Journal of Applied Farmasi Sains Vol.

8 (09), pp 107-113, September, 2018 Tersedia online di

http://www.japsonline.com DOI: 10,7324 / JAPS.2018.8916 ISSN 2231-3354

Liquid Chromatography dan Fourier Transform Infrared Spectroscopy

untuk analisis kuantitatif kurkuminoid individu dan total Curcuma longa ekstrak

Ratna Wulandari 1,2, Sudjadi 1, Sudibyo Martono 1, Abdul Rohman 1 *

1 Departemen Farmasi Kimia, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, 55281, Indonesia.
2 Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia.

PASAL INFO ABSTRAK

Pasal sejarah: Analisis kurkuminoid individu dan jumlah yang terdiri dari kurkumin (CUR), desmethoxycurcumin (DMCUR) dan bisdemethoxycurcumin (BDMCUR)
Diterima pada: 2018/11/03 Diterima pada spesies Curcuma sangat penting. Kurkuminoid yang sering digunakan sebagai penanda dalam pengobatan herbal yang melibatkan
pada: 23/07/2018 Tersedia online: penggunaan spesies Curcuma dalam rumusannya. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memvalidasi-kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dan
30/09/2018 Fourier transform infrared spectroscopy-parsial setidaknya persegi (FTIR-PLS) untuk analisis kuantitatif dari total dan individu kurkuminoid dalam
kunyit ( Curcuma longa L.) ekstrak. The bubuk kunyit dimaserasi menggunakan etanol dan diuapkan untuk mendapatkan ekstrak etanol. Isi
sebenarnya dari kurkuminoid individu CUR, DMCUR, dan BDMCUR ditentukan dengan menggunakan HPLC. FTIR-PLS dapat digunakan untuk
Kata kunci:
analisis kuantitatif kurkuminoid individu dan jumlah menggunakan wavenumbers tertentu. Koefisien determinasi (R 2) untuk hubungan antara nilai
Curcuma longa Linn, kurkuminoid,
aktual dan FTIR-PLS diprediksi nilai untuk kalibrasi internal, dan validasi eksternal adalah> 0,98 yang menunjukkan akurasi yang baik. Nilai-nilai
parsial setidaknya persegi, HPLC,
yang relatif rendah kesalahan dalam kalibrasi, validasi dan validasi eksternal menunjukkan presisi yang baik. Spektroskopi FTIR-PLS dapat
spektroskopi FTIR.
digunakan sebagai teknik alternatif lebih HPLC untuk penentuan kurkuminoid individu dan total dalam ekstrak kunyit.

PENGANTAR 2013 ).

Penggunaan kunyit ( Curcuma longa Linn) sebagai bahan baku Dalam rangka untuk menjamin kualitas bahan herbal dari satu batch

obat-obatan herbal dan produk makanan telah meningkat secara signifikan ( liang untuk batch lain, adalah penting untuk menentukan tingkat senyawa kimia yang

et al., 2004 ; Berkeluyuran et al., 2013 ). Karena komposisinya terutama bertanggung jawab untuk aktivitas biologis. Kurkuminoid dalam kunyit, khususnya

kurkuminoid, kunyit dikenal sebagai komponen makanan fungsional, kunyit telah kurkumin, telah digunakan sebagai penanda kimia selama evaluasi aktivitas biologis

dilaporkan memiliki antibakteri, antiinflamasi, dan kegiatan antioksidan karena ( Gupta et al.,

kandungan tinggi kurkuminoid ( Bernyanyi et al., 2002 ; de et al.,
2009 ; Anubala et al., 2014 ), Saraf ( Issuriya et al.,
2014 ), Imunomodulator ( Rogers et al., 2010 ), Antidiabetes ( Wickenberg et al., 2010 (total dan individual) harus dikembangkan.
), Serta kegiatan antitumor dan antikanker ( Aggarwal et al., 2003 ; Wilken et al., 2011
). Karena kegiatan antioksidan yang tinggi, kunyit telah banyak digunakan dalam
kosmetik, nutraceuticals, dan phytomedicines ( Paulucci et al.,
*
Penulis yang sesuai
Abdul Rohman, Departemen Farmasi Kimia, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah
Mada, Yogyakarta, 55281, Indonesia. E-mail: abdul_kimfar @ ugm.ac.id
1999 ). Menurut Pharmacopeia Herbal Indonesia, ekstrak kunyit harus berisi
minimal 33,90% dari total kurkuminoid dengan kadar air kurang dari 10% ( Kementerian
Kesehatan 2008 ). Memang, teknik analisis yang mampu mengukur kurkuminoid
Beberapa teknik analisis telah dikembangkan dan digunakan untuk
analisis kuantitatif kurkuminoid, yaitu lapisan tipis kromatografi-densitometri ( Péret-Almeida
et al., 2005 ), Kromatografi cair kinerja tinggi menggunakan ultraviolet-tampak
dan elektrokimia detektor ( Inoue et al., 2008 ; Syed et al., 2015 ), Kromatografi
cair-spektrometri massa ( Asai dan Miyazawa, 2000 ), Dan elektroforesis kapiler ( Jiang
et al., 2006 ). Karena kemampuan untuk memberikan pemisahan antara
komponen-komponen di

© 2018 Ratna Wulandari et al. Ini adalah sebuah artikel akses terbuka didistribusikan di bawah ketentuan Creative Commons Atribusi Lisensi -NonCommercial- ShareAlikeUnported License
(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/3.0/).
108 wulandari et al. / Journal of Applied Farmasi Sains 8 (09); 2018: 107-113
sampel, metode berbasis kromatografi-adalah metode pilihan untuk analisis
multikomponen seperti dalam ekstrak; Namun, metode ini memakan waktu dan
melibatkan penggunaan bahan kimia yang berlebihan dan reagen. Oleh karena itu, ada
kebutuhan untuk mengembangkan teknik analisis yang mampu mengukur analit
menggunakan beberapa metode sederhana berdasarkan spektroskopi seperti inframerah
dekat-spektroskopi ( Tanaka et al., 2008 ) Dan inframerah pertengahan spektroskopi ( Rohman cutter komersial, dan dikeringkan menggunakan oven konvensional pada 50 ° C.
et al., 2015 ).
Transformasi Fourier inframerah (FTIR) spektroskopi adalah teknik
menjanjikan untuk kuantifikasi kurkuminoid karena kemampuan untuk memberikan
teknik analisis yang cepat dan hijau, dengan sampel minimum persiapan langkah ( Bunaciu C untuk mendapatkan ekstrak etanol. Ekstrak etanol kemudian difraksinasi
et al., 2011 ; Rohman, 2012 ). Dikombinasikan dengan kalibrasi multivariat, spektroskopi
FTIR dapat digunakan sebagai teknik alternatif untuk teknik kromatografi. Tanaka et al.
( 2008) telah menganalisis kurkuminoid individu kurkumin (C), desmethoxycurcumin
(DMC) dan bisdemethoxycurcumin (BDMC) dan jumlah kurkuminoid (sebagai jumlah
dari C + DMC + BDMC) menggunakan dekat inframerah pada 1650-1780 nm. Dalam
studi ini, pertengahan inframerah (4000-400 cm -1) digunakan karena puncak lebih
diperoleh, sebagai konsekuensinya, pemodelan PLS menggunakan lebih puncak lebih
dicapai ( Bunacie et al., 2011 ). Rohaeti et al.
(2015) menggunakan spektroskopi FTIR dalam kombinasi dengan analisis
komponen utama (PCA) dan analisis kanonik variate (CVA) untuk identifikasi
dan klasifikasi kunyit, temulawak
( Curcuma xanthorhiza) dan bengle (Zingiber cassumunar). Dalam pengetahuan
terbaik kami, tidak ada laporan mengenai penerapan spektroskopi FTIR untuk
analisis kurkuminoid individu dan jumlah menggunakan HPLC dan spektroskopi
FTIR dikombinasikan dengan PLS. Dalam penelitian ini, kurkuminoid individu
diisolasi dari campuran dengan kromatografi kolom dan senyawa terisolasi yang
diperoleh digunakan untuk kuantifikasi menggunakan HPLC dan spektroskopi FTIR
dikombinasikan dengan regresi PLS.
MATERIAL DAN METODE
Kurkuminoid yang mengandung CUR, DMCUR dan BDMCUR dibeli
dari E. Merck (Darmstadt, Jerman) dengan isi kurkuminoid ≥ 94%. Kunyit
diperoleh dari beberapa daerah di Jawa (Jawa Timur, Jawa Tengah, Jawa
Barat, Yogyakarta, dan Jakarta). Kurkumin sintetis ramah diberikan oleh Prof Dr
Sudibyo Martono dari Departemen Farmasi Kimia, Fakultas Farmasi,
Universitas Gadjah Mada, Indonesia. Pelarut yang digunakan untuk fase gerak
yang HPLC kelas. Pelarut lain dan reagen yang kelas pro-analitis kecuali
dinyatakan telah ditentukan.
Isolasi C, DMC, dan BDMC
Isolasi kurkuminoid (dengan isi kurkuminoid ≥ 94%) dari E. Merck ke
CUR, DMCUR dan BDMCUR dilakukan sesuai dengan Péret-Almeida et al. ( 2005)
menggunakan kromatografi kolom dengan fase diam silika gel 60 untuk
kromatografi kolom (230-400 mesh) (Merck, Darmstadt, Jerman), dengan fase
gerak kloroform-metanol disampaikan dengan cara gradien. Setiap fraksi yang
diperoleh menjadi sasaran TLC, dan fraksi yang mengandung kurkuminoid yang
sama disusun. Pelarut diuapkan menggunakan vacuum evaporator berputar,
dan serbuk yang diperoleh ditentukan untuk kemurniannya kualitatif
menggunakan TLC dengan tiga sistem fase gerak yang berbeda. Kemurnian
kurkuminoid individu juga ditentukan dengan menggunakan HPLC
dengan fotodioda detektor array pada 425 nm menggunakan teknik normalisasi
internal yang (relatif persentase).
Persiapan ekstrak etanol kunyit
Sampel kunyit dibersihkan dari setiap kotor, potong kecil menggunakan
kunyit kering bubuk menggunakan penggiling dan dikenakan sieving menggunakan
jala 40. A-50 gram kunyit bubuk menjadi sasaran maserasi menggunakan 500 mL
etanol 90% dalam akuades selama 24 jam ( Tanaka et al., 2008 ). Macerate disaring
dan supernatan diuapkan menggunakan vacuum rotary evaporator pada suhu 50 °
menggunakan n heksana dua kali, dan ekstrak etanol murni kemudian ditambahkan
dengan Amprotab (1 bagian ekstrak: 19 bagian Amprotab) dan dikenakan
pengukuran spektroskopi FTIR dan analisis HPLC.
analisis HPLC dan validasi
Kondisi HPLC dioptimalkan berdasarkan
Wichitnithad et al. ( 2009) untuk mendapatkan pemisahan terbaik di antara CUR, DMCUR,
dan BDMCUR. Kondisi akhir yang digunakan selama analisis kurkuminoid dalam ekstrak
etanol kunyit adalah: Kolom:
Waters X-jembatan C18 (250 × mm
4.6 mm id; 5 pM)
fase gerak: asetonitril: asam asetat 2% di aquadest
(50:50 v / v) disampaikan isocratically pada
1,0 mL / menit
Detektor: PDA pada 425 nm
Volume injeksi: 20 uL
Kolom suhu oven: 30 ° C
Validasi metode HPLC
Kondisi HPLC dioptimalkan menjadi sasaran validasi menurut
International Conference Harmonisasi ( ICH 2005 ) Dengan menilai beberapa
parameter yaitu: selektivitas, linieritas dan jangkauan, batas Detection (LOD),
batas kuantifikasi, presisi, dan akurasi.
analisis spektroskopi FTIR
Analisis ekstrak etanol kunyit ditambah dengan Amprotab dilakukan
dengan menggunakan teknik sampling dilemahkan Total reflektansi (ATR) seperti
dalam Rohman et al. ( 2015) . Sampel langsung ditempatkan pada ATR kristal dan
spektrum yang dipindai menggunakan FTIR spektrofotometer ABB MB3000
(Clairet Ilmiah, Northampton, UK), dilengkapi dengan deuterated triglycine sulfat
(DTGS) detektor dan beam splitter germanium, dan diolah menggunakan Horizon
MB FTIR versi perangkat lunak 3.0.13.1 (ABB, Kanada). Spektrum FTIR diukur
pada pertengahan inframerah (4000-650 cm -1) menggunakan resolusi 4 cm -1 dan
jumlah pemindaian 32. Semua spektrum dijatah dengan latar belakang spektrum
udara. Setelah setiap scan, spektrum background udara referensi baru diambil.
Spektrum ini dicatat sebagai nilai-nilai absorbansi pada setiap titik data dalam
rangkap dua.
Analisis statistik
Hasil analisis yang diperoleh dengan menggunakan HPLC digunakan
 wulandari et al. / Journal of Applied Farmasi Sains 8 (09); 2018: 107-113 109

sebagai nilai-nilai konten yang sebenarnya dari CUR, DMCUR, dan BDMCUR dan
berkorelasi dengan nilai-nilai prediksi CUR, DMCUR, dan BDMCUR menggunakan PLS
kalibrasi. PLS adalah model yang kalibrasi digunakan untuk memecahkan masalah
yang melibatkan collinearity tinggi atau untuk menghitung berkorelasi Y variabel ( BerkeluyuranHASIL DAN DISKUSI
et al., 2013 ). PLS telah dikaitkan dengan metode matematika lain dan algoritma, dan
algoritma yang paling sering digunakan untuk melaksanakan PLS regresi non-linear
berulang kuadrat terkecil parsial (NIPALS). Variabel konsentrasi (y-axis) terkait dengan
variabel prediktor ( x-axis)
melalui variabel tambahan dikenal sebagai variabel laten (faktor atau komponen),
yang merupakan kombinasi linear dari variabel-variabel
x 1, x 2, ..., x K. Komponen-komponen ini sangat mirip dengan komponen utama
dihitung dengan analisis komponen utama. software Minitab versi 17 digunakan
untuk analisis statistik selama
kalibrasi, validasi internal dengan menggunakan cuti satu dari teknik, dan validasi
eksternal.
Standar acuan CUR, DMCUR, dan BDMCUR digunakan untuk analisis
kuantitatif diisolasi dari kurkuminoid dengan kromatografi kolom. Senyawa-senyawa
terisolasi dari CUR, DMCUR dan BDMCUR dianalisis menggunakan KLT dengan tiga
pelarut polaritas yang berbeda. Gambar 1 menunjukkan bahwa CUR, DMCUR, dan
BDMCUR yang baik dipisahkan. Kurkumin merupakan komponen utama dalam
kurkuminoid dan diperoleh relatif mudah dibandingkan dengan DMCUR dan
BDMCUR. Tingkat kemurnian CUR, DMCUR, dan BDMCUR seperti yang ditentukan
menggunakan HPLC dengan detektor photodiode array yang pada 425 nm adalah
dari 99,92%, 98,53% dan
85,85%, masing-masing.

Gambar 1.: Tipis profil kromatografi lapis kurkumin (C), demethoxycurcumin (DMC) dan bisdemethoxycurcumin (BDMC) menggunakan tiga pelarut yang berbeda dengan fase diam dari GF254 silika gel. Sistem A =
kloroform: metanol: asam asetat (95: 3: 2 v / v / v); Sistem B = Toluene: asam asetat (9: 1 v / v); dan sistem C = kloroform: aquadest: Etanol (25: 0,04: 0,96). M = Kurkuminoid; SC = sintetis kurkumin.

Karena fleksibilitas, kinerja tinggi kromatografi cair (HPLC) adalah dengan polaritas kurkuminoid, di mana BDMCUR lebih polar dari DMCUR dan
metode pilihan untuk penentuan kurkuminoid karena kurkuminoid relatif CUR.
non-polar dan cocok untuk dipisahkan menggunakan dibalik kolom HPLC ( Prabaningdyah
et al., 2017 ). HPLC adalah metode referensi untuk analisis kuantitatif CUR, Validasi metode HPLC untuk analisis C, DMC, dan BDMC

DMCUR dan BDMCUR di ekstrak etanol kunyit, dan dioptimalkan dalam rangka
memenuhi persyaratan uji kesesuaian sistem, yaitu resolusi> 2; tailing faktor
<1,8 dan jumlah teoritis plat> 10.000. Dua kolom, yaitu Waters X-jembatan C18
(250 mm x 4,6 mm id; 5 m) dan Waters Spherisorb, C 18, ( 250 × 4,6 mm, 5 m)
dibandingkan, dan akhirnya Waters X-jembatan C18 dipilih dengan fase gerak
asetonitril: asam asetat 2% di aquadest (50:50 v / v) disampaikan isocratically
pada 1,0 mL / menit. HPLC kromatogram CUR, DMCUR, dan BDMCUR
diperoleh dengan menggunakan kondisi optimum ditunjukkan di Gambar 2 .
Urutan elusi dari kurkuminoid adalah BDMCUR dengan t R dari ± 6,795 menit,
DMCUR dengan t R dari ± 7.43 menit, dan CUR dengan t R dari ± 8,130 menit.
Pesanan ini adalah dalam perjanjian
HPLC telah divalidasi untuk analisis kuantitatif CUR, DMCUR dan
BDMCUR dalam ekstrak kunyit dengan menentukan beberapa parameter yaitu
selektivitas, linieritas, batas deteksi, batas kuantifikasi, akurasi, dan presisi
sesuai dengan Konferensi Internasional tentang Harmonisasi (2005) . Tes
kesesuaian sistem menunjukkan bahwa sistem HPLC digunakan adalah cukup
tepat karena deviasi standar relatif (RSD) nilai waktu retensi dan area puncak
CUR, DMCUR dan BDMCUR dari enam ulangan kurang dari 2,0%. Selain itu,
nilai resolusi (Rs) dari> 2, jumlah piring teoritis (N)> 10.000, dan tailing faktor
(TF) ≤ 2 dicapai seperti yang diminta oleh Amerika Serikat Pharmacopeia.

Selektivitas HPLC untuk pemisahan kurkuminoid diungkapkan

dengan nilai resolusi (Rs). nilai-nilai Rs yang diperoleh
110 wulandari et al. / Journal of Applied Farmasi Sains 8 (09); 2018: 107-113

dari CUR, DMCUR dan BDMCUR adalah 2,67, 2,59 dan 15,56, masing-masing
yang menunjukkan bahwa metode divalidasi cukup selektif untuk pemisahan
kurkuminoid. Linearitas HPLC dinilai pada berbagai konsentrasi 0,4248-4,2484
ug / mL untuk CUR, 0,3139-1,8835 mg / mL untuk DMCUR, dan 0.3288-
1,644 mg / mL untuk CUR. Koefisien korelasi (r) yang diperoleh untuk hubungan
antara konsentrasi CUR, DMCUR
dan BDMCUR dan puncaknya daerah (y-axis) adalah 0,9995, 0,9996 dan
0,9996, dengan% nilai y-intercept dari 3,43%, 3,21% dan 6,17%, masing-masing.
Semua r-nilai yang lebih tinggi dari 0,999 menunjukkan bahwa metode HPLC
adalah linier selama rentang konsentrasi, yang meliputi 50-150% dari target analit
dalam ekstrak etanol dipelajari kunyit ( ICH 2005 ).

Gambar 2.: HPLC kromatogram ekstrak etanol kunyit. BDMC = bisdemethoxycurcumin dengan t R 6,795, DMC = demethoxycurcumin dengan tR dari 7.43 dan C = kurkumin dengan t R dari 8,130. Kolom = Waters
X-jembatan C 18 ( 250 mm × 4,6 mm id; 5 pM), dengan kolom suhu oven 30 ° C; fase gerak: asetonitril: asam asetat 2% di aquadest (50:50 v / v) disampaikan isocratically pada 1,0 mL / menit; detektor = photodiode
array (PDA) pada 425 nm.

Ketepatan HPLC dikembangkan dinilai dengan uji pengulangan dan dari HPLC analisis digunakan sebagai nilai yang sebenarnya dalam pemodelan PLS selama
presisi menengah dengan analisis enam ulangan ekstrak sampel homogen. prediksi CUR, DMCUR dan BDMCUR menggunakan spektroskopi FTIR.
nilai-nilai RSD dari CUR, DMCUR, dan BDMCUR adalah 1,34%, 1,42%, dan
3,45%, masing-masing, lebih rendah dari yang diminta oleh RSD Horwitz (yaitu
Tabel 1: Konsentrasi kurkumin (CUR), demethoxycurcumin (DMCUR) dan bisdemethoxycurcumin
4%) pada tingkat konsentrasi 1% analit sasaran ( Gonzalez dan Herrador 2007 ).
(BDMCUR) di ekstrak etanol kunyit ob- tained dari daerah Jawa, Indonesia.
Selain itu, nilai-nilai recovery untuk studi akurasi CUR, DMCUR, dan BDMCUR
dipelajari dengan metode penambahan standar oleh spiking CUR, DMCUR, dan
BDMCUR ke dalam sampel ekstrak kunyit. Nilai-nilai recovery yang diperoleh Wilayah CUR DMCUR BDMCUR Kurkuminoid Total *

98,05-100,38% untuk CUR, 99,30-101,60% untuk DMCUR, dan Bandung (West java) 1,56 0,51 0,94 3.01

Jakarta 1,17 0.34 0.60 2.11

Cilacap (Jawa Tengah) 1,40 0,55 1,52 3.47

99,97-100,0% untuk BDMCUR. Nilai-nilai ini sesuai dengan yang ditetapkan
Depok (Jawa Barat) 1,41 0,58 0.89 2,88
dalam ICH (2005) .
Magelang (Jawa Tengah) 1.20 0,46 1.01 2,67
Sensitivitas HPLC diungkapkan dengan menentukan batas deteksi
Bantul (Yogyakarta) 1,68 0.61 1,02 3,31
(LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ). The LOD dan LOQ nilai-nilai yang diperoleh
Karanganyar (Jawa Tengah) 1,61 0,52 0.96 3,09
0,0040 mg / mL, 0,0037 mg / mL, dan 0,0049 mg / mL untuk CUR, DMCUR dan
BDMCUR, masing-masing, sementara nilai-nilai LOQ adalah 0,0162, 0,0104, dan Kediri (Jawa Timur) 1,88 0,52 0.89 3.29

0,0147 mg / mL masing-masing. Nilai-nilai LOD dikonfirmasi dengan menyuntikkan Kuningan (Jakarta) 1,41 0,47 0,98 2,86

konsentrasi ini 5 kali, dan RSD dari 23,55% diperoleh menunjukkan bahwa Purworejo (Jawa Tengah) 1,05 0.33 0.62 2.00

nilai-nilai LOD tidak cukup tepat untuk digunakan sebagai LOQ. Selain itu, Sleman (Yogyakarta) 1,41 0,55 1,29 3,25

dilaporkan LOD dan LOQ nilai-nilai CUR yang lebih rendah dari yang dilaporkan Sukaharjo (Jawa Tengah) 1,19 0,52 0.92 2,63
oleh Dandekar dan Patravale (2009) , Yaitu 0,06 ± 0,01 ug / mL dan 0,21 ± 0,045
Temanggung (Jawa Tengah) 1,37 0.61 1,17 3.15
mg / mL, masing-masing. Namun, LOD dan LOQ nilai-nilai penelitian ini juga lebih
Wonogiri (Jawa Tengah) 0,76 0,29 0,52 1,57
rendah (lebih sensitif) daripada yang dilaporkan oleh Cheng et al.
* Total kurkuminoid adalah jumlah CUR + DMCUR dan BDMCUR.

Analisis menggunakan spektroskopi FTIR

(2010) menggunakan ultra-kromatografi kinerja cair (UPLC) dengan detektor UV-vis.
LOD dan LOQ nilai-nilai yang 0,040 dan 0,134 mg / mL untuk CUR, 0.049 dan
0,164 mg / mL untuk DMCUR, serta
0,029 dan 0,098 mg / mL untuk BDMCUR, masing-masing. Metode HPLC yang
divalidasi kemudian digunakan untuk analisis kuantitatif CUR, DMCUR, dan
BDMCUR dalam sampel, dan hasilnya ditampilkan di Tabel 1 . Konsentrasi
CUR, DMCUR, dan BDMCUR dan jumlah kurkuminoid yang diperoleh
Spektroskopi FTIR diperhitungkan sebagai teknik analisis sidik jari yang
digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif analit (s) termasuk Curcuma longa ekstrak
( Prabaningdyah et al., 2018 ). Untuk memudahkan spektroskopi FTIR sebagai metode
analisis kuantitatif kurkuminoid dalam ekstrak etanol kunyit, PLS dipekerjakan untuk
membuat korelasi antara nilai-nilai konten yang sebenarnya dari kurkuminoid yang
ditentukan menggunakan HPLC dan FTIR diprediksi
 wulandari et al. / Journal of Applied Farmasi Sains 8 (09); 2018: 107-113
nilai-nilai menggunakan nilai absorbansi pada wavenumbers dioptimalkan. PLS
adalah teknik kalibrasi multivariat berdasarkan kalibrasi terbalik di mana
konsentrasi (y-axis) dimodelkan dengan faktor (kombinasi variabel absorbansi)
di sumbu x ( Miller dan Miller, 2005 ). Gambar 3 dipamerkan spektrum FTIR
ekstrak etanol kunyit dari beberapa daerah di Jawa, dipindai di wavenumbers
Gambar. 3. Spektrum FTIR dari ekstrak etanol kunyit dari 14 daerah Jawa, dipindai di pertengahan inframerah daerah (4000-650 cm -1) bersama dengan puncak utama yang sesuai dengan serapan IR pada wavenumbers tertentu.
Analisis kurkuminoid dengan spektroskopi FTIR ditambah dengan
kalibrasi PLS dilakukan dalam tiga langkah, yaitu kalibrasi, validasi, dan analisis
sampel tidak diketahui. Sebelum pemodelan kalibrasi, spektrum FTIR semua
sampel menjadi sasaran optimasi untuk mendapatkan wilayah terbaik yang
mampu memberikan korelasi diterima antara nilai aktual dan FTIR prediksi
nilai-nilai kurkuminoid dan kesalahan terendah. Optimasi dilakukan dengan
memilih wilayah wavenumbers dan perawatan spektral ( Lestari et al., 2017 ).
Akhirnya, wavenumbers dari 1400-1720 cm -1 lebih disukai untuk kuantifikasi
CUR, wavenumbers dari 1481-1747 cm -1 digunakan untuk analisis kuantitatif
DMCUR, wavenumbers wilayah gabungan dari 1172-1226 cm -1 dan 1469-1785
cm -1 digunakan untuk analisis BDMCUR, sedangkan wavenumbers dari
1407-1820 cm -1 dieksploitasi untuk analisis total kurkuminoid. Gambar 4 mengungkapkan
DMCUR, 4.4 × 10 -6 untuk BDMCUR, dan 2,6 × 10 -6 total kurkuminoid. Nilai-nilai yang
model kalibrasi untuk hubungan antara nilai yang sebenarnya dari CUR,
DMCUR, dan BDMCUR dan jumlah kurkuminoid dan FTIR diprediksi nilai-nilai.
Koefisien determinasi (R 2) yang diperoleh 0,9998 (CUR), 0,9999 (DMCUR),
0,9996 (BDMCUR) dan 0,9999 (Total kurkuminoid). root mean square error dari
nilai kalibrasi (RMSEC) yang diperoleh 0,469, 0,0035, 0,0063 dan 0,064 mg%
untuk CUR, DMCUR dan BDMCUR dan jumlah kurkuminoid, masing-masing.
Tingginya nilai R 2 dan nilai-nilai yang rendah RMSEC menunjukkan bahwa
spektroskopi FTIR menggunakan ini wavenumbers tertentu yang akurat dan
tepat untuk analisis kuantitatif kurkuminoid. Dari angka 4 , Jelas bahwa hasil yang
diperoleh
111
dari 4000-650 cm -1 bersama dengan puncak utama yang sesuai dengan serapan IR pada
wavenumbers tertentu. Semua kelompok fungsional dalam
Gambar 3 adalah wakil dari orang-orang dari kurkuminoid. puncak ini adalah sesuai
dengan yang dilaporkan oleh Rohman et al. ( 2015) .
Rohaeti et al. ( 2015) dan Prabaningdyah et al. ( 2018) .
dari HPLC tidak signifikan dari yang diperoleh spektroskopi FTIR seperti yang
ditunjukkan oleh R tinggi 2 nilai.
PLS Model kalibrasi selanjutnya divalidasi menggunakan meninggalkan
teknik satu keluar (LOO). Dalam LOO, salah satu sampel kalibrasi telah dihapus dari
model kalibrasi, dan sampel yang tersisa digunakan untuk membuat model yang
PLS baru. Selanjutnya, sampel dihapus dihitung menggunakan model regresi PLS
baru. cara ini terulang, meninggalkan masing-masing sampel dalam gilirannya.
Perbedaan antara nilai yang sebenarnya dan nilai-nilai dihitung dari CUR, DMCUR,
dan BDMCUR dan jumlah kurkuminoid dihitung ( Miller dan Miller, 2005 ). Model
validasi C, DMC, BDMC dan jumlah kurkuminoid selama LOO dihasilkan jumlahnya
diperkirakan sisa kesalahan kuadrat (PRESS) dari 1,4 × 10 -6 untuk CUR, 2 × 10 -7 untuk
rendah PRESS menunjukkan bahwa model kalibrasi itu cukup tepat untuk
digunakan untuk analisis CUR, DMCUR dan BDMCUR, dan jumlah kurkuminoid
dalam sampel yang tidak diketahui. Namun, berdasarkan hasil yang diperoleh
selama validasi eksternal, nilai-nilai RMSEP dari DMCUR dan BDMCUR terlalu
tinggi, oleh karena itu, model yang dikembangkan tidak digunakan untuk prediksi
DMCUR dan BDMCUR.
Analisis CUR dan jumlah kurkuminoid dalam sampel yang tidak diketahui
dari Sleman dan Sukoharjo, Jawa Tengah menggunakan spektroskopi FTIR model PLS
kalibrasi dilakukan. Hasil yang diperoleh dibandingkan dengan yang diperoleh dengan
menggunakan HPLC menggunakan uji Tukey statistik pada tingkat signifikansi 0,05.
Disana ada
112 wulandari et al. / Journal of Applied Farmasi Sains 8 (09); 2018: 107-113
tidak ada perbedaan yang signifikan dari hasil yang diperoleh oleh spektroskopi FTIR
dan HPLC (P> 0,05). Nilai P adalah 1,25 dan 1,23 untuk CUR, serta 3,25 dan 2,63
total kurkuminoid dari kunyit diperoleh dari Sleman dan Sukoharjo, masing-masing.
spektroskopi FTIR
Gambar 4.: PLS kalibrasi model untuk hubungan antara nilai yang sebenarnya dari kurkumin, demethoxycurcumin, bisdemethoxycurcumin dan jumlah kurkuminoid dengan FTIR diprediksi / nilai yang dihitung dengan menggunakan
wavenumbers tertentu.
KESIMPULAN
Spektroskopi FTIR dikombinasikan dengan model yang PLS kalibrasi adalah
teknik alternatif untuk HPLC karena kemampuan spektroskopi FTIR-PLS untuk
menawarkan hubungan erat antara nilai yang sebenarnya sebagaimana ditentukan oleh
HPLC dan FTIR diprediksi nilai-nilai dengan kesalahan yang rendah. CUR ditentukan
pada wavenumbers dari daerah 1400-1720 cm -1, sedangkan total kurkuminoid dianalisis di
1407-1820 cm -1. R 2 nilai korelasi antara nilai-nilai yang sebenarnya dari kurkuminoid dan
FTIR-PLS adalah> 0,98 yang menunjukkan akurasi metode dengan kesalahan yang
rendah. Spektroskopi FTIR cepat, tidak merusak dan tidak ada persiapan sampel yang
berlebihan.
KONFLIK KEPENTINGAN
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.
PENGAKUAN
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Kementerian Riset dan Pendidikan
Tinggi untuk dukungan keuangan selama penelitian ini melalui skema Penelitian Unggulan
Perguruan Tinggi 2016 dengan nomor kontrak 807 / UN1-P.III / LT / DIT-LIT / 2016.
REFERENSI
Aggarwal BB, Kumar A, Bharti AC. Potensi antikanker dari kurkumin: Studi
praklinis dan klinis. Antikanker Res 2003; 23: 363-
398.
dikombinasikan dengan model yang PLS kalibrasi ditawarkan metode alternatif lebih HPLC
karena kesederhanaan dan kemampuan untuk memberikan analisis secara simultan
kurkuminoid tanpa langkah pemisahan.
Anubala S, Sekar R, Nagaiah K. Pengembangan dan validasi metode
analisis untuk pemisahan dan penentuan kurkuminoid bioaktif utama dalam Curcuma
longa rimpang dan produk herbal menggunakan elektroforesis kapiler non-air. Talanta
2014; 123: 10-17.
Asai A, Miyazawa T. Terjadinya kurkuminoid oral sebagai glukuronida dan
glukuronida / konjugat sulfat dalam plasma tikus. Hidup Sci, 2000; 67: 2785-2793.
Bunaciu AA, Aboul-Enein HY, Fleschin S. Aplikasi Terbaru dari Fourier
Transform Infrared Spektrofotometri di Herbal Analisis Medicine. Appl Spectros Rev 2011;
46: 251-260.
Cheng J, Weijun K, Yun L, Jiabo W, Haitao W, Qingmiao L, Xiaohe
Pembangunan X. dan validasi metode UPLC untuk pengendalian kualitas dari Curcuma
longa Linn .: Cepat kuantisasi simultan dari tiga kurkuminoid. J Pharm Biomed Anal, 2010;
53: 43-49.
De R, Kundu P, Swarnakar S, Ramamurthy T, Chowdhury A, Nair GB,
Mukhopadhyay AK. Kegiatan antimikroba Kurkumin terhadap Helicobacter pylori Isolat
dari India dan selama Infeksi di Mice. Antimicrob Agen Chemother, 2009; 53: 1592-1597.
Gad HA, El-Ahmady SH, Abou-Shoer MI, Al-Azizi MM. Penerapan
kemometrika di otentikasi obat-obatan herbal: review A. Phytochem Anal, 2013; 24: 1-24.
González AG, Herrador MA. Sebuah panduan praktis untuk metode analisis
validasi, termasuk ketidakpastian pengukuran dan profil akurasi. Trac Tren Anal Chem,
2007; 26: 227-238.
Gupta AP, Gupta MM, Kumar S. Penentuan Simultan kurkuminoid dalam
Curcuma Sampel Menggunakan High Performance kromatografi lapis tipis. J Liq
Chromatogr Terkait Technol, 1999; 22: 1561-1569.
Inoue K, Nomura C, Ito S, Nagatsu A, Hino T, Oka H.
 wulandari et al. / Journal of Applied Farmasi Sains 8 (09); 2018: 107-113
Pemurnian kurkumin, demethoxycurcumin, dan bisdemethoxycurcumin oleh kecepatan
tinggi kromatografi lawan. J Agric Food Chem 2008; 56: 9328-9336.
Konferensi Internasional tentang Harmonisasi. Validasi Prosedur Analitis:
Teks dan Metodologi. 2005; Diterima dari http: // www.ich.org/products/guidelines.html.
Issuriya A, Kumarnsit E, Wattanapiromsakul C,
Studi Vongvatcharanond U. histologi efek saraf dari Curcuma longa Linn. pada hilangnya
neuron yang disebabkan oleh pengobatan deksametason dalam hippocampus tikus. Acta
Histochemica 2014; 116: 1443-1453.
Jiang H, Somogyi A, Jacobsen NE, Timmermann BN, Gang DR. Analisis
kurkuminoid oleh ionisasi electrospray positif dan negatif dan spektrometri massa tandem.
Cepat Comm Mass Spectrom, 2006; 20: 1001-1012.
Lestari HP, Martono S, Sudjadi, Rohman A. analisis simultan dari Kurkumin
dan demethoxycurcumin di temulawak menggunakan spektroskopi FTIR dan
kemometrika. Int Makanan Res J 2017; 24 (5): 2097-2101.
Liang YZ, Xie P, Quality control Chan K. obat-obatan herbal. J Chromatogr B
2004; 812: 53-70.
Miller JN, Miller JC. 2005. Statistik dan kemometrika untuk Analytical
Chemistry. 5 th Ed. Edinburgh: Pearson Education Limited.
Dandekar PP, Patravale VB. Pengembangan dan Validasi Metode LC
Stabilitas-Menunjukkan untuk Curcumin. Chromatographia, 2009; 69: 871-877.
Paulucci VP, Couto RE, Teixeira CCC, Freitas LAP. Optimalisasi ekstraksi
kurkumin dari rimpang Curcuma longa. Brasil J Pharmacog, 2013; 23: 94-100.
Péret-Almeida L, Cherubino APF, Alves RJ, Dufossé L, Gloria MBA.
Pemisahan dan penentuan karakteristik fisiko-kimia kurkumin, demethoxycurcumin dan
bisdemethoxycurcumin. Makanan Res Int 2005; 38: 1039-1044.
Prabaningdyah NK, Riyanto S, Rohman A, Siregar C. Penerapan HPLC dan
metodologi respon permukaan untuk penentuan simultan kurkumin dan kurkumin
desmethoxy dalam formulasi sirup Curcuma. J App Pharm Sci 2017; 7: 58-64.
Prabaningdyah NK, Riyanto S, Rohman A. Penerapan spektroskopi FTIR
dan multivariat kalibrasi untuk analisis kurkuminoid dalam formulasi sirup. J App Pharm
Sci, 2018; 8: 172-179.
Rogers NM, Kireta S, Coates PTH. Curcumin menginduksi pematangan
ditangkap dendritik sel yang memperluas sel T regulator in vitro
113
dan in vivo. Clin Exp Immun, 2010; 162: 460-473.
Rohaeti E, Rafi M, Syafitri UD, Heryanto R. Fourier transform infrared
spectroscopy dikombinasikan dengan kemometrika untuk diskriminasi dari Curcuma longa,
Curcuma xanthorrhiza dan Zingiber cassumunar. Spectrochim. Acta Bagian A: Mol Biomol
Spectros 2015; 137: 1244-1249.
Rohman A. Penerapan Fourier Transform Infrared Spectroscopy untuk
Quality Control Produk Farmasi: Sebuah Tinjauan. J Pharm Indonesia 2012; 23: 1-8.
Rohman A, Sudjadi D, Ramadhani D, Nugroho A. Analisis Kurkumin di
Curcuma longa dan temulawak Menggunakan FTIR Spektroskopi dan kemometrika. Res
J Med Plant, 2015; 9: 179-186.
Singh R, Chandra R, Bose M, Luthra PM. aktivitas antibakteri Curcuma longa
ekstrak rimpang pada bakteri patogen. Saat Sci, 2002; 83: 737-740.
Syed HK, Liew KB, Loh gok, Peh KK. Stabilitas menunjukkan metode HPLC-UV
untuk mendeteksi kurkumin dalam ekstrak longa Curcuma dan formulasi emulsi. Makanan
Chem 2015; 170: 321-326.
Tanaka K, Kuba Y, Sasaki T, Hiwatashi F, Komatsu K. Penghitungan
kurkuminoid dalam temulawak rimpang dengan analisis spektroskopi inframerah dekat. J
Agric Food Chem 2008; 56: 8787-8792.
Departemen Kesehatan, Republik Indonesia. 2008. Farmakope Herbal
Indonesia. 1 st Ed. Jakarta: Kemenkes.
Wichitnithad W, Jongaroonngamsang N, Pummangura S, Rojsitthisak P.
Sebuah metode HPLC isokratik sederhana untuk penentuan simultan dari kurkuminoid
dalam ekstrak kunyit komersial. Phytochem Anal, 2009; 20: 314-319.
Wickenberg J, Ingemansson SL, Hlebowicz J. Pengaruh Curcuma longa
(kunyit) pada glukosa plasma postprandial dan insulin pada subyek sehat. Nutr J, 2010; 9:
1-5.
Wilken R, Veena MS, Wang MB, Srivatsan ES. Kurkumin: Sebuah tinjauan sifat
anti-kanker dan aktivitas terapeutik pada kepala dan leher karsinoma sel skuamosa. Mol
Kanker, 2011; 10: 1-19.
Bagaimana mengutip artikel ini:
Wulandari R, Sudjadi, Martono S, Rohman A. Liquid Chromatography dan
Fourier Transform Infrared Spectroscopy untuk analisis kuantitatif
kurkuminoid individu dan total
Curcuma longa ekstrak. J App Pharm Sci, 2018; 8 (09): 107-113.