UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PRÁCTICA 3

MÉTODOS DE CONTROL QUÍMICO Y FÍSICO-ESTERILIZACIÓN (PARTE

II)

1. OBJETIVOS
1.1.Conocer y utilizar los procesos de esterilización para evitar la contaminación
cruzada.
1.2.Conocer la técnica aséptica de uso en los laboratorios microbiológicos y
bioquímicos

2. TEORÍA
2.1.Esterilización
2.1.1. Definición
Es un proceso en el cual se alcanza la muerte de todas las muertes
microbianas, incluyendo bacterias y sus formas esporuladas altamente
resistente, hongos y sus esporos, y virus. (P. Roca, 2003)
2.1.2. Fundamentos de esterilización
Consiste en la eliminación de los microorganismos existentes en un
sistema. El objetivo es obtener materiales y medios aptos para la siembra
de microorganismo a analizar. (K. Mathews, 2002)
2.1.3. Tipos de esterilización (Físicos y Químicos)
Método físico
 Calor Húmedo: El calor húmedo produce desnaturalización y
coagulación de proteínas. (K. Mathews, 2002)
 Calor seco: El calor seco produce desecación de la célula, es esto
tóxicos por niveles elevados de electrolitos, fusión de
membranas. (K. Mathews, 2002)
 Ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las
bases de los ácidos nucleicos, estructuras proteicas y lipídicas, y
componentes esenciales para la viabilidad de los
microorganismos. (K. Mathews, 2002)
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Método húmedo
 Con óxido de etileno: Es un agente alquilante que se une a
compuestos con hidrógenos lábiles como los que
tienen grupos carboxilos, amino, sulfhídricos, hidroxilos, etc.
(P. Roca, 2003)
 Con aldehídos: Son agentes alquilantes que actúan sobre
las proteínas, provocando una modificación irreversible
en enzimas e inhiben la actividad enzimática. Estos compuestos
destruyen las esporas. (P. Roca, 2003)
 Esterilización por gas-plasma de Peróxido de Hidrógeno:
Es proceso de esterilización a baja temperatura la cual consta en
la transmisión de peróxido de hidrógeno en fase plasma (estado
entre líquido y gas), que ejerce la acción biocida. (P. Roca, 2003)
2.1.4. Controles de calidad de esterilización
Los controles de esterilización son importantes para comprobar el
funcionamiento correcto de cualquier método de esterilización. Esto es
debido a la importancia del uso material esterilizado, para certificar la
calidad del proceso se emplean controles de esterilización de diversos
tipos: físico, químico y biológico. (M. Devlin, 2004)
 Controles físicos: son implícitos del propio aparataje y se pueden
comprobar con aparataje auxiliar. Si existe algún indicador o
parámetro que no ha alcanzado los valores estipulados, el ciclo se
desecha. El material de dicho ciclo deberá ser esterilizado de
nuevo. (M. Devlin, 2004)
 Controles químicos: están basados en indicadores colorimétricos.
Son tiras reactivas compuestas de franjas con tintas reactivas,
compuestas por sales metálicas, que cambian de color. (M. Devlin,
2004)
 Controles biológicos: se consideran el único medio de garantía
para confirmar la esterilización. Aun así, conviene apoyarlos con
los controles físicos y químicos para garantizar, aún más, la
eficacia de la esterilización. (M. Devlin, 2004)
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2.2.Equipos de esterilización
2.2.1. Autoclave
2.2.2. Estufa
2.2.3. Cámara de flujo laminar
2.2.4. Mechero Bunsen
2.2.5. Baño maría
2.3.Materiales comunes en laboratorio de microbiología
3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Materiales y Equipos
3.1.1. Autoclave
3.1.2. Estufa
3.1.3. Mechero de alcohol
3.1.4. Varilla de vidrio
3.1.5. Frascos autoclavables
3.1.6. Cajas petri
3.1.7. Matraces Erlenmeyer R: (0-250) [mL]
3.1.8. Asa de cultivo
3.1.9. Aguja de cultivo
3.1.10. Papel empaque
3.1.11. Piola delgada

3.2.Sustancias y Reactivos
3.2.1. Agua destilada 𝐻2 𝑂(𝑙)
3.2.2. Alcohol 𝐶2 𝐻6 𝑂(𝑎𝑐)

3.3.Procedimiento
ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL
3.3.1. PARTE A: Autoclave
CARGA DE DEPÓSITO DE AGUA:
3.3.1.1.El nivel del agua debe estar como máximo a 2cm de la base de la
válvula de seguridad.
3.3.1.2.La carga del agua del autoclave es de 350ml debe ser incrementada
por el frente del autoclave.
3.3.1.3.Sus laterales y tapa trasera deben estar despejados como mínimo
25mm para su correcta ventilación.
3.3.1.4.El agua deber ser agua destilada o estéril para evitar problemas de
corrosión en el equipo.
3.3.1.5.El tamaño y la densidad de los paquetes deberá ser tal que permita
una penetración uniforme y completa del vapor, con un apreciable
margen de seguridad, en un tiempo promedio de 15 minutos a una
temperatura de 121°C.

3.3.2. PARTE B: Estufa eco line

3.3.2.1.Mantener conectado el equipo a un tomacorriente estándar de 110V

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3.3.2.2.Encender el equipo presionando el PULSADOR e editar programa

3.3.2.3.Fijar la temperatura de operación y el tiempo presionando editar
programa.
3.3.2.4.Abrir la puerta metálica de la estufa halando la perilla delantera
3.3.2.5.Colocar el material a esterilizar dentro del equipo sobre las
bandejas
3.3.2.6.No colocar las bandejas pegadas a la pared del fondo de la
incubadora, dejar un espacio de 1cm para que el aire circule
fácilmente
3.3.2.7.Cerrar la puerta asegurando la con la perilla delantera

3.3.3. PARTE C: Esterilización del medio de trabajo

3.3.3.1.Lavarse las manos con jabón

3.3.3.2.Colocarse los guantes y desinfectarlos con alcohol
3.3.3.3.Limpiar el área de trabajo con alcohol
3.3.3.4.Colocar el papel empaque sobre el área de trabajo
3.3.3.5.Colocar los mecheros en la mitad de área de trabajo para mantener
un área estéril ( Radio=15cm).
3.3.3.6.Encender el mechero y seguir con la parte D

3.3.4. PARTE D: Mechero y esterilización de asa y aguja de cultivo

3.3.4.1.Encender el mechero
3.3.4.2.Poner en contacto directo el asa de cultivo hasta que adquiera una
tonalidad de rojo vivo que indicará esterilización (realizarlo antes
y después de su uso)
3.3.4.3.Realizar el procedimiento anterior para la aguja de cultivo.
3.3.4.4.Apagar el mechero, retirar el papel y dejar limpia el área.

6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
6.1.Citas bibliográficas
 (P. Roca, 2003)
 (M. Devlin, 2004)
 (K. Mathews, 2002)

6.2.Bibliografía
 T. M. Devlin (2004) Bioquímica. Libro de Texto con Aplicaciones
Clínicas. 4ª edición. Editorial Reverté S.A.
 C.K. Mathews, K.E. Van Holde y K.G. Ahern (2002) Bioquímica. 3ª
Edición. Pearson Educación.
 P. Roca, J. Oliver y A.M. Rodríguez (2003) Bioquímica. Técnicas y
Métodos. Editorial Hélice.