Resumen
Se realizó una titulación de distintos aminoácidos: Glicina, Cisteína y Alanina el cual se
determinó su punto isoeléctrico pI mediante sus valores pKa en titulaciones ácido-base. Los
resultados de los valores de pI evidenciaron que son valores alejados a los que se encuentran
en la teoría posiblemente por errores cometidos por el analista.
Abstract
It has been made titration of different amino acids was performed: Glycine, Leucine, Cysteine
and Alanine which was determined its isoelectric point pI through its pKa values in acid-base
titrations. The results of the pI values showed
Introducción
Los aminoácidos puede existir en varias formas iónicas, dependiendo del pH del medio en
donde se encuentre disuelto. Los aminoácidos tienen al menos dos grupos disociables, el
amino y el carboxilo; pueden tener más si el grupo R tiene a su vez grupos que se pueden
ionizar. Para cada uno de estos grupos existe un pK, el del carboxilo se le llamará Pk COOH y
Pk NH2 al del amino. Esta es la forma en que se comportan en el pH celular. El grupo amino
(-NH2) acepta un protón hasta convertirse en -NH3+ y el grupo carboxilo dona un protón
convirtiéndose en -COO- disociado. Según se mencionó, la solución de un ácido y su base
conjugada sirve de amortiguador y resiste cambios en el pH cuando se agrega un ácido o una
base. Gracias a los grupos amino y carboxilo de una proteína.
La electroforesis es una técnica analítica en la cual se usa para la separación de moléculas por
medio de un campó eléctrico. Las biomoléculas aminoácidos, péptidos, proteínas, nucleótidos,
ácidos nucleicos tiene la capacidad de tener grupos ionizables estando en soluciones, así
cuando se agrega un electrono en una solución con etas biomoléculas, se van a saperar gracias
a la carga que estás poseen. Hay distintos tipo de electroforesis per la más usada es la
electroforesis de zona desplaza sobre un soporte sólido, como papel de filtro, celulosa o gel y
los componentes de la muestra migran en forma de pequeñas bandas, también llamadas zonas.
El presente trabajo tiene como estudio evidenciar las propiedades iónicas de un aminoácido
por medio de la curva de titulación, así mismo determinar su respectivo pK por medio de una
titulación ácido/base y aprender el uso del potenciómetro.
Metodología
Se realizaron 4 soluciones de aminoácidos la 01 N estás fueron alanina, cisteína, leucina y
glicina para ello se pesó 1,7818 g, 2,4323 g, 2,6236 g y 1,5012 g de cada aminoácido
respectivamente, después se agregó cada uno en un beaker y se le adicionó agua destilada, esta
disolución se pasó a un matraz aforado de 100 mL así hasta diluir lo más posible el
aminoácido, por último se aforó con agua destilada. Para la titulación de estos aminoácidos, se
agregó una alícuota de 25 mL de leucina a un erlenmeyer de 250 mL, seguidamente se procedió
a tomar su pH y también el de la solución titulante que fue de NaOH, una vez obtenido estos
datos se inició la titulación de manera en que el pH de la alícuota de aminoácido fuera
aproximo al pH de la solución titulante, el mismo proceso se repitió con la solución titulante
de HCl 0.1 N. Del mismo modo se realizó este procedimiento para los demás aminoácidos.
14 4
12 3.5
primera derivada de la cisteina
pH
10 3
8 2.5
ΔpH
6 2
4 1.5
2 1
0
0.5
0 20 40 60
Equivalentes OH- 0
0 20 40 60 80 100 120
Δ Equivalentes OH
Resultados y discusión
La ilustración 3 nos representa la ionización que presenta la cisteína cuando se realiza una
titulación para la determinación de sus pKa, inicialmente en la ilustración 3 se tiene la
protonación del grupo amino lo que nos indica que el primer pKa de la proteína es ácida, su
segundo pKa pertenece al del grupo tiol, el cual es un sustituyente que es ionizable y por
último tenemos la desprotonación del grupo OH- del ácido carboxílico, dando así 3 pKa
para la cisteína. Estos cambios se presencia mediante la titulación de esta proteína, ya que
al agregarlo el agente titulante se observa por medio del potenciómetro un cambio en el pH,
pasado de ácido a básico. La ilustración 2, es la primera derivada de la titulación de la
cisteína, estos cálculos matemáticos se realizaron con el fin de poder obtener los valores
más precisos y exactos de los pKa de la cisteína. Los valores que se obtuvieron son 1.68
para el NH2, 9.74 para el grupo tiol y por último 11.24 para el grupo COOH.
Derivada de la tutulación
12 de la Glicina
10
8
ۚΔpH
6
4
2
Titulación de la Glicina 0
0 50 100
14
Δ equivalentes OH-
12
10
8
pH
6
4
2
0
0 10 20 30 40 50 60
Equivalentes OH-
10
1.5
pH
1
5
0.5
0 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 0 50
Δ equivalentes OH-
Equivalente -OH
Ilustración 7. Titulación de la alanina
Conclusiones
Se determinaron los pKa para cada aminoácido los cuales fueron para la alanina pKa del COOH es
2.40, pK del NH2 es de 9,71, para la glicina fueron 2,80 para COOH, 10,40 para el NH2, y la
cisteína valores de 1.68 para el NH2, 9.74 para el grupo tiol y por último 11.24 para el grupo
COOH. Se determinó que si un grupo sustituyente como el tiol puede dar un valor de pKa
debió a que es un grupo ionizable como en el caso del cisteína. Además se obtuvieron los
valores de pI para cada aminoácido, estos valores son 3.65 para alanina, 4.78 para la cisteína y
3.8 para glicina, lo cual son bastante alejados de los valores teóricos, los cuales son 6.07 para
alanina, 5,07 para cisteína y 5,97 para glicina.
Referencias
[2] J. G. V. C. Donald Voet, Fundamental of Biochemistry (2° Edition), Madrid-Spain:
Editorial PANAMERICAN, 2007.