Peristiwa Penting dari Siklus Sel:

Regulasi dan Organisasi

L. V. Omelyanchuk, S. A. Trunova, L. I. Lebedeva, and S. A. Fedorova
Institute of Cytology and Genetics, Russian Academy of Sciences, Novosibirsk, 630090 Russia;
fax: (3832) 33-12-78; e-mail: ome@bionet.nsc.ru
Diterima 26 November, 2002; akhir, 18 August, 2003

Abstrak

Tinjauan ini mensurvei studi mekanisme molekuler genetik dari kontrol siklus sel pada berbagai
model eukariotik. Fenomena siklus sel utama yang dipertimbangkan: (1) tempat pemeriksaan dan
perannya dalam mempertahankan integritas DNA dan ketepatan mitosis, (2) model osilator sel,
dan (3) peran cyclins dalam pengaturan waktu pembelahan sel dan koordinasi peristiwa mitosis.
Kelas utama protein pengatur yang terlibat dalam siklus sel dibahas secara rinci.
Pendahuluan
Pembelahan sel adalah salah satu fenomena biologis dasar dan menjamin reproduksi sistem
biologis sebagai kondisi yang diperlukan untuk kehidupan mereka. langsung (amitosis) dan mode
pembelahan sel tidak langsung (mitosis) untuk membedakan. Pembelahan langsung, yang jarang
terjadi dan kurang dipelajari, materi genetik kadang-kadang mungkin didistribusikan secara tidak
merata antara sel anak perempuan. Pembelahan sel tidak langsung (mitosis) umum dalam
kehidupan organisme. Signifikansi biologisnya berdasarkan fakta bahwa sel anak perempuan
menerima sama, identik dengan satu set kromosom ibu, yang memastikan presisi transmisi
informasi herediter dalam generasi sel.
Menurut pandangan modern, siklus sel adalah sebuah pergantian fase berurutan yang
diulang secara berkala G1, S, G2, dan M. Selama fase ini, meteri genetik sel pertama kali
digandakan (fase-S), dan kemudian dibagi menjadi dua set anak perempuan identik (fase M).
Rincian siklus sel bervariasi di antara eukariota. Namun demikian, berikut empat ciri somatik
tersebut siklus sel dibagi oleh mereka semua: pertumbuhan sel, replikasi DNA, mitosis
(pembelahan inti), dan divisi sel (cytokinesis) [1]. Peristiwa siklus kunci adalah replikasi DNA
dan pemisahan dari duplikasi set dari kromosom ibu kepada dua set anak perempuan identik. Ini
adalah proses ketepatan tinggi; kesalahan mereka mengakibatkan kelainan bawaan dan penyakit
disebut sebagai penyakit siklus sel, yang meliputi karsinogenesis[5]
Studi sistematik molekuler-genetika siklus sel dimulai pada 1970-an pada ragi, tumbuhan
dan spesies hewan, yang sangat dipromosikan oleh munculnya teknik genetik, biokimia, dan
sitologi baru. Karena biologi ragi, penelitian dengan objek ini berkembang lebih cepat. Akibatnya,
saat ini pemahaman tentang siklus sel sebagian besar didasarkan pada data yang diperoleh pada
Schizosaccharomyces pombe dan Saccharomyces cerevisiae. Karena protein siklus kunci sel
secara evolusioner dilestarikan, hasil yang diperoleh untuk ragi (dengan beberapa pengecualian)
berlaku untuk semua eukariota.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendeskripsikan gen dan produk mereka yang
terlibat dalam regulasi siklus sel eukariota dan mekanisme molekuler yang mendasarinya pada
peristiwa utama siklus sel. Regulasi siklus sel telah telah dipelajari secara terperinci hanya pada
tingkat posttranslasional sementara pada tingkat transkripsi diperiksa secara menyeluruh hanya
pada transisi G1-S dan tahap S, yang tercermin dalam ulasan kami. Kami praktis membatasi hanya
pada diskusi sinyal induksi proliferasi dan penghambatan serta target intraseluler mereka, karena
itu masalah independen dan rumit. Mengingat hal ini, masalah program proliferasi dan
morfogenesis, peran batasan kompartemen dalam regulasi proliferasi dan regenerasi jaringan,
molekul sifat supresi onkogen dan tumor juga ditinggalkan. Mekanisme pengaturan mitosis pada
eukariota yang lebih tinggi (kondensasi kromosom, pembentukan, konstruksi dan fungsi dari
mesin mitosis) akan dipertimbangkan dalam ulasan yang akan datang.
2. Siklus Sel dan Heterokarion
Pengembangan teknik sinkronisasi pembelahan sel dan fusi protoplas di berbagaitahap-
tahap siklus sel memediasi penemuan yang dominasi pada tahapan siklus sel [6]. Setelah
penyatuan dari pembagian sel mamalia dengan sel sel mamalia dengan sel yang pada setiap tahap
interfase (G1, S atau G2), inti interfase masuk mitosis (stadium M) (Tabel 1). Untuk menjelaskan
penemuan ini, keberadaan faktor aktif khusus yang mampu menginduksi mitosis pada setiap tahap
siklus sel dipostulatkan. Faktor ini memang ditemukan kemudian (lihat Bagian 3). Perilaku nuklir
dalam sel X yang diproduksi oleh fusi sel-sel pada tahap S dan G1 lebih kompleks. Setelah fusi,
inti fase S melanjutkan siklus sel dan kemudian ditangkap pada transisi G2-M, sedangkan inti fase
G1 memulai sintesis DNA. Kemudian nukleus ini melewati tahap S dan G2, dan kedua inti
memasuki tahap M pada waktu bersamaan. Perilaku sel ini dapat dijelaskan oleh keberadaan titik
siklus sel khusus yang mengendalikan penyelesaian persiapan sel untuk mitosis (lihat Bagian 9).
Sel, di mana salah satu nukleus tidak menyelesaikan G2 sampai saat penggabungan, ditangkap
pada transisi G2-M sampai persiapan untuk mitosis selesai pada kedua sel. Transisi diizinkan jika
kedua sel siap lolos ke tahap selanjutnya secara bersamaan. Itu mekanisme yang mendasari
perilaku ini dibahas dalam bagian “Cell Cycle Checkpoints”.
Terlepas dari perlambatan pada titik-titik tertentu, perilaku sel ini memiliki fitur penting
lainnya. Fakta dari Replikasi DNA di salah satu nuklei menyiratkan adanya faktor replikasi (s)
dalam sitoplasma heterokaryon. Muncul pertanyaan mengapa faktor ini terjadi tidak mengaktifkan
re-replikasi DNA dalam inti yang dimiliki sudah mengalami siklus replikasi sebelum fusi dan
Apakah pada G2 saat fusi? Kondisi yang mana apakah diperlukan untuk replikasi DNA?
Mekanismenya penangkapan re-replikasi dianggap dalam bagian “Control of DNA replication”.
Di sel Y diproduksi oleh fusi G2 dan sel S-stage, nukleus, yang berada pada tahap G2,
diblokir di pos pemeriksaan G2 – M menunggu yang lain, Fase S, sel untuk menyelesaikan
replikasi DNA dan menjangkau tahap ini. Kemudian kedua nukleus secara bersamaan masuk
mitosis. Dengan demikian, kedua fenomena, kontrol pos pemeriksaan dan memblokir re-replikasi,
diamati juga dalam kasus ini. Setelah fusi sel G1 dan G2 (Tabel 1, Z), yang inti G1 direplikasi
secara normal sedangkan inti G2 "Menunggu" di pos pemeriksaan G2 – M sampai replikasi di
bekas nukleus selesai
3. Identifikasi MPF
Biasanya, meiosis dalam oosit katak berjalan sebagai berikut: hormon progesteron
mengaktifkan masuk awal oosit ke meiosis 1. Kejadian meiosis selanjutnya adalah diakhiri oleh
menghentikan siklus sel pada metafase 2. Setelah pembuahan, penangkapan ini diangkat, yang
diikuti oleh karyogamia (fusi ibu dan ayah pronuklei) dan kemudian divisi zygotik. Eksperimen
dilakukan pada microinjecting sitoplasma oosit, yang secara alami diblokir pada metafase 2,
ke dalam oosit awal yang belum diinduksi oleh progesteron [1]. Sebagai hasil dari microinjecting,
oosit melewati tahap meiotik sampai metafase 2 tanpa stimulasi progesteron. Hasil ini
diintepretasikan sebagai indikasi adanya faktor pematangan oosit bernama MPF (maturation
promoting factor), yang dominan memediasi masuknya oosit ke meiosis [7]. Analisis dinamika
aktivitas MPF menunjukkan bahwa aktivitas memuncak pada awal meiosis [8].
Protein murni dengan fungsi MPF diisolasi menggunakan prosedur ekstraksi sel yang
dikembangkan untuk oosit katak dan landak laut [9]. Bagian utama MPF terdiri dari kompleks
protein dengan dua subunit 32 dan 45 kDa. Komponen 32-kDa dekenali oleh antibodi terhadap
bagian konservatif Cdc2 dari Sch. Pombe, yang saat itu sudah dikenal. Kedua komponen kemudian
diidentifikasi sebagai cyclin B1 [10]. Saat ini, total kelas protein yang disebut cyclins adalah, yang
secara berkala disintesis dan terdegradasi dalam siklus sel [11].
4. Identifikasi dari cdc Gen Pada Ragi
Perkembangan biologi sel modern didasarkan pada pendekatan genetik formal yang
diimplementasikan dalam ragi [12]. Keberhasilan pendekatan ini dihasilkan dari kesesuaian objek
genetik (karena adanya strain haploid, dalam ragi sekitar 106 individu dapat digunakan dalam
seleksi percobaan sedangkan pada eukariota lain parameter adalah 104, yang jauh lebih rendah).
Tidak adanya kromosom yang jelas dalam organisme ini tidak menghambat penelitian, karena
analisis genetik dilakukan untuk memperkirakan ukuran sel (ukuran kuncup di
S. cerevisiae dan ukuran sel anak di Sch. pombe). Dua kelompok mutasi yang sensitif terhadap
suhu terbukti: mutasi menahan siklus sel pada tahap pengobatan dengan temperature (misalnya:
pada setiap tahap) an mutasi yang terjadi siklus sel pada tahap tertentu. Kelas pertama jelas terdiri
dari gen rumah tangga. Kelompok kedua, yang terdiri dari tahap mutan spesifik disebut mutasi
CDC (siklus pembelahan sel), terbukti model yang sangat baik untuk mempelajari mekanisme
siklus regulasi sel.

Tabel 2 menyajikan informasi tentang beberapa mutasi cdc diidentifikasi dalam Sch.
pombe. Dalam mutasi S. cerevisiae dikelompokkan ke dalam kelompok yang serupa sesuai dengan
aksi tahapan mereka. Jumlah mutasi dengan fase berbeda aksi mencerminkan relatif kompleksitas
genetik dari proses diperiksa. Beberapa gen mengendalikan beberapa fase siklus sel: misalnya, gen
cdc2 terlibat dalam kontrol entri fase S dan transisi G2-M. Mutasi gen cdc2 secara fenotip
dinyatakan dalam fase S atau transisi G2 – M tergantung pada waktu pergeseran suhu (sebelum
atau setelah transisi G1 – S) [13, 14].
 Gen yang terkait dengan mutasi cdc2 di Sch. pombe mengkodekan produk dari 297 asam
amino (34 kDa), yang memiliki fungsi serin-treonin kinase p34cdc2. Gen ini 63% homolog dengan
cdc28 gen S. cerevisiae [15]. Nanti penggantian fungsional dari Sch. pombe cdc2 dan S. cerevisiae
cdc28 ditampilkan secara eksperimental. Analisis aktivitas protein Cdc2 menggunakan histone
H1 sebagai substrat fosforilasi menunjukkan bahwa kegiatan ini memuncak pada transisi G2-M
(Gbr. 1) dan tidak hanya bergantung pada interaksinya dengan protein lain tetapi juga pada tingkat
fosforilasi protein ini sendiri [16]. Tyr15 (Situs Y) dan Thr167 (Situs T) bertindak sebagai substrat
fosforilasi ini. Hasil studi fenotipe dari alel cdc2 dan lokalisasi dari substitusi yang sesuai dalam
urutan polipeptida (Tabel 3) menunjukkan itu banyak mutasi yang mengganggu asam amino
menjadi bagian urutan milik dua situs mengelompok di sekitar situs-situs ini [17–19]. Analisis
fenotip sel yang mengandung gen mutan ini menunjukkan bahwa hanya bentuk MPF dengan T-
situs terfosforilasi (tetapi tidak Y-situs)aktif (Gbr. 2) [20].
Kloning dari cdc 13 + gen Sch. Pombe menunjukkan bahwa produk 482 asam amino
dalam ukuran memiliki substansial homologi dengan cyclins yang dikenal dengan kelompok B
[21, 22]. Penghapusan alleles cdc13 di G2 dengan kondensasi kromosom dan inaktivasi Cdc2
kinase [22]. Diberikan interaksi biokimia antara produk cdc2 dan cdc3 [20], Mereka cenderung
berfungsi bersama-sama di transisi G2-M yang mengatur masuknya sel ke dalam mitosis. Produksi
berlebih Cdc13 tidak mengganggu pembelahan sel. Ini berarti bahwa peraturan kegiatan
kompleks ini terjadi pada level posttranslasional modifikasi protein daripada level transkripsi [21,
22].
Temperatur sensitif allel cdc25 akan ditahan di transisi G2-M meninggalkan protein
Cdc2 terfosforilasi di situs-Y dan tidak aktif. Protein ini diaktifkan selama 10 menit setelah
mengembalikan sel ke temperature permisif. Overproduksi protein Cdc25 menginduksi masuknya
sel ke dalam mitosis [23]. Karena sifat-sifat ini, Cdc25 fosfatase dianggap sebagai aktivator Cdc2
kinase. Chc25 dephosphorylates situs Y Cdc2 yang memediasi aktivasi MPF [24].
Penghapusan alel gen wee1 menginduksi masuknya sel menjadi mitosis pada ukuran
kuncup lebih rendah dari pada tipe liar S. cerevisiae (awal masuk ke mitosis). Sebaliknya, setelah
kelebihan protein ini, ukuran kritis kuncup sel meningkat [25]. Jadi, sifat dari wee1 berlawanan
dengan cdc25. Produk dari Gen wee1 adalah asam polipeptida 877-amino homolog ke protein
kinase C-end [25]. Wee1 kinase berperan dalam fosforilasi situs Y Cdc2 dan penghambatan
aktivitas kinase ini telah ditunjukkan untuk evolusi homolog pada eukariota yang lebih tinggi [26].
5. Model Sel Oscillator
Setelah menetapkan gen regulasi siklus sel dan produk mereka dan menunjukkan peran
penting fosforilasi protein reversibel dalam proses ini, muncul pertanyaan tentang bagaimana
sistem ini memastikan pergantian fase siklus sel dalam ragi dan organisme eukariotik. Pandangan
saat ini pada siklus sel adalah didasarkan pada gagasan osilator sel dan pos pemeriksaan sebagai
sistem transmisi sinyal dalam sel. Sel osilator adalah sistem protein periodik reversibel
modifikasi yang dihasilkan dari fosforilasi / defosforilasi peristiwa yang mengarah pada penataan
ulang global struktur sel. Osilator sel ditandai dengan tingkat ambang sinyal stimulasi, positif dan
umpan balik negatif [27]. Mari kita pertimbangkan pergantian fase siklus sel menggunakan MPF
sebagai contoh. MPF diaktifkan dan ditekan oleh defosforilasi komponen cyclin oleh fosfatase dari
golongan Cdc25 dan fosforilasi oleh tipe kinase Wee1 masing-masing (Gbr. 2). Mekanisme
pengaturan MPF sangat tinggi untuk dilestarikan.Dalam sel manusia memiliki homolog protein
ini, Cdc25 bertindak sebagai substrat fosforilasi oleh Cdc2 (Cdk1 dalam nomenklatur lain) [28],
yang dikonfirmasi hipotesis yang diajukan sebelumnya bahwa aktivitas MPF diatur oleh self-
catalysis [29]. Aktivitas Wee1 kinase sebagai antagonis terhadap aktivitas Cdc25. Protein
terdahulu mengoordinasi penyelesaian replikasi DNA dan perbaikan mengendalikan laju proses
self-catalytic ini. Wee1 diaktifkan oleh Pyp1- dan Pyp2 phosphatases; juga, ada Nim1 kinase
menghambat aktivitas Wee1. Selain itu, kegiatan MPF dikendalikan oleh sebuah umpan balik
negatif untuk menonaktifkan dengan tepat waktu CycB dan memastikan transisi sel dari metafase
ke anafase. Umpan balik positif dan negatif secara kolektif menginduksi tarikan MPF berkala dan
jatuh ke level ambang batas level, yang merupakan dasar dari osilator sel G2-M (Gbr. 2). Tahap
siklus sel lainnya diatur oleh sistem yang serupa.Produk gen cyclin B tidak aktif melalui ubiquitin-
proteolisis tergantung oleh anafase yang mempromosikan complex (APC) (Gbr. 2). APC
mengenali dan mengikat dilestarikan urutan disebut sebagai penghancuran cyclin kotak (D-box)
yang terletak di cyclin N-end. Ubiquitin ligase pada kompleks APC mengikat molekul ubiquitin
untuk lisin dekat kotak-D (Gbr. 2). Kemudian protein mengandung rantai polyubiquitin dikenali
oleh proteosom dan terdegradasi [30]. Aktivitas ubiquitin
ligase yang diisolasi dari telur landak meningkat dengan penambahan protein Cdc2 [31].
Apalagi lokasi spasial dari berbagai protein regulasi pembelahan sel menyediakan
kontrol temporal dari siklus sel. Beberapa dari regulator ini secara berkala bergerak di antara
kompartemen dalam sel, yaitu penting untuk spesifisitas substrat dan waktu presisi bertindak dari
protein kinase dan fosfatase. Kontrol lokalisasi intraseluler kinase antagonis, fosfatase, dan
protease memberikan gradien terfosforilasi dan substrat yang difosforilasi dalam satu sel. Sel
secara spasial mengoordinasi reorganisasi global dari struktur intraseluler di pintu masuk dan
keluar dari mitosis [32]. Perhatikan juga bahwa tampilan di atas pada MPF sebagai kompleks CycB
/ Cdc2 (sesuai dengan nomenklatur lain, CycB / Cdk1) agak disederhanakan. Sel dari eukariota
yang lebih tinggi mengandung beberapa cyclin B terkait gen; selain itu, kompleks CycA / Cdk1
dapat berfungsi mirip dengan MPF pada transisi G2-M.
6. PERIKSA SIKLUS SEL SEL

Mari kita mulai dengan menjelaskan istilah-istilah umum yang digunakan dalam
membahas masalah ini. Pos pemeriksaan adalah sistem sinyal yang digunakan oleh sel untuk
mengontrol penyelesaian peristiwa tertentu dari siklus sel dan inisiasi peristiwa berikutnya. Ada
pos-pos pemeriksaan untuk kerusakan DNA, replikasi DNA, dan integritas peralatan mitosis. Pos
pemeriksaan, atau loop umpan balik, menentukan tahap siklus sel di mana perkembangan siklus
sel tertunda oleh beberapa gangguan (Tabel 4). Tahap siklus sel ini juga secara konvensional
disebut sebagai pos pemeriksaan transisi G1-S, G2-M, dan M-A. Titik restriksi (R-point) adalah
tahap siklus sel di mana sel sensitif terhadap faktor pertumbuhan. Perhatikan bahwa titik batasan
istilah tidak sama dengan pos pemeriksaan istilah tetapi menggambarkan peristiwa independen.
Titik pembatasan yang diketahui adalah pada akhir G1 tetapi tidak bertepatan dengan pos
pemeriksaan transisi G1-S [33]. Dalam ragi, titik siklus sel dianalogikan dengan m -alian R-point
adalah titik MULAI menentukan entri ke fase S. Analisis genetik dari siklus sel dalam S. cerevisiae
menunjukkan bahwa ada tahap-tahap antara antara titik START dan awal fase S.

Iradiasi yang diinduksi pembelahan sel dikenal bahkan dalam radiobiologi klasik [34].
Eksperimen pada pemilihan mutasi ragi bersyarat (mengarah ke mitosis mematikan setelah
pengobatan mutagen dan tidak mempengaruhi pembelahan sel tanpa adanya mutagen)
memberikan bukti bahwa keterlambatan tersebut disebabkan oleh aktivitas gen tertentu.
Perhatikan bahwa masalah kontrol genetik mitosis memiliki dua aspek. Di satu sisi, ini adalah
kontrol genetik perbaikan DNA, yang berada di luar cakupan tinjauan ini. Di sisi lain, ini adalah
masalah gen yang produknya menunda pembelahan sel sebagai respons terhadap kerusakan
struktur intraseluler.

Mutasi mutagen-sensitif bersyarat dari S. cerevisiae yang mengakibatkan mitosis

mematikan setelah terpapar radiasi atau suhu terbatas dikelompokkan menjadi dua kelas menurut
morfologi sel-sel mati. Mutasi kelas rad52 mengganggu perbaikan DNA dan menyebabkan
kematian sel jika ukuran sel mutan melebihi sel utuh. Ini menandakan bahwa hanya perbaikan
DNA daripada mekanisme pos pemeriksaan yang memastikan penundaan pembelahan sel yang
diinduksi mutagen rusak dalam sel mutan. Akibatnya, perkembangan sel melalui siklus tertunda
tetapi pertumbuhan sel tidak terpengaruh, dan sel mencapai ukuran besar dan mati tanpa
pembelahan. Kelas kedua termasuk mutasi tipe rad9 yang ditandai oleh sel-sel mati berukuran
kecil, yang dijelaskan oleh gangguan loop umpan balik. Memang, jika mekanisme keterlambatan
rusak, sel-sel biasanya akan bergerak melalui siklus dan masuk ke dalam mitosis pada ukuran
normal mirip dengan sel utuh yang tidak diiradiasi [35].

Tabel 4. Gangguan mengaktifkan pos pemeriksaan jalur sinyal

fase siklus sel di mana gangguan Checkpoint-mengaktifkan fase siklus sel di mana sel
terjadi gangguan ditangkap

G1 Pemisahan DNA G1-S

duplikasi rusak dan (atau) G2-MS
pemisahan centrosomes

S Pemblokiran dari garpu G2-M

replikasi
G2 DNA untai ganda memecah G2-M,M-AM
M Kromosom yang tidak terikat M – A
ke poros

Jalur Perbaikan dan Replikasi Kontrol DNA

Penangkapan siklus sel pada transisi G2-M muncul sebagai respons tidak hanya terhadap
mutagen tetapi juga terhadap faktor lain. Mutasi bersyarat dari Sch. pombe pada gen yang
mengkode protein replikasi DNA (DNA ligase: cdc17, DNA polimerase γ-subunit: pol3, PCNA:
pcn1) menangkap sel di G2-M pada suhu terbatas. Pengobatan dengan inhibitor replikasi DNA,
hydroxyurea, mengarah pada konsekuensi yang serupa. Penangkapan siklus sel oleh faktor-faktor
di atas diatasi dalam sel Sch. pombe mutan pada gen rad1, yang produknya terlibat dalam
perbaikan DNA [36]. Fenotip dari gen mutan rad3 (produk dari gen ini adalah DNA helicase),
rad1, rad17, hus1, dan hus2 dianalogikan dengan fenotipe rad9. Fitur spesifik dari mutasi gen
rad21 (protein terlibat dalam perbaikan double-strand break) dan rad24 adalah bahwa sel melewati
pos pemeriksaan sebagai respons terhadap kerusakan DNA daripada replikasi DNA yang tidak
lengkap [37]. Dengan demikian, loop umpan balik menunjukkan sensitivitas diferensial untuk
berbagai jenis agen yang mengganggu pembelahan sel. Biasanya, kelompok gen rad Sch. pombe
— rad3, rad9, rad17, hus1, serta cdc18, cdt1, cut5, rum1 — mengontrol integritas DNA pada
transisi G1-S [13]. Sistem pos pemeriksaan berfungsi sebagai berikut: protein sensor mengontrol
penyelesaian peristiwa siklus sel dan mengirimkan sinyal terkait yang diterima oleh efektor,
elemen respons yang menahan perkembangan sel melalui siklus [38]. Fungsi-fungsi gen yang
diketahui dan produk-produknya yang terlibat dalam kontrol pos-pos sesuai dengan skema ini.
Misalnya, sensor kerusakan dapat mencakup protein yang disandikan oleh gen rad1 (perbaikan)
dan rad9 (mengikat lesi DNA) serta produk gen cdc18 (faktor replikasi). Produk-produk dari gen
rad17 yang mengkode 3'– 5 'exonuclease dan gen rad24, sebuah gen exonuclease putatif yang
homolog dengan faktor replikasi DNA manusia, juga dikaitkan dengan sensor [38, 39]. Pada saat
yang sama, produk gen rad3, protein kinase, kemungkinan mentransmisikan sinyal yang muncul
pada aktivasi pos pemeriksaan. Pemancar lainnya adalah produk gen mec1 (pengkodean
inositolposphatidyl-inositol kinase, homolog protein kinase FRP1 manusia), mec2 (pengkodean
threonine-tyrosine protein kinase), dan serine-threonine kinase Chk1 (Rad53) [35, 40]. Cdc2,
komponen katalitik dari cyclin kinases, adalah efektor osilator sel.

Aktivasi dan transmisi sinyal pada penangkapan sel pos pemeriksaan bukanlah aktivasi
kaskade sederhana karena proses ini melibatkan loop umpan balik internal. Misalnya, protein
Mec1 memfosforilasi kerusakan sensor Rad9 dan Dcd1 sebagai respons terhadap kerusakan DNA
[41]. Interaksi protein pos pemeriksaan agak rumit: misalnya, Mec1 terfosforilasi oleh Rad9
berikatan dengan Rad53. Phosporylation dari Rad53 itu sendiri tergantung tidak hanya pada Rad9
dan Mec1 tetapi juga pada protein kelompok Rad17, Rad24, Dcd1, Mec3 (grup Rad24), cabang
sensor kerusakan DNA yang independen dari Rad9 [42]. Fosforilasi DCD1 melibatkan protein
kelompok Mec1 dan Rad24 tetapi tidak Rad9 [41]. Rupanya, peraturan rumit ini ditujukan untuk
penguatan sinyal yang menghalangi osilator sel hanya dalam kondisi tertentu. Protein kinase Dun1
juga ditugaskan untuk memberi sinyal protein pemancar. Selain itu, protein ini terlibat dalam
induksi transkripsi gen perbaikan [43]. Dengan demikian, aktivasi pos pemeriksaan tidak hanya
didasarkan pada interaksi protein-protein tertentu, tetapi juga mencakup aktivitas gen diferensial.

Jalur Kontrol Peralatan Mitotik

Kelangsungan hidup sel tidak hanya membutuhkan replikasi dan integritas kromatin yang
tepat (diperiksa di pos pemeriksaan G1-S dan G2- M) tetapi juga memperbaiki segregasi
kromosom. Yang terakhir dipastikan oleh pos pemeriksaan M – A, yang mengontrol perakitan
spindel yang benar dan perlekatan kromosom ke spindel. Pada semua eukariota, segregasi
kromosom ditangkap oleh agen yang mengganggu pembentukan gelendong (misalnya colchicine).
Studi kontrol genetik dari proses ini dimulai dengan mengisolasi mutasi bersyarat Mad, Bub, dan
Mps1 dalam ragi S. cerevisiae. Mutasi Gila (defisiensi henti mitosis) diekspresikan pada
pengobatan dengan benomil; mutasi Bub (tunas tanpa dihambat oleh benzimadazole) dan Mps1
membatalkan penangkapan sel mitosis yang biasanya disebabkan oleh zat yang mengganggu
polimerisasi mikrotubulus [44]. Protein kinase Mps1 dianggap sebagai faktor pertama dari
transmisi sinyal untuk menghambat transisi metafase-anafase. Selain itu, protein ini terlibat dalam
duplikasi badan tiang gelendong (analog centrosom dari eukariota yang lebih tinggi). Berdasarkan
studi fenotipik mutan ganda, Feaquet et al. [47] mengidentifikasi forking dari rantai sinyal dari
Mps1 ke cabang Mad2 (Bub1, Bub3, Mad1, Mad2, Mad3) [45, 46] dan cabang Bub2 (diwakili
oleh satu gen) [47]. Pemeriksaan perilaku minichromosome di S. cerevisiae menunjukkan bahwa
keberadaan minichromosom yang mengandung kasus kinetokor salinan penangkapan sementara
anafase. Penangkapan semacam itu tidak terjadi pada mutan untuk gen dari kelompok gila. Ini
membuktikan fakta bahwa sel “memeriksa” jumlah dan (atau) keadaan kinetokor sebelum
memasukkan anafase [1]. Menurut fungsi molekulernya, Bub1 dirujuk ke kelas protein kinase.
Fungsi Bub2 tidak diketahui dan sejauh ini tidak ada homologi yang ditemukan. Fungsi Bub3 juga
tidak diketahui, tetapi dalam kasus ini
Homologi ditemukan dengan protein murine transmembran A72.5 yang kaya akan
pengulangan WD40 (fungsi pengulangan WD melibatkan protein ubiquitinization). Produk gen
Mad1 homolog dengan δ myosin (rantai berat) tikus yang tidak berotot. Mad3 homolog dengan
protein kinine. Mad2 adalah isopreniltransferase yang mengendalikan pengikatan protein ke
membran dan perlekatan kinetokor pada mikrotubulus spindel [48]. Interaksi protein-protein di
pos pemeriksaan metafase-anafase juga lebih dari sekadar rantai transmisi sinyal. Misalnya, Mad1
dan Mad2 membentuk kompleks, dan Mad1 difosforilasi oleh protein Mps1 dengan efisiensi yang
lebih tinggi tepat ketika protein sebelumnya berada di kompleks. Dalam S. cerevisiae, anafase
yang mempromosikan APC kompleks (lebih khusus lagi, komponen Cdc20) bertindak sebagai
target pengikatan Mad2. Ikatan ini menghambat aktivitas APC [49]. Eksperimen produksi berlebih
Cdc20 menunjukkan bahwa Cdc20 ditargetkan pada separin Pds1 daripada pada cyclins mitosis
[50]. Sel-sel yang mengandung substitusi protein di wilayah kotak destruksi Pds1 tidak dapat
memasuki anafase [51] karena aktivitas MPF yang tinggi. Oleh karena itu, tidak adanya degradasi
Pds1 menghambat pemisahan kromatid dan aktivasi MPF. Dengan demikian, jalur Mad2
menghadirkan perpanjangan spindel dan hilangnya kohesi kromatid saudara perempuan, yaitu,
memediasi penangkapan masuk ke mitosis, sedangkan jalur Bub2 menghambat proteolisis siklik
mitosis dan mencegah keluar dari mitosis. Dua jenis efektor transisi metafase-anafase diketahui:
protein Pds1 (separin) yang mengendalikan pasangan kromatid (transisi metafase-anafase
memerlukan inaktivasi) dan faktor MPF yang dipertimbangkan di atas (anafase, telofase, dan
sitokinesis memerlukan penghancurannya). Pds1 diinaktivasi oleh fosforilasi oleh protein Chk1,
yang, pada gilirannya, berfungsi sebagai substrat untuk fosforilasi Mec1 [40]. Cyclin proteolysis
oleh APC adalah peristiwa yang diperlukan untuk penyelesaian mitosis normal. Aktivasi pos
pemeriksaan metafase menghambat aktivitas APC berkenaan dengan cyclin dengan mengubah
aktivitas komponen kompleks Hct1 dan Chd1 [52]. Efektor di atas digunakan oleh pos
pemeriksaan G2-M pada kerusakan DNA. Ini melibatkan rantai reaksi berurutan dari fosforilasi
Mec1, Chk1, dan Pds1. Efektor ini juga berfungsi sebagai bagian dari sistem kontrol penghentian
replikasi DNA. Dalam sistem ini, Pol2 (DNA polimerase), Rfc5 (Faktor replikasi), dan protein
Dpb11, Drc1 bertindak sebagai sensor [53, 54]. Sensor mengenali cacat replikasi DNA, yang
menghasilkan fosforilasi pemancar sinyal Mec1. Peristiwa lebih lanjut analog dengan yang
dijelaskan dalam paragraf sebelumnya. Lokalisasi protein intraseluler yang terlibat dalam fungsi
pos pemeriksaan metafase terutama terkait dengan kinetokor. Pada vertebrata, protein Mad2 secara
selektif berikatan dengan kinetokor yang tidak melekat pada spindel dan menghilang dari
kinetokor setelah perlekatan spindel mereka [48]. Selain itu, Mad2 terletak pada centrosom,
sepanjang mikrotubulus spindel dan dalam sitoplasma [48]. Homolog Mad1 dikaitkan dengan
kinetokor dalam interfase dan dengan centrosom dalam mitosis [55]; homolog murine Bub1
dikaitkan dengan kinetokor dalam mitosis [56].

Adaptasi Pos Pemeriksaan Aktivasi pos pemeriksaan menghasilkan penangkapan siklus

sementara (sampai kesalahan diperbaiki) atau ke situasi yang tidak dapat diubah lagi, yaitu,
kematian sel (apoptosis) yang dimediasi oleh caspases [57]. Dalam beberapa kasus, penangkapan
siklus dapat diatasi tanpa perbaikan kerusakan lengkap. Fenomena ini disebut adaptasi pos
pemeriksaan. Karena mutasi yang mempengaruhi adaptasi telah diidentifikasi [58], adaptasi
dianggap dikendalikan secara genetik. IAP penghambat apoptosis (sinonim: survivin) diketahui;
pertama kali ditemukan pada virus yang mampu menghambat apoptosis sel inang. IAP
diekspresikan dalam G2 dan M sel manusia dan biasanya dikaitkan dengan gelendong. Jika
gelendong terganggu oleh sitostatika, protein ini mengubah lokalisasi dan kaitannya dengan
kromosom. Titik pemeriksaan spesifik untuk tahap dan, mungkin, spesifik untuk jaringan.
Eksperimen pada ekstrak telur katak telah menunjukkan bahwa pada pengembangan telur awal
(pada konsentrasi nuklir sekitar 100 inti per telur), penghambat replikasi DNA, aphidicolin, tidak
menghentikan pembelahan nuklir. Namun, pada konsentrasi sekitar 500 inti per telur, divisi nuklir
ditangkap oleh agen ini [59]. Hasil serupa dilaporkan untuk Drosophila [60].

7. REGULATOR UTAMA DARI SIKLUS SEL

Bekerja pada ragi, kultur sel, dan oosit, yang dibahas di atas, pada waktu tertentu
memainkan peran utama dalam mempelajari siklus sel eukariotik. Berbeda dengan organisme
uniseluler, yang multiseluler memiliki sinyal perkembangan yang menentukan kinetika siklus yang
berbeda dan mengarah pada pembentukan berbagai jaringan. Pada eukariota yang lebih tinggi,
skema utama pengaturan siklus adalah sedikit perubahan tetapi rangkaian gen dan produknya yang
mengatur perubahan fase siklus jauh lebih luas daripada organisme uniseluler. Kelas modulator
aktivitas kinase dependen-siklin telah dipelajari secara paling rinci; ini adalah kinase pengaktif
siklin, inhibitor kinase, pengaktif dan penghambat fosfatase, dan faktor-faktor yang memediasi
proteolisis spesifik protein siklus sel. Fungsi regulator G1 dan G1-S yang sangat dikonservasi
seperti CycD, CycE, Rb, dan E2F / DP, yang kekurangan ortolog dalam ragi, ditentukan [61].
Skema yang menggambarkan aktivitas diferensial kompleks cyclin / cyclin-dependent kinase
(cyclin / cdk) disajikan pada Gambar. 1. Di bawah ini, kami mempertimbangkan struktur dan
terutama fungsi protein regulator siklus sel utama pada eukariota yang lebih tinggi. Cyclin-
dependent kinases (CDKs) diisolasi dari banyak organisme eukariotik. Tingkat homologi mereka
bervariasi dari 58 hingga 97% [27]. Mereka memfosforilasi protein yang berpartisipasi dalam
peristiwa siklus sel dasar. Menentukan spesifisitas substrat setiap CDK bermasalah karena banyak
kinase (MAPs, Cyc / CDKs) memfosforilasi protein oleh konsensus homolog [27]. Protein
sitoskeleton (lamins, vimentin, caldesmon, MAP-p220), protein kinase (p60src, p85gag-mos),
protein pengikat DNA (histone H1, HMG I, Y, P1, nukleolin), dan protein lainnya (APP, Rab1, 4,
cyclin B, Cdc25B, Cdc25C, Far1, Cdc20, FZR) mungkin merupakan substrat potensial dari Cdk1
pada mitosis [62]. Dalam fase G1-S, kinase dependen-siklin memfosforilasi apa yang disebut
protein saku (pRb, p107, p103), faktor transkripsi (E2Fs, Sp), subunit kompleks degradasi protein
dan sejumlah protein lain (reseptor estrogen α, ID1, ID2, B-Myb) [63]. Pembentukan kompleks
kinase membutuhkan protein Suc1 (Sks1) yang merupakan kelas pertama sebagai penghambat
kinase yang bergantung pada siklin. Cyclins dan Suc1 juga memainkan peran penting dalam
pengenalan substrat [64]. Cyclin dapat dibagi secara sewenang-wenang menjadi dua subfamili
menurut struktur dan fase aktivitasnya: cyclins G1 (grup C, D, E, J) dan cyclins mitotic G2– M
(Grup B, A). Semua cyclins memiliki wilayah homolog yang sama, cyclin box, yang bertanggung
jawab untuk pengikatan kinase. G1 cyclins adalah protein berumur pendek, mereka terdegradasi
dengan cepat dan levelnya sangat ditentukan oleh laju transkripsi mRNA [65]. Dibandingkan
dengan sikotik mitosis, siklon G1 memiliki urutan terminal-C yang lebih panjang ke kotak cyclin.
Wilayah ini termasuk urutan PEST, yang kehadirannya berkorelasi dengan masa hidup pendek
protein. Protein mitosis CycA dan CycB stabil dalam fase interfase dan cepat terdegradasi dalam
mitosis melalui proteolisis yang dimediasi ubiquitin [30]. A family cyclins bersama dengan Cdk2
mengatur perkembangan sel melalui tahap G1-S dan diperlukan untuk replikasi DNA, sedangkan
G2-M dikendalikan oleh kompleks CycA / Cdk1 [65]. Level dan aktivitas cyclin dalam sel
ditentukan oleh transkripsi, proteolisis, dan aksi inhibitor spesifiknya [66]. Semua cyclins mitosis
Drosophila diperkirakan mengalami degradasi sesuai dengan skenario yang sama yang ditentukan
oleh adanya kotak penghancur, tetapi pada kenyataannya degradasi CycA sangat tergantung juga
pada wilayah terminal-N yang panjang [67]. Fenomena penargetan berbagai cyclin dan kinase
untuk membentuk kompleks Cyc / Cdk tertentu masih belum jelas. Di satu sisi, berbagai cyclin
berikatan dengan kinase yang sama (misalnya, CycA, CycB1, CycB2, CycB4 berikatan dengan
catalytic subunit Cdk1) dan, sebaliknya, satu cyclin mengikat ke kinase yang berbeda (misalnya,
CycA mengikat Cdk1 dan Cdk2) (Gbr. 1); ayam CycB3 berikatan dengan Cdk2, yang
menunjukkan perannya dalam regulasi fase S [68]. CycB3 dari Drosophila co-mengendap hanya
dengan Cdk1 [69]. Kehadiran banyak kompleks Cyc / Cdk dapat berfungsi sebagai penanda yang
digunakan sel untuk menentukan bagiannya melalui fase siklus. Aktivasi pengaktif CDK (CAK)
diidentifikasi oleh homologi dari sekuens primer ke CDK dan kemampuan untuk mengaktifkan
kompleks Cyc / Cdk. CAK ditemukan dalam beragam organisme eukariotik termasuk manusia,
katak, Drosophila, dan ragi. CAK memfosforilasi residu spesifik yang dipertahankan, Thr161 (atau
HuThr170), yang terletak di wilayah T-loop dan dapat diakses oleh CAK setelah mengikat dengan
cyclin. Salah satu keluarga kinase CAK bernama Cdk7; komponen sikliknya adalah CycH. Subunit
ketiga kompleks CycH / Cdk7 adalah protein p34 (MAT1) milik keluarga protein RING, yang
mungkin dimediasi stabilisasi dari kumpulan kompleks ini. Fungsi lain dari CAK adalah fosforilasi
ujung karboksil (CTD) dari RNA polimerase II (RNApII). CAK terbukti berpartisipasi dalam
kompleks transkripsi TFIIH yang mengikat RNApII. Dengan demikian, CAK dapat
menghubungkan transkripsi dan kontrol siklus sel [70]. Fosfat dari tipe PP1 dan PP2A terlibat
dalam banyak aspek metabolisme sel termasuk kontrol siklus sel, meskipun peran pastinya masih
belum jelas. Fungsi spesifik protein ini dalam siklus sel mungkin disediakan oleh subunit pengatur.
Fosfatase tipe PP1 secara evolusioner dilestarikan; Enzim yang sesuai dari ragi dan mamalia adalah
70 hingga 80% homolog [13]. Mutasi di Sch. gen pombe dis2 yang mengkode fosfatase tipe-PP1
menghasilkan kromosom nondisjungsi. Subunit pengatur Sds22 dari Sch. pombe berinteraksi
dengan dua fosfatase tipe PP1 (Dis2 dan Sds21) mengubah spesifisitas substrat mereka [71]. PP2A
adalah regulator negatif untuk masuk ke dalam mitosis yang menghambat aktivitas Cdc25. Urutan
protein PP1 dan PP2A di Sch. pombe adalah 80% identik [13]. Subunit fosfatase katalitik pada
Drosophila dan manusia adalah 95% homolog, dan subunit pengatur, 70-79% homolog [72]. PP2A
Drosophila terdiri dari satu subunit pengatur (65 kDa) katalitik (65 kDa). Analisis mutasi pada gen
untuk subunit 55-kDa menunjukkan bahwa enzim yang mengandung protein ini memainkan peran
penting dalam penentuan nasib sel [13] dan regulasi siklus sel [73]. Subunit pengatur PR55
memberikan kekhususan substrat fosfatase yang dalam banyak kasus bertentangan dengan Cyc /
Cdks dalam efeknya. Fosfatase penginduksi mitosis adalah homolog dari enzim ragi Cdc25 yang
mampu mengaktifkan kinase yang bergantung-siklinden melalui defosforilasi mereka. Fosfatase
ini bertindak sebagai penggagas utama mitosis eukariotik dan antagonis dari kinase Wee1. Dua
homolog (String dan Twine) dikenal dalam Drosophila dan tiga (Cdc25A, Cdc25B, dan Cdc25C),
pada manusia [74, 75]. Semua fosfatase Cdc25 membawa domain katalitik di bagian terminal-C
dari molekul dan domain regulatori di bagian terminal-N. Aktivitas enzim dikendalikan oleh
perubahan pada bagian pengatur, motif untuk fosforilasi Cdks dan CaMPII [74]. Yeast phosphatase
Cdc25 secara positif mengontrol level sel CAMP pada titik MULAI G1, memicu pembelahan sel,
dan mengaktifkan transisi G2-M. Human Cdc25A bertindak sebagai fosfatase nuklir utama dalam
interfase menetralkan aktivitas menghambat kinase Wee1 terhadap CycA / Cdk2, CycE / Cdk2,
CycD / Cdk4 dan, mungkin, fraksi CycB / Cdk2 nuklir [75]. Inisiasi mitosis pada vertebrata
dikendalikan oleh gen Cdc25B dan Cdc25C. Gen string dalam Drosophila ditranskripsi dalam G1,
dan produk-produknya berfungsi selama transisi G2-M [76]. Siklon pengaktif Drosophila
phosphatase dari kelompok G1 tidak diketahui. Inaktivasi Cdc25 dapat dikontrol melalui
proteolisis ubiquitinmediated langsung [77]. Cyclin kinase inhibitor (CDIs) pertama kali diisolasi
pada tahun 1993 berdasarkan kemampuan mereka untuk menghambat aktivitas CDK dan secara
langsung berinteraksi dengan kompleks-kompleks ini dan (atau) komponen-komponennya [65].
CDI adalah protein kecil (20-27 kDa). Dengan homologi struktur dan fungsinya, mereka secara
sewenang-wenang dibagi menjadi kelas-kelas p21 (CIP / KIP) dan p15 (INK). Fungsi CDI terdiri
dalam mengoordinasikan penentuan nasib sel dan fase siklus sel. CDI menangkap sel dalam G1,
G2 atau fase S awal, dan dalam fase M oleh penghambatan terarah kompleks Cyc / Cdk tertentu
dan regulasi lokalisasi intraseluler. Protein p21 berikatan dengan Cdk2 kompleks CycA, CycD1,
CycE, dan, kurang kuat, ke Cdk1 dan Cdk3 [78]. Promotor gen p21 memiliki situs pengikatan
untuk protein p53 dan dapat menghambat siklus sel dalam menanggapi kerusakan DNA sesuai
dengan skema berikut: Kerusakan DNA induksi p53 produksi protein p21 penghambatan cyclins.
Penutupan protein struktur p27KIP1 menunjukkan afinitas tertinggi terhadap Cdk4 [65]. Dua
protein kecil p16INK4 dan p15INK4B secara spesifik menghambat Cdk4 dan Cdk6; kedua protein
memiliki empat ankyrin domain[79]. p161NK4 berikatan dengan Cdk4 dan menggantikan CycD1
dalam kompleks in vitro, yang dapat menjelaskan tidak adanya CycD1, p21, dan PCNA dalam
kompleks dengan Cdk4 dalam sel yang diubah. Protein p21 dan p16 tidak berinteraksi dengan
cyclin-activating kinases (CAK) tetapi keduanya menghambat interaksi CAK dengan kompleks
Cyc / Cdks dengan mengubah pengaturan spasial dari asam amino signifikan secara fungsional
[70]. CDI terlibat dalam regulasi diferensiasi: mutasi pada gen murine p21 dan p27kip1
mengakibatkan hilangnya kemampuan membedakan dalam banyak sel dalam embriogenesis [80].
Inhibitor Kinase termasuk gen D. melanogaster yang berkembang pesat, Rux [81], yang sebagian
menentukan aktivitas CycA / Cdk2 pada tahap G1 dan S dan mempengaruhi aktivitas CycA / Cdk1,

CycB / Cdk1 selama mitosis [82]. Rux mirip dengan keluarga penghambat Cip / Kip dalam sejumlah sifat fungsional [81].
Perhatikan bahwa ini adalah satu-satunya penghambat mitosis cyclin kinase yang dikenal sejauh
ini.

Gbr3. Loop feedback positif dari CLN1 dan

CLN 2 aktivasi transkripsi mengatur
transisi GI-S pada sel S. cerevisiae

8. PENGENDALIAN FASE S MASUK DI MASA KUNCI

Gen cdc2 di Sch. pompe memainkan peran penting dalam mengendalikan transisi G2-M dan G1-
S (Tabel 2, 3). Alel cdc2 mutan mempengaruhi koordinasi pertumbuhan dan pembelahan sel.
Mutasi pada gen CDC28 homolog pada sel penangkapan S. cerevisiae pada titik G1-S bertindak
mirip dengan mengawinkan feromon [16, 83]. Selain itu, sel yang diobati dengan feromon terbukti
ditangkap dalam keadaan dengan aktivitas Cdc28 kinase yang rendah [84]. Fitur biologi reproduksi
ragi memainkan peran penting dalam analisis genetik dari kontrol inisiasi fase S. Konjugasi sel
haploid yang sukses dari jenis seksual yang berbeda (a dan α) memerlukan sinkronisasi sel-sel ini
pada tahap siklus sel tertentu. Dalam S. cerevisiae, ini diimplementasikan sebagai berikut: sel tipe-
α berhenti pada titik G1-S dan melepaskan dalam faktor seksual sedang α; sel tipe-a menerima
sinyal ini dan juga berhenti pada titik yang sama, setelah sel diploid terbentuk. Sintesis kimiawi
dari faktor α membuka kemungkinan untuk memilih mutasi yang tahan terhadap faktor ini, yaitu,
untuk mengisolasi strain semacam itu yang sel tipe-a tidak ditangkap oleh faktor seksual pada titik
G1-S. Mutasi CLN3 yang dominan dari S. cerevisiae diisolasi dengan cara itu. Mempelajari urutan
produk gen ini menunjukkan keberadaan kotak cyclin di dekat ujung-N polipeptida [85]. Dalam
karya lain [86], dua gen lain ditranskripsi secara berkala selama siklus sel (CLN1 dan CLN2) [87]
diidentifikasi. Keduanya terbukti memiliki konsensus di wilayah regulasi; binding transcription
factor Swi4 ke konsensus ini bertanggung jawab untuk ekspresi dalam G1 [88]. Ekspresi CLN1
dan CLN2 dan fosforilasi faktor Swi4 oleh Cdc28 / CLN membentuk loop umpan balik positif
yang aktivasi menyebabkan masuknya sel ke dalam fase S [89, 90]. Lingkaran ini secara skematis
diperlihatkan dalam Gambar. 3. Ekspresi CLN1 dan CLN2 meningkat dengan selfcatalysis karena
produk-produk dari gen-gen ini yang mengikat protein kinase Cdc28 memfosforilasi kompleks
transkripsi Swi4 / Swi6 yang, pada gilirannya, sekali lagi meningkatkan aktivitas cyclins. . Berbeda
dengan loop umpan balik yang mengatur entri ke mitosis, loop ini memberikan pengaturan siklus
pada tingkat transkripsi.

9. TRANSISI G1 – S DALAM EUKARYOT YANG

LEBIH TINGGI

Tergantung pada sinyal eksternal, sel memilih jalur perkembangan yang berbeda:
proliferasi, apoptosis, atau diferensiasi. Diferensiasi terminal sel-sel metazoan biasanya terjadi
pada G1 dan menandakan keluar ke G0 (Gbr. 4). Dalam ragi, pos pemeriksaan G1, di mana kondisi
lingkungan (nutrisi, radiasi, dll) secara kolektif menentukan apakah sel dapat menyelesaikan G1
dan mempersiapkan fase S, disebut posisi START [64, 91]. Dalam sel mamalia, titik START
didahului oleh titik restriksi R [92], di mana sel-sel peka terhadap faktor pertumbuhan dan
hormon.
Reseptor permukaan yang diaktifkan memicu kaskade kinase atau rantai reaksi fosforilasi
/ defosforilasi berturut-turut: faktor pertumbuhan berikatan dengan reseptor dan mengaktifkan
reseptor tirosin kinase (MEM / MKK), yang mengaktifkan MARKK. Enzim yang terakhir, pada
gilirannya, mengaktifkan MARK dan memicu transkripsi awal segera.

Kompleks CycD / Cdk4 pada mamalia dicirikan sebagai regulator siklus sel yang
bertanggung jawab untuk stimulasi divisi yang disebabkan oleh faktor pertumbuhan (Gbr. 4).
Dalam sel mamalia, sintesis cyclin tipe D diatur oleh sinyal ekstraseluler. Mitogen menginduksi
akumulasi mRNA yang cepat dan sintesis protein dari siklon D, yang dengan cepat terdegradasi
[65, 93]. Cdk4 kinase adalah mitra katalitik utama dari cyclins D, meskipun Cdk2, Cdk5, dan Cdk6
juga dapat memasuki kompleks CycD. Perubahan jumlah CycD sesuai dengan perubahan pada
level mRNA Cdk4 meskipun jumlah Cdk4 konstan sepanjang siklus sel [65].

Tahap G1 (tahap pertumbuhan sel) mengendalikan dua proses yang sulit dibedakan:
pertumbuhan sel dan persiapan untuk replikasi DNA. Studi fungsi Drosophila CycD tunggal,
DmCycD, menunjukkan bahwa kompleks Dm CycD / Cdk4 memastikan pertumbuhan sel dan
akumulasi massa daripada langsung mengatur G1-S. Respons terhadap induksi pertumbuhan yang
dimediasi Dm CycD / Cdk adalah spesifik sel; aktivitas Dm CycD / Cdk4 diperlukan untuk
diferensiasi normal dan pertumbuhan sel dan organisme [94].

Peran kunci dalam kontrol G1 dan transisi G1-S dimainkan oleh protein retinoblastoma
penekan tumor (pRb), yang berfungsi sebagai target bagi banyak sinyal pengontrol pertumbuhan
(Gbr. 4). Dalam keadaan hipofosforilasi, pRb dan protein terkait p107 dan p130 mengikat faktor
transkripsi keluarga E2F (Gbr. 4). Kompleks CycD / Cdk4 dan CycE / Cdk2 aktif memfosforilasi
protein keluarga Rb termasuk p107 dan p130, yang menghasilkan pembebasan dan aktivasi faktor
transkripsi, termasuk E2Fs / DP [94, 95]. Siklus grup D adalah yang pertama kali memfosforilasi
pRb di dekat pos pemeriksaan R. Protein E2F berfungsi secara kompleks dengan protein DP;
Heterodimer E2F / DP mengatur transkripsi banyak gen siklus sel pada G1-S pada mamalia dan
Drosophila [96]. Lima gen E2F dan dua gen DP pada mamalia memiliki fungsi yang tumpang
tindih. Dalam Drosophila, hanya satu gen dE2F dan satu dDP yang diketahui fungsinya sangat
penting untuk regulasi transisi G1-S. Protein E2F-1, E2F-2, dan E2F-3 berinteraksi dengan pRb,
dan E2F-4 berikatan dengan p107, p130 [97]. Bentuk pRb hyperphosphorylated terjadi pada
transisi G1-S sementara E2F / p107 memiliki pola penampilan lain dalam siklus sel. Kompleks
terkait DNA E2F / p107 / CycE / Cdk2 berfungsi pada akhir G1, sedangkan kompleks transkripsi
E2F-4 / CycA / p107 / Cdk2 beroperasi pada fase S [97]. Efek CycA dan CycE pada E2F yang
terkait dengannya tidak jelas. Sekarang, diketahui bahwa E2F paling aktif dalam keadaan bebas
tetapi kompleks Cyc / Cdk dapat memodulasi daripada sepenuhnya menghambat aktivitas ini.
Asosiasi ini juga dapat dijelaskan oleh fakta bahwa kompleks Cyc / Cdk terkait dengan DNA
melalui E2F dan dapat memfosforilasi protein yang terikat DNA tetangga [65]. Misalnya,
fosforilasi faktor transkripsi manusia Sp1 oleh CycA / CDK meningkatkan aktivitasnya sebanyak
3 hingga 4 kali lipat [63]. Sebaliknya, hubungan Cyc / Cdk dengan faktor E2F dapat mengatur
lokalisasi intraseluler faktor transkripsi dari keluarga E2F [32]. Saat ini, peran utama kompleks
CycE / Cdk2 dalam siklus sel organisme multisel dianggap terdiri dalam mengatur transisi G1-S
dan inisiasi transkripsi sedangkan kompleks CycA / Cdk2 diperlukan untuk melanjutkan
transkripsi dan melewati fase S. Namun, fosforilasi Rb tergantung pada CycD, CycE, dan CycA,
yang menyiratkan bahwa CycA memiliki fungsi independen dalam regulasi transisi G1-S [63].
Berbeda dengan fungsi ganda dari cyclins grup A dan D, peran CycE adalah unik. Substrat Cycs /
Cdk dalam fase S masih belum diketahui; protein RF-A dan Cdc6 diperlukan untuk replikasi DNA
[32, 98] dan faktor transkripsi adalah kandidat yang diduga. Hu-Cdc25A phosphatase, homolog
dari regulator mitosis esensial Hu-Cdc25B , DmCdc25string, penting untuk inisiasi fase S pada
mamalia [61, 99]. Mempelajari secara ekstensif tahap siklus sel G1-S menghasilkan identifikasi
banyak gen dan fungsi produk mereka. Namun demikian, pertanyaan penting tentang mekanisme
umpan balik positif dan negatif belum dijawab. Misalnya, kinase dan fosfatase yang secara
langsung mengatur aktivitas CycE / Cdk2, CycA / Cdk2 masih belum diketahui. Umpan balik
positif dan negatif pada tahap G1-S mungkin sebagian dilaksanakan melalui CycE (lihat Bagian 6
"Pos Pemeriksaan Siklus Sel") meskipun umpan balik positif melalui E2Fs tidak diamati dalam
semua kasus [100]. Hubungan negatif melalui fosforilasi dan degradasi diri CycE oleh kompleks
SCF telah ditemukan relatif baru-baru ini [101]. Waktu yang tepat dan kisaran ekspresi cyclins di
G1 penting untuk perkembangan siklus sel normal. Transformasi meningkatkan jumlah cyclins
G1. Hal ini dapat dicapai dengan berbagai cara, misalnya dengan mengganggu fungsi pRb, CDI,
Cdc25, meningkatkan ekspresi gen, meningkatkan degradasi inhibitor atau stabilitas cyclin.

Gambar 4. Pengaturan siklus sel pada eukariota

yang lebih tinggi. Poin tindakan regulator siklus sel

utama ditampilkan

10. PENGENDALIAN REPLIKASI

DNA

Sampai saat ini, proses biokimia dari replikasi DNA telah dipelajari secara menyeluruh
[102]. Yang menarik adalah mekanisme penggandaan tunggal kesetiaan tinggi dari struktur makro
seperti kromosom eukariotik. Mesin yang diaktifkan dari sintesis DNA memilih tepat sebuah
nukleus yang mengandung set kromosom yang tidak direplikasi, yang harus direplikasi sebelum
pembelahan, tetapi meninggalkan nukleus dengan kromosom yang sudah direplikasi. Bahkan
DNA asing yang ditempatkan dalam ekstrak telur katak mampu membentuk struktur seperti
kromatin yang dikelilingi oleh amplop nuklir dan replikasi [102, 103]. Data menunjukkan bahwa
replikasi DNA tergantung pada struktur intraseluler pertama kali diperoleh dalam percobaan
dengan microinjections MPF ke dalam sel katak yang divisi nuklirnya ditangkap oleh inhibitor
sintesis protein [104]. Suntikan ini menginduksi masuknya nuklei ke dalam mitosis dan replikasi
DNA selanjutnya. Salah satu penjelasan dari fenomena ini melibatkan degradasi amplop nuklir
yang memungkinkan beberapa faktor pengontrol sintesis DNA untuk duduk di kromosom. Jika
inti sperma ditambahkan ke ekstrak telur katak yang diblokir di sela oleh penghambat sintesis
protein, cycloheximide, nuklei bereplikasi satu kali. Jika inti ini ditransfer ke ekstrak segar,
replikasi tambahan tidak terjadi. Namun, jika nukleus yang sama dirawat dengan deterjen yang
menghancurkan amplop nuklir, DNA bereplikasi sekali lagi [105]. Hasil ini menunjukkan adanya
faktor lisensi khusus yang mampu mereplikasi lisensi dengan mengikat kromosom (mungkin
dengan daerah asal replikasi). Efek satu kali dari faktor ini menyiratkan adanya faktor lain, SPF
(S-phase mempromosikan factor), yang aktivitas sitoplasmiknya menghasilkan sinyal yang
memulai replikasi di situs pengikatan DNA dari faktor lisensi [106, 107]. Model dua langkah ini
secara eksperimental dikonfirmasi dalam mempelajari jejak DNA asal replikasi ragi, yang bisa
dalam keadaan prereplicative dan postreplicative [107]. Aktivitas faktor lisensi dapat dihambat
oleh penghambat protein kinase, 6-dimethylaminopurine (6-DMAP). Temuan ini diizinkan untuk
menunjukkan perubahan berkala dalam aktivitas faktor dalam siklus sel [108]. Komponen faktor
perizinan diidentifikasi sebagai protein yang homolog bagi mereka yang memelihara
minichromosom dalam ragi (minichromosome maintenance protein, MCMs) [109]. Selain protein
MCM, berfungsinya faktor perizinan yang benar membutuhkan protein yang menentukan
lokalisasi kromosom MCM. Protein spesifik dari sistem ubininitisasi ditemukan di antara faktor-
faktor perizinan.

11. KESIMPULAN. CHECKPOINTS DAN PROLIFERASI TUMOR

Penampilan banyak tumor manusia diketahui berkorelasi dengan mutasi pada gen p53
[110]. Eksperimen langsung telah menunjukkan bahwa mutasi p53 menonaktifkan checkpoint
siklus sel G1-S [111]. Bukti serupa telah diperoleh untuk sindrom ataksia-telangiectasia [112].
Dalam dua kasus kanker kolorektal, sekuensing gen bub1 menunjukkan adanya mutasi pada gen
yang terlibat dalam fungsi pemeriksaan G1-S. Studi fungsional mengkonfirmasi hubungan sebab
akibat antara perkembangan beberapa tumor dan inaktivasi pos pemeriksaan [113]. Secara umum,
inaktivasi dari pos pemeriksaan G1-S lebih umum pada sel tumor daripada di pos pemeriksaan
G2-M. Sel yang membawa mutasi pada gen pos pemeriksaan (misalnya, pada gen rad9 dari S.
cerevisiae) jauh lebih tahan terhadap iradiasi daripada sel normal. Dengan demikian, mutasi yang
mempengaruhi pos pemeriksaan bertindak sebagai sensibilizers radiasi meningkatkan tingkat
kematian sel. Menggunakan radiasi dan terapi kimia pada tumor yang disebabkan oleh pos
pemeriksaan siklus sel yang
 menonaktifkan mutasi mungkin lebih efektif daripada dalam kasus jenis tumor lainnya
karena dalam kasus sebelumnya, sel tumor secara alami memiliki sensitivitas radiasi yang lebih
tinggi daripada sel tetangga normal. Namun, tidak semua kasus pembentukan tumor terkait dengan
fungsi yang buruk dari pos pemeriksaan siklus sel. Misalnya, dalam produk protein Drosophila
dari banyak gen penekan tumor terletak di wilayah kontak sel. Ini berarti bahwa dalam beberapa
kasus transformasi tumor sel terkait denganrusak
komunikasi intraseluler yang, yaitu perubahan dalam transfer sinyal tentang proliferasi sel.
Respons sel-sel ini terhadap iradiasi dan pengobatan sitostatik tidak dapat dibedakan dari sel-sel
normal. Tumor fokus diobati dengan terapi yang melibatkan iradiasi terfokus pada sel. Setelah
iradiasi lokal, beberapa sel tumor menjalani apoptosis (lihat teks di atas tentang adaptasi pos
pemeriksaan). Berbagai faktor diketahui ikut serta dalam pengaturan efisiensi apoptosis. Aktivitas
sistem kekebalan berhubungan langsung dengan kematian sel terprogram (tahap apoptosis esensial
dalam elegans Caenorhabditis adalah pengakuan sel yang mengalami apoptosis oleh sel sistem
kekebalan). Karenanya, dalam hal ini, kombinasi terapi radiasi, terapi kimia, dan imunoterapi atau
terapi radiasi, terapi kimia, dan stimulasi perlindungan antitumor alami oleh sitokin diharapkan
efektif. Kelemahan signifikan dari obat sitostatik yang saat ini digunakan untuk terapi tumor adalah
kurangnya spesifisitas jaringan. Peningkatan intensitas apoptosis dengan mengaktifkan pos
pemeriksaan dapat digunakan untuk membangun protein chimeric yang memiliki efek
mempromosikan sitostatik dan apoptosis spesifik jaringan. Agen ini harus mengandung fragmen
protein yang mampu menembus ke dalam sel (protein penetrasi telah dibangun oleh perusahaan
biomedis dan digunakan dalam penelitian meskipun efisiensi penetrasi mereka masih sangat
rendah sekitar 1%) dan domain protein mampu mengaktifkan pos pemeriksaan (lebih lanjut
khususnya, bagian dari rantai sinyal pos pemeriksaan yang meningkatkan apoptosis). Spesifisitas
jaringan peptida tersebut dapat dipastikan oleh domain yang bertanggung jawab untuk penetrasi
atau karakteristik spesifik jaringan dari rantai sinyal pos pemeriksaan di berbagai jaringan dapat
ditemukan. Aspek penting dari pendekatan ini adalah fakta bahwa peptida sitostatik harus
bertindak pada konsentrasi rendah di latar belakang produk normal. Dalam hal genetika,
pengkodean gen untuk protein chimeric juga harus mengandung mutasi dominan yang
mengaktifkan pos pemeriksaan. Ulasan kami menunjukkan bahwa kemajuan yang signifikan
dalam memahami banyak detail dari mesin pembelahan sel telah dicapai dalam beberapa tahun
terakhir. Namun, fitur spesifik jaringan dan tumor spesifik dari siklus sel memerlukan penelitian
 lebih lanjut. Akumulasi bukti dalam arah ini akan memungkinkan peningkatan metode terapi
antitumor yang ada dan dengan demikian menerapkan potensi teori siklus sel di bidang terapan.
Langkah selanjutnya dalam pengembangan pengetahuan dasar dari siklus sel adalah, dalam
pandangan kami, studi regulasi proliferasi pada tingkat yang lebih tinggi dari sel, yaitu, pada
tingkat jaringan dan organisme.

REFERENCES
Murray, A. and Hunt, T., The Cell Cycle: An Introduction,New York: Oxford: Oxford Univ. Press,
1993.
Strasburger, E., Neue Beobachtungen uber Zellbildung und Zellteilung, Bot. Ztg., 1879, vol. 37, pp.
265–288.
Flemming, W., Beitrage zur Kenntnis der Zelle und ihrer Lebenserscheinungen, Arch. Mikr. Anat.,
1879, vol. 16.
Flemming, W., Zur Kenntnis der Zelle in ihrer Teilung- Erscheinungen, Schriften Naturwiss. Vereins
Schl.-Holsk., 1878, vol. 3, no. 1, p. 26
Lees, E.M. and Harlow, E.D., Cancer and the Cell Cycle, Cell Cycle Control, Hutchison, Ch. and
Glower, D.M., Eds., Oxford: Oxford Univ. Press, 1995,
pp. 228–263.
Rao, P.N. and Johnson, R.T., Mammalian Cell Fusion: Studies on the Regulation of DNA Synthesis
and Mitosis, Nature, 1970, vol. 225, pp. 159–169.
Masui, Y. and Markert, C.L., Cytoplasmatic Control of Nuclear Behavior during Meiotic Maturation of
Frog Oocytes, J. Exp. Zool., 1971, vol. 177, pp. 129–145.
8. Gerhart, J., Wu, M., and Kirschner, M., Cell Cycle Dynamics of an M Phase-Specific Cytoplasmic
Factorin Xenopus laevis Oocytes and Eggs, J. Cell Biol., 1984, vol. 98, pp. 1247–1255.
9. Gautier, J., Norbury, C., Lohka, M., et al., Purified Maturation-Promoting Factor Contains the Product
of a Xenopus Homolog of the Fission Yeast Cell Cycle Control Gene cdc2+, Cell (Cambridge,
Mass.), 1988, vol. 54, pp. 433–439.
10. Pines, J. and Hunt, T., Molecular Cloning and Characterization of the mRNA for Cyclin from Sea
Urchin Eggs, EMBO J., 1987, vol. 6, pp. 2987–2995.
11. Minshull, J., Pines, J., Golsteyn, R., et al., The Role of Cyclin Synthesis, Modification and Destruction
in the Control of Cell Division, J. Cell Sci. Suppl., 1989, vol. 12, pp. 77–97.
12. Nurse, P., Thuriaux, P., and Nasmyth, K., Genetic Contro of the Cell Division Cycle in Fission Yeast
Schizosaccharomyces pombe, Mol. Gen. Genet., 1976, vol. 146, no. 2, pp. 167–178.
13.MacNeill, S.T. and Fantes, P.A., Controlling Entry into Mitosis in Fission Yeast, Cell Cycle Control,
Hutchison, Ch. and Glower, D.M., Eds., Oxford: Oxford Univ. Press, 1995, pp. 63–109.
14. Nurse, P. and Bisett, Y., Gene Required in G1 for Commitment to Cell Cycle and in G2 for Control of
Mitosis in Fission Yeast, Nature, 1981, vol. 292, pp. 558–560.
15. Simanis, V. and Nurse, P., The Cell Cycle Control Gene cdc2+ of Fission Yeast Encodes a Protein
Kinase Potentially Regulated by Phosphorylation, Cell (Cambridge, Mass.), 1986, vol. 45, pp.
261–268.
16. Booher, R.N., Alfa, C.E., Hyams, J.S., and Beach, D.H., The Fission Yeast Cdc2/Cdc13/Suc1 Protein
Kinase: Regulation of Catalytic Activity and Nuclear Location, Cell (Cambridge, Mass.), 1989,
vol. 58, p. 485.
17. MacNeill, S.A., Creanor, J., and Nurse, P., Isolation, Characterization and Molecular Cloning of the
Fission Yeast p34cdc2 Protein Kinase Gene: Identification of Temperature-Sensitive G2
Arresting Alleles, Mol. Gen. Genet., 1991, vol. 229, p. 109.
18. Nurse, P. and Thuriaux, P., Regulatory Genes Controlling Mitosis in the Fission Yeast
Schizosaccharomyces pombe, Genetics, 1980, vol. 96, pp. 627–635.
19. Lundgren, K., Walworth, N., Booher, R., et al., Mik1 and Wee1 Cooperate in the Inhibitory Tyrosine
Phosphorylation of Cdc2, Cell (Cambridge, Mass.), 1991, vol. 64, p. 1115.
20. Gould, K.L. and Nurse, P., Tyrosine Phosphorylation ofthe Fission Yeast cdc2+ Protein
Kinase Regulates Entry into Mitosis, Nature, 1989, vol. 342, pp. 39–45.
21. Richardson, H., Lew, D.J., Henze, M., et al., Cyclin-B Homologs in Saccharomyces
cerevisiae Function in S Phase and in G2, Genes Dev., 1992, vol. 6, no. 11, pp. 2021–2034.
22. Goebl, M.G. and Winey, M., The Yeast Cell Cycle, Curr. Opin. Cell. Biol., 1991, vol. 3, no.
2, pp. 242–246.
23. Russell, P. and Nurse, P., cdc25+ Functions as an Inducer in the Mitotic Control of Fission
Yeast, Cell (Cambridge, Mass.), 1986, vol. 45, pp. 145–150.
24. Millar, J.B., McGowan, C.H., Lenaers, G., et al., p80cdc25 Mitotic Inducer Is the Tyrosine
Phosphatase That Activates p34cdc2 Kinase in Fission Yeast, EMBO J., 1991, vol. 10, pp. 4301–
4310.
25. Russell, P. and Nurse, P., Negative Regulation of Mitosis by wee1+, a Gene Encoding a
Protein Kinase Homolog, Cell (Cambridge, Mass.), 1987, vol. 49, pp. 559–568.
26. Kumagai, A. and Dunphy, W.G., Regulation of the cdc25
Protein during the Cell Cycle in Xenopus Extracts, Cell
(Cambridge, Mass.), 1992, vol. 70, pp. 139–146.
27. Basi, G. and Draetta, G., The cdc2 Kinase: Structure,
Activation and Its Role at Mitosis in Vertebrate, Cell
Cycle Control, Hutchison, C. and Glover, D., Eds., New
York: Oxford Univ. Press, 1995, pp. 106–143.
28. Hoffmann, I., Clarke, P.R., Marcote, M.J., et al., Phosphorylation
and Activation of Human cdc25C by cdc2–
CyclinB and Its Involvement in the Self-Amplification
of MPF at Mitosis, EMBO J., 1993, vol. 12, pp. 53–58.
29. Wasserman, W.J. and Masui, Y., Effects of Cyclohexamide
on a Cytoplasmic Factor Initiating Meiotic Maturation
in Xenopus Oocytes, Exp. Cell. Res., 1975, vol. 91,
pp. 381–390.
30. Glotzler, M., Murray, A.W., and Kirschner, M.W.,
Cyclin Is Degraded by the Ubiquitin Pathway, Nature,
1991, vol. 349, pp. 132–138.
31. Hershko, A., Ganoth, D., and Sudakin, V., Components
of a System That Ligates Cyclin to Ubiquitin and Their
Regulation by the Protein Kinase cdc2, J. Biol. Chem.,
1994, vol. 269, pp. 4940–4946.
32. Pines, J., Four-Dimensional Control of the Cell Cycle,
Nat. Cell Biol., 1999, vol. 1, pp. 73–79.
33. Planas-Silva, M.D. and Weinberg, R.A., The Restriction
Point and Control of Cell Proliferation, Curr. Opin. Cell
Biol., 1997, vol. 9, pp. 768–772.