconocimiento en la fecha de vencimiento en los
antisépticos y desinfectantes.
 Realizar una limpieza en cada uno de los envases posterior al uso con agua
destilada y alcohol para evitar posibles contaminantes en la solución a tratar.
 El área de trabajo debe mantenerse zonas secas, ventiladas, protegidas con
agentes físicos como la luz y una buena ventilación mecánica.
 Las diluciones deben hacerse a la temperatura, y según el procedimiento indicado
por el fabricante.
 Nunca se deben tapar utilizando cubiertas de metal, algodón, gasa, corcho o papel
es recomendable usar la tapa original.

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8. APÉNDICE

ESTERILIZACIÓN:

Pre - lavado

Lavado y descontaminación

Secado e inspección

Preparación
Almacenamiento y
del material
distribución

Empaque Método de esterilización

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MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN:

Húmedo, ejemplo: Vapor a presión

autoclave.

AGENTES FÍSICOS CALOR

Seco, ejemplo: Aire caliente(horno)

Incineración.

AGENTES MECÁNICOS Filtración

AGENTES QUÍMICOS

GASEOSOS NO GASEOSOS

Aldehídos, Ej. Glutaraldehido

Ácido peracético
ÓXIDO DE ETILENO

Peróxido de hidrógeno

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9. FUENTES DE INFORMACIÓN

 Iáñez, E. (9 de mayo de 2005). Microbiología general.

 Romero, M., Esquivel, J., Alvarado, F., Resendiz, M. d., & Rangel, M. (6 de
junio de 2012). Microbiologia.

 A. Gilmour. (1998). The Journal of Applied Microbiology.

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