MEDIOS DE CULTIVO

N. Arias1, S. Falla2
1,2
Estudiante Ingeniería Agroindustrial, Universidad Surcolombiana, Facultad de Ingeniería

RESUMEN

Un medio de cultivo es una solución de nutrientes que permite el desarrollo de

microorganismos. Cada medio está diseñado para el crecimiento de ciertos microorganismos,
en esta práctica se usa el medio EMB Agar este es usado para el aislamiento selectivo de
bacilos Gram negativos y Lysine Agar usado en el aislamiento y enumeración de levadura
silvestre en la industria cervecera. Se prepara el medio de cultivo haciendo la mezcla de
cantidad de gramos del medio con la cantidad de agua destilada, esta mezcla se lleva a su
punto de ebullición, se esteriliza en el autoclave y finalmente se sirve en cajas de Petri, se
ponen en una incubadora artificial con condiciones de microaerófilia al mezclar bicarbonato
con alcohol. Pasados 7 días se procede a realizar la tinción de Gram donde se usan (Cristal
Violeta, Lugol, Alcohol-Acetona y Safranina) para identificar los principales tipos de
bacterias, se encontraron bacilos gram positivos y se usa la técnica de aplicación de Lugol
para observar hongos, en donde se observaron bacterias posiblemente cocos.

Palabras claves: Medio de cultivo, tinción de Gram, autoclave, microorganismos,

microaerófilia.

ABSTRACT

A culture medium is a nutrient solution that allows the development of microorganisms. Each
medium is designed for the growth of certain microorganisms, in this practice the medium
EMB Agar is used for the selective isolation of Gram-negative bacilli and Lysine agar used
in the isolation and enumeration of yeast Wild in the brewing industry. The culture medium
is prepared by mixing the quantity of grams of the medium with the quantity of distilled
water, this mixture is brought to its boiling point, sterilized in the autoclave and finally it is
served in Petri dishes, they are put in an artificial incubator with Traditions of Microaerófilia
when mixing bicarbonate with alcohol. After 7 days We proceed to make the gram stain
where they are used (crystal violet, Lugol, Alcohol-Acetone and Safranin) to identify the
main types of bacteria, were found Gram positive bacilli and use the technique of application
of Lugol for To observe fungi, where bacteria possibly coconuts were observed.

Key words: Culture Medium, Gram stain, autoclave, microorganisms, microaerófilia.

MARCO TEORICO:
Lysine agar fue incluido por Morris y
Eddy en 1957 para aislar y enumerar
levaduras silvestres en cervecería. Walters
y Thiselton examinaron 180 especies de
levaduras en un medio liquido sintético
este tenía lisina como única fuente de
nitrógeno, Encontraron que ninguna cepa
normal de cerevisiae o carlsbergensis
usaba lisina, mientras que muchas otras
levaduras, incluidas las silvestres, sí
(Thermo SCIENTIFIC, s.f.).
Es un medio sólido y diferencial para el
cultivo de aislamiento y enumeración de
levadura silvestre en la industria
cervecera. Para su preparación se suspende
66 gramos de polvo en 1 litro de agua
destilada que contiene 10 ml de una
solución de lactato de potasio al 50%.
Llevar a ebullición, revolviendo
constantemente y enfriando a 50 °C.
Añadir 1 ml de ácido láctico para ajustar el
pH y verter en cajas de Petri.
El agar EMB se desarrolló por primera
vez en 1916 por Holt-Harris y Teague. El
agar se usó para la diferenciación entre
colonias de fermentación de lactosa y
microbios no fermentadores. Se usó el
mismo medio para diferenciar los
coliformes que pueden fermentar la
sacarosa de los coliformes que no pueden
fermentar la sacarosa. Se prefiere el agar
EMB porque es más estable y sensible en
comparación con otros tipos de agares
(LaboratoryInfo, 2019).
Un agar EMB significa agar azul
de eosina; que es a la vez un medio
de cultivo diferencial y selectivo.
Es un medio selectivo porque
permite el crecimiento de algunos
tipos de microorganismos y
restringe el crecimiento de otros.
Es diferencial por sus
componentes; azúcar lactosa,
sacarosa y colorantes Eosina y azul
de metileno. Si hay un buen
crecimiento, entonces indica que
las bacterias son gram negativas. Si
no hay crecimiento o al menos un
crecimiento pobre, es un indicador
de que los microorganismos son
gram positivos.
(LaboratoryInfo,2019)
Usado para el aislamiento selectivo de
bacilos Gram negativos y permite el
desarrollo de todas las especies de la
familia Enterobacteriaceae. Para su
preparación se suspende 36 gramos de
polvo en 1 litro de agua destilada, calentar
agitando frecuentemente y llevar a
ebullición hasta que este totalmente
disuelta. Esterilizar en el autoclave durante
15 minutos a 121°C, verter en cajas de
Petri previamente esterilizadas (Britania).
MATERIALES:
Medio de cultivo:
 EMB agar.
 Lysine agar.
 Cajas de Petri.
 Balanza.
 Erlenmeyer.
 Autoclave.
 Placa calefactora.
Tinción de Gram
 Cristal Violeta.
 Lugol.
 Alcohol-Acetona.
 Safranina.
 Asa bacteriológica.
 Encendedor.
  Portaobjetos.
 Microscopio.
Condiciones de microaerófilia.
 Aguardiente.
 Alka Seltzer.
 Incubadora casera.
METODOLOGIA:
Para la preparación de los medios de
cultivos se debe calcular la cantidad de
gramos del medio dependiendo de la
cantidad de cajas de Petri requeridas. La
cantidad de gramos por litros se
encuentran en las indicaciones de cada
medio, se usó el EMB Agar para este se
debe agregar 36 gramos por litros y Lysine
Agar en este se agregan 66 gramos por
litro. Para preparar 10 cajas de Petri de
cada medio se deben hacer los cálculos
sabiendo que en cada caja de Petri se debe
verter 20 ml.
Cantidad de ml para 10 cajas de Petri:
20𝑚𝑙 ∗ 10𝑐𝑎𝑗𝑎𝑠 = 200𝑚𝑙
Cantidad de gramos de EMB Agar:
66g 1000𝑚𝑙
= 13,2 g
x 200𝑚𝑙
Cantidad de gramos de Lysine Agar:
36g 1000𝑚𝑙
= 7,2 g
x 200𝑚𝑙
Se pesó la cantidad de gramos requerida,
se depositó la cantidad en un Erlenmeyer,
con ayuda de una probeta se midieron 200
ml de agua destilada y se vertió en el
Erlenmeyer para hacer la mezcla, se selló
y se colocó en una plancha calefactora se
agitó hasta que alcanzó su punto de
ebullición, se depositó en el Autoclave y se
dejó 15 minutos para esterilizar , después
de este tiempo se sacó el Erlenmeyer se
dejó enfriar para servir el cultivo en cajas
de Petri previamente esterilizadas, se
esperó que se solidificara y se sembraron
hojas de árbol de mango, las cajas de Petri
se pusieron en una caja totalmente sellada
para incubar en una condición de
microaerófilia esta condición se obtiene
mezclando el Alka Seltzer y aguardiente,
este procedimiento se realizó para ambos
medios.
Pasados 7 días se observaron
microscópicamente los medios de
cultivos, primero con un asa bacteriológica
se tomó una muestra y se froto sobre el
portaobjetos, se fijó y se procedió a
realizar la tinción de Gram, aplicando
Cristal Violeta, Lugol, Alcohol-Acetona, y
Safranina con tiempos de 30 segundos, 30
segundos, 15 segundos y 30 segundos
respectivamente, se dejo secar y se
observó en el microscopio. Se tomo otra
muestra, esta era de hongos y para esta
solo se aplicó Lugol.
REFERENCIAS
Britania. (s.f.).
https://www.britanialab.com.
Obtenido de
https://www.britanialab.com/back/
public/upload/productos/upl_5a28
240e1c004.pdf
LaboratoryInfo. (18 de 01 de 2019).
https://laboratoryinfo.com.
Obtenido de
https://laboratoryinfo.com/emb-
agar-eosin-methylene-blue-agar/
Thermo SCIENTIFIC. (s.f.).
http://www.oxoid.com. Obtenido
de
http://www.oxoid.com/UK/blue/pr
od_detail/prod_detail.asp?pr=CM
0191&cat=&c=UK&lang=EN