BAB III

METODE KERJA

3.1 ALAT DAN BAHAN

3.1.1 ALAT 3.1.2 BAHAN
- Yellow tip
- Blue tip
- Mikropipet
- Spektrofotometer
- Stopwatch
- Tabung reaksi 3 mL
- Beaker gelas
- Aquadest
- Reagen RT tdd: Sulfanilic Acid 29 mmol/L,
Hydrochloric acid 0,24 mol/L, Dupasol® 3%
(w/v)
- Reagen RD tdd: Sulfanilic Acid 29 mmol/L,
Hydrochloric acid 0,24 mol/L
- Reagen RN tdd: Sodium Nitrate 11,6 mmol/L
- Kalibrasi/Standar/CAL: Bilirubin calibrator
- Sampel serum

3.2 CARA KERJA

3.2.1 Cara Kerja Bilirubin Direct

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan

Disiapkan spektrofotometri dengan absorbansi 0 menggunakan aquadet

Disiapkan working reagen: campur 1 mL reagen RN dengan 4 mL reagen RD

Disiapkan standar/kalibrasi: rekonstitusi vial dengan menambahkan 1,0 mL

aquadest

Dihomogenkan campuran dan dibiarkan 5-10 menit sebelum dipergunakan

Disiapkan 3 buah tabung reaksi yang telah diberi label blanko, standar, sampel
 Dipipet masing-masing kedalam tabung:
- Blanko: 100 µL aquadest dan 1 mL working reagen
- Sampel blanko: 100 µL sampel dan 1 mL reagen RD
- Sampel: 100 µL sampel dan 1 mL working reagen
- CAL: 100 µL CAL dan 1 mL working reagen

Dihomogenkan campuran dan diinkubasi selama 5 menit pada suhu 25-30oC

Dibaca absorbansi sampel blanko terhadap aquades dengan spektrofotometri

pada panjang gelombang 540 nm

Dibaca absorbansi sampel terhadap reagen blanko dengan spektrofotometri

pada panjang gelombang 540 nm

Dicatat absorbansi yang didapatkan lalu dihitung kadar Bilirubin Direct dalam
sampel

3.2.2 Cara Kerja Bilirubin Total

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan

Disiapkan spektrofotometri dengan absorbansi 0 menggunakan aquadet

Disiapkan working reagen: campur 1 mL reagen RN dengan 4 mL reagen RD

Disiapkan standar/kalibrasi: rekonstitusi vial dengan menambahkan 1,0 mL

aquadest

Dihomogenkan campuran dan dibiarkan 5-10 menit sebelum dipergunakan

Disiapkan 3 buah tabung reaksi yang telah diberi label blanko, standar, sampel

Dipipet masing-masing kedalam tabung:

- Blanko: 100 µL aquadest dan 1 mL working reagen
- Sampel blanko: 100 µL sampel dan 1 mL reagen RD
- Sampel: 100 µL sampel dan 1 mL working reagen
- CAL: 100 µL CAL dan 1 mL working reagen

Dihomogenkan campuran dan diinkubasi selama 5 menit pada suhu 25-30oC

Dibaca absorbansi sampel blanko terhadap aquades dengan spektrofotometri

pada panjang gelombang 540 nm

Dibaca absorbansi sampel terhadap reagen blanko dengan spektrofotometri

pada panjang gelombang 540 nm

Dicatat absorbansi yang didapatkan lalu dihitung kadar Bilirubin Direct dalam
sampel