UNESA Journal Of Chemistry Vol. 3 No.

1 January 2014

UJI AKTIVITAS NANOGOLD SEBAGAI PEREDAM RADIKAL BEBAS 1,1-DIFENIL-2-

PIKRILHIDRAZIL (DPPH) DENGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI TIGA
PANJANG GELOMBANG

SCAVENGING ACTIVITY TEST of 1,1-DIFENIL-2-PIKRILHIDRAZIL (DPPH) FREE

RADICAL by NANOGOLD WITH SPECTROPHOTOMETRY METHODS

Israwan Sudhana *, Maria Monica Sianita dan Titik Taufikurohmah

Department of Chemistry, Faculty of Mathematics and Sciences
State University of Surabaya
Jl. Ketintang Surabaya (60231), Telp. 031-8298761
* Korespondensi, email: israwansudhana@ymail.com

Abstrak. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh variasi konsentrasi nanogold
terhadap peredaman radikal bebas 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil dengan pengukuran tiga
panjang gelombang, serta untuk mengetahui berapa besar konsentrasi efektif nanogold yang
dapat meredam 50% DPPH (EC50). Konsentrasi larutan nanogold yang digunakan adalah 5
ppm, 10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm yang masing-masing konsentrasi diambil 0,3 ml
kemudian ditambahkan DPPH sampai 3 ml sehingga konsentrasi masing-masing menjadi 0,5
ppm, 1,0 ppm, 2,0 ppm, 3,0 ppm, 4,0 ppm. Penelitian ini menggunakan spektrofotometer UV-
Vis merk Shimadzu tipe 1800 pada tiga panjang gelombang yaitu 497,83 nm, 517,39 nm,
536,96 nm dengan interval waktu 3; 10; 20 menit. Nilai E C50 masing-masing pada interval
waktu 3; 10; 20 menit berturut-turut adalah 3,26 ppm, 2,5 ppm, dan 2,18 ppm. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa semakin besar konsentrasi nanogold semakin besar pula
persen peredaman terhadap senyawa DPPH.

Kata kunci: nanogold, antioksidan,DPPH, tiga panjang gelombang

Abstract. The purpose of this research is to find out the influence of the activity of nanogold as
free radicals scavengers 1,1-diphenyl-2-pikrilhidrazyl using three wavelengths of
spectroscopy method, and also to find out the effective concentration of nanogold that can
reduced 50% of DPPH (EC50). Nanogold concentration used was 5 ppm, 10 ppm, 20 ppm, 30
ppm, 40 ppm, which had been taken 0,3 ml and then added by DPPH up to 3 ml for each
concentration, so the final concentration becomes 0,5 ppm, 1,0 ppm, 2,0 ppm, 3,0 ppm, 4,0
ppm. The experiment used Shimadzu’s spectrophotometer UV-Vis 1800 on three wavelengths
are 497,83 nm, 517,39 nm, 536,96 nm with time interval 3; 10; 20 minutes respectively. The
value of EC-50 at 3; 10; 20 minutes are 3,26 ppm, 2,5 ppm, and 2,18 ppm. The result shows
that the higher the concentration nanogold, the higher its capacity to reduce the free radicals.

Keywords: nanogold, antioxidant, DPPH, three wavelengths.

48
UNESA Journal Of Chemistry Vol. 3 No. 1 January 2014

PENDAHULUAN secara elektrokimia seperti tumor, kanker, tinggi kemampuan

Pada saat ini pada permukaan antigen asterosklerosis, katarak, suatu senyawa untuk
teknologi nano telah hepatitis B di dalam keriput, penuaan (aging) menangkal DPPH dan
berkembang sangat darah manusia[4]. dan lainnya. Untuk semakin tinggi pula
pesat diseluruh aspek Secara umum, mencegah akibat dari kemampuan senyawa
kehidupan manusia baik mensintesis nanpartikel radikal bebas tersebut tersebut sebagai
dalam bidang medis, dapat dilakukan dengan maka diperlukan suatu antioksidan atau anti
otomotif, komputer, dua cara, yaitu cara zat yang dapat menunda radikal bebas.
farmasi, tekstil, militer, pertama memecahkan atau menghambat Dalam penelitian ini
lingkungan hidup partikel ukuran besar terjadinya reaksi akan dilakukan uji
maupun konversi energi menjadi ukuran oksidasi radikal bebas, aktivitas emas dalam
[1]. Teknologi nano nanometer (top down) yang dikenal dengan bentuk nanomaterial
adalah penggunaan dengan metode grinding antioksidan [6]. (nanogold) sebagai
materi pada ukuran (penggerusan). Cara Salah satu uji untuk peredam radikal bebas
yang sangat kecil yaitu yang kedua adalah menentukan aktivitas terhadap DPPH dan
partikel dengan memulai dari atom- anti radikal bebas diukur pada tiga
diameter kurang dari atom yang digabung adalah metode panjang gelombang
100nm [2]. Keunggulan membentuk partikel penangkal radikal bebas yaitu 497,83 nm, 517,39
lain dari material ini yang berukuran 1,1 difenil-2- nm, dan 536,96 nm
adalah sifat yang nanometer yang pikrilhidrazil (DPPH). dengan memvariasi
dimiliki oleh dikehendaki (bottom- Metode penangkal konsentrasi dalam
nanomaterial dapat up). Dalam penelitian radikal bebas DPPH interval waktu 3; 10;
diubah-ubah melalui ini emas akan disentesis memberikan informasi dan 20 menit
pengontrolan ukuran dengan metode bottom- reaktivitas senyawa menggunakan
material, pengaturan up dan selanjutnya akan yang diuji dengan suatu spektrofotometer UV-
komposisi kimiawi, dan digunakan untuk radikal stabil yang dapat Vis. Dengan
modifikasi permukaan. membuat nanogold memberikan serapan membandingkan
Dalam dunia ini ada yang diharapkan dapat kuat pada panjang serapan pada ketiga
beberapa macam nano meredam radikal bebas. gelombang 517 nm panjang gelombang
diantaranya nanocooper, Radikal bebas dengan warna violet tersebut dari DPPH
nanospray, nanogold, merupakan atom atau gelap. Senyawa sebelum dan sesudah
dan lainnya, akan tetapi molekul yang penangkal radikal bebas diberi material
dalam hal ini akan mengandung satu atau menyebabkan elektron nanogold, kemudian
digunakan nanogold lebih eletron-elektron menjadi berpasangan menghitung Ec50 untuk
sebagai peredam radikal yang tidak berpasangan yang kemudian mengetahui pada
bebas. C. Loo (2004) pada orbital terluarnya menyebabkan konsentrasi berapa
telah membuktikan [5]. Adanya elektron penghilangan warna senyawa radikal bebas
bahwa emas dalam yang tidak berpasangan yang sebanding dengan dapat teredam oleh
bentuk nanopartikel menyebabkan senyawa jumlah elektron yang nanogold.
dapat digunakan untuk radikal bebas sangat diambil [7]. DPPH
terapi kanker dengan reaktif yang mampu merupakan senyawa METODE
memanfaatkan efek menyerang dan merusak yang tidak stabil dan PENELITIAN
termal [3]. Tang (2008) sel-sel yang sehat. hanya bisa diredam oleh Bahan
juga melalukan Radikal bebas dapat antioksidan yang bisa Beberapa bahan
modifikasi nanogold menimbulkan kerusakan memberikan atom yang digunakan pada
yang dapat digunakan di berbagai bagian sel hidrogen. Oleh karena penelitian ini: Larutan
untuk mendeteksi dan menyebabkan itu, semakin banyak HAuCl4, Aquabidest,
logam pada sistem imun berbagai penyakit gugus hidroksil semakin

49
UNESA Journal Of Chemistry Vol. 3 No. 1 January 2014

Serbuk DPPH, Etanol, larutan HAuCl4, larutan nanogold mendidih dengan

Asam sitrat. menambahkan 0,3 gram dari masing-masing pengadukan sempurna
asam sitrat, kemudian konsentrasi. hingga homogen,
Alat diaduk sempurna, Campuran tersebut selanjutnya
Alat yang digunakan setelah terjadi kemudian di ukur ditambahkan 5 ml
pada penelitian ini perubahan warna pada 3 panjang larutan HAuCl4 100
adalah: Gelas kimia menjadi larutan merah gelombang yaitu ppm dan didapatkan
250ml, 100 ml dan 50 anggur didinginkan 497,83 nm; 517,39 larutan nanogold
ml, gelas ukur 25 ml pada suhu kamar. Untuk nm dan 536,96 nm dengan konsentrasi 5
dan 10 ml, Labu ukur membuat nanogold dengan puncak di ppm. Sedangkan untuk
100 ml, kompor listrik, dengan konsentrasi 10- 517,39 nm pada konsentrasi 10-40 ppm,
Pipet volume 10 ml dan 40 ppm, ditambahkan interval waktu 3; 10; ditambahkan 10 ml; 20
1 ml, Penyemprot, larutan HAuCl4 20 menit. Demikian ml; 30 ml; 40 ml larutan
Spatula, Timbangan sebanyak masing- juga dilakukan pada HAuCl4. Mula-mula
digital, masing 10ml; 20ml; konsentrasi larutan emas berwarna
Spektrofotometer UV- 30ml; 40ml. nanogold yang lain. kuning setelah
Vis Shimadzu 1800. Uji aktivitas anti ditambahkan asam
radikal bebas dengan HASIL DAN nitrat terjadi perubahan
spektrofotometer UV- PEMBAHASAN warna larutan menjadi
Vis. Pembuatan nanogold tidak berwarna dan
PROSEDUR  Pengukuran Emas nanopartikel perlahan-lahan menjadi
PENELITIAN absorbansi DPPH (nanogold) dapat dibuat warna merah anggur.
Pembuatan Larutan Spektra absorbansi dari pencampuran Pemanasan lalu
HAuCl4 100 ppm DPPH diukur pada antara larutan emas dihentikan, tetapi tetap
Mengambil 10 ml panjang gelombang (HAuCl4) dengan asam diaduk dan dibiarkan
larutan induk HAuCl4 300-700 nm. Larutan sitrat yang ditandai oleh dingin. Reaksi yang
1000 ppm yang blanko yang perubahan warna dari terjadi adalah :
tersedia, memasukkan digunakan dalam kuning jernih menjadi 2HAuCl4 +
ke dalam labu ukur 100 setiap pengukuran warna merah anggur. 3C6H8O7 (asam sitrat)
ml kemudian dilarutkan adalah etanol. Asam sitrat digunakan → 2Au + 3C5H6O5 (3-
sampai tanda batas Pencatatan hasil sebagai zat pereduksi asam-ketoglutarat) +
dengan aquabidest. dilakukan pada tiga dalam sintesis 8HCl + 3CO2 [8]
Pembuatan Larutan panjang gelombang nanopartikel yang akan
DPPH 0,004% yaitu 497,83 nm, mereduksi kation Au3+ Secara umum ada
Menimbang 4 mg 517,39 nm dan pada larutan HAuCl4 dua metode yang dapat
DPPH, dimasukkan 536,96 nm dengan menjadi ion logam yang digunakan dalam
dalam labu ukur 100 puncak di 517,39 nm tidak bermuatan (Au sintesis nanopartikel,
ml, dilarutkan dengan untuk DPPH pada nol) [8]. yaitu secara top-down
menambahkan etanol interval waktu dari Pada penelitian ini, dan bottom-up. Dalam
sampai tanda batas dan 3; 10; 20 menit. sintesis nanogold di penelitian ini metode
kocok.  Pengukuran buat dengan yang digunakan adalah
Pembuatan nanogold absorbansi sampel memanaskan 100 mL metode bottom-up
Memanaskan 100 ml terhadap DPPH. aquabidest sampai dimana dari bentuk
aquabidest dalam gelas Sejumlah 2,7 ml mendidih pada suhu larutan emas yang
kimia 250 ml dengan larutan DPPH 1000C, kemudian memiliki ukuran
kompor listrik sampai 0,004% dimasukkan ditambahkan asam sitrat partikel yang
mendidih, ke dalam kuvet lalu 0,3 gram lalu berdiameter sangat kecil
menambahkan 5 ml ditambahkan 0,3 ml dipanaskan lagi sampai (pikometer (10-12))

50
UNESA Journal Of Chemistry Vol. 3 No. 1 January 2014

menjadi koloid maksimum diperlukan  Pengukuran 300-700 nm diperoleh

nanogold yang untuk pembacaan absorbansi sampel panjang gelombang
berdiameter 1-100 nm. absorbansi sampel terhadap DPPH seperti pada gambar 2
Hal ini disebabkan larutan berwarna yang Pengukuran anti berikut.
setelah Au3+ direduksi akan diuji. Serapan radikal bebas dengan
menjadi Au nol (atom cahaya oleh suatu pereaksi DPPH sebagai
Au) muatannya menjadi molekul dalam daerah senyawa radikal bebas
netral sehingga spektrum UV-vis sangat tidak stabil yang
memungkinkan antara bergantung pada ditetapkan secara
atom Au saling struktur elektronik dari spektrofotometri
mendekat dan molekul [9]. merupakan prosedur
berinteraksi satu dengan Berdasarkan hasil sederhana untuk
yang lain melalui ikatan pengukuran dengan mengukur aktivitas
antar logam yang dapat spektrofotometer UV- antiradikal. Radikal
menjadi cluster yang Vis pada panjang DPPH adalah suatu Gambar 2. Spektrum
berukuran nanometer. gelombang 300-700 nm senyawa organik yang UV-
Interaksi antara atom- diperoleh panjang mengandung nitrogen Vis :
atom ini terjadi sangat gelombang seperti pada tidak stabil dengan DPPH;
cepat dan sering tidak gambar 1 berikut. absorbansi kuat pada λ DPPH+
terkontrol sehingga maks 517 nm dan Nanogo
ukuran partikel emas berwarna ungu gelap. ld
yang sebelumnya Setelah bereaksi dengan 5ppm;
dikehendaki berkisar larutan nanogold maka DPPH
antara 1-100 nm DPPH tersebut akan +
berubah dengan cepat tereduksi dan intensitas 10ppm;
menjadi partikel yang warna ungu akan DPPH
sangat besar bahkan berkurang. Perubahan +
dapat melebihi ukuran warna tersebut 20ppm;
nanometer. Hal ini disebabkan karena DPPH
ditandai dengan berkurangnya ikatan +
munculnya endapan Gambar 1. Spektrum rangkap terkonjugasi 30ppm;
emas. UV-Vis DPPH pada DPPH karena DPPH
adanya penangkapan +
Dari gambar 1 dapat satu elektron oleh zat 40ppm.
Uji Aktivitas Anti diketahui bahwa antiradikal yang
Radikal Bebas Dengan absorbansi DPPH menyebabkan tidak Pada Gambar 2
Spektrofotometer UV- maksimal terjadi pada adanya kesempatan dapat dilihat bahwa
Vis panjang gelombang elektron tersebut untuk kurva yang berwarna
 Pengukuran 517,39nm dengan beresonansi dimana ungu muda adalah
absorbansi DPPH absorbansi puncak perubahan ini dapat kurva DPPH, yang
Pengukuran radikal masing-masing tiap diukur dan dicatat berwarna biru muda
bebas DPPH dilakukan waktu yaitu 3 menit dengan adalah kurva DPPH +
pada sinar tampak 300- dengan absorbansi spektrofotometer. Nanogold 5ppm, yang
700 nm dengan 0,116; 10 menit dengan Berdasarkan hasil berwarna hijau adalah
memakai instrumen absorbansi 0,116 dan 20 pengukuran dengan kurva DPPH +
spektrofotometer UV- menit dengan spektrofotometer UV- Nanogold 10ppm, yang
Vis shimadzu 1800. absorbansi 0,1155. 1800 shimadzu pada berwarna merah muda
Panjang gelombang panjang gelombang adalah kurva DPPH +

51
UNESA Journal Of Chemistry Vol. 3 No. 1 January 2014

Nanogold 20ppm, yang dikatakan aktif sebagai Tabel 2. % peredaman

berwarna orange adalah antiradikal bebas bila nanogold terhadap
kurva DPPH + persentase DPPH menit ke-10
Nilai Absorban
Nanogold 30ppm, yang peredamannya lebih
berwarna hitam adalah dari atau sama dengan 10 menit

kurva DPPH + 50% [10]. Perhitungan 497,83 517,39 536,96 Pu

Nama
Nanogold 40ppm. persen peredaman nm nm nm cak

Nanogold dimasukkan dengan waktu 3 menit DPPH+ 0,754 0,866 0,746 0.1
0,3 ml dalam kuvet dapat dilihat pada tabel Etanol 6

diencerkan 10x sampai 1., sedangkan grafik DPPH+ 0,678 0,782 0,67 0,1
5ppm 8
volume 3 ml,berarti hubungan konsentrasi
DPPH+ 0,609 0,687 0,583 0,0
konsentrasi nanogold larutan nanogold 10ppm 1
yang diperoleh untuk dengan persen Gambar 3. Pengaruh DPPH+ 0,516 0,569 0,489 0,0
meredam DPPH adalah peredaman dapat konsentra 20ppm 65
0,5, 1, 2, 3, 4. Pada diperoleh dengan si DPPH+ 0,249 0,267 0,212 0,0
terhadap 30ppm 65
konsentrasi DPPH memplot nilai dari
0,004% yang berwarna persen peredaman dan % DPPH+ 0,163 0,143 0,057 0,0
40ppm 3
ungu sehingga besarnya konsentrasi larutan peredama
aktivitas antiradikal nanogold yang dapat n DPPH
bebas dapat diukur dilihat pada gambar 3. menit ke-
sebagai % peredaman 3
melalui rumus sebagai Tabel 1. % peredaman
berikut : nanogold terhadap Pada Tabel 1. dapat
DPPH menit ke-3 dilihat bagaimana %
peredaman sebanding
Nilai Absorban dengan besar
20 menit konsentrasi larutan
nanogold masing-
497,83 517,39
Nama
nm nm
masing 5,6%; 15,52%,
22,84%; 42,24%;
Adapun absorbansi
DPPH+ 0,758 0,868 66,81% sehingga
hitung DPPH atau Etanol
diperoleh efektivitas
sampel pada puncak DPPH+ 0,697 0,801
Gambar 4. Pengaruh
konsentrasi (EC-50)
517 nm dapat dihitung 5ppm konsentrasi
sebesar 3,26 ppm.
melalui rumus sebagai DPPH+ 0,642 0,726 terhadap
10ppm Perhitungan persen
berikut : persen
DPPH+ 0,639 0,712 peredaman terhadap
peredaman
20ppm DPPH dengan waktu 10
DPPH
DPPH+ 0,519 0,556 menit dapat dilihat
Absorbansi hitung 30ppm menit ke-
Tabel 2., sedangkan
sampel atau DPPH DPPH+ 0,315 0,314 10
40ppm grafik hubungan dapat
diperoleh dengan
Pada Tabel 2. dapat
memplot dari nilai
dilihat bagaimana %
persen peredaman dan
Nilai 0% berarti peredaman sebanding
konsentrasi larutan
tidak mempunyai dengan besar
nanogold yang dapat
keaktivan sebagai konsentrasi larutan
dilihat pada gambar 4.
antiradikal bebas, 100 nanogold masing-
% berarti peredaman masing 6,89%; 21,55%,
total. Suatu bahan 42,67%; 68,53%;

52
UNESA Journal Of Chemistry Vol. 3 No. 1 January 2014

71,55% sehingga diperoleh efektivitas 10, konsentrasi 2010.

diperoleh efektivitas konsentrasi (EC-50) 2,18 ppm pada Nonspherical
konsentrasi (EC-50) sebesar 2,18 ppm. Noble Metal
menit ke- 20. Nanoparticles:
sebesar 2,5 ppm.
Colloid-Chemical
Perhitungan persen DAFTAR PUSTAKA Synthesis and
peredaman terhadap 1. Hadi, S. 2010. Morphology
DPPH dengan waktu 20 Nanoteknologi, Control. Jurnal
menit dapat dilihat teknologi masa Advance Materials
Tabel 3., sedangkan depan. September 22, 1781–1804.
04, 2011, 7. Sunarni, T. 2005.
grafik hubungan dapat
http://teknologi.ko Aktivitas
diperoleh dengan mpasiana.com/tera Antioksidan
memplot dari nilai pan/2010/11/29/na Penangkap Radikal
persen peredaman dan noteknologi- Bebas Beberapa
konsentrasi larutan teknologi-masa- kecambah Dari
nanogold yang dapat depan/. Biji Tanaman
dilihat pada gambar 5. 2. Abdullah, M. Familia
Gambar 5. Pengaruh 2009. Pengantar Papilionaceae.
konsentrasi Nanosains. Jurnal Farmasi
Tabel 3. % peredaman
terhadap Bandung: ITB. Indonesia 2 (2),
nanogold
persen 3. Awaludin, R. 2009. 2001, 53-61.
terhadap DPPH
Pembuatan 8. Tabrizi, A., Fatma,
menit ke-20 peredaman
Nanopartikel A., and Hakan, A.
Nilai Absorban DPPH 2009. Gold
Emas Radioaktif
20 menit menit ke- Nanoparticle
dengan Aktivasi
20 Neutron. Makara Synthesis and
497,83 517,39 Characterisation.
Nama Teknologi, Vol. 13,
nm nm
PENUTUP No. 1. 42-46. Journal of biology
DPPH+ 0,745 0,858 Simpulan and Chemistry
Etanol 4. Tang.2008.Ionic Hacettepe J. Biol.
Berdasarkan hasil Liquid And & Chem 37(3),
DPPH+ 0,662 0,762 dan pembahasan di atas, Nanogold-
5ppm 217-226.
dapat ditarik Modified 9. Hardjono, S.,
DPPH+ 0,582 0,662
10ppm kesimpulan sebagai Immunosensing 1991,
berikut : Interface For Spektroskopi,
DPPH+ 0,476 0,537
20ppm 1. Persen peredaman Electrochemical Liberty,
Of Hepatitis B Yogyakarta.
DPPH+ 0,248 0,271 nanogold terhadap
30ppm Surface Antigen In 10. Djatmiko, 1998,
larutan DPPH dalam Human
DPPH+ 0,156 0,115 Seminar Nasional
etanol pada Serum.Jurnal.Chon
40ppm Tumbuhan Obat
pengukuran tiga gqing.Soutwest XII, Unair,
panjang gelombang University. Surabaya.
berbanding lurus 5. Fessenden, R. J., &
Pada Tabel 3. dapat dengan waktu dan Fessenden, J. S.
dilihat bagaimana konsentrasi 1986. Kimia
nanogold tersebut. Organik. Jilid 1.
persen peredaman
2. Nilai EC50 dalam Edisi Ketiga.
sebanding dengan besar Penerjemah:
konsentrasi larutan nanogold diperoleh
Aloysius Hadyana
nanogold masing- konsentrasi 3,26 Pudjaatmaka.
masing 9,52%; 23,38%, ppm pada menit ke- Jakarta: Erlangga.
43,72%; 77,06%; 3, konsentrasi 2,5
6. Sau, Tapan K., dan
87,01% sehingga ppm pada menit ke-
Andrey L. Rogach.

53