TINCION GRAM

La tinción de Gram es una técnica de laboratorio que permite identificar distintos tipos
de bacterias según se coloree su superficie, aportando información muy útil para
orientar el tratamiento antibiótico.
La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es una técnica de
laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos de las bacterias.
Fue diseñada por Christian Gram, un científico danés, en el año 1884. El objetivo de
Gram era conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de
bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba resultó todo un éxito y
pronto se convirtió en una técnica muy útil no solo para el estudio de las bacterias, sino
también para poder identificarlas rápidamente en una infección y seleccionar
el antibiótico más adecuado para tratarla.

La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen
(esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los
colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza
un lavado del colorante. Después de eso puede que el colorante permanezca en la pared
bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecería el color morado, y se trataría
de bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un color rosado, y
serían Gram negativas.

Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la clasificación de la
amplía mayoría de las bacterias. Cada uno de los grupos responde de forma diferente a
cada tipo de antibióticos, por eso es una técnica útil para seleccionar el fármaco
antimicrobiano inicial ante una infección. Hay que tener en cuenta que en ciertas
situaciones (como la sepsis) es muy importante iniciar un tratamiento antibiótico
adecuado de forma precoz, por eso la tinción de Gram se pide de urgencia en muchas
ocasiones.

La tinción de Gram también tiene ciertas limitaciones. Algunas bacterias no tienen pared,
como por ejemplo las Chlamidias, y no se podrán identificar, al igual que los virus. En
esos casos la tinción no coloreará ningún germen. Otro aspecto negativo de la prueba es
que no puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable de la infección. Para ello
es necesario realizar un cultivo microbiológico que se acompaña siempre de un
antibiograma para estudiar de forma exacta el antibiótico más efectivo.
Tinción de Gram
La tinción de Gram es una técnica muy sencilla que se basa en el uso de un colorante
que permite observar las bacterias mejor que bajo el microscopio.
La Tinción de Gram es una técnica que permite observar las bacterias. Las bacterias son
microorganismos unicelulares que conviven habitualmente con el ser humano. En
muchos casos forman parte de nuestra flora habitual y la de nuestro entorno sin ocasionar
ningún peligro para la salud. En otras situaciones, las bacterias pueden ser patógenas, es
decir, producen infecciones de diversos tipos: cutáneas, abdominales, óseas, etc.
Para poder identificarlas y tratarlas es necesario clasificarlas. Las diferentes
clasificaciones atienden a diversos criterios y características bacterianas: morfología,
metabolismo, presencia de pared celular, etc.
Una de las maneras de diferenciar a las bacterias es en base a la presencia de una pared
celular. Así, hay bacterias con una pared gruesa (formada por peptidoglicanos) y otras
con una pared mucho más delgada.

En qué consiste
La tinción de Gram se utiliza en microbiología desde finales del siglo XIX. Es una técnica
muy sencilla que se basa en el uso de un colorante (tinción) y que tiene una gran utilidad
en medicina.
La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para observarlas
mejor bajo el microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de la pared celular
que las envuelve, se tiñen de una forma u otra. Así, las bacterias que no se tiñen mediante
esta técnica se denominan Gram negativas. Están formadas por una pared más fina
formada por menos capas de peptidoglicano y una segunda membrana rica en lípidos (que
repele la tinción Gram), al microscopio aparecen incoloras.
Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un gran
número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram, dando un
color violeta intenso al microscopio y se clasifican como Gram +.
La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo
de antibiótico así como su eficacia. El antibiótico de elección ha de ser capaz de atravesar
la pared bacteriana, en función de si la bacteriana es gram positiva o negativa se
seleccionará el antibiótico más eficaz.
Cómo hacer una tinción de Gram
El proceso es muy sencillo, y los pasos a seguir serían:

 Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un isopo (bastón estéril de

algodón).
 Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
 Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
 Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un minuto.
 Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de genciana (lugol).
El lugol y el violeta de genciana forman un complejo insoluble en agua capaz de
penetrar en la pared de las células bacterianas.
 Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante
unos segundos.
 Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina o fucsina para distinguir
las Gram negativas que aparecerán bajo el microscopio (en lugar de incoloras)
con un tono rosado o rojo. Lavar con agua.
 Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de color
violeta las Gram positivas y de color rosa-rojizo las Gram negativas.

En el caso de las bacterias Gram positivas los complejos insolubles se quedan atrapados
entre las capas de peptidoglicano de la pared bacteriana, sin disolver y dando la coloración
morada característica al observarlas al microscopio. En cambio, en las bacterias gram
negativas estos compuestos sí que se disuelven y pierden su color. Al microscopio se
verán incoloras o de color rosa-rojo, en función de si se ha añadido la fucsina al final de
la técnica de tinción de Gram.

Entre las bacterias gram positivas más frecuentes se encuentran el Staphylococcus, el

Streptococcus y el enterococo. Ejemplos de bacterias gram negativas son la Escherichia
coli y la Pseudomona aeuruginosa.

Las limitaciones de la técnica vienen dadas por las características de la muestra, el

procotolo de tinción y además el hecho de que algunas bacterias no presentan pared
celular.

LO QUE DEBES SABER…

 Es una técnica muy sencilla que se basa en el uso de un colorante (tinción) y que
tiene una gran utilidad en medicina y que permite observar las bacterias mejor que
bajo el microscopio.
 La gran aportación práctica de la tinción de gram es que permite determinar el
tipo de antibiótico así como su eficacia.
 El proceso para realizar la tinción es muy sencillo.