Cuadro 1

La ORF que codifica la poliproteína del virus del dengue (DENV) (parte a) o del virus de la
hepatitis C (VHC) (parte b) y las estructuras secundarias predichas de las regiones no
traductoras (NTR) 5) y 3ʹ se representan en la parte superior de cada panel.

 El genoma DENV contiene una estructura de tapa tipo 1 en el extremo 5ʹ.

 La escisión de poliproteínas por peptidasas de señal celular se indica mediante tijeras
 Las flechas denotan la escisión por la proteasa viral, mientras que
 la flecha vertical negra indica la escisión por la proteasa furina residente del aparato
de Golgi.
 El signo de interrogación denota una segmentación de poliproteína DENV realizada
por una proteasa desconocida.
 Las proteínas estructurales de la cápside de DENV:
o Proteína C
o prM
o Proteína de la envoltura E son constituyentes del virión
o NS1, la única proteína no estructural que reside en el lumen del retículo
endoplásmico (ER)
o NS2A son esenciales para la replicación del virus y la producción de partículas
infecciosas
o La subunidad NS2B de la serina proteasa actúa como un cofactor para la
serina proteasa NS3 y recluta las membranas NS3 a ER
o NS3 es una proteína multifuncional con proteasa, nucleótido 5ʹ trifosfatasa
(NTPasa), ARN 5ʹ trifosfatasa y helicasa
o NS4A es una proteína de membrana integral con actividad inductora de
curvatura de membrana.
o El péptido 2K sirve como un péptido señal para la inserción de traducción
NS4B en la membrana ER
o NS4B es una proteína sin actividad enzimática informada que interactúa con
NS3 y es absolutamente necesaria para la replicación del virus
o NS5 consiste en un dominio N-terminal que posee actividades de
guanililtransferasa, guanina-N7-metiltransferasa y nucleósido-2ʹ O-
metiltransferasa involucradas en la cobertura y la metilación del ARN viral
con un nucleósido-2ʹ O y un dominio C-terminal con ARN polimerasa
dependiente de ARN Actividad responsable de la síntesis de ARN viral.
B

El genoma del ARN del VHC tiene una longitud de ~ 9.6 kb, no está recubierto y está
flanqueado por NTR de 5ʹ y 3 altamente estructurados.

 La NTR 5ʹ contiene un sitio de entrada al ribosoma interno de tipo III (IRES) que dirige
la traducción independiente del límite del genoma del ARN viral.
 La escisión de poliproteínas por la proteasa viral se indica mediante flechas, mientras
que
 La escisión por peptidasas de señal celular se indica mediante tijeras.
 La división por la peptidasa peptídica de señal celular que resulta en la eliminación
de la región carboxiterminal del núcleo del VHC se indica mediante un asterisco.
 La proteína del núcleo y las glicoproteínas de la envoltura E1 y E2 constituyen la
partícula viral, mientras que
 p7 y NS2 soportan el ensamblaje de partículas, pero aún no están incorporadas en los
viriones;
 El dominio NS2 C-terminal contiene una cisteína proteasa que cataliza la escisión de
la unión NS2-NS3;
 NS3 contiene serina proteasa, ARN helicasa y actividades NTPasa
 NS4A actúa como cofactor para la proteasa NS3 y ancla las membranas NS3 a ER
 NS4B participa en la formación del orgánulo de replicación del VHC
 NS5A es una fosfoproteína con una región C-terminal intrínsecamente desplegada
que media interacciones con numerosas proteínas celulares
 NS5B es la ARN polimerasa dependiente de ARN viral responsable de la síntesis de
ARN.
 Tenga en cuenta que solo la cápside DENV y el NS1, así como el NS5A del VHC se
muestran como dímeros, pero las proteínas virales adicionales forman homodímeros
y heterodímeros o complejos oligoméricos.
 AUG, metionina (codón de inicio); D1, dominio 1. La parte b está adaptada de REF. 39,
Macmillan Publishers Limited.
Cuadro 2

Caja 1 | Ciclo de replicación de Flavivirus

Las partículas de virus se unen a la superficie de las células susceptibles, que incluyen
monocitos, células dendríticas de la piel (por ejemplo, células de Langerhans en el caso del
virus del dengue (DENV)), neuronas (por ejemplo, en el caso del virus del Nilo Occidental (WNV)
y Virus Zika (ZIKV), macrófagos placentarios (células de Hofbauer), trofoblastos, células
progenitoras neurales humanas, células testiculares, fibroblastos uterinos y tejidos asociados
a los ojos (por ejemplo, en el caso de ZIKV).

La visión actual es que las partículas virales primero interactúan con los factores de unión que
se requieren para atar el virión a la superficie celular, lo que es seguido por otras interacciones
específicas con los receptores secundarios, que median la internalización endocítica y es
probable que definan la especificidad del tejido. Los receptores o factores de unión que se
identificaron en células diana relevantes incluyen:

 El antígeno CD209 de lectina de tipo C (también conocido como DC-SIGN), que es

explotado por los cuatro serotipos DENV y WNV para unirse a las células dendríticas
 El receptor de manosa, descrito como un receptor DENV en macrófagos
 Miembros de la familia de receptores de fosfatidilserina TAM (proteína tirosina
proteína quinasa receptor 3 (TYRO3) -AXL-MER de TIM (proteína de dominio de mucina
de inmunoglobulina T 1) y TAM, que facilitan la infección por DENV de células
epiteliales primarias y la entrada de ZIKV en células de placenta, piel Fibroblastos y
células gliales.

Las partículas de flavivirus ingresan predominantemente a través de una vía de entrada

dependiente de clatrina, exponiendo las partículas virales a un compartimento endosómico
ácido que desencadena reordenamientos conformacionales de las glicoproteínas de la
envoltura para permitir la fusión de las membranas endosómicas y virales, lo que resulta en la
liberación del ARN viral en el citosol.

El ARN de sentido positivo liberado ((+) ARN) es reconocido por los ribosomas, iniciando la
traducción en la membrana del retículo endoplásmico (ER) en bruto y produciendo una única
poliproteína.

Las proteasas virales y celulares catalizan la escisión co-traduccional y postraduccional de la

poliproteína en tres proteínas estructurales y siete no estructurales, casi todas de ellas
asociadas con membranas intracelulares. Mientras que las proteínas estructurales son
constituyentes del virión, las proteínas no estructurales orquestan las invaginaciones de la
membrana del RE, que son el supuesto sitio de amplificación del genoma del ARN a través de
la síntesis de un intermedio de ARN ((-) ARN) de sentido negativo.

Todas las proteínas no estructurales de Flavivirus son esenciales para la replicación del ARN,
ya que la proteína no estructural 1 (NS1) DENV tiene un doble papel en la replicación del ARN
y en la producción de partículas de virus.

Las moléculas de ARN (+) que se generan por el complejo de la replicasa viral se pueden
incorporar a las partículas virales, un proceso que involucra la encapsidación del ARN y la
brotación en el lumen del RE, que ocurre predominantemente en regiones opuestas a los sitios
de replicación.
La maduración de las partículas nacientes de DENV que contienen prM se produce a lo largo
de la vía secretora por escisión de prM mediada por furina.

Se presume que las partículas de flavivirus salen de la célula a través de la vía secretora
convencional, aunque los detalles de cómo ocurre este proceso y si las gotitas de lípidos, así
como las apolipoproteínas, están involucradas en la producción del virus, como es el caso de la
infección por el virus de la hepatitis C es incierto.

 HSPG, proteoglicanos de sulfato de heparina.

Imagen – Pasos

 Fijación
 Internalizacion
 Fusión
 Traducción
 Replicación de ARN
 Montaje
 Maduración
 Secreción

Caja 2 | Ciclo de replicación del virus de la hepatitis C

Las partículas del virus de la hepatitis C (VHC) están estrechamente relacionadas con las
lipoproteínas de las células huésped y tienen un alto contenido de lípidos. Estas
lipoviropartículas se dirigen principalmente a los hepatocitos y entran a las células a través de
la unión gradual a varios receptores de la célula huésped que eventualmente localizan las
partículas virales en uniones estrechas donde se internalizan

En este caso, los proteoglicanos de sulfato de heparano (HSPG) junto con los receptores de
lipoproteínas de baja densidad (LDLR) y otras moléculas de la superficie celular median la
unión inicial a la célula.

Luego, las partículas virales interactúan con el miembro 1 de la clase B del receptor del
secuestrador (SRB1) y la tetraspanina CD81, que guían la difusión lateral de los viriones unidos
hacia la membrana apical. Allí, el CD81 se asocia con las proteínas de unión estrecha claudina
1 (CLDN1) y occludina (OCLN), un paso que es crítico para la internalización endocítica a través
de la vía de entrada dependiente de clatrina.

Después de la liberación del ARN viral en el citosol, el genoma viral se traduce en el retículo
endoplásmico (ER) rugoso, y las proteínas virales junto con los factores de la célula huésped
forman el orgánulo de replicación, que se compone principalmente de vesículas de doble
membrana (DMV). Uno de los cuales quedan abiertos hacia el citosol. Los DMV permanecen
vinculados a la ER o son liberados.

El ensamblaje de partículas del VHC se produce en estrecha asociación con las gotitas de lípidos
citosólicos en sitios muy probablemente enriquecidos en proteínas del núcleo; glicoproteínas
de envoltura E1 y E2; p7 y proteína no estructural 2 (NS2).

La formación y posiblemente también la secreción de viriones recién formados se producen en

asociación con componentes de la maquinaria de lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL).
Las partículas secretadas de HCV exhiben una densidad flotante inusualmente baja (≤1.055 g
/ ml en suero y ~ 1.1 g / ml en cultivo celular), son altamente pleomorfas, incorporan
lipoproteínas celulares (más notablemente apolipoproteína E (APOE)) y tienen una
composición lipídica similar Partículas de lipoproteínas de baja densidad (LDL)

APOE puede adquirirse durante o después de la envoltura de partículas de HCV y contribuir a

la maduración de partículas, la liberación de partículas o la adquisición de infectividad.
“Curiosamente, se informó que APOE, la glicoproteína secretada ERNS de los pestivirus y NS1
de los flavivirus cumplía la misma función en la maduración del virus e incluso puede rescatar
la infectividad de las partículas del VHC que se producen en las células de doble abatimiento
APOB-APOE.” Los análisis morfológicos y bioquímicos más recientes han demostrado que el VHC
forma lipoviropartículas (es decir, partículas que se parecen a VLDL), pero también puede
unirse a partículas de VLDL después de la liberación de las células, formando así complejos de
partículas.

Se presume que los viriones del

VHC de progenie salen de la
célula a través de vías
secretoras.

Imagen – Pasos

 Fijación
 Internalizacion
 Fusión
 Traducción
 Replicación de ARN
 Gota de lípidos
 Montaje
 ¿Maduración?
 Secreción
RECABLEADO DE REDES CELULARES POR MIEMBROS DE LA FAMILIA FLAVIVIRIDAE.

Como parásitos intracelulares obligados, los virus dependen estrictamente de su capacidad para
manipular la maquinaria de las células huésped para propagarse. En consecuencia, los virus han
desarrollado numerosas estrategias para manipular las células infectadas al desencadenar una
serie de cambios metabólicos y estructurales que facilitan la replicación viral.

La familia Flaviviridae proporciona muchos ejemplos fascinantes de reprogramación celular

impulsada por virus. Esta familia está compuesta por cuatro géneros: Flavivirus (con 53
especies); Hepacivirus (con 14 especies); Pegivirus (con 11 especies) y Pestivirus (con 4 especies)
1. Varios miembros de los géneros Hepacivirus y Flavivirus tienen un impacto sustancial en la
salud humana. La infección crónica por el virus de la hepatitis C (VHC), el prototipo de
hepacivirus, es la principal causa de enfermedad hepática en todo el mundo, con
aproximadamente 71 millones de personas en riesgo de desarrollar cirrosis hepática y carcinoma
hepatocelular2. Recientemente, los fármacos antivirales de acción directa altamente eficaces
dirigidos a los procesos virales esenciales están disponibles para uso clínico; sin embargo,
todavía falta una vacuna profiláctica para controlar la pandemia del VHC (revisada en la REF. 3)

En contraste con la infección predominantemente persistente por el VHC, las infecciones

humanas con flavivirus son agudas y autolimitadas y son asintomáticas o se presentan como una
enfermedad febril no diferenciada que puede, en casos específicos, conducir a síntomas más
graves, como una fuga vascular, grave Hemorragia, shock o complicaciones neurológicas graves,
como encefalitis y meningitis.

El virus del dengue (DENV, por sus siglas en inglés), el agente etiológico de la fiebre del dengue
y la fiebre hemorrágica del dengue, o síndrome del shock del dengue, es responsable de
aproximadamente 60 millones de infecciones sintomáticas por año, causando
aproximadamente 10,000 muertes por año4. Aunque recientemente se ha autorizado una
vacuna contra el DENV, su eficacia general es limitada, especialmente en individuos
inmunológicamente ingenuos, y su administración no se recomienda para niños pequeños o
ancianos, ambos de los cuales tienen un mayor riesgo de enfermedad grave5.

Los ejemplos de flavivirus neurotróficos incluyen el virus del Nilo Occidental (WNV), el virus de
la encefalitis transmitida por garrapatas (TBEV), el virus de la encefalitis japonesa (JEV) y el virus
Zika (ZIKV). Esta última se ha propagado recientemente en todo el mundo y las infecciones se
han relacionado con el síndrome de Guillain Barré en adultos y múltiples defectos del desarrollo
neurológico, incluida la microcefalia en bebés nacidos de madres infectadas durante el primer
trimestre del embarazo (revisado en REF. 6). Aunque el ZIKV rara vez es neuroinvasivo en
adultos, puede infectar células progenitoras neurales humanas (hNPC), lo que probablemente
resulte en los trastornos congénitos mencionados anteriormente (revisado en REF. 7). En la
actualidad, no hay medicamentos antivirales aprobados disponibles para el tratamiento de
infecciones por Flavivirus.

Síndorme de Guillain-Barré

Una enfermedad neurológica aguda (generalmente reversible) que resulta de la destrucción

autoinmune del sistema nervioso periférico que con frecuencia es desencadenada por una
infección.

Además de las marcadas diferencias en tropismo y patogénesis, los virus dentro de los géneros
Flavivirus y Hepacivirus, aunque comparten similitudes en su organización genómica general,
difieren en varios aspectos, como su mecanismo de traducción: una vía canónica, dependiente-
cap en el caso de flavivirus o un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) en el caso del VHC
(Figura 1).

En la misma línea, el principio general de los ciclos de replicación de flavivirus y hepacivirus es

similar (RECUADRO 1 y RECUADRO 2, respectivamente), pero se han descubierto múltiples
diferencias durante los últimos años, incluida la dependencia de una lipido quinasa específica
en el caso de VHC pero no DENV o ZIKV

Estas diferencias y similitudes reflejan las estrategias que utilizan estos virus para manipular las
células huésped, ofreciendo la oportunidad de conocer los roles de los factores de la célula
huésped, las vías y los mecanismos de su manipulación mediante la realización de análisis
comparativos. En esta Revisión, resumimos la comprensión actual de cómo los miembros de la
familia Flaviviridae toman el control de los componentes o procesos celulares para crear
entornos favorables para la replicación viral. Compararemos y contrastaremos DENV y ZIKV con
HCV como representantes de los géneros Flavivirus y Hepacivirus, respectivamente.
Comprender los detalles de cómo los virus explotan sus células huésped abre nuevas vías para
el desarrollo de estrategias antivirales, y la comparación de estrategias de replicación dentro de
Flaviviridae puede ayudarnos a identificar factores de dependencia de huésped esenciales
compartidos que sean adecuados para el desarrollo de antivirales de amplio espectro con
Actividad pan-flaviviral.

Arquitectura de orgánulos de replicación.

La replicación del genoma de los virus de ARN de cadena positiva ((+) ARN) se produce en
estrecha asociación con las endomembranas celulares dentro de estructuras similares a
orgánulos definidas como orgánulos de replicación (RO). Estas RO sirven para aumentar la
concentración local de factores celulares y virales que se requieren para la replicación del
genoma, coordinan los diferentes pasos de la replicación viral a través de su compartimentación
y para proteger el ARN genómico de los sensores inmunes innatos celulares. Las RO se pueden
agrupar en dos clases morfológicamente distintas designadas como RO de tipo esférico o
invaginado o RO de tipo protrusión.

Las RO invaginadas / de tipo esférico se generan por invaginaciones de la membrana donante

en el lumen del orgánulo. Las RO de tipo protrusión están compuestas por grupos de vesículas
de membrana única (SMV), vesículas de membrana doble (DMV), vesículas multimembrana
(MMV) y, a menudo, túbulos multimembrana. Curiosamente, aunque las membranas de los
donantes pueden ser proporcionadas por diferentes orgánulos, las RO de todos (+) virus de ARN
pueden clasificarse en uno de estos dos morfotipos, lo que sugiere mecanismos conservados
evolutivamente de su biogénesis8.

En el caso de los flavivirus, el análisis por microscopía electrónica de células infectadas con DENV
o ZIKV reveló la formación de agrupaciones de vesículas de aproximadamente 90 nm de
diámetro, definidas como paquetes de vesículas (VP), que se crean por invaginación del retículo
endoplásmico rugoso (ER) membranas (figura 2a). Además, a menudo se observan membranas
de ER lisas agrupadas, denominadas membranas enmarañadas (CM), en estrecha proximidad a
las mitocondrias (ver a continuación) y VP. Los VP y los CM están interconectados y forman una
única red endomembrana. Una abertura similar a un poro de ~ 11 nm conecta el interior de la
vesícula con el citosol, presumiblemente para permitir el intercambio de metabolitos y otras
moléculas (figura 2A, recuadro). La detección de los componentes de la replicasa viral y los
intermedios de la replicación del ARN de doble cadena (ARNbc) dentro de las vesículas
invaginadas sugiere que las VP son el sitio de la amplificación del genoma viral9. Los viriones
brotan dentro de las cisternas ER opuestas a los poros de las vesículas invaginadas, y los grupos
de viriones a menudo se pueden observar en matrices paracristalinas en cisternas ER
agrandadas en gran proximidad a los VP.

La función específica de los CM en la infección viral aún no está clara. Un enriquecimiento para
las proteínas virales, pero no para el dsRNA en estas estructuras celulares sugiere que los CM
son sitios de maduración de la poliproteína12. Los CM también podrían servir como sitios de
almacenamiento de lípidos o interferir con las respuestas inmunes innatas al interrumpir las
membranas asociadas a las mitocondrias (MAM), una interfaz importante para la señalización
inmune innata, o al secuestrar los receptores de reconocimiento de patrones inmunes innatos
(PRR)

Sin embargo, la ausencia de tales estructuras en células de mosquito infectadas con DENV o
hNPC infectadas con ZIKV cuestiona una función general para los CM en la replicación viral y
aboga por un papel específico del tipo de célula. Además de las VP y las CM, a menudo se
observan cisternas de ER fuertemente yuxtapuestas con un área luminal limitada, denominadas
membranas de cremallera ER (zER), en células de hepatoma infectadas con ZIKV10.
Curiosamente, en las hNPC infectadas con ZIKV, no se forman CM ni zER, y el diámetro promedio
de las VP es considerablemente menor (~ 60 nm en comparación con ~ 90 nm en células de
hepatoma), lo que sugiere que los factores específicos del tipo de célula ayudan a determinar la
arquitectura de ZIKV ROs.

A diferencia de los flavivirus, el VHC induce la producción de DMV de ~ 150 nm de diámetro,

formando grupos designados como la banda membranosa (Figura 2B). La formación de la
membrana membranosa puede ser inducida por la síntesis de la proteína no estructural de la
replicasa viral 3 (NS3) a NS5B independientemente de la replicación del ARN viral.

La membrana externa del DMV a menudo está vinculada al ER, lo que sugiere que los DMV se
originan como protuberancias que se extienden desde el ER hacia el citosol16 (figura 2B,
recuadro). Además de los DMV, también pueden observarse SMV y MMV dentro de la banda
membranosa (Figura 2B). Aunque la contribución de los SMV al ciclo de replicación viral aún no
está clara, se ha demostrado que los MMV se forman después de la formación de los DMV y
pueden representar un subproducto de la replicación o surgir como resultado de una respuesta
de estrés celular17.

La correlación entre la abundancia de DMV y la amplificación de ARN, así como la presencia de

actividad replicasa en DMVs18 aislados, sugiere que los DMV constituyen el sitio de replicación
del ARN de HCV. Sin embargo, aún no es posible localizar de forma inequívoca el sitio de la
síntesis de ARN de novo en el lumen o en la membrana externa de los DMV. Los estudios
bioquímicos han demostrado que la actividad de la replicasa y el ARN del VHC residen en un
entorno resistente a la nucleasa y resistente a la proteasa18-20, lo que apoya la hipótesis de que
la replicación se produce dentro del lado luminal protegido por membrana de los DMV.

El intercambio de metabolitos y factores que se requieren para la replicación, así como la salida
de genomas recién sintetizados de los DMV, podría ocurrir a través de aberturas similares a
poros, que se observaron en aproximadamente el 10% de las vesículas. Esto sugeriría que solo
una pequeña proporción de los DMV admite la replicación activa en un momento determinado
y que la replicación podría cesar cuando las aberturas de la membrana estén cerradas16.
Alternativamente, los complejos de transporte proteico, como las estructuras similares a
complejos de poros nucleares, podrían permitir el tráfico dentro y fuera de un compartimento
de membrana cerrado.