Estimasi interval post-mortem untuk kasus tenggelam dengan

menggunakan lalat (Diptera) di Cina Tengah-Selatan: Implikasi untuk

entomologi forensik
Liu Ying, Chen Yaoqing, Guo Yadong, Zha Lagabalyila, Li Longjiang

Abstrak : Area entomologi forensik telah berkembang menjadi aspek yang semakin
penting dari ilmu forensik. Larva serangga dan serangga dewasa yang ditemukan pada
mayat manusia dapat memberikan informasi penting untuk estimasi interval post-
mortem (PMI). Pada Juli 2010, mayat wanita yang membusuk ditemukan di Sungai
Xiangjiang, Changsha. Larva utama yang ditemukan pada mayat diidentifikasi
Boettcherisca peregrina (Robineau-Desvoidy) dengan pengamatan morfologis dan
kemudian dikonfirmasi oleh urutan DNA mitokondria. Berdasarkan bukti entomologis
yang diperoleh secara eksperimental, PMI betina disimpulkan antara 90 dan 120 jam.
Namun, laporan saksi mata akhirnya mengkonfirmasi bahwa waktu yang berlalu sejak
kematian adalah 128 jam. Kasus ini menunjukkan bahwa estimasi PMI dalam hal
periode aktivitas serangga (PIA) sangat rumit dan menyangkut banyak faktor seperti
karakteristik spesies serangga, cuaca dan musim, wilayah geografis. Interaksi antara ahli
entomologi forensik dan ahli patologi dalam kasus kematian di mana serangga terkait
dengan sisa harus didorong.
Kata Kunci: ilmu forensik, entomologi forensik, interval post-mortem, Boettcherisca
peregrina, tenggelam, DNA mitokondria.

Entomologi forensik adalah bidang luas di mana ilmu arthropoda dan sistem
peradilan berinteraksi [1]. Ketika larva (belatung) lalat nekrofag menginfestasi mayat
manusia, tahap perkembangan mereka dan penentuan spesies mereka dapat digunakan
untuk memperkirakan interval post-mortem minimum (mPMI) mayat. Di Cina,
terjadinya serangga yang berhubungan dengan bangkai diketahui termasuk lalat dipteran
seperti Sarcophagidae, Calliphoridae dan Muscidae. Spesies bangkai yang berkaitan
erat secara substansial dapat berbeda dalam tingkat pertumbuhan, respons diapause,
atau kebiasaan ekologis [2]. Identifikasi akurat dari serangga yang dikumpulkan dari
mayat adalah persyaratan penting untuk investigasi forensik. Namun, identifikasi
spesies yang tepat dan cepat berdasarkan kunci morfologis pada tahap imatur sangat
sulit bagi hampir semua ilmuwan forensik dalam pekerjaan rutin mereka di Cina [3].
Metode berbasis DNA dapat digunakan sebagai sarana tambahan metode morfologis
dalam identifikasi spesies, karena dapat dilakukan pada setiap tahap siklus hidup tanpa
membesarkan lebih lanjut dan pada sampel mati, diawetkan atau hidup [4].
Keuntungan utama terhadap metode standar untuk penentuan PMI awal adalah
bahwa arthropoda dapat mewakili ukuran yang akurat bahkan pada tahap akhir PMI
ketika metode patologis forensik klasik gagal [5, 6]. Studi kasus yang menunjukkan
kemampuan ahli entomologi untuk memperkirakan PMI secara akurat telah diterbitkan
dalam buku [7], artikel penelitian [8, 9]. Usia larva ditentukan dengan membandingkan
ukuran atau tahap perkembangannya dengan data pertumbuhan yang dipublikasikan dari
larva dari spesies yang sama pada suhu yang sama atau mirip dengan tempat kematian.
Namun, prediksi PMI berbasis arthropoda diakui terkait dengan sejumlah asumsi, yang
dapat menyebabkan penyimpangan parah dari PMI yang benar jika dilanggar [10].
Dalam penelitian ini, kami menyajikan rincian kasus di Hunan (China tengah-
selatan) pada Juli 2010. Larva yang paling banyak ditemukan pada mayat diidentifikasi
sebagai Boettcher Isca peregrina (Robineau-Desvoidy) dengan pengamatan morfologis
dan kemudian dikonfirmasi oleh mitokondria DNA (mtDNA) sitokrom oksidase
mensubstitusi satu (COI) urutan. Kami telah melakukan percobaan PMI di Changsha
dengan membuang bangkai hewan selama 5 tahun berturut-turut (2007 hingga 2011).
Meskipun PMI ditunjukkan dengan merujuk pada percobaan sebelumnya yang telah
dilakukan dalam keadaan yang serupa, hasilnya ternyata tidak memuaskan. Di satu sisi,
estimasi PMI untuk kasus tenggelam lebih kompleks. Di sisi lain, bagaimana mengubah
bukti serangga menjadi standar dan target untuk mengukur waktu sejak kematian masih
membutuhkan upaya besar bagi para sarjana yang bekerja di bidang forensik.

Laporan Kasus
 Seperempat hingga pukul sepuluh pagi, pada 23 Juli 2011, mayat seorang wanita
berusia 35 tahun ditemukan di bagian Sungai Xiangjiang di Changsha (112,17 ° BT,
28,28 ° BT). Sungai bagian ini lebarnya sekitar 150 m dan mengalir perlahan dari
selatan ke utara. Almarhum berbaring di sebelah tepi timur, yang miring pada sudut 45
derajat. Tepiannya tertutup oleh vegetasi yang jarang dan tidak ada tanda aktivitas
manusia yang jelas. Mayatnya mengenakan T-shirt biru dan jins biru. Mayat itu sangat
membusuk dan tidak ada luka tusukan fatal yang diamati. Kepala sebagian besar
berbentuk kerangka, sementara kulit dada, perut, pantat, dan anggota tubuh bagian
bawah ganda pada dasarnya utuh. Tidak ada puparium yang ditemukan di tempat
kejadian. Jenazah diangkut ke rumah duka setempat untuk pemeriksaan forensik dan
otopsi. Larva serangga ditemukan di mayat, dan khususnya di bagian belakang dan
larva dikumpulkan. Aktivitas larva menyebabkan jaringan belakang menjadi berlubang.
Menurut autopsi forensik dan uji diatom, penyebab kematian didiagnosis tenggelam,
sedangkan estimasi PMI membingungkan para peneliti.

Estimasi PMI
Larva dikumpulkan dari mayat selama otopsi. Tiga puluh larva instar ketiga
dipilih secara acak. Larva ini bervariasi dari 11 mm hingga 17 mm. Lima belas dari
mereka dibawa kembali ke laboratorium dan diidentifikasi sebagai Boettcherisca
peregrina (n = 11, panjang rata-rata = 15,5 mm, kisaran 14-17 mm) dan Chrysomya
megacephala (n = 4, panjang rata-rata = 11,5 mm, kisaran 11-12 mm ) menggunakan
kunci morfologis [11, 12]. Spesimen diamati di bawah stereomicroscope untuk
mengidentifikasi spesies berdasarkan kait mulut, pita tulang belakang, spirakel anterior
dan posterior. Lima belas larva lainnya juga diidentifikasi sebagai Boettcherisca
peregrina dan Chrysomya megacephala menggunakan kunci morfologi. Kemudian
DNA sampel diekstraksi menggunakan kolom jaringan QIAamp (Qiagen Inc., Valencia,
CA) mengikuti instruksi pabrik. Segmen COI 272-bp diamplifikasi dan diurutkan untuk
sampel DNA dari semua belatung yang tersisa. Primer dan kondisi amplifikasi PCR
yang digunakan dijelaskan dalam [13]. Urutan yang dihasilkan dibandingkan dengan
urutan Diptera di situs web NCBI oleh fungsi Blast dan hasilnya konsisten dengan
identifikasi morfologi. Urutan perwakilan telah disimpan di GenBank oleh Sequin
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Sequin/index.html) dan nomor aksesi mereka tercantum
di sini (JF416536, HM016680, GU145202, GU145212, GU145209, HM016676,
FJ746479). Hasilnya akan berperan penting untuk implementasi database serangga
Cina.
PMI dari kasus ini terdiri dari tiga periode sebagai I, II dan III. Periode I dimulai
dari betina yang terendam air hingga muncul kembali. Periode II dimulai dari tubuh
yang muncul dari air hingga lalat pertama yang mencapai tubuh dan bertelur atau larva
di atasnya. Periode III adalah periode aktivitas serangga (PIA), yang didefinisikan
sebagai waktu dari kolonisasi serangga hingga penemuan sisa-sisa [10]. Catatan cuaca
di wilayah itu adalah rata-rata harian 32 C dan kelembaban relatif 70% dalam beberapa
hari terakhir (Sumber: situs web Administrasi Meteorologi Tiongkok [CMA]),
sedangkan suhu air rata-rata harian 24oC (Sumber: Biro hidrologi Kota Changsha situs
web).
Waktu yang dibutuhkan tubuh untuk keluar dari air terutama tergantung pada
suhu air dan biasanya berkurang dengan kedalaman [14]. Kami telah melakukan
percobaan PMI di wilayah yang sama dengan membuang bangkai hewan. Dengan suhu
yang cukup hangat (ketika suhu udara rata-rata adalah 32oC dan suhu air rata-rata
adalah 24oC), seperti halnya untuk Sungai Xiangjiang pada bulan Juli, sebuah benda
diperkirakan akan muncul ke permukaan dalam waktu 18 hingga 30 jam [15]. Estimasi
Periode II saat ini bermasalah, periode ini umumnya diabaikan dalam literatur [16].
Menurut penelitian sebelumnya [15, 17-19], dibutuhkan setidaknya 96 jam untuk
Boettcherisca peregrina untuk berkembang menjadi 17 mm instar ketiga pada suhu
pengembangbiakan konstan 28 ° C, sementara itu dibutuhkan setidaknya 83 jam untuk
Chrysomya megacephala untuk berkembang hingga 12 mm dari instar ketiga pada
kondisi yang sama. Berdasarkan data di atas, PMI wanita disimpulkan antara 101 dan
126 jam.
Menurut perkiraan PMI ini, ruang lingkup investigasi dipersempit dan segera
laporan saksi mata menunjukkan bahwa waktu wanita berlalu sejak kematian sekitar
119 hingga 121 jam. Pukul setengah delapan pagi, pada 18 Juli, seorang nelayan
melihat almarhum berbicara di telepon seluler di tepi sungai dan dia menghilang
setengah jam kemudian. Seorang teman almarhum mengkonfirmasi bahwa ponselnya
telah dimatikan sejak pukul sebelas pada 18 Juli.

Diskusi
Dewan Riset Nasional A.S. mengeluarkan laporan pada tahun 2009 yang sangat
mengkritik ilmu forensik [20]. Dalam banyak masalah yang dihadapi dalam ilmu
forensik, PMI sangat penting namun sulit untuk diperkirakan. Hingga saat ini, tidak ada
metode yang objektif dan akurat yang ditawarkan untuk estimasi PMI, terutama untuk
tahap akhir setelah kematian dan mayat yang membusuk. Fakta bahwa serangga dan
artropoda lainnya berkontribusi pada penguraian mayat dan bahkan dapat membantu
menyelesaikan pembunuhan telah diketahui selama bertahun-tahun. Dengan
menghitung tahap perkembangannya, lalat berguna dalam memperkirakan mPMI,
namun, kita harus ingat bahwa mPMI ini bukan PMI yang sebenarnya.
PMI nyata dapat dibagi menjadi 2 periode - interval pra-kolonisasi (pra-CI) dan
interval pasca-kolonisasi (pasca-CI) [10]. Dalam hal ini, pra-CI mencakup periode I dan
II, sedangkan post-CI berhubungan dengan periode III. Dibandingkan dengan kasus-
kasus umum, situasi di sini agak berbeda dan lebih sulit untuk ditafsirkan, karena tubuh
telah berada di bawah air selama beberapa waktu dan muncul dalam keadaan fisiologis
yang berbeda daripada yang akan terjadi jika korban baru saja terbunuh beberapa menit
sebelumnya dan tidak pernah terpapar. ke air. Selain suhu air, faktor-faktor lain yang
mempengaruhi laju dekomposisi dalam air termasuk kandungan bakteri dan salinitas
[1]. Mayat yang terendam dalam air yang cukup hangat dan eutrofik seperti Sungai
dalam kasus ini akan terurai lebih cepat daripada mayat di air yang relatif lebih dingin
dengan jumlah bakteri yang lebih rendah [14]. Tentu saja, berat tubuh dan pakaian juga
harus dipertimbangkan.
Dalam kondisi lingkungan yang berbeda, tahap pra-CI berlangsung beberapa
menit hingga berjam-jam, atau bahkan berhari-hari. Hanya ada sejumlah asumsi dan
tebakan untuk periode ini [21]. Pemahaman pra-CI masih dangkal, sehingga estimasi
periode Ⅱ saat ini bermasalah dan kita harus mengabaikannya dalam kasus ini.

Faktanya, dalam hal ini periode aktivitas serangga lebih tepat mengindikasikan panjang
minimum waktu tubuh muncul kembali (Periode II dan III). Air adalah salah satu faktor
utama untuk mencegah akses tubuh terhadap serangga, oviposisi dan perkembangan
selanjutnya dari larva serangga. Selama mengapung, jika mayatnya dekat dengan tanah,
ia dapat dengan mudah didahului oleh serangga darat seperti dalam studi kasus ini.
Pengamatan ini telah dijelaskan dengan baik dalam penelitian sebelumnya [22, 23].
Namun, jika tahap pra-CI harus diabaikan dalam setiap kasus, kami tidak dapat
menyangkal bahwa akan ada penyimpangan parah dari PMI sejati dalam beberapa
kasus. Oleh karena itu, bagaimana menetapkan metode ilmiah yang obyektif, dapat
direproduksi, untuk estimasi tahap pra-CI menjadi masalah sulit lainnya dari
entomologi forensik yang harus dipecahkan.

Periode Ⅲ adalah periode aktivitas serangga, yang akan mencerminkan periode

waktu minimum sejak kematian atau PMI tetapi tidak akan secara tepat menentukan
waktu kematian. Kita bisa mendapatkan penentuan yang relatif tepat tentang tahap
perkembangan lalat dan perhitungan durasi perkembangan sebelum tahap ini untuk
memperkirakan PMI, berdasarkan fitur perkembangan lalat dan kondisi lingkungan
[24]. Identifikasi yang akurat dari spesimen serangga biasanya merupakan langkah
pertama yang penting dalam analisis entomologi forensik. Meskipun B. peregrina dapat
diidentifikasi dengan kunci morfologis, karakter anatomi diagnostik-spesies tidak
dikenal untuk tahap imatur banyak serangga penting forensik, dan kunci yang ada
mungkin tidak lengkap atau sulit untuk digunakan oleh non-spesialis. Fragmen 272-bp
dari gen COI mitokondria dalam kasus ini menunjukkan bahwa metode berbasis DNA
dapat digunakan sebagai sarana tambahan untuk metode morfologis dalam
mengidentifikasi lalat penting forensik Cina yang umum.
Secara umum, spesies calliphorid adalah yang pertama kali menemukan dan
oviposit pada mayat, dan merupakan spesies dominan yang ditemukan pada mayat
di Tiongkok [25]. Namun, B. peregrina, yang merupakan spesies sarkofagid paling
luas yang terkait dengan mayat di Cina, adalah spesies dominan dalam kasus ini
menurut bukti entomologis. Potensi sarkofagid untuk estimasi PMI telah
ditunjukkan dengan baik dalam banyak Studi [26, 27]. Dalam hal ini, meskipun
punggung betina sepenuhnya dibungkus oleh T-shirt birunya, daging betina lalat B.
peregrina deposit larva instar pertama hidup pada penguraian dan larva bisa tiba
ke jaringan belakang dalam waktu singkat setelah mereka disimpan. Selain itu B.
peregrina dapat terbang dalam kondisi buruk yang akan mencegah Calliphoridae,
sehingga dalam hal ini, mungkin merupakan spesies pertama yang tiba dengan
bangkai.
Secara umum diterima bahwa sebenarnya tidak ada cara ilmiah untuk secara
tepat menentukan periode waktu yang tepat sejak kematian [10]. Apa yang
dilakukan dalam kasus entomologi adalah perkiraan periode aktivitas serangga
pada tubuh. Periode aktivitas serangga ini akan mencerminkan periode waktu
minimum sejak kematian atau PMI tetapi tidak akan secara tepat menentukan

waktu kematian. Estimasi periode Ⅱ saat ini bermasalah, yang menghambat

penerapan entomologi forensik. Bagaimana mengubah pencapaian ini menjadi

standar dan target untuk mengukur waktu sejak kematian masih membutuhkan
upaya besar bagi para sarjana yang bekerja di bidang forensik. Peneliti forensik
telah mendorong interaksi antara ahli forensikentom dan patologis dalam kasus
kematian di mana serangga dikaitkan dengan sisa-sisa [2, 28-29]. Bahkan, ahli
patologi forensik biasanya memiliki otoritas hukum untuk mengambil alih mayat
di tempat kejadian dan mereka bertanggung jawab untuk menentukan PMI serta
penyebab dan cara kematian. Di sisi lain, ahli entomologi forensik bertanggung
jawab untuk menentukan periode aktivitas serangga. Kerjasama antara dua
profesional ini sangat disarankan oleh ahli entomologi forensik.

Reference:
1. Byrd JH, Castner JL, editors. The utility of arthropods in legal investigations. Boca Raton, FL: CRC
Press, 2001.
2. Amendt J, Richards CS, Campobasso CP, Zehner R, Hall MJR. Forensic entomology: applications and
limitations. Forensic Science Medicine and Pathology. 2011; 7:379–392.
3. Guo YD, Cai JF, Chang YF, LiX, Liu QL, Wang XH, Wang X, Zhong M, JF Wen, Wang JF. Identification of
forensically important sarcophagid flies (Diptera: Sarcophagidae) in China, based on COI and 16S
rDNA gene sequences. J Forensic Sci. 2011; 56:1534-1540.
4. Wells JD, Stevens JR. Application of DNA-Based Methods in Forensic Entomology. Ann Rev Entomol.
2008; 53:103–120.
5. Benecke M. Forensic entomology: arthropods and corpses. In: Tsokos M (ed.) Forensic Path Rev Vol
II, Humana Press, Totowa (NJ,USA), 2004, P.207-240.
6. Benecke M. A brief survey of the history of forensic entomology . Acta Biologica Benrodis. 2008; 14:
15-38.
7. Goff ML, editor. A Fly for the Prosecution: How Insect Evidence Helps Solve Crimes. Cambridge, MA:
Harvard Univ. Press, 2000.
8. Arnaldos MI, Garcia MD, Romera E, Presa JJ, Luna A. Estimation of postmortem interval in real cases
based on experimentally obtained entomological evidence. Forensic Sci Int. 2005; 149:57 –65.
9. Huntington TE, Higley LG, Baxendale FP. Maggot development during morgue storage and its effect
on estimating the post-mortem interval. J Forensic Sci. 2007; 52:453–458.
10. Tomberlin JK, Mohr R, Benbow ME, Tarone AM, VanLaerhoven S. A roadmap for bridging basic and
applied research in forensic entomology. Ann Rev Entomol. 2011; 56:401-21.
11. Lu BL, Wu HY, editors. Classification and identification of important medical insects of China. China:
Henan science and technology press, 2003.
12. Fan Z, editor. Key to the common flies of China. China: Science Press, 1992.
13. GuoYD, Cai JF, Meng FM, Chang YF, Gu Y, Lan LM, Liang L, Wen JF. Identification of forensically
important flesh flies based on a shorter fragment of the cytochrome oxidase subunit I gene in China.
Med Vet Entomol. 2012; 26:307-313.
14. Haglund WD and Sorg MH, editors. Forensic taphonomy: the postmortem fate of human remains. CRC
Press LLC, Boca Raton, FL, 1997.
15. Cai JF, editor. Modern and Practical Forensic Entomology. People’s Medical Publishing House, Beijing,
2011.
16. Parmenter RR, MacMahon JA. Carrion decomposition and nutrient cycling in a semiarid shrub–steppe
ecosystem. Ecological Monographs. 2009; 79:637-61.
17. Hu C, Min JX, editors. Forensic Entomology. Chongqing, China: Chongqing Publishing House, 2000.
18. Chen LS, Xu Q, Shi F. Estamation time of death by necrophagous flies life cycle. Fa Yi Xue Za Zhi 2012;
26:332-5.
19. Wang HY, Shi YW, Liu XS, Zhang RJ. Growth and development of Boettcherisca peregrina under
different temperature conditions and its significance in forensic entomology. Journal of
Environmental Entomology 2010; 32:166- 72. (Chines e)
20. Tomberlin JK, Benbow ME, Tarone AM, Mohr RM. Basic research in evolution and ecology enhances
forensics. Trends Ecol Evol. 2011;26:53-55.
21. Mozayani A, Noziglia C, editors. The Forensic Laboratory Handbook Procedures and Practice.
Springer Science+Business Media, LLC, 2011.
22. Mann RW, Bass WM, Meadows L. Time since death and decomposition of the human body: variables
and observations in case and experimental studies. J Forensic Sci. 1990; 35: 103-1 11.
23. Campobasso CP, Di Vella G, Introna F. Factors affecting decomposition and Diptera colonization.
Forensic Sci Int. 2001; 120: 18-27.
24. Baqué M, Amendt J. Strengthen forensic entomology in court--the need for data exploration and the
validation of a generalized additive mixed model. Int J Legal Med. 2013; 127:213-223.
25. Wang JF, Li ZG, Chen YC, Chen QS, Yin XH. The succession and development of insects on pig carcasses
and their significance in estimating PMI in south China. Forensic Sci Int.. 2008; 179:11-18.
26. Meiklejohn KA, Wallman JF, Dowton M. DNA barcoding identifies all immature life stages of a
forensically important flesh fly (Diptera: Sarcophagidae). J Forensic Sci. 2013; 58:184-187.
27. Cherix D, Wyss C, Pape T. Occurrences of flesh flies (Diptera: Sarcophagidae) on human cadavers in
Switzerland, and their importance as forensic indicators. Forensic Sci Int. 2012; 220: 156-163.
28. Campobasso CP and Introna F. The forensic entomologist in the context of the forensic pathologist's
role. Forensic Sci Int. 2001;120: 132-139.
29. Amendt J, Campobasso CP, Gaudry E, Reiter C, LeBlanc HN, Hall MJ. Best practice in forensic
entomology--standards and guidelines. Int J Legal Med. 2007; 121:90-104 .