3.

1 Pra Analitik

1. Alat

Alat-alat yang digunakan dalam pemeriksaan profil lipid ini meliputi : tabung serologi, mikropipet, yellow
tip, blue tip, rak tabung, stopwatch, fotometer, tissue.

2. Reagen

Adapun reagen-reagen yang digunakan adalah :

a. Pemeriksaan kolesterol

Reagen yang digunakan dalam pemeriksaan kolesterol yaitu :

- Larutan buffer (pH) 50 mmol/L

- Fenol 5 mmol/L

- 4-aminoantipirin 0,3 mmol/L

- Cholesterol esterase (CHE)

- Cholesterol oxidase (CHO)

- Peroxidase (POD)

- Standart kolesterol 200 mg/dl (5,2 mmol/L)

b. Pemeriksaan LDL

Reagen yang digunakan dalam pemeriksaan kolesterol LDL yaitu :

- Heparin 100.000 U/L

- Sodium citrate 64 mmol/L

- Standart kolesterol LDL 200 mg/dl (5,2 mmol/L)

c. Pemeriksaan HDL

Reagen yang digunakan dalam pemeriksaan kolesterol HDL adalah :

- Phospotungstic acid 1,4 mmol/L

- Magnesium chloride 8,6 mmol/L

- Standar kolesterol HDL 200 mg/dl (5,2 mmol/L)

d. Pemeriksaan trigliserida
Reagen yang digunakan dalam pemeriksaan kolesterol TG adalah :

- Larutan buffer ( pH 7,2) 50mmol/L

- 4-chlorophenol 4mmol/L

- ATP 2 mmol

- Mg 2+ 15 mmol

- Glycerokinase (GK) ≥0,4 kU/L

- Peroxidase (POP) ≥ 2 kU/L

- Lipoprotein lipase (LPL) ≥ 2 kU/L

- 4-amioantipyrine 0,5 mmol/L

- Glycerol-3-phospate-oxidase ≥ 0,5 kU/L

- Standart TG 200 mg/dl (2,3mmol/L)

3. Sampel

Sampel yang digunakan dalam pemeriksaan profil lipid berupa serum.

4. Metode

- Kolesterol : CHOD-PAP

- LDL : CHOD-PAP

- HDL : CHOD-PAP

- Trigliserida : GPO-PAP

5. Probandus

Berbagai persiapan penderita yang perlu diberitahukan secara baik dan mendetail pada penderita antara
lain :

a. Persiapan pasien (untuk pemeriksaan tertentu pasien harus puasa selama 8-12 jam sebelum
diambil darah)

b. Pengambilan spesimen sebaiknya pagi hari antara pukul 07.00 – 09.00

c. Menghindari obat-obatan sebelum spesimen di ambil

d. Menghindari aktifitasfisik/olahraga sebelum spesimen di ambil

e. Dicatat identitas pasien dengan benar

Nama : Mr/Mrs. X

Alamat :Y

Jenis kelamin : XY

3.2 Analitik

1. Prisip Pemeriksaan

a. Kolesterol

Kolesterol ditentukan melalui hidrolisis enzimatik dan oksidasi. Reaksi dari 4-aminoantypirine dengan
fenol dari peroksida hidrogen melalui katalis peroksida menghasilkan indikator quinoneimine kalorimetri.

Reaksi :

(CHE)

Cholesterol ester + H2O à cholesterol + as. Lemak

(CHO)

Cholesterol + O2 à cholesterol-3-one + H2O2

(POD)

2 H2O2 + 4 aminoantipyrine + fenol à quinoneimine + 4 H2O

b. LDL

LDL diendapkan oleh heparin, HDL dan LDL setelah disentrifugasi hasilnya berupa supernatan dan
pengukuran menggunakan enzymatic.

c. HDL

Chylomicron, LDL dan VIDL yang di endapakan dengan menambah phosphatogitis dan ion-ion
magnesium centrifugasi hanya mendapatkan HDL dalam supernatanya, kandungan kolesterol ditemukan
melalui enzimatik

d. Trigliserida (TG)
Trigliserida ditentukan melalui ikatan enzimatic dengan lipoprotein lipase. Reaksi antara 4-
aminoantypirine dengan 4- klorofenol dari hasil hidrogen peroksida melalui katalis peroksidase
menghasilkan indikator quinoneimine.

Reaksi :

(LPL)

TG à gliserol + as. Lemak

(GK)

Gliserol + ATP à gliserol- 3 phospate + ADP

(GPO)

Gliserol-3- fosfat + O2 à dyhidroxyaceton phospate + H2O2

(POD)

2 H2O2 + aminoantypirine + 4-klorofenol

2. Prosedur Kerja

a. Pemeriksaan kolesterol

- Disiapkan 3 tabung serologi

- Dipipet masing-masing ke dalam tabung.

- Dihomogenkan, kemudian diinkubasi selama 20 menit pada suhu 20- 25 0C atau selama 10 menit
pada suhu 37 0C.

- Dibaca hasil absorbansinya pada alat fotometer.

b. Pemeriksaan LDL

1) Prosedur presipitat

- Disiapkan tabung serologi

- Dipipet sampel sebanyak 100 mL

- Ditambahkan reagen presipitat sebanyak 1000 mL

- Dihomogenkan, kemudian diinkubasi selama 15 menit pada suhu ruangan, kemudian di

sentrifugasi selama 20 menit pada kecepatan 2500 rpm.

- Di Pipet standart & test sesuai dengan kebutuhan untuk pemeriksaan selanjutnya.

2) Pemeriksaan kolesterol LDL

- Disiapkan 3 tabung serologi dan dipipet masing-masing ke dalam tabung :

- Dihomogenkan, kemudian diinkubasi selam 10 menit di suhu ruangan atau 5 menit pada suhu 37
0C.

- Dibaca hasil absorbansinya pada fotometer.

c. Pemeriksaan HDL

1) Prosedur presipitat

- Disiapkan tabung serologi.

- Dipipet sampel 200 mL ditambahkan reagen presipitat 500 mL.

- Dihomogenkan, kemudian diinkubasi selama 15 menit pada suhu ruangan.

- Disentrifugasi selama 20 menit dengan kecepatan 2500 rpm.

- Di Pipet standart & test sesuai dengan kebutuhan untuk pemeriksaan selanjutnya.

2) Pemeriksaan kolesterol HDL

- Disiapkan 3 tabung serologi dan dipipet masing-masing ke dalam tabung :

- Dihomogenkan, kemudian diinkubasi selam 10 menit di suhu ruangan atau 5 menit pada suhu 37
0C.

- Dibaca hasil absorbansinya pada fotometer.

d. Pemeriksaan Trigliserida

- Disiapkan 3 tabung serologi dan dipipet masing-masing ke dalam tabung :

- Dihomogenkan, kemudian diinkubasi selama 20 menit pada suhu 20- 25 0C atau selama 10 menit
pada suhu 37 0C.

- Dibaca hasil absorbansinya pada alat fotometer.

Pasca Analtik

Kolesterol Total Kolesterol HDL Kolesterol LDL Trigliserida

Normal < 200 ≤ 40 < 100 < 149

Borderline 200-239 n/a 130-159 150-199

Tinggi ≥ 240 n/a ≥ 160 ≥ 200

Rendah n/a <40 n/a n/a