RESULTS

Keberhasilan barcode DNA

Pemulihan barcode DNA dari berbagai produk herbal berhasil. Kode batang DNA
berkualitas tinggi diperoleh untuk wilayah rbcL dan ITS2 untuk 100% dari 100
spesies herbal yang dilindungi (Ontario Agricultural College Herbarium), yang
berfungsi sebagai perpustakaan barcode herbal SRM berkualitas tinggi. Perpustakaan
ini menyediakan database yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi haplotype
(barcode) yang tidak dikenal yang dipulihkan dari produk herbal. Pohon klasifikasi
SRM (Gambar 1) menunjukkan bahwa semua spesies herbal memiliki resolusi spesies
100%, dengan masing-masing spesies menyajikan setidaknya satu perbedaan
diagnostik dari takson lain dan membentuk clade monofiletik (Gambar 1). Tingkat
keberhasilan barcode DNA produk herbal adalah 91% (40/44 produk) untuk wilayah
gabungan, menghasilkan pemulihan 34 rbcL dan 40 urutan ITS2. Resolusi spesies
untuk barcode yang dipulihkan dari produk herbal adalah 66% (rbcL) dan 93% (ITS2).
Resolusi rendah dalam rbcL diharapkan, karena diketahui memiliki variabilitas urutan
nukleotida yang tidak memadai untuk membedakan antara spesies yang terkait erat.
Tiga spesies yang tidak terselesaikan dengan ITS2 disebabkan oleh tiga sampel yang
memiliki substitusi produk dengan spesies yang tidak ada di perpustakaan SRM kami;
barcode spesies yang tidak diketahui ini cocok dengan famili dan genus terdekat.
Kami juga mem-barcod sampel daun herbal berlabel buta yang dikumpulkan dari
sampel hidup dari rumah kaca hortikultura. Ini memberikan tes independen terhadap
kemampuan barcode untuk membedakan semua spesies pada label produk herbal.
Resolusi spesies untuk barcode yang diambil dari sampel daun herbal adalah 57%
(rbcL) dan 100% (ITS2), dengan kecocokan sempurna untuk perpustakaan barcode
SRM herbal menggunakan BLAST.
Gambar 1 Standar referensi bahan (SRM) pohon konsensus pustaka barcode herbal
(MP-ratchet analysis) untuk data barcode gabungan dari rbcL dan ITS2 dari 100
spesies herbal dari sumber yang diketahui yang telah diidentifikasi oleh para pakar
taksonomi.
Otentikasi: adalah spesies herbal pada label yang ditemukan diproduk?
Apa yang tercantum pada label produk herbal tidak selalu apa yang ditemukan di
dalam produk. Kode batang DNA mampu mengotentikasi 48% dari produk yang diuji
(Gambar 2). Namun, sebagian besar (59%) dari produk herbal yang diuji mengandung
spesies tanaman yang tidak tercantum pada label (Gambar 2). Beberapa (33%) dari
produk herbal asli juga mengandung kontaminan dan atau pengisi yang tidak
tercantum pada label (Gambar 2). Beberapa sekuens DNA yang dipulihkan hanya
diidentifikasi untuk keluarga karena pustaka barcode DNA herbal SRM kami belum
lengkap (lihat catatan di atas). Namun, pustaka barcode SRM yang tidak lengkap
masih memungkinkan identitas yang benar secara hierarkis untuk keluarga dan genera
tergantung pada tingkat kecocokan terbaik dalam pohon klasifikasi. Beberapa
kontaminan berasal dari spesies yang tidak terkait dari keluarga tumbuhan yang sama
sekali berbeda (Tabel 1). Meskipun banyak perusahaan herbal (75%) yang produknya
kami uji memiliki beberapa produk asli, hanya 2 dari 12 perusahaan yang
menyediakan produk asli tanpa substitusi, kontaminan atau pengisi. Sebaliknya, kami
tidak dapat mengotentikasi salah satu produk untuk 25% perusahaan (Gambar 3).
Walaupun angka-angka ini menjelaskan jumlah perusahaan dengan produk autentikasi,
kami hanya mengambil sampel tiga atau empat produk per perusahaan dan oleh
karena itu perbedaan di antara perusahaan kemungkinan karena kebetulan.
Pergantian: adalah bahan herbal utama yang diganti beberapa spesies lain?
Analisis barcode kami dari 44 produk herbal yang mewakili 30 spesies tanaman obat
mengidentifikasi substitusi produk di 32% dari sampel (Gambar 2; Tabel 1). Kriteria
yang kami gunakan untuk menentukan substitusi produk adalah identitas taksa
tanaman lain sebagai pengganti bahan berlabel utama produk, yang TIDAK terdeteksi
dalam sampel. Kami mendeteksi substitusi produk dalam sebagian besar (83%) dari
12 perusahaan yang kami uji (Gambar 3). Perlu dicatat bahwa untuk 90% spesies
herbal dalam penelitian ini, terdapat produk dari setidaknya satu perusahaan yang
menghasilkan identitas yang benar (menunjukkan produk asli). Ini adalah konfirmasi
bahwa pemrosesan bukan halangan untuk memulihkan barcode. Juga harus dicatat
bahwa kami mencicipi setiap produk secara intensif tanpa penggantian; banyak
sampel per produk diekstraksi dan di-barcode untuk memastikan kami tidak
melewatkan DNA spesies apa pun. Karena ini hanya produk herbal bahan tunggal,
kami tidak berharap untuk mendeteksi lebih dari satu barcode spesies tanaman kecuali
itu adalah kontaminan. Pengambilan sampel intensif kami menghasilkan maksimum
dua barcode spesies per produk herbal yang salah satunya adalah spesies produk
herbal yang benar atau pengganti, dan yang lainnya adalah pengisi atau kontaminan.

Pengisi: apakah ada pengisi yang tidak berlabel yang digunakan dalam produk herbal?
Beberapa produk herbal mengandung pengisi yang tidak tercantum pada label.
Definisi kami terbatas pada deteksi barcode DNA dari O. sativa dan G. max. Spesies
pengisi ini terdeteksi dalam 21% dari produk. Kami juga mendeteksi rumput dalam
sampel, yang juga termasuk gandum (Triticum spp.). Tidak diketahui apakah tanaman
ini sengaja digunakan sebagai pengisi atau apakah mereka kontaminan; saat ini kami
sedang menyelidiki penggunaan pengisi dalam pemrosesan oleh masing-masing
perusahaan. Dalam 9% dari sampel hanya beras atau barcode gandum yang terdeteksi;
tidak ada barcode yang terdeteksi untuk spesies herbal pada label. Penggunaan pengisi
terbatas pada sepertiga perusahaan yang produknya kami uji (Gambar 3).