V de Gowin n.

º 1 – Extracção do DNA de células vegetais

Nome: ______________________________________________ N.º: ______ Turma: ______

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Teoria
Teoria celular
Princípios
- Todos os seres vivos (animais e plantas) são
constituídos por células;
- A célula é unidade básica de estrutura e função
dos seres vivos;
- Todas as células são delimitadas por membranas
de natureza lipídica (modelo do mosaico fluído);
- A membrana nuclear é também de natureza
lipídica;
- O DNA é uma biomolécula existente em todas as
células;
- Nas células eucarióticas 99% do DNA encontra-se
no núcleo associado a proteínas (histonas).
- O detergente emulsiona os lípidos.
O sal (NaCl) contribui com iões, pois, em solução
aquosa, origina Na++ e Cl-.
- O DNA não se dissolve no álcool, precipita-se,
tornando-se visível.
Questão Central
Discussão / Conclusão
Através dos procedimentos desenvolvidos foi
Será possível possível extrair e observar DNA de células
extrair e observar vegetais.
o DNA de células Para tal procedeu-se à trituração da fruta para
vegetais? desagregação dos tecidos. Para destruir a
membrana plasmática e o invólucro nuclear
adicionou-se detergente. A adição de sal
permite o fornecimento de iões à solução,
importante para neutralizar a carga negativa do
DNA. Assim, não há repulsão entre as moléculas
de DNA, elas mantêm-se mais unidas, sendo
mais fácil observar a olho nu.
O DNA é menos denso que a água por isso localizou-se na
parte superior do filtrado. O DNA tornou-se visível com a
adição do álcool pois é insolúvel neste e precipita. As
moléculas de DNA ascendem no álcool devido às bolhas de
ar que se formam devido ao choque térmico.
A olho nu não é possível observar a estrutura do DNA.

Material e Transformações de Registos

Procedimentos Libertação de bolhas de ar quando se
Ver página 23 do adicionou álcool.
Conceitos manual Observação de duas fases distintas: a
Célula, membrana plasmática, núcleo, aquosa com células mais densa e a alcoólica
membrana nuclear, DNA, lípidos menos densa.
O DNA aparece como filamentos
esbranquiçados na interface entre o filtrado
e o álcool e, parte dele, lentamente ascende
para o filtrado.
 Discussão:
1. Onde se encontra o DNA na célula?
Cerca de 99% do DNA encontra-se no núcleo da célula. O restante DNA encontra-se em locais específicos, como por exemplo organitos (as mitocôndria e os cloroplastos possuem o seu próprio DNA).
Apesar desses organitos terem o seu próprio cromossoma eles não podem contar com a sua informação. As mitocôndrias e cloroplastos necessitam de genes especiais situados noutros organitos. Para a
maioria das funções, estes organitos utilizam os cromossomas nucleares

2. Porque motivo não se pode ver a dupla hélice que constitui a molécula de DNA?
A dupla hélice de cada molécula de DNA é demasiado pequena para se observar. Apesar de o DNA ser a maior molécula na célula, só pode ser visto com um microscópio electrónico. A razão pela qual
podemos observar o DNA na nossa experiência é porque temos milhões de cadeias de DNA e RNA aglomerados, para além de imensas proteínas

3. Utilizando os dados da tabela, procure estabelecer relações entre as etapas de extração e os princípios que as fundamentam.
Etapas da Extração Princípios
A. O papel de filtro retém alguns constituintes maiores e deixa
1. Destruição dos tecidos e das membranas
passar o DNA (bem como as proteínas).
para libertar o DNA -B
B. O esmagamento / trituração permite a destruição dos
2. Agregação de moléculas de DNA por
tecidos e o detergente intervêm na desorganização das
neutralização da carga negativa do DNA
membranas por emulsão dos lípidos.
fornecida pelo grupo fosfato. - D
C. O álcool permite desidratar as moléculas de DNA que por
3. Separação do DNA do resto dos
serem insolúveis neste aglutinam-se tornando-se visíveis
constituintes da célula. - A
(massa filamentosa esbranquiçada).
4. Fazer precipitar o DNA com o fim de o
D. A adição de sal (NaCl) permite o fornecimento de iões à
observar - C
solução, importante para neutralizar a carga negativa do
DNA. Assim, não há repulsão entre as moléculas de DNA
possibilitando a agregação (aglomeração) de várias
moléculas.

Função do álcool etílico (etanol) gelado?

Permite a separação do DNA, dado que esta molécula é insolúvel nesta concentração e temperatura. O DNA é menos denso do que
a água, posicionando-se na parte superior do filtrado. Assim, quando se adiciona lentamente etanol ao filtrado, os filamentos de
DNA ascendem lentamente na camada de álcool, surgindo mais próximos da superfície. Além disso, a formação de bolhas de ar,
devido ao “choque térmico” ajuda nessa ascensão.
O álcool gelado, além de proporcionar uma mistura heterogénea (duas fases), em ambiente salino, faz com que as moléculas de
DNA se aglutinem, formando uma massa filamentosa e esbranquiçada.
O DNA não se dissolve no álcool, na concentração e na temperatura que se usou nesta experiência. Pelo facto do DNA ser menos
denso que a água e a mistura aquosa dos restos celulares, ele localiza-se na interface da fase alcoólica e aquosa. Como resultado, o
DNA aparece à superfície da solução ou precipita.