UJI ANTIOKSIDAN DARI SIMPLISIA CAESALPINIA SAPPAN Caesalpinia sappan L.

)
(ANTIOXIDANT TEST FROM CAESALPINIA SAPPAN (Caesalpinia sappan L.))
Bella Vania Sianto1,Chusnul2,Ika Nuraini3,Laila Intan Pratama4,Sintia Dina Pranata5,Siti
Nur Aini6,Yulis Mitra Reformasika7
Jurusan Farmasi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universutas Ma Chung, Malang,I ndonesia,
65151

ABSTRAK
Kayu Secang (Caesalpinia sappan L.) merupakan salah satu spesies tumbuhan yang dapat
dimanfaatkan sebagai obat, mempunyai aktivitas antioksidan penangkal radikal bebas dari
kandungan utamanya brazilin. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari
kayu secang dengan melakukan proses ektraksi pada simplisia, mengetahui kandungan senyawa
yang terdapat dalam kayu secang, melakukan uji antioksidan menggunakan metode KLT
(Kromatografi Lapis Tipis) dan DPPH.
Kata kunci: Kayu secang, Antioksidan, Kromatografi, DPPH

ABSTRACT
Secang wood (Caesalpinia sappan L.) is one of the plant species that can be used as a
medicine, has antioxidant activity to counteract free radicals from its main ingredient, Brazilin.
This study aims to determine the antioxidant activity of secang wood by extracting the simplicia,
knowing the content of compounds contained in secang wood, conducting antioxidant tests using
the TLC (Thin Layer Chromatography) and DPPH methods.
Keywords: Secang wood, Antioxidants, Chromatography, DPPH
PENDAHULUAN
Indonesia memiliki berbagai macam
jenis tumbuhan yang dapat dimanfaatkan
sebagai bahan baku obat-obatan,seperti
minuman herbal atau jamu sebagai
pengobatan tradisional dikalangan
masyarakat pedesaan yang sudah menjadi
tradisi maupun budaya. Pada tahun 1985
WHO (World Health Organization) telah
memprediksi sekitar 80% penduduk dunia
telah banyak memanfaatkan tumbuhan obat
herbal untuk kesehatan. Diantaranya untuk
pencegahan dan pengobatan, terutama untuk
penyakit kronis ,degeneratif maupun kanker
(Mirza,2010).
Penyakit kronis dan degeneratif dapat
disebabkan oleh radikal bebas yag berlebih,
senyawa tersebut akan menyerang sel-sel di
tubuh yang sehat. Apabila jumlah radikal
bebas di dalam tubuh kita berlebihan, maka
sistem pertahanan tubuh yang biasanya
melawan senyawa radikal bebas tidak akan
efektif lagi bekerja sebagai pelindung
serangan radikal bebas, sehingga terjadilah
Famili : Leguminose
Genus : Caesalpinia
Secang (Caesalpinia sappan L.)
merupakan salah satu spesies tumbuhan yang
dapat dimanfaatkan sebagai obat, tergolong
tumbuhan herbal yang tumbuh alami dihutan-
hutan sekunder dan mudah di dapatkan di
Indonesia. Tumbuhan ini sebagian besar
dipergunakan sebagai pewarna alami, hasil
dari ektraksi kayu secang ini diambil dari
komponen utamanya yakni brazilin (Fu et al.,
2008;Jun et al., 2008). Pemanfaatan pada
kayu secang ini, dilakukan dengan mengolah
tanaman tersebut menjadi ekstrak terlebih
dahulu yaitu melalui proses ekstraksi sesuai
standart mutu bahan yang ada. Sehingga
kandungan aktif yang diharapkan dalam
proses oksidasi terhadap zat gizi yang
mengakibatkan timbulnya berbagai penyakit
(Rahmawati,2011).
Salah satu spesies tumbuhan yang dapat
dimanfaatkan sebagai obat tradisional adalah
secang (Caesalpinia sappan L.), tergolong
tumbuhan herbal yang tumbuh alami dihutan-
hutan sekunder dan mudah di dapatkan di
Indonesia. Tumbuhan ini sebagian besar
dipergunakan sebagai pewarna alami, hasil
dari ektraksi kayu secang ini diambil dari
komponen utamanya yakni brazilin (Fu et al.,
2008; Jun et al., 2008).
Morfologi
Klasifikasi Kayu Secang
(Tjitrosoepomo, 1994 dalam Fadliah,
2014) :
Kingdom : Plantae
Division : Spermatophyta
Sub Division : Angiospermae
Class : Dicotyledonae
Ordo : Rosales
ekstrak tersebut mampu mengandung
sebagian besar senyawa yang di inginkan
(Anonim,1995).
Secang juga memiliki komponen
kandungan senyawa lainnya selain brazilin
yakni alkaloid, tannin, saponin, flavonoid,
terpenoid, dan lainnya. Senyawa fenolik
seperti flavonoid pada ekstrak kayu secang
ini, mempunyai aktivitas antioksidan
penangkap radikal bebas. Aktivitas
penangkap antioksidan disini di istilahkan
sebagai peredam atau penangkap (scavenger)
radikal bebas, yaitu molekul yang dapat
berinteraksi dengan radikal bebas dan
berfungsi menetralkan radikal bebas
(Panovska et al., 2005).
 Ekstrak kayu secang berkhasiat
mengobati diare, meningkatkan imunitas,
malaria, vasorelaxant, hepatoprotective dan
tumor (Anariawati, 2009). Sebagai
antibakter, yakni dapat menghambat aktivitas
bakteri dalam saluran pencernaan karena
mengandung asam galat di dalam ekstrak
kayu secang (Fazri,2009).
MASERASI
Proses ekstraksi yang sering
digunakan adalah maserasi. Maserasi adalah
proses ekstraksi simplisa menggunakan
pelarut dengan beberapa kali gojokan atau
pengadukan pada temperature suhu ruangan
(kamar). Maserasi merupakan proses
penyarian yang paling baik digunakan untuk
bahan simplisia halus dMaserasi dilakukan
dengan cara merendam serbuk simplisia kayu
secang dalam pelarut. Pelarut akan
menembus dinding sel dan masuk kerongga
sel zat aktif. Perbedaan konsentrasi antara
larutan zat aktif, larutan yang pekat akan
terdesak keluar. Peristiwa tersebut akan
berulang dan terjadi kesetimbangan antara
larutan diluar maupun di dalam. (Ansel,
1986).
Keuntungan metode ini mudah dan tidak
perlu melakukan pemanasan, sehingga kecil
kandungan bahan alam menjadi rusak atau
terurai. Pemilihan pelarut ini berdasarkan
kelarutan dan polaritasnya memudahkan
pemisahan kandungan pada sampel.
Kerugian pada proses maesrasi ini adalah
waktu pengerjaan yang lama dan penyarian
yang kurang sempurna. Namun, dalam waktu
pengerjaan lama dan dengan keadaan yang
diam selama proses maserasi ini berlangsung
dapat memungkinkan banyaknya senyawa
yang akan terekstraksi (Istiqomah, 2013).
EVAPORASI
Evaporasi adalah peralatan yang
digunakan untuk menurunkan kadar air
bahan pelarut dengan menggunakan prinsip
penguapan. Sampai pada nilai yang
diinginkan. (Heldman et al,1992)
Dalam proses penguapan ini, pelarut yang
digunakan biasanya air, etanol dll yang
kemudian dikeluarkan dari tanaman melalui
pemanasan sampai memperoleh konsentrasi
yang di harapkan (Toledo,1991)
Proses evaporasi merupakan proses yang
dilibatkan pindah panas dan pindah masa
secara simultan. Artinya, dalam proses ini
sebagaian air atau pelarut akan diuapkan
sehingga akan diperoleh suatu produk yang
kental (konsestrat). Proses pindah panas dan
pindah masa yang efektif akan meningkatkan
kecepatan penguapan. Evaporasi akan terjadi
apabila suhu suatu bahan sama atau lebih
tinggi dari titik didih cairan
(Wirakartakusumah et al,1988)
Proses yang kami lakukan pada saat
pratikum ialah setelah dilakukan penyaringan
menggunakan kain saring kemudian disaring
lagi menggunakan kertas saring, setelah itu
cairan yang sudah di saring dilakukan
evaporasi dengan cara memindahkan
simplisia ke dalam labu yang digunakan
evaporasi. Saat evaporasi berlangsung,
tekanan dari alat evaporasi harus dijaga, saat
sudah turun diangka 0 harus dinaikkan
sampai kurang lebih -15 (ekstrak yang
dievaporasi tidak boleh sampai menyembur).
Proses evaporasi berlangsung hingga cairan
yang dievaporasi berwarna pekat karena
terpisah dari etanolnya. Setelah itu cairan
tersebut disaring serta dipindahkan kecawan
arloji. Cairan yang berada dicawan arloji
diletakkan di waterbath, proses ini
berlangsung hingga cairan tersebut 4) Lubang kondensor : berfungsi pintu
mengering dan menjadi ekstrak. Setelah masuk bagi air kedalam kondensor
kering, ekstrak tersebut dikeruk. Kemudian yang airnya disedot oleh pompa vakum
ekstrak diletakkan di botol vial yang telah 5) Kondensor: berfungsi sebagai
dihasilkan dan beratnya adalah 22,759 g. pendingin yang mempercepat proses
Alat yang digunakan perubahan fasa, dari fasa gas ke fasa air
1) Hotplate : berfungsi untuk mengatur 6) Lubang kondensor : berfungsi pintu
suhu pada waterbath keluar bagi air dari dalam kondensor
2) Waterbath: sebagai wadah air yang 7) Labu alas bulat penampung : berfungsi
dipanaskan oleh hot plate untuk labu sebagai wadah bagi penampung pelarut
alas 8) Ujung rotor : berfungsi sebagai tempat
3) Ujung rotor: berfungsi sebagai tempat labu alas bulat
labu alas bulat sampel bergantung
Bahan yang digunakan 4. Simplisia secang
Simplisia cengkeh Cara kerja
1. Penetapan kadar abu
KADAR ABU 2-3 gram zat yang telah digerus lalu
Kadar abu adalah campuran dari ditimbang,masukkan kedalam crus
komponen mineral dan anorganik.Kadar abu platina dan crus silikat yang telah
dianalisis dengan membakar bahan pangan dipijarkan dan ditara,ratakan.Pijarkan
atau pengabuannya dalam suhu yang sangat berlahan-lahan hingga arang
tinggi.Penentuan kadar abu berhubungan erat habis,didinginkan kemudian
dengan kandungan mineral yang ada dalam ditimbang,bilas dengan air
suatu simplisia,kemurnian serta panas,saring menggunakan kertas
kebersihan.Pengukuran kadar abu bertujuan saring bebas abu.Pijarkan sisa dan
untuk mengehtahui besarnya andungan kertas saring dalam crus yang
mineral yang terdapat dalam suatu simplisia sama.Masukkan filtrate kedalam
(Persagi,2009). crs,uapkan,pijarkan hingga bobot
Alat dan Bahan tetap kemudian timbang.Hitung kadar
Alat abu terhadap simplisia yang telah
1. .Mortir dan stamfer dikeringkan di udara.
2. Timbangan 2. Penetapan kadar abu yang larut dalam
3. Kertas saring air
4. Water bath Abu yabg diperoleh pada penentapan
5. Cawan penguap kadar abu,didihkan dengan 25 ml air
6. Labu alas bulat selama 5 menit,kumpulkan bagian
Bahan yang tidak larut,saring menggunakan
1. Air panas crus kaca masir,atau kertas saring
2. Asam klorida encer bebas abu cuci dengan air panas dan
3. Klorofrom 95% pijarkan selama 15 menit pada suhu
 <450°C,hingga bobot tetap kemudian
timbang.Perbedaan bobot sesuai
dengan kadar abu yang larut dalam
air.Hitung kadar abu yang larut dalam
air.
3. Penetapan kadar sari yang larut dalam
air
Keringkan serbuk (4/18)
diudara,maserasi 5 gram serbuk
dengan 150 ml kloroform p dalam
labu bersumbat.Selama 6 jam
pertama sekali kali kocok agar
homogen selanjutnya barkan selama
18 jam.Saring,uaokan 20 ml filtrate
hingga kering dalam cawan penguap
yang telah ditara,pabaskan pada suhu
105°C hingga bobot tetap.Hitung
kadar % sari yang larut dalam air.
4. Penetapan kadar sari yang larut dalam
etanol
Keringkan serbuk (4/18) di
udara,maseras 5 gram serbuk dengan
100 ml ethanol 95% dalam labu
tersumbat.Selama 6 jam pertama
sekali kali dikocok agar homogeny
selanjutnya dibiarkan selama 18
jam.Saring cepat dengan membiarkan
penguapan ethanol 95%,uapkan 20
ml filtrate hingga kering dalam cawan
penguap berdasarkan dasar rata yang
ditara,panaskan pada suhu 105°C
hingga bobot tetap.Hitung kadar
dalam % sari yang larut dalam
ethanol.
5. Penetapan bahan organik asing
Timbang 25-50 gram simplisia
ratakan.Pisahkan bahan organic asing
timbang dan tetapkan jumlahnya
dalam % terhadap simplisia yang
digunakan.
6. LOD
Tujuan dari LOD untuk mengetahui
kadar air yang terkandung pada
simplisia secang.Setelah memperoleh
kadar abu simplisia ini didihkan
selama dengan 25 ml air selama 5
menit, kemudian disaring
menggunakan kertas saring ( bobot
dari kertas saring adalah 662,7 mg).
Kemudian masukkan kedalam oven
pada suhu < 450°C selama 48 jam.
Setelah di oven simplisia di timbang
(bobot simplisia adalah 39,3mg)
kemudian dihitung kadarnya,
menurut literature kadar dari air
sendiri < dari 5% dan hasil yang
didapat 1,27%.
Pembahasan
1. Penetapan kadar abu
Abu merupakan residu bahan
anorganik dari proses pembakaran
dan merupakan hasil oksidasi
komponen bahan, tujuan dari
penetapan kadar abu yaitu untuk
menentukan kadar mineral,
kemurnian dan kebersihan suatu
bahan yang digunakan selain dari itu
perlunya pengujian abu digunakan
untuk mengetahui kontaminasi
mineral yang bersifat toksik. Pada
penetapan ini dilakukan dengan cara
metode langsung yaitu dengan cara
sebanyak 5 gram dipanaskan hingga
menjadi abu.
Abu yang didapatkan kemudian di
larutkan dalam air panas, abu yang
tertahan pada kertas saring di
keringkan kemudian dihitung berapa
rendemennya dan kadarnya
didapatkan kadar penetapan kadar
abu yaitu 8,28% hasil ini sesuai
 dengan panduan MMI yaitu tidak
melebihi dari 16%
2. Penetapan kadar abu larut air dan
tidak larut dalam air
Tujuan dai penetapan ini untuk
meningkatkan tingkat pengotoran
oleh silikat sementara prinsip dari
penetapan kadar abu larut air ini yaitu
sejumlah abu yang diperoleh
dilewatkan pada kertas saring yang
merupakan kertas saring bebas abu
kemudian abu yang tertinggal
merupakan abu yang tidak larut. Pada
praktikum ini didapatkan hasil
presentase kadar abu larut air yaitu
1,62% yang dimana hasil ini
merupakan hasil yang sesuai dengan
panduan MMI yaitu tidak melebihi
dari 4% sementara presentase kadar
abu tidak larut air didapatkan hasil
1,27% hasil ini menunjukan
kesesuaian dengan pedoman MMI
yaitu tidak melebihi dari 5%
3. Penetapan kadar sari larut dalam air
dan larut dalam etanol
Penetapan kadar ini merupakan
penetapan yang bertujuan untuk
memperkirakan kadar senyawa aktif
berdasarkan sifatnya atau
polaritasnya. Hasil dari penetapan ini
nantinya akan memisahkan senyawa
yan bersifat polar (larut air) dan
senyawa yang bersifat. Hasil dari
penetapan ini diharapkan tidak
melebih 100%. Hasil dari penetapan
kadar sari larut air yaitu 98,64% hasil
ini menunjukan hasil bahwa simplisia
uji yang digunakan memiliki sifat
polar (larut air) sementara hasil
penetapan kadar sari larut etanol yaitu
23,67%.
Uji Kualitatif Secara Kimiawi
Uji Alkaloid
Senyawa alkaloid adalah senyawa
organik hasil metabolit sekunder yang
umumnya terdapat di alam, terutama pada
tumbuhan tingkat tinggi, namun senyawa
tersebut juga dapat ditemukan pada hewan,
bakteri, dan jamur. Senyawa alkaloid adalah
senyawa dengan struktur heterosiklik dengan
satu atau lebih gugus nitrogen(N) sehingga
senyawa alkaloid bersifat alkali/basa. Untuk
mengetahui kandungan alkaloid dalam suatu
ekstrak tumbuhan, dapat dilakukan dengan
uji reaksi secara fitokimia.
Pada uji alkaloid, digunakan reagen
Mayer(K2[HgI4]) dan
Dargendorff(K[BiI4]). Prinsip uji skrining
dari kedua reagen tersebut sebenarnya sama.
Kedua reagen tersebut akan memberikan
gugus -K untuk berikatan dengan gugus -N
pada alkaloid, sehingga dihasilkan senyawa
dengan cincin heterosiklik dan gugus -NK
yang merupakan senyawa berwarna. Reagen
Mayer akan menghasilkan endapan berwarna
kuning dan reagen Dargendroff akan
menghasilkan endapan berwarna merah.

Gambar 1. Uji alkaloid
Pada praktikum ini digunakan serbuk
simpleks dari kayu secang yang dilarutkan
dalam asam klorida 1% 10 ml. Ekstrak
kemudian ditempatkan dalam gelas beker
berisi air mendidih selama 30 menit.
Suspensi yang telah disaring kemudian
ditempatkan dalam dua tabung reaksi sama
banyak. Pada tabung pertama dibagi lagi ke
dalam dua tabung sama banyak dan dalam
masing-masing tabung diberi reeagen Mayer
dan reagen Dargendorff. Dari hasil
penambahan reagen tersebut, tidak
ditemukan adanya endapan dalam kedua
tabung sehingga dapat disimpulkan dalam
serbuk kayu secang tersebut tidak terdapat
senyawa alkaloid.
Uji Antrakinon
Antrakinon adalah senyawa golongan
glikosida, yaitu senyawa yang jika
dihidrolisis akan menghasilkan satu atau
lebih senyawa gula/glikon dan senyawa
bukan gula/aglikon. Jika senyawa gula yang
dihasilkan adalah bukan glukosa, maka
senyawa tersebut adalah senyawa glikosida.
Senyawa glikosida terbentuk dari kondensasi
gugus hidroksil gula dengan aglikon, gugus
hidroksil sekunder juga mengalami
kondensasi menghasilkan cincin oksida.
Salah satu jenis senyawa glikosida adalah
senyawa glikosida antrakinon yang ditandai
dengan adanya gugus karbonil pada atom C9
dan atom C10 atau hanya atom C9 antron dan
antranol. Pada uji senyawa antrakinon, dapat
dilakukan dengan reaksi kimia yang disebut
Borntrager’s test. Pada reaksi ini, senyawa
antrakinon dihasilkan dari oksidasi senyawa
antranol atau senyawa antrahidrokuinon.
Kedua senyawa ini dihasilkan dari reaksi
tautomerasi senyawa antron dengan senyawa
antrahidrokuinon didahului dengan
pembentukan senyawa oksantron yang
dihasilkan dari oksidasi senyawa antron.
Gambar 2. Uji Antrakinon
Pada praktikum ini digunakan
serbuk simpleks dari kayu secang yang
dilarutkan dalam kalium hidroksida 0,5 N, 10
ml dan hydrogen peroksida 1 ml yang
kemudian dipanaskan hingga mendidih
selama 2 menit. Suspensi kemudian
dibiarkan hingga mencapai suhu ruang dan
disaring. Filtrat kemudian ditambahkan asam
asetat glasial 10 tetes dan toluene 10 ml.
Lapisan atas kemudian diambil dan
ditambahkan kalium hidroksida. Dari hasil
reaksi tersebut, tidak ditemukan adanya
warna kemerahan pada lapisan air sehingga
dapat disimpulkan dalam serbuk kayu secang
tersebut tidak terdapat senyawa antrakinon.
Uji Polifenol
Senyawa polifenol adalah senyawa
kimia yang dalam bidang kesehatan dapat
dimanfaatkan karena memiliki sifat
atantioksidan kuat dan umunya dapat
ditemukan pada tumbuhan, terutaman pada
buah-buahan. Di alam terdapat berbagai jenis
senyawa polifenol, seperti flavonol, tannin,
isoflavon, dan sebagainya. Senyawa
polifenol tersusun atas banyak senyawa
fenolik yang jumlahnya mempengaruhi
struktur dan sifat fisika serta kimia. Senyawa
fenol adalah senyawa organic aromatis
dengan cincin siklik aromatis yang berikatan
dengan gugus hidroksi. Untuk mengetahui
kandungan senyawa polifenol dalam larutan
uji, dapat dilakukan dengan mereaksikan
dengan ferii klorida yang akan menghasilkan
senyawa hijau-biru jika positif mengandung
senyawa polifenol.
Gambar 3. Uji polifenol
Pada praktikum ini digunakan serbuk
simpleks yang dilarutkan dalam air 10 ml dan
serbuk simpleks yang dilarutkan dalam
penyari etanolm 80% 10 ml. Kedua larutan
tersebut dipanaskan dalam penangas air
mendidih dan dalam keadaan masih panas,
disaring. Setelah dingin kedalam larutan
tersebut ditambahkan pereaksi besi (III)
klorida dan jika terbentuk warna hijau
kebiruan, maka dalam simplisia tersebut
mengandung polifenol. Dari hasil praktikum,
terbentuk warna hijau-biru dalam larutan uji
sehingga dapat disimpulkan, dalam serbuk
kayu secang terkandung senyawa polifenol.
Uji Tanin (zat samak)
Senyawa tannin adalah salah satu
jenis senyawa polifenol yang merupakan
metabolit sekunder pada tumbuhan. Tanin
terdiri atas gugus fenolik dan dapat bereaksi
dengan protein menghasilkan senyawa
kompleks dalam bentuk endapan. Ikatan
antara tannin dengan protein terdiri atas
ikatan hydrogen, dan ikatan hidrofobik.
Reaksi antara tannin-protein dapat
dipengaruhi oleh struktur protein,
karakteristik tannin, dan kondisi selama
proses reaksi (pH, suhu, konsentrasi, dan
sebagainya). Pada praktikum ini, serbuk
simpleks dilarutkan dalam air dan kemudian
dipanaskan dalam penangas air selama 30
menit. Larutan kemudian disaring dan filtrate
ditambahkan natrium klorida dan kemudian
disaring lagi. Filtrat kemudian diberi larutan
gelatin 1% 5 ml dan jika terbentuk endapan
menandakan adanya senyawa tannin. Dari
hasil reaksi tersebut, tidak ditemukan adanya
endapan sehingga dapat disimpulkan dalam
serbuk kayu secang tersebut tidak terdapat
senyawa tannin.
Gambar. 4 uji tannin
Uji Saponin
Saponin adalah senyawa glikosida amfipatik
yang larut dalam ng dapat ditemukan dalam
tumbuhan. Saponin terdiri atas gugus aglikon
yang berikatan dengan rantai karbohidrat.
Gugus aglikon atau sapogenin terdiri atas
sterol(gugus steroid) atau gugus triterpenoid
umum dan gugus glikosilnya terikat pada C3.
Gugus karbohidrat bersifat mudah larut
dalam air sedangkan gugus sapogenin
bersifat mudah larut dalam lemak. Struktur
senyawa saponin menyebabkan seenyawa
tersebut dapat menghasilkan busa yang
bersifat stabil, Untuk mengetahui kandungan
senyawa saponin, pada praktikum ini
dilarutkan 300 mg serbuk simpleks dalam 10
ml air. Larutan kemudian ditutup dan
dikocok selama 30 detik. Tabung kemudian
dibiarkan dan setelah 30 menit, diamati. Jika
terbentuk buih, amak dalam senyawa tersebut
mengandung saponin. Uji lain dilakukan
dengan pipa kapiler. Larutan serbuk simpleks
disaring dan kemudian dialirkan dalam pipa
kapiler kemudian ketinggian cairan dalam
pipa caliper dibandingkan dengan ketinggian
air suling. Adanya saponin ditunjukkan jika
tinggi cairannya setengah atau kurang dari
tinggi air suling. Dari hasil reaksi tersebut,
tidak terlihat adanya buih endapan sehingga
dapat disimpulkan dalam serbuk kayu secang
tersebut tidak terdapat senyawa saponin.
Gambar. 5 uji saponin
gradient polaritas diharapan mampu
memisahkan senyawa -senyawa dengan
polaritas yang berbeda
(Sastrohamidjojo,2005).
Alat yang digunakan adalah
kolom,vakum,klem,penyumbat,elenmeyer
sebagai penampung.Bahan yang digunakan
ekstrak secang, n-hexan, methanol ,etil
acetat.Fase diam yang digunakan pelarut n-
hexan, methanol dan etil acetat.
FRAKSINASI
Fraksinasi adalah proses pemisahan
komponen-komponen dalam ekstrak
berdasarkan tingkat kepolarannya. Salah satu
metode yang dapat digunakan adalah vacuum
liquid chromatography (VLC).VLC
merupakan kromatografi kolom yang
dipercepat dan bekerja pada kondisi vakum,
sehingga prosesnya berlangsung cepat,
kolom kromatografi dikemas kering dalam
keadaan vakum agar diperoleh kerapatan
maksimum. Pemisahan komponen secara
kromatografi kolom dilakukan dalam suatu
kolom yang diisi dengan fase diam dan fase
gerak untuk mengetahui banyaknya
komponen yang keluar melalui
kolom.(Adnan,1997;Hostettmann et al.,
1995)
Prinsip kerja dari vacuum liquid
chromatography ( VLC) adalah adanya
adsorpsi atau serapan, sedangkan
pemisahnya didasarkan pada senyawa-
senyawa yang dipisahkan terdistribusi
diantara fase diam dan fase gerak dalam
perbandingan yang berbeda beda.
Pelarut merupakan factor utama dalam
fraksinasi
Pemilihan pelarut didasarkan atas
selektivitas yaitu pelarut hanya boleh
melarutkan ekstrak yang diinginkan,
sementara komponen komponen lain dari
bahan ekstraksi tidak terlarut; kelarutan yaitu
pelarut diusahakan sebisa mungkin memiliki
perbedaan kerapatan yang besar antara
pelarut dan bahan ekstraksi; reaktifitas yaitu
pelarut pada umumnya tidak menyebabkan
perubahan secara kimiawi pada komponen Air Ethanol Metanol Kloroform Aseton
komponen bahan yang diekstraksi, rasio Antosiannin Tanin Terpenoid Terpenoid Flavonoid

pelarut-bahan baku yaitu semakin besar rasio Tanin Sterol Saponin Flavonoid Flavonoid

pelarut-bahan baku, maka akan memperbesar Saponin Polifenol Tannin

konsentrasi solute yang terlarut pada Terpenoid flavonoid Flavonoid

permukaan partikel sehingga akan Lecectin Terpenoid Polifenol

memperbesar gradient konsentrasi didalam Tabel 1. Pelarut bahan aktif

dan dipermukaan partikel padatan sebagai
akibatnya, laju ekstrasi akan mengalami
peningkatan.
Pelarut pelarut tersebut berpengaruh
terhadap senyawa yang akan diekstrak
Berdasarkan sifat dan kepolaran pelarut,
maka dapat diketahui bahan aktif yang
dilarutkan.
Tabel pelarut yang digunakan untuk
melarutkan bahan aktif
Sumber : Tiwari et al., 2011
Dari tabel data tersebut di atas, maka
pemakaian pelarut metanol bertujuan
untuk melarutkan senyawa Polifenol yang
ada pada ekstrak kayu secang.
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT)
Kromatografi adalah suatu teknik
yang digunakan untuk memissahkan
campuran yang tidak volatile.Kromatografi
juga dapat diartikan sebagai teknik
pemisahan campuran yang didasarkan

didasarkan atas perbedaan distribusi dari
komponen-komponen campuran tersebut
diantara dua fase yaitu fase diam dan fase
gerak.Fase gerak adalah sisitem yang terdiri
dari larutan organic tunggal maupun
campuran yang berguna sebagai pembawa
senyawa yang akan dipisahkan sedangkan
fase diam adalah system yang terdiri dari plat
aluminium atau kaca yang permukaanya
terdapat sorbent (silica gel) sebagai media
memisahkan senyawa polar.Macam-macam
kromatografi diantaranya kromatografi lapis
tipis,kromatografi kertas,kromatografi
kolom,kromatografi cair dan kromatografi
preparat.
Kromatografi lapis tipis(KLT)
adalah metode pemisahan menggunakan fase
diam berupa plat aluminium dan
permukaanya dilapisi silica .Konsep
pemisahan menggunakan KLT adalah :
1. Terjadi interaksi antara solute dengan
fase gerak dan diam
2. Perimbangan interakasi akan
menentukan kecepatan migrasi solute
melalui fase diamnya
 Semakin kuat interaksi dari
solute maka semakin lambat
fase diamnya
 Semakin kuat interaksi dari
solute makan semakin cepat
fase geraknya
Hal yang pertama kami lakukan
adalah penotolan sampel diplat silica
gel.Jarak yang kami gunakan pada saat
pentolan yaitu 1 cm dan untuk penotolan
sendiri dilakukan secara 2 kali yaitu untuk
penotolan pertama yaitu ekstrak dari secang
dan kedua yaitu larutan yang kami dapatkan
pada saat melakukan cara soxletasi sebagai
pembanding.Setelah ditotolkan silica gel
diletakkan di gelas yang telah diisi dengan
toluen sebagiai fase gerak.Tujuan dari
pemberian toluene sendiri yaitu sebagai
pembawa senyawa yang akan
dipisahkan.Setelah fase gerak naik sesuai
dengan jarak yang telah ditentukan plat silica
gel diangkat dengan menggunakan pinset dan
diletakkan pada alat KLT.Hasil totolan dapat
terlihat pada cahaya 366 nm terlihat dengan
Gambar. 6 contoh penotolan
Contoh penotolan sampai dengan direndam
dengan fase gerak yang kemudian mulai
merambat spot yang ditotolkan hingga
didapat hasilnya.
UJI AKTIFITAS ANTIOKSIDAN
DENGAN METODE DPPH
Pada pengujian antioksidan senyawa
simplisia uji hal yang dilakukan pertama
yaitu membuat larutan DPPH pada
pembuatan larutan DPPH keamanan pada
praktikum sangat di perhatikan dilihat dari
sifat DPPH dapat mengkontaminasi tubuh
larutan metanol sebanyak 1,0 ml DMSO
untuk mendapatkan DPPH dengan
konsentrasi 19,6 mg.l, larutan ini harus selalu
dibuat baru dan ditutup dengan aluminium
foil untuk mengurangi tingkat kontaminasi
kedalam tubuh larutan ini yang kemudian
akan dibuat larutan stok quersetin dengan
cara sebanyak 10,0 mg quersetin
dicampurkan kedalam 1,0ml DMSO lalu
ditambahkan metanol sebanyak 10,0ml.
Pembuatan larutan kontrol positif dan
negatif, pada kontrol positif dibuat dengan
jelas warna yang dihasilkan dan jarak yang
ditempuh.Antara totolan secang dengan
pembanding didapatkan bahwa warna
keduanya sama dan jarak nya sama atau
sejajar dan dapat dikatakan positif sedangkan
pada cahaya 254 nm tidak terlihat rambatan
dari senyawa totolan,sehingga dapat dihitung
Rf atau jarak spot yang ditempuh
DPPH 3,8ml dan 0,2ml quersetin sementara
pada kontrol negatif dibuat dengan
mencapurkan 3,8ml DPPH dengan 0,2ml
etanol. Setelah semua larutan selesai maka
dilakukan scanning dengan spektrofotometri
UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm
.
Pada pengujian ini dilakukan pada
fraksi yang telah didapatkan, tujuan dari
pengujian ini untuk mengetahui aktivitas dari
simplisia uji yang digunakan memiliki
aktivitas atau tidak. Metode yang digunakan
yaitu menggunakan DPPH dari metode ini
akan didapatkan nilai EC50 (effective
concentration 50) yang merupakan
konsentrasi substrat yang menyebabkan 50%
hilangnya aktivitas DPPH, yang dimana
semakin tinggi aktivitas antioksidan suatu
senyawa makan nilai dari EC50 akan
semakin rendah hal ini dapat diketahui dari
adanya penurunan absorbansi DPPH akibat
penambahan senyawa tersebut.
Prisip dari metode pengujian secara DPPH
yaitu pengukuran aktivitas antioksidan secara
kualitatif dengan pengukuran penangkapan
radikal DPPH oleh senyawa yang diharapkan
mempunyai aktivitas antioksidan dengan
menggunakan spektrofotometri UV-Vis. Chart Title
Konsentr Absorba Absorba %S Persama IC y = 4.995x + 81.108
asi nsi nsi an (mg/ 88
R² = 0.8467
(mg/ml) sampel kontrol Y= bx + ml) 86

Axis Title
a
84 Series1
0,2 0,0668 0,3623 81,5 Y= -6,227
6 4,995x 82
+ Linear
80
0,4 0,0577 0,3623 84,0 81,108 (Series1)
7
0 1 2
0,8 0,0565 0,3623 84,4 R2= Axis Title
0,8467
1,0 0,0493 0,3623 86,3
9 Gambar. 7 kurva absorbansi
1,2 0,0545 0,3623 84,9
5
Nilai EC50 ekstrak secang berdasarkan hasil
Tabel. 2 absorbansi perhitungan yan didapatkan adalah -6,227
mg/ml. menurut molyneux (2004), jika suatu
Nilai EC50 ekstrak secang didapatkan zat mempunyai sifat antioksidan bila nilai
persamaan regresi linier pada tabel diatas, EC50 yan gdiperoleh berkisar 200-1000
dimana y=4,995x + 81,108 dan r=0,8467. μg/mL, sehingga didapatkan hasil bahwa zat
Koefisien y pada persamaan ini adalah tersebut kurang aktif berpotensi sebagai zat
sebagai EC50 sementara koefisien x antioksidan. Kontrol positif yan digunakan
merupakan besarnya konsentrasi yang pada pengujian ini yaitu DPPH 3,8ml dan
diharapkan dapat merendam 50% aktivitas 0,2ml quersetin, penggunakan kontrol positif
radikal DPPH. Nilai r= 0,8467 hasil ini pada pengujian ini adalah untuk mengetahui
kurang mendekati +1 sehingga nilai tersebut seberapa kuat potensi dari senyawa
merupakan nilai negatif sehingga antioksidan yang terdapat pada simplisia uji
menggambarkan kurva hubungan ekstrak dibandingkan dengan kontrol positif. Jika
secang yang tidak linear. Dapat dilihat pada nilai EC50 sampel mendekati nilai EC50
gambar berikut. pada kontrol positif maka dapat dikatakam
bahwa sampel berpotensi sebagai salah satu
alternatif antioksidan yang sangat kuat.

KESIMPULAN
Praktikum yang telah dilakukan dapat
disimpulkan bahwa kayu secang positif
dalam arti mengandung senyawa polifenol
dan negative dalam arti tidak mengandung
senyawa alkaloid,tannin,antrakinon dan
saponin,kadar abu yang dimiliki oleh kayu
secang 8,28% sesuai dengan MMI.
DAFTAR PUSTAKA
Winarsi,H. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal
Bebas. Yogyakarta: Penerbit Kanisius.
Gandjar, G.H, dan Rohman, A. 2007. Kimia
Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
Prakash, A. 2001. Antioxidant Activity.
Medallion Laboratories-Analytical Progress.
Volume 19. Nomor 2.Hal 1-4
Depkes RI. Parameter Standar Umum Ekstrak
Tumbuhan Obat, Jakarta. 2000.
Depkes RI. Materia Medika Indonesia, Jakarta.
1979.
Heldman, Dennis R. 1992. Handbook of
Food Engineering. Marcel Dekker, Inc.,
New York.
Toledo, R. T. 1991. Fundamentals of Food
Process Engineering (Second Edition).
Chapman&Hall, New York.
Wirakartakusumah, M. A. 1988. Prinsip-
Prinsip Teknik Pangan. PAU Pangan dan
Gizi IPB, Bogor.
Anonim, 1995, Farmakope Indonesia, edisi
IV, 7 Departemen Kesehatan Republik
Indonesia, Jakarta
Ansel, H., C,, 1989, Pengantar Bentuk
Sediaan Farmasi, Edisi 4, 615, UI Press,
Jakarta
Fadliah, M. 2014. Kualitas organoleptik dan
pertumbuhan bakteri pada susu pasteurisasi
dengan penambahan kayu secang
(Caesalpinia sappan L.) selama
penyimpanan. [Skripsi]. Jurusan Produksi
Ternak. Fakultas Peternakan. Universitas
Hasanuddin. Makassar.
Fazri, M. E. 2009. Uji efektivitas antibakteri
ekstrak metanol kayu secang (Caesalpinia
sappan L.) terhadap Helicobacter pylori
secara in vitro. [Skripsi]. Fakultas Farmasi.
Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Surakarta.
Fu Y-S, Lin Y-Y, Chou S-C, et al.
Tetramethylpyrazine inhibits activities of
glioma cells and glutamate
neuroexcitotoxicity: Potential therapeutic
application for treatment of gliomas. Neuro-
Oncology. 2008;10:139–152.
Istiqomah. 2013. Perbandingan Metode
Ekstraksi Maserasi Dan Sokletasi Terhadap
Kadar Piperin Buah Cabe Jawa (Piperis
Retrofracti Fructus). Skripsi. UIN Jakarta
Mirza, Z. 2010. Inventarisasi pemanfaatan
tumbuhan obat secara tradisional oleh Suku
Osing Banyuwangi. [Skripsi]. Jurusan
Pendidikan MIPA. Fakultas Keguruan dan
Ilmu Pendidikan. Universitas Jember.
Jember.
Panovska, T.K., S. Kulevanova., Stefova.
2005. In Vitro Antioxidant Activity of Some
Teucrium Spesies (Lamiaceae). Acta Pharm.
55:207- 214.
Rahmawati, F. 2011. Kajian potensi ‘wedang
uwuh’ sebagai minuman fungsional. Seminar
Nasional ‘Wonderfull Indonesia’, Jurusan
PTBB FT UNY, 3 Desember 2011.
Adnan,M.,1997.Teknik Kromatografi untuk
Analisis Bahan Makanan,Edisi
Pertama,9.Penerbit Andi,Yogyakarata
Sastrihamidjojo,Hardjono.2005.Kimia
Dasar.Yogyakarta:UGM Press