Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2006

PENGEMBANGAN METODA ANALISIS RESIDU

AFLATOKSIN B1 DALAM HATI AYAM SECARA
ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA)
(Method Development of Aflatoxin B1 Residue in Liver Chicken
by Enzyme Linked Immunosorbent Assay (Elisa))
SRI RACHMAWATI

Balai Penelitian Veteriner, Jl. R.E. Martadinata 30, Bogor 16114

ABSTRACT

Aflatoxin B1 (AFB1) is a toxic compound as a secondary metabolite of Aspergillus flavus growth on the
media of corn and feed, because of bad storage and handling. Feed that contaminated by high AFB1 could
leave some residue in their animal product such as liver. The aim of experimental is to develop a method of
analysis residue AFB1 in liver by direct competitive ELISA. Result indicated that the mixer of methanol and
phosphate buffer saline (1 : 1) is a good reagent to extract AFB1 from liver samples. Limit detection of
analyses is 0.19 + 0.03 ppb, quite good precision with RSD (relative standard deviation) value of 12.3% in
repeatable testing. The antibody used gave a specific respond to AFB1. ELISA method developed was quite
accurate which the recovery results in the average of 100.8%. The method was applied for analyses the liver
samples collected from nine traditional markets and super markets around Bogor area. It was found that 11
out of 45 liver samples contain AFB1 residue in the range of 0.2 – 0.7 ppb.
Key Words: Method, Analysis, Aflatoxin, ELISA

ABSTRAK

Aflatoksin B1 (AFB1) adalah senyawa racun yang merupakan metabolit sekunder dari Aspergillus flavus
yang tumbuh pada media seperti jagung dan pakan, pada kondisi penyimpanan dan penanganan yang kurang
baik terhadap bahan-bahan tersebut. Pakan yang tercemar AFB1 cukup tinggi dapat menyebabkan
terdeteksinya residu AFB1 pada produk ternak seperti organ hati. Penelitian ini bertujuan untuk
mengembangkan metoda analisis residu AFB1 pada sampel organ hati ayam secara ELISA kompetitif
langsung. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pereaksi yang baik digunakan untuk mengekstrak sampel hati
adalah campuran methanol dan fosfat buffer salin (MeOH: PBS = 1 : 1). Hasil uji limit deteksi yang diperoleh
adalah 0,19 + 0,03 ppb dengan presisi yang cukup baik, dimana uji keterulangan memberikan nilai relatif
standar deviasi (RSD) 12,3%. Hasil uji spesifisitas menunjukkan bahwa respon antibodi spesifik terhadap
AFB1, Metoda ELISA untuk analisis residu AFB1 pada hati ayam cukup akurat dengan nilai perolehan
kembali (recovery) adalah rata-rata 100,8%. Uji ELISA yang dikembangkan diaplikasikan untuk analisis
residu AFB1 dalam hati ayam yang dikumpulkan dari 9 pasar tradisional dan swalayan didaerah Bogor.
Ternyata bahwa dari 11 dari 45 sampel hati yang dianalisis (24,4%) terdeteksi adanya residu AFB1 dengan
kadar 0,2 – 0,7 ppb.
Kata Kunci: Metoda, Analisis, Aflatoksin, ELISA

PENDAHULUAN Residu aflatoksin pada produk ternak dapat

Isu keamanan pangan semakin banyak
dibicarakan di masyarakat, dengan adanya
tuntutan jaminan keselamatan konsumen.
Pangan yang merupakan produk ternak
diantaranya hati ayam, kemungkinan dapat
mengandung residu toksin, seperti aflatoksin.
terdeteksi, karena ternaknya mengkonsumsi
pakan yang mengandung aflatoksin dengan
kadar cukup tinggi.
Aflatoksin merupakan senyawa racun yang
merupakan metabolit sekunder dari Aspergillus
flavus yang dapat tumbuh pada media seperti
jagung dan pakan, dan berkembang pada

783
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2006
kondisi penyimpanan dan penanganan yang
kurang baik. Jenis aflatoksin B1 (AFB1) yang
banyak dijumpai. Dilaporkan di Indonesia
bahwa bahan pakan jagung dan pakan jadinya
banyak terkontaminasi aflatoksin (BAHRI dan
MARYAM, 2003; RACHMAWATI, 2005).
Keberadaan residu AFB1 dan AFM1 juga
dilaporkan oleh beberapa peneliti pada produk
ternak seperti hati dan daging ayam, hati dan
daging sapi, telur ayam dan itik serta susu sapi
(MARYAM et al., 1994; MARYAM 1996;
WIDIASTUTI, 1999).
Bahaya yang ditimbulkan aflatoksin,
terutama AFB1 yang paling toksik, yaitu dapat
menyebabkan toksisitas akut, kronik,
karsinogenik, menimbulkan mutasi genetik
(mutagenik), teratogenik kecenderungan
menimbulkan penyimpangan pembentukan
fisik janin dalam uterus, kanker hati pada
manusia. Kejadian penyakit akibat aflatoksin
ini dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti
umur, jenis kelamin, status pangan dan atau
dapat terjadi bersama-sama dengan agen
penyebab lain seperti virus hepatitis atau infeksi
parasit (GROOPMAN et al., 1988).
Pentingnya suatu teknik deteksi yang tepat
dan akurat diperlukan untuk mengetahui tingkat
kontaminasi, selain itu hasil analisis yang
akurat membantu upaya pengendalian masalah
berkaitan dengan aflatoksin, mencegah
terjadinya keracunan aflatoksin, dapat pula
sebagai masukan bagi penentu kebijakan atau
penyusunan regulasi. Teknik deteksi aflatoksin
metoda standard berdasarkan Applied of
Analytical Chemistry (AOAC, 1984) adalah
menggunakan kromatografi lapis tipis (Thin
Layer Chromatography – TLC) atau
kromatografi cair kinerja tinggi (High
Performance Liquid Chromatography –
HPLC). Metode Enzyme Linked Imunnosorbent
Assay (ELISA) sudah banyak dikembangkan
dan digunakan karena dinilai cukup cepat,
sensitif dan relatif murah. Cepat karena ektraksi
sampel lebih sederhana, tidak melalui tahap
pemurnian,dan dapat setiap kali pemeriksaan
dapat menganalisa sekaligus banyak sampel.
Relatif murah, karena sedikit diperlukan jumlah
sampel dan reagent serta alat yang lebih
sederhana dan murah dibandingkan dengan
HPLC. Metode ELISA sudah diterapkan untuk
analisis AFB1 pada kacang tanah (KAWA
MURA et al., 1988), jagung dan pakan ternak
(TRUCKSESS et al., 1989) dan sampel-sampel
784
biologi seperti urine manusia dan hewan ternak
(STUBBLE et al., 1991). Limit deteksi untuk
analisis metode ELISA dapat membaca
serendah 0,1 ug/ml.
Pada makalah ini akan disajikan suatu
pengembangan metoda analisis residu AFB1
pada hati ayam secara ELISA, akan dipelajari
pengaruh matrik sampel hati, pelarut ektraksi
yang tepat, pengujian sensitifiti (limit deteksi),
repeatibitily (keterulangan), spesifisiti dan
akurasi.
MATERI DAN METODE
Pengujian pengaruh matrik sampel hati
Dilakukan dengan mempersiapkan kalibrasi
standard (0,12 – 30 ppb AFB1) dalam ekstrak
hati yang tidak mengandung AFB1 dan metanol
60%, diuji secara ELISA konpetitif langsung
dengan menggunakan pereaksi antigen dan
konjugat yang diperoleh Balitvet dari kegiatan
penelitian sebelumnya. Tahapan uji ELISA,
disajikan pada lampiran 1. Pengukuran ELISA
reader dilakukan pada panjang gelombang 450
nm. Selanjutnya kalibrasi standard yaitu plot
antara % Inhibisi versus konsentrasi AFB1
yang diperoleh, dibandingkan untuk keduanya
dan dievaluasi.
Penentuan jenis pelarut yang tepat untuk
ekstraksi sampel hati
Dibuat ekstrak hati ayam dengan
penimbangan dan penambahan pelarut yang
bervariasi seperti berikut: a) 20 gram hati ayam
ditimbang, diekstraksi dengan 80 ml campuran
metanol/PBS (Posfat Buffer Saline) = 1 : 1; b)
20 g hati ayam diekstrak dengan 20 ml metanol,
diambil 5 ml supernatan ditambah 5 ml PBS; c)
10 gram hati ayam diekstraksi 20 ml metanol,
5 ml supernatan diencerkan sampai 10 ml
dengan PBS. Selanjutnya kurva standard AFB1
(0,12 – 30 ppb) di uji dalam ekstrak yang
disiapkan diatas.
Pengujian sensitifitas (limit deteksi) dan
keterulangan (presisi)
Sensitifiti dari alat pembaca ELISA reader
ditetapkan pada nilai inhibisi 10 – 15% dari
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2006
kalibrasi standar AFB1 (0,12 – 30 ppb), yang
disiapkan dalam ekstrak hati dengan pelarut
yang diperoleh pada uji sebelumnya. Pengujian
dilakukan sebanyak 6 kali dan dilakukan pada
waktu yang berbeda untuk melihat juga
keterulangan yang dapat menunjukkan presisi.
Limit deteksi adalah rata2 konsentrasi IC 15.
Pengujian spesifikasi dan akurasi
Uji spesifikasi dilakukan dengan mengukur
respon dari jenis aflatoksin yang lain (AFB2,
AFG1 dan AFG2 ) pada uji ELISA, sedangkan
pengujian akurasi dilakukan dengan
mempersiapkan ”spike sample” yaitu sampel
hati yang ditambahkan standar AFB1
konsentrasi tertentu (10, 20 dan 40 ppb),
selanjutnya diekstrak dengan pelarut yang tepat
dan diuji secara ELISA. Dihitung AFB1 yang
diperoleh kembali dan persen perolehan
kembali (recovery) dapat diketahui.
Analisis sampel hati
Metoda uji yang dikembangkan
diaplikasikan untuk analisis sampel hati ayam
(45 sampel) yang dikumpulkan dari 9 pasar
tradisional dan swalayan didaerah Bogor.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh matrik sampel hati dan penentuan
pelarut
ELISA untuk analisis AFB1 pada pakan,
jagung dan kacang tanah sudah dikembangkan
dan diaplikasikan di lapangan (RACHMAWATI,
2005). Dengan menggunakan pereaksi
immunokimia antigen dan konjugat yang
diproduksi Balai Penelitian Veteriner tersebut
pengembangan metoda ELISA dilakukan
terhadap sampel produk ternak (hati ayam).
Jenis sampel pada pengujian atau analisis
senyawa tertentu dapat mempengaruhi hasil
yang diperoleh, disebabkan oleh adanya matrik
dalam sampel. Pereaksi yang digunakan untuk
mengekstrak AFB1 yang terkandung dalam
sampel biasanya adalah metanol, dan pada
metoda ELISA dengan antigen dan konjugat
yang dipergunakan Balitvet, pelarut
pengekstrak sampel adalah metanol 60%. Pada
Gambar 1, dapat diamati pengaruh matrik
sampel hati dibandingkan dengan standar
dalam metanol 60%. Terlihat bahwa kurva
kalibrasi standard AFB1 dalam ektrak hati
ayam masih belum mendekati kurva kalibrasi
standar dalam metanol sebagai acuan, walaupun
ada titik yang bersinggungan dalam kurva.
Pada konsentrasi AFB1 rendah, efek matrik
sangat terlihat dengan kurva yang berjauhan.
Pengaruh matrik dapat dihilangkan atau
diminimumkan dengan cara a). melakukan
pengenceran sampel sebelum dianalisa, tetapi
perlu dipertimbangkan sensitifiti dari
penetapan, b). menggunakan kombinasi pelarut
ekstrak, c). penambahan deterjen atau protein
pada pelarut. Pada percobaan ini efek matrik
dicoba dengan menggunakan kombinasi
pelarut untuk ekstraksi, yaitu metanol dan PBS.
Metanol merupakan pelarut organik yang baik,
sehingga hampir seluruh matrik termasuk
senyawa yang diuji terlarut dalam metanol.
PBS dapat mengendapkan sebagian protein dan
lemak yang terkandung dalam hati, yang dapat
mengurangi efek matrik (STANKER and BEIER,
1995).
Hasil percobaan dengan menggunakan
pelarut campuran metanol dan PBS dengan
berbagai teknik pengerjaan dan jumlah sampel,
dimana kedalam supernatannya ditambahkan
standar AFB1 konsentrasi 0,12 – 30 ppb,
didapat kurva kalibrasi seperti Gambar 2.
Ternyata bahwa penggunaan pelarut campuran
metanol dan PBS = 1:1 yang ditambahkan
kedalam 20 g hati ayam, merupakan cara yang
terbaik. Mengekstrak dulu senyawa uji dalam
metanol 100%, kemudian baru pengenceran
dengan PBS, masih memperlihatkan efek
matrik yang lebih besar dimana kurva bergeser
kesebelah kanan.
Sensitifitas dan presisi
Sensitifitas dari suatu penetapan atau
analisis dapat ditunjukan dengan nilai dari limit
deteksi, seberapa sensitif alat dapat
memberikan respon pada konsentrasi terendah
dari analit yang ditetapkan. Pada uji secara
ELISA, limit deteksi ditetapkan pada
konsentasi yang memberikan nilai Inhibisi
15% (IC15), dari pengukuran seri standar
dalam matrik sampel yang tidak mengandung
AFB1. Dari 6 kali pengukuran maka dapat
785
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2006

100
90
80
70

% Inhibitin
60
50
40
30
20
10
0
0.1 1 10 100
Aflatoxin B1 (ng/mL)
60% MeOH
ekstrak hati dlm MeOH 60%

Gambar 1. Respon AFB1 dalam pelarut metanol 60% dan ektrak hati dalam metanol

100
90
80
70
% Inhibitin

60
50
40
30 60% MeOH
20 gr+MeOH/PBS
20
20 gr MeOH, encerkan PBS
10 10 gr MeOH, encerkan PBS
0
0.1 1 10 100
Aflatoxin B1 (ng/mL)

Gambar 2. Kurva kalibrasi standar AFB1 dalam berbagai pelarut ekstraksi dan jumlah sampel

dihitung dan didapat konsentrasi IC 15 seperti
pada Tabel 1. Limit deteksi yang diperoleh
adalah 0,19 + 0,03 ppb.
Presisi yaitu kedekatan beberapa hasil
pengujian (seberapa dekat pengamatan yang
satu dengan yang lainnya). Presisi dapat
dievaluasi dari pengujian keterulangan,
pengujian sampel/standar yang sama, dengan
peralatan yang sama, pada laboratorium yang
sama, diulang pada waktu berbeda. Pada uji
ELISA repetabilitas dapat ditentukan dengan
menghitung konsentrasi yang memberikan nilai
inhibisi 50% (IC50, titik paling akurat) pada
kalibrasi standar. Hasil perhitungan IC50 dari
pengukuran 6 kali seri standar AFB1 yang
dipersiapkan dalam matrik hati yang tidak
mengandung AFB1 disajikan pada Tabel 1.
Ternyata bahwa metoda yang dikembangkan
memberikan keterulangan, presisi yang baik
dengan nilai RSD = 12,3%. PATEY et al.,
(1992), melaporkan bahwa sebagai petunjuk
ketepatan analisa, nilai koefisien variasi
sebaiknya dalam kisaran 5 – 15%.
Spesifikasi dan akurasi
Spesifikasi antibodi aflatoksin dapat
diketahui dari pengujian reaksi silang dengan
jenis aflatoksin lain yang mempunyai struktur
yang hampir menyerupai AFB1 yaitu AFB2,
AFG1 dan AFG2. Persentase reaksi silang dapat
diketahui dengan menghitung IC50 dari
pengukuran seri standar (0,12 – 30 ppb) dalam
matrik sampel hati dari masing-masing jenis
aflatoksin dibandingkan terhadap AFB1, dimana
respon AFB1 100%, seperti pada Tabel 2.
Ternyata bahwa antibodi memberikan respon

786
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2006

Tabel 1. Sensitifitas (limit deteksi) dan presisi pada uji AFB1 sampel hati secara ELISA, yang ditunjukkan
dengan nilai IC15 dan IC50

Kalibrasi 1 2 3 4 5 6 Rata-rata Std RSD

IC15 (ppb) 0,19 0,22 0,19 0,15 0,16 0,23 0,19 0,03
Limit deteksi = 0,19 ± 0,03 ppb
IC50 (ppb) 2,17 2,22 2,15 1,84 2,23 1,61 2,03 0,25 12,3%

yang sensitif terhadap AFB1, dengan nilai IC50 AFB1, dengan reaksi silang yang relatif kecil
yang rendah, sedangkan responnya terhadap terhadap AFB2, AFG1 dan AFG2 yaitu masing-
jenis aflatoksin lainnya tidak sensitif masing 5,6; 13,6 dan 1,5%.
(perhatikan juga Gambar 3). Akurasi, ketepatan suatu analisis dievaluasi
dari hasil uji perolehan kembali dari”spike
Tabel 2. Persentasi reaksi silang antibodi aflatoksin sample”, yaitu sampel hati yang ditambahkan
B1 konsentrasi tertentu AFB1. Tiga konsentrasi
AFB1 dalam”spike sample” yaitu 10, 20 dan 40
Jenis aflatoksin Nilai IC50 % reaksi silang
ppb dipersiapkan, selanjutnya diuji kadar AFB1
AFB1 1,5 100 nya secara ELISA. Hasil pengukuran dan
AFB2 27,2 5,6 perhitungan seperti pada Tabel 3. Perolehan
AFG1 11,3 13,6 kembali (recovery) rata-rata 100,8%
AFG2 99,9 1,5 menunjukan metoda yang dikembangkan
memberikan akurasi yang baik. Hasil penelitian
Dapat dikatakan bahwa antibodi terdahulu rata-rata perolehan kembali analisis
secara ELISA adalah 94 – 108% (SPILMAN,
memberikan respon yang spesifik terhadap
1985).

100
90
80
70
% Inhibitin

60
50
40
30
20
10
0
0.1 1 10 100
Aflatoksin (ng/mL)
AFB1 AFB2 AFG1 AFG2

Gambar 3. Respon antibodi terhadap berbagai jenis aflatoksin

Tabel 3. Perolehan kembali (recovery)

AFB1 di+kan (ppb) AFB1 ditemukan (ppb) % Perolehan kembali (recovery) Rata-rata % recovery
10 ppb 9,8 98 100,8%
10,2 102
20 ppb 20,8 103,8
19,6 98,2
40 ppb 40,8 102,1
40,2 100,5

787
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2006
Tabel 4. Kadar residu AFB1 pada sampel hati ayam yang dikumpulkan dari pasar tradisional dan swalayan di
daerah Bogor
Pasar/swalayan n AFB1 negatif (TT)*
A 5
B 5
C 5
D 5
E 5
F 5
G 5
H 5
I 5
Total 45
TT = tidak terdeteksi; limit deteksi 0,19 ppb
Kadar residu AFB1 dalam sampel hati ayam
Metoda ELISA yang dikembangkan
diaplikasikan untuk analisis sampel hati yang
dikumpulkan dari 9 tempat (pasar tradisional
dan swalayan) didaerah Bogor. Ternyata dari
45 sampel hati, sebanyak 11 sampel (24,4%)
positif mengandung residu AFB1 dalam
kisaran 0,2 – 0,7 ppb. Data disajikan pada
Tabel 4. Hasil studi yang dilaporkan terdahulu
dari 31 sampel hati ayam, sebanyak 14 sampel
positif mengandung residu AFB1 dengan kadar
rata-rata 0,01 ppb dan 30 sampel mengandung
AFM1 kadar rata-rata 12,1 ppb (MARYAM,
1996). Sampel hati yang dikumpulkan dari
pasar tradisionil dan swalayan didaerah Jawa
Barat ternyata juga mengandung residu AFB1
dan AFM1. 13 dari 21 sampel hati sapi yang
dikumpulkan mengandung residu AFB1 dalam
kisaran 0,33 – 1,44 ppb (WIDIASTUTI, 1999).
Residu AFB1 pada organ hati yang terdeteksi
relatif rendah, karena dalam metabolisme
tubuh ayam AFB1 berubah menjadi
metabolitnya seperti aflatoksikol dan AFM1.
Sebagian diekresikan an sebagian terdistribusi
di darah, hati, tembolok, dada dan paha. Pada
percobaan pemberian 3 ppm AFB1 pada ayam
pedaging dan petelur, residu AFB1 dan
metabolitnya yang terbentuk, terdeposit di
organ hati 10 kali lebih besar dibandingkan
jaringan tubuh yang lain (MABEE dan CHIPLEY,
1973; BINTVIHOK et al., 2002).
788
AFB1 positif Kisaran kadar (ppb)
2 3 0,5 – 0,7
2 3 0,2
5 0 -
5 0 -
2 3 0,3
5 0 -
5 0 -
3 2 0,2
5 0 -
34 11 0,2 – 0,7
KESIMPULAN
Dari hasil pengembangan metoda analisis
residu AFB1 yang dikembangkan dapat
disimpulkan bahwa:
Metoda ELISA dapat diaplikasikan untuk
analisis residu AFB1 pada sampel hati dengan
pelarut yang baik adalah campuran metanol
dan PBS = 1 : 1.
Sensitifiti dan presisi cukup baik dengan
nilai limit deteksi yang diperoleh 0,1 + 0,03
ppb. Uji keterulangan memberikan nilai 12,3%
RSD (< 20%).Respon spesifik terhadap AFB1
dengan reaksi silang yang kecil terhadap AFB2,
AFG1 dan AFG2 yaitu masing-masing 5,6%,
15,6% dan 1,5. Selain itu metoda juga cukup
akurat dengan persentase perolehan kembali
rata-rata 100,8%.
Hasil analisis sampel hati ayam diperoleh
sebanyak 11 dari 45 sampel (24,4%) positif
mengandung residu AFB1 dengan kadar dalam
kisaran 0,2 – 0,7 ppb.
DAFTAR PUSTAKA
AOAC. 1984. Official Methods of Analysis. 14th Ed,
AOAC, Arlington VA. Section 26.026 –
26.031; 26.049 – 26.051.
BAHRI, S. dan R. MARYAM. 2003. Mikotoksin
berbahaya dan pengaruhnya terhadap
kesehatan hewan dan manusia. Wartazoa
14(4): 129 – 142.
 Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner 2006
BINTVIHOK, A, S. THIENGNIN, K. DOL and S.
KUMAGAI. 2002. Residues of aflatoxins in the
liver, muscle and eggs of domestic fowl. J.
Vet. Med. Sci. 64 (11): 1037 – 1039.
GROOPMEN, J.D, L.G. CAIN and T.W. KENSLER.
1988. Aflatoxin exposure in human
populations measurement relationship to
cancer. Crit. Rev. Toxicol. 19(2): 113 – 145.
KAWAMURA, A.O., S. NAGAYAMA, S. SATO, K.
OHTANI, I. UENO and Y. UENO. 1988.
Development of aflatoxin immunoassay
technique of peanut. Mycotoxin Res. 4: 76 –
87.
MABEE, M.S. and J.R. CHIPLEY. 1973. Tissue
distribution and metabolism of aflatoxin B1-
14 C in broiler chickens. Appl microbial.25(5):
763 – 769.
MARYAM, R. 1996. Residu aflatoksin dan
metabolitnya dalam daging dan hati ayam.
Pros. Temu Ilmiah Nasional Bidang Veteriner.
Balai Penelitian Veteriner, Bogor. hlm. 336 –
339.
MARYAM, R., S. BAHRI dan P. ZAHARI. 1994. Deteksi
aflatoksin B1,M1 dan aflatoksikol dalam telur
ayam ras dengan kromatografi cair kinerja
tinggi. Pros. Seminar Teknologi Veteriner
untuk meningkatkan kesehatan hewan dan
pengamanan bahan pangan asal ternak.
Cisarua – Bogor, 22 – 24 Maret 1994. hlm.
412 – 416.
PATEY, A.L., M. SHARMAN and J. GILBERT. 1992.
Determination of total aflatoxin levels in
peanut butter by Enzyme Linked
Imunnosornbent Assay: Collaborative Study. J
AOAC Int. 75 (4): 693 – 697.
RACHMAWATI, S. 2005. Aflatoksin pada pakan di
Indonesia: Persyaratan kadar dan peratuan per-
undang-undangannya. Wartazoa 4 (1): 26 – 35.
SPILMAN, J.R. 1985. Modification of rapid screening
method for aflatoxin in corn for quantitative
use. JAOAC 68(3): 453 – 456.
STANKER, L.H. and R.C. BEIER. 1995. Introduction
to immunoassay for residue analysis: Concept,
formats and applicaions in immunoassays for
residue analysis. In: ELISA workshop. Simple
test for monitoring mycotoxins and pestisides
in produce. Post Harvest Technology Insitute.
Ho Chi Minh City, Vietnam, November 15 –
17 1999. University of Sydney. pp. 12 – 22.
STUBBLE, F., R.D.J. GREER, O.L. SKOTWELL and
A.M. AIKENS. 1991. Direct competitive ELISA
of aflatoxins in biological material. JAOAC 74
(3): 530 – 532.
TRUCKSESS, M.W., M.E. STACK, S. NESHEIM, D.L.
PARK and A.E. POHLAND. 1989. Enzyme
Linked Imunnosorbent Assay of Aflatoxins
B1, B2 and G1 in corn, cotton seed, peanut,
peanut butter and poultry feed: Collaborative
study. JAOAC 72(6): 957 – 961.
WIDIASTUTI, R. 1999. Residu aflatoksin pada daging
dan hati sapi di pasar tradisional dan swalayan
di Jawa Barat. Pros. Seminar Nasional
Peternakan dan Veteriner. Bogor. 18 – 19
Oktober 1999. Puslitbang Peternakan, Bogor.
hlm. 609 – 614.
.
789