Anda di halaman 1dari 6

RESUME JURNAL Indah Ayu Puspitasari (3311171104)

Metode untuk Penentuan Aktivitas Antioksidan Total: Tinjauan

Aurelia Magdalena Pisoschi1* dan Gheorghe Petre Negulescu2


1
University of Agronomic Sciences and Veterinary Medicine of Bucharest, Faculty of Veterinary
Medicine, 105, Splaiul Independentei, sector 5, 050097, Bucharest, Romania
2
University of Agronomic Sciences and Veterinary Medicine of Bucharest, Faculty of Land Reclamation
and Environmental Engineering, 59, Marasti Street, sector 1, 011464, Bucharest, Romania

Abstrak

Antioksidan bereaksi dengan oksigen radikal atau molekul, yang mampu menghambat proses oksidasi
yang terjadi di bawah pengaruh oksigen molekuler atau spesies oksigen reaktif. Antioksidan bertanggung
jawab atas mekanisme pertahanan organisme terhadap patologi yang terkait serangan radikal bebas,
sehingga asupan antioksidan yang berasal dari tanaman terlibat dalam pencegahan degeneratif penyakit
yang disebabkan oleh stres oksidatif, seperti kanker, Parkinson, Alzheimer atau aterosklerosis.

Kata kunci: Antioksidan; Stres oksidatif; Spesies oksigen reaktif; Kapasitas antioksidan; Penilaian
antioksidan

Pendahuluan dalam efek kesehatan yang bermanfaat, karena


antioksidan hadir dalam buah dan sayuran. Ada
Antioksidan adalah senyawa yang mampu banyak antioksidan dalam tanaman makanan:
menunda atau menghambat proses oksidasi yang karotenoid, senyawa fenolik, turunan asam
terjadi di bawah pengaruh atmosfer oksigen atau benzoat, flavonoid, proanthocyanidins, stilbenes,
spesies oksigen reaktif. Mereka digunakan untuk coumarin, lignan, dan lignin [4]
stabilisasi produk polimer, dari petrokimia,
bahan makanan, kosmetik dan obat-obatan. [1]
Mekanisme Aksi Antioksidan
Manfaat Antioksidan bagi Kesehatan Inisiasi
Antioksidan berkaitan dengan radikal LH + R ∙ → L ∙ + RH
dan stres oksidatif, profilaksis kanker dan terapi,
dan umur panjang [2]. Fenol dan polifenol Di mana LH mewakili molekul substrat,
adalah target analit banyak kasus seperti itu; misalnya, suatu lipid, dengan R ∙ sebagai radikal
mereka dapat dideteksi oleh enzim seperti pengoksidasi awal. Oksidasi lipid menghasilkan
tirosinase atau fenol oksidase lainnya, atau radikal alil yang sangat reaktif (L ∙) yang dapat
bahkan oleh jaringan tanaman yang mengandung dengan cepat bereaksi dengan oksigen
enzim ini [3]. Berdasarkan studi epidemiologi membentuk radikal peroksil lipid (LOO ∙)
adalah buah-buahan, sayuran dan makanan
pokok yang kurang diproses dengan baik dapat Perambatan
berdampak pada perkembangan penyakit yang L∙ + O2 → LOO∙
disebabkan oleh stres oksidatif, seperti kanker, LOO ∙ + LH → L∙ + LOOH
penyakit jantung koroner, obesitas, diabetes,
Radikal peroksil adalah pembawa rantai reaksi;
hipertensi dan katarak. Penjelasannya terdiri
mereka bisa selanjutnya mengoksidasi lipid,
menghasilkan lipid hidroperoksida (LOOH), Metode spektrofotometri dengan DPPH
yang pada gilirannya terurai menjadi berbagai diterapkan untuk penentuan kapasitas
senyawa, termasuk alkohol, aldehida, format antioksidan dalam jus buah dan buah ekstrak
alkil, keton dan hidrokarbon, dan radikal, (jambu biji) [10].
termasuk radikal alkoksil (LO ∙) [7].
Metode ABTS: Metode spektrofotometri
Percabangan berdasarkan absorbansi Pengurangan radikal
kation ABTS diaplikasikan pada kandungan
LOOH → LO∙ + HO∙ antioksidan penentuan dalam ekstrak buah
2 LOOH → LOO ∙ + LO∙ + H2O
jambu biji, ekstrak buah dan sayuran, minuman
Kerusakan hidroperoksida lipid sering kali ringan, minuman beralkohol, teh dan kopi.
melibatkan transisi katalisis ion logam, dalam Standar kurva linier antara 25 dan 600μM
reaksi yang mirip dengan yang melibatkan Trolox. Nilai dari Total kapasitas antioksidan
hydrogen peroksida, menghasilkan radikal ekstrak jambu biji berkisar antara 22,3 ± 0,9 dan
lipoks peroksil dan alkoksil lipid. 37,9 ± 3,4μM TE / massa segar [10].

Metode FRAP (ferric mengurangi


Penghentian antioksidan): FRAP Metode (pengurangan daya
antioksidan antioksidan) bergantung pada
Reaksi penghentian melibatkan kombinasi pengurangan dengan antioksidan, dari ion besi-
radikal untuk terbentuk produk non-radikal [8]. TPTZ kompleks (2,4,6-tri (2-piridil) - 1,3,5-
triazine). Ikatan Fe2 + ke ligan menciptakan
yang sangat kuat warna biru tua. Absorbansi
Metode Penilaian Kapasitas Antioksidan
dapat diukur untuk menguji jumlahnya besi
Total
berkurang dan dapat dikorelasikan dengan
jumlah antioksidan . Trolox atau asam askorbat
Teknik Spektrometri
digunakan sebagai referensi [5]
Teknik spektrometri mengandalkan reaksi
radikal, kation atau kompleks radikal dengan
molekul antioksidan mampu donasikan atom Uji ORAC (kapasitas penyerapan radikal
hidrogen. oksigen): metode ini mengukur aktivitas
antioksidan yang dimusuhi radikal peroksil,
Metode DPPH: DPPH (2,2-difenil-1-
diinduksi oleh 2,2'-azobis- (2-amidino-propane)
picrylhydrazyl) adalah radikal bebas yang stabil,
dihidroklorida (AAPH), pada suhu 37oC.
karena delokalisasi elektron cadangan pada
Aktivitas antioksidan dari ekstrak metanol buah
seluruh molekul. Dengan demikian, DPPH tidak
jambu ditentukan dengan metode ORAC. Kurva
dimerize, seperti yang terjadi pada kebanyakan
standar linear antara 0 dan Trolox 50 mM. Hasil
radikal bebas. Delokalisasi pada DPPH molekul
yang diperoleh berkisar antara 18,2 ± 2,3 dan
menentukan terjadinya warna ungu, dengan a
25,5 ± 1,6μM TE / massa segar [10].
pita serapan dengan maksimal sekitar 520nm.
Ketika DPPH bereaksi dengan donor hidrogen, Uji HORAC (kapasitas penghindaran radikal
yang berkurang (molekul) formulir (DPPH) hidroksil): teknik ini bergantung pada
dihasilkan, disertai dengan hilangnya warna pengukuran aktivitas pengkelat logam
ungu. Oleh karena itu, pengurangan absorbansi antioksidan, dalam kondisi reaksi seperti Fenton.
tergantung secara linear konsentrasi antioksidan. Itu Metode menggunakan kompleks Co (II) dan
Trolox digunakan sebagai antioksidan standar
karenanya mengevaluasi kemampuan kompleks berwarna biru, dengan absorbansi
melindungi menentang pembentukan radikal maksimum pada 700nm [15, 16].
hidroksil. Fluorescein diinkubasi dengan sampel
yang akan dianalisis, maka campuran Fenton Uji CUPRAC (tembaga mengurangi
(menghasilkan radikal hidroksil) telah antioksidan): antioksidan atau ekstrak standar
ditambahkan. Fluoresensi awal diukur, setelah dicampur dengan CuSO4 dan neocuproine.
itu bacaan diambil setiap menit setelah bergetar. Setelah 30 menit, absorbansi diukur pada
Perancis larutan asam digunakan untuk 450nm. Di pengujian, Cu (II) direduksi menjadi
membangun kurva standar [11, 12]. Cu (I) melalui aksi electrondonating antioksidan.
Hasilnya dinyatakan dalam miligram Trolox per
TRAP (parameter antioksidan penjebak liter ekstrak [15, 16].
radikal peroksil total) pengujian:
chemiluminescence luminol-enhanced (CL) Fluorimetri fluoresensi adalah emisi cahaya
adalah dieksploitasi untuk memantau reaksi oleh suatu zat yang telah menyerap cahaya atau
yang melibatkan radikal peroksil. Itu Sinyal CL
radiasi elektromagnetik lain yang berbeda
digerakkan oleh produksi radikal turunan panjang gelombang. Dalam kebanyakan kasus,
luminol, dihasilkan dari dekomposisi termal cahaya yang dipancarkan memiliki panjang
AAPH. Nilai TRAP ditentukan dari durasi gelombang yang lebih panjang, dan karena itu
periode waktu selama sampel memadamkan energi lebih rendah, daripada radiasi yang
sinyal chemiluminiscence, karena adanya diserap. Fluoresensi emisi terjadi ketika elektron
antioksidan [11, 13].
orbital dari suatu molekul melonggarkannya
Uji penghambatan peroksidasi lipid: keadaan dasar, dengan memancarkan foton
Peroksidasi lipid Metode uji penghambatan cahaya setelah bersemangat untuk a keadaan
menggunakan sistem seperti Fenton (Co (II) + kuantum yang lebih tinggi oleh beberapa jenis
H2O2), untuk menginduksi peroksidasi lipid energi. Uji fluoresensi telah telah digunakan
(mis. asam lemak). Asam α-linolenat dipilih untuk penentuan kadar antioksidan [17].
sebagai substrat model. Itu dicampur dengan
Teknik elektrokimia
sampel yang dianalisis, serta dengan campuran
seperti Fenton, untuk diinduksi peroksidasi lipid. Teknik elektrokimia juga diterapkan pada
Setelah akhir masa inkubasi, konsentrasi zat antioksidan penentuan kadar dan kapasitas
asam reaktif tiobarbiturat (TBARS) diukur, antioksidan. Voltametri siklik dan
seperti indeks peroksidasi lipid. Peroksidasi lipid biamperometri adalah yang paling banyak
dinyatakan dalam nmol TBARS per 1 ml digunakan.
campuran asam α-linolenat / sampel yang
dianalisis [11, 14]. Voltametri siklik voltametri siklik adalah jenis
pengukuran elektrokimia potensiodinamik.
Metode PFRAP (potassium ferricyanide Dalam voltametri siklik Eksperimen potensial
reduction power):Peningkatan absorbansi dapat elektroda kerja ditingkatkan secara linear versus
dikorelasikan dengan kemampuan mengurangi waktu. Voltametri siklik (CV), terbukti sebagai
dari antioksidan / ekstrak antioksidan. Senyawa metodologi yang nyaman, telah divalidasi
dengan antioksidan kapasitas bereaksi dengan kuantisasi kapasitas Antioksidan Berat Molekul
kalium ferricyanide, untuk membentuk kalium Rendah plasma darah, homogenat jaringan, dan
ferrocyanide. Yang terakhir bereaksi dengan ekstrak tanaman. Kapasitas antioksidan dari
triklorida besi, menghasilkan besi ferrocyanide, ekstrak tumbuhan kering (dinyatakan sebagai
mg ekivalen asam askorbat) ditentukan oleh elektrokatalitik evaluasi kapasitas antioksidan
voltametri siklik dilakukan di elektroda karbon total dibangun [9, 20].
yang berfungsi kaca. Teh hijau, hitam teh,
rosemary dan kopi, dipilih dan dianalisis untuk Kromatografi gas (GC) adalah jenis yang
menguji total kapasitas antioksidan dari masing- umum dari kromatografi yang digunakan untuk
masing ekstrak kering. Untuk tiga ekstrak memisahkan dan menganalisis senyawa yang
diperoleh dari setiap matriks kapasitas dapat diuapkan tanpa dekomposisi. Proses
antioksidan ditentukan oleh pengukuran area memisahkan senyawa dalam campuran
anodik dari voltammogram siklik [6]. dilakukan antara fase diam cair dan fase gas
bergerak. Fasa gerak biasanya berupa gas inert
sebagai helium atau gas yang tidak reaktif
Metode biamperometrik Metode seperti nitrogen. Fase diam adalah lapisan
biamperometrik adalah berdasarkan pada mikroskopis cairan atau polimer pada
pengukuran arus yang mengalir antara dua yang pendukung padat inert. Itu perbandingan waktu
identik elektroda kerja terpolarisasi pada retensi inilah yang memberi GC kegunaan
perbedaan potensial kecil dan direndam dalam analitisnya. Detektor yang paling umum adalah
larutan yang mengandung pasangan redoks yang detektor ionisasi nyala dan detektor
dapat dibalik. Tidak langsung pengukuran konduktivitas termal [21].
biamperometrik bergantung pada reaksi analit
dengan pasangan redoks yang mengindikasikan,
selektivitasnya tergantung pada spesifisitasnya HPLC (kromatografi cair kinerja tinggi):
dari reaksi yang melibatkan bentuk redoks yang Metode ini biasanya menggunakan berbagai
teroksidasi atau tereduksi dan analitnya. Fe3 + / jenis fase diam, pompa yang menggerakkan fase
Fe2 +, I2 / I-, Fe (CN) 6 3- / Fe (CN) 6 4- adalah gerak dan analit melalui kolom, dan detektor
pasangan redoks umum digunakan dalam untuk memberikan retensi karakteristik waktu
pengukuran biamperometrik. Pasangan redoks untuk analit. Fase normal HPLC menggunakan
yang umum dipilih dalam studi biamperometrik fase stasioner kutub dan non-polar, tidak berair
adalah DPPH • / DPPH [19]. fase seluler, dan bekerja secara efektif untuk
memisahkan analit mudah larut dalam pelarut
Metode biosensor non-polar Aktivitas antioksidan menggunakan
sistem HPLC dengan postcolumn deteksi
Oksidureduktase adalah yang paling sering antioksidan online, berdasarkan 2,2'-azinobis-3-
digunakan dalam aplikasi biosensor karena sifat aktivitas pemulungan radikal asam
transfer elektronnya selama katalisis. Ini Enzim etilbenzotiazoline-6-sulfonat [22, 23].
menawarkan keuntungan menjadi stabil dan
dalam beberapa situasi tidak memerlukan Kesimpulan
koenzim atau kofaktor. Ada beberapa ulasan dan
buku yang merujuk pada penentuan kapasitas Meningkatnya minat yang didapat oleh
antioksidan dan antioksidan oleh biosensor . antioksidan adalah karena kesehatan manfaat
Aplikasi potensial dari biosensor untuk evaluasi yang diberikan terutama oleh molekul rendah
antioksidan status termasuk pemantauan radikal bersumber alami (eksogen) antioksidan berat.
superoksida (O2 • -), pemantauan nitric oxide Berbagai metode dan alat analisis digunakan
(NO), pemantauan glutathione, pemantauan untuk antioksidan konten dan evaluasi kapasitas
asam urat, asam askorbat atau senyawa fenolik. total antioksidan: spektrometri, metode
Biosensor berbasis DNA pasta karbon untuk elektroanalisis, kromatografi. Teknik-teknik ini
dapat menawarkan profil lengkap kandungan (2006) Comparison of ABTS, DPPH,
antioksidan dari bahan makanan. FRAP, and ORAC assays for estimating
antioxidant activity from guava fruit
DAFTAR PUSTAKA extracts. Journal of Food Composition
and Analysis 19: 669–675.
1. Litescu SC, Sandra AV, Eremia SAV, 11. 79. Denev P, Ciz M, Ambrozova G,
Diaconu M, Tache A, et al. (2011) Lojek A, Yanakieva I, et al. (2010)
Biosensors Applications on Assessment Solidphase extraction of berries’
of Reactive Oxygen Species and anthocyanins and evaluation of their
Antioxidants. Environmental antioxidative properties. Food Chem
Biosensors. In Tech Rijeka Croatia. 123: 1055-1061.
2. 2. Kalcher K, Svancara I, Buzuk M, 12. 81. Ou B, Hampsch-Woodill M,
Vytras K , Walcarius A (2009) Flanagan J, Deemer EK, Prior RL, et al.
Electrochemical sensors and biosensors (2002) Novel fluorimetric assay for
based on heterogeneous carbon hydroxyl radical prevention capacity
materials. Monatsh Chem 140: 861-889. using fluorescein as the probe. J Agric
3. 4. Ly SY (2008) Voltammetric analysis Food Chem 50(10):
of DL-α-tocopherol with a paste 13. 82. Cízová H, Lojek A, Kubala L and
electrode. J Sci Food Agric 88: 1272- Cíz M (2004) The effect of intestinal
1276. ischemia duration on changes in plasma
4. 21. Lindsay DG and Astley SB (2002) antioxidant defense status in rats.
European research on the functional Physiol Res 53: 523-531.
effects of dietary antioxidants— 14. 83. Slavíková H, Lojek A, Hamar J,
EUROFEDA. Mol Aspects Med 23: 1- Dušková M, Kubala L, et al. (1998).
38. Total antioxidant capacity of serum
5. 43. Pellegrini N, Serafini M, Colombi B, increased in early but not in late period
Del Rio D, Salvatore S, et al. (2003) after intestinal ischemia in rats. Free
Total antioxidant capacity of plant Radic. Biol. Med 25: 9-18.
foods, beverages and oils consumed in 15. 84. Meng J, Fang Y, Zhang A, Chen S,
Italy assessed by three different in vitro Xu T, et al. (2011) Phenolic content and
assays. J Nutr 133: 2812–2819. antioxidant capacity of Chinese raisins
6. 47. Chevion S, Roberts MA, Chevion M produced in Xinjiang Province. Food
(2000) The use of cyclic voltammetry 16. 85. Jayaprakasha GK, Girennavar B and
for the evaluation of antioxidant Patil BS (2008) Radical scavenging
capacity. Free Radic Biol Med 28: 860- activities of Rio Red grapefruits and
870. Sour orange fruit extracts in different in
7. 69. Cheeseman KH and Slater TF vitro model systems. Bioresource
(1993) An introduction to free radical Technol 99: 4484-4494.
biochemistry. Br Med Bull 49: 481-493. 17. 86. Apak R, Guculu K G, Ozyurek M
8. 71. Frankel EN and Meyer AS (2000) and Karademir SE (2004) Novel total
The problems of using one-dimensional antioxidant capacity index for dietary
methods to evaluate multifunctional polyphenols and vitamins C and E,
food and biological antioxidants. J Sci using their cupric iron reducing
Food Agric 80: 1925-1941. capability in the presence of
9. 72. Giardi MT, Rea G, Berra B (2010) neocuproine: CUPRAC method. J Agric
Bio Farms for Nutraceuticals: Food Chem 52: 7970-7981.
Functional Food and Safety Control by 18. 87. Magalhaes KF, Caires ARL and
Biosensors. Landes Bioscience and Oliveira SL (2011) Determination of
Springer Science+Business Media. Antioxidant Content in Biodiesel by
10. 74. Thaipong K, Boonprakob U, Crosby Fluorescence Spectroscopy. Encontro de
K, Cisneros-Zevallos L and Byrne DH Fisica.
19. 97. Tougas TP, Jannetti JM, Collier WG
(1985) Theoretical and experimental
response of a biamperometric detector
for flow injection analysis. Anal Chem
57: 1377-1381.
20. 104. Mello LD, Kubota LT (2007)
Biosensors as a tool for the antioxidant
status
evaluation. Talanta 72: 335-348.
21. 115. Jayaprakasha GK, Jena BS, Negi
PS, Sakariah KK (2002) Evaluation of
Antioxidant Activities and
Antimutagenicity of Turmeric Oil: A
Byproduct from Curcumin Production.
Z Naturforsch 57c: 828-835.
22. 117. Stalmach A, Mullen W, Nagai C,
Crozier A (2006) On-line HPLC
analysisof the antioxidant activity of
phenolic compounds in brewed, paper-
filtered coffee. Braz J Plant Physiol 18:
253-262.
23. 118. Oishi M, Matsuda T, Nojiri S, Saito
K (2002) Simultaneous determination of
five antioxidants in food by HPLC with
fluorescence detection. Food Hygiene
and Safety Science (Shokuhin Eiseigaku
Zasshi) 43: 104-109.

Anda mungkin juga menyukai