CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

FUNDAMENTO TEORICO

La cromatografía de capa delgada, conocida como TLC (Thing Layer

Chromatography) es la técnica más utiliza para separar los varios tipos de
compuestos que integran las mezclas. El método se basa en la remoción selectiva
de los componentes de una fase a medida que esta fase fluye a través de una
segunda fase estacionaria. La separación se debe a que los componentes de la
mezcla son atraídos con distinta fuerza por la fase estacionaria a medida que fluye
a través de ella. Aquel componente que es atraído con mayor fuerza por la fase
estacionaria va quedándose atrás mientras que el componente atraído con menor
fuerza va más adelante que los demás a medida que van fluyendo a través de la
fase estacionaria.
PROCEDIMIENTO

1. Sobre un placa de silica gel para cromatografía de aproximadamente 6x3 cm.

Trace suavemente una línea en la base, aproximadamente 1 cm del borde de
la base, con un lápiz.
2. Introduzca la punta del capilar en la solución, luego que la solución haya
ascendido en el capilar retírelo.
3. Toque momentáneamente y con suavidad con la punta del capilar lleno, un
punto de la capa de cromatografía sobre la línea base trazada. Se debe lograr
una mancha circular pequeña.
4. Se deja que el solvente se evapore y de esta manera esta lista para hacer la
cromatografía
5. En una cubeta cromatografía se agrega el eluyente o fase móvil hasta una
altura más o menos 0,5 a 1 cm y se tapa dejándola en reposo durante unos
minutos para que su atmosfera se sature con los vapores del solvente.
6. Con una pinza se toma la placa de cromatografía previamente preparada con
la muestra, por la parte superior y se introduce verticalmente con cuidado
(mancha de muestra hacia abajo) por último se tapa la cubeta.
7. El solvente al entrar en contacto con la parte inferior de la placa empieza a
ascender y cuando llega a la mancha empezara el proceso de cromatografía.
8. Retire la placa de cromatografía cuando el solvente haya subido
aproximadamente 5 cm, marque y mida su recorrido.
REVELADO DE LA PLACA

Se debe de utilizar un revelador especial para observar los metabolitos secundarios

de cada placa, en el caso de alcaloides se debe utilizar el reactivo de Dragendorff,
para flavonoides y cumarinas simplemente se debe observar la placa bajo luz
ultravioleta.
GRUPO QUIMICA FASE MOVIL REVELADO (COLOR)
DRAGENDROFF (OSCURO-ROJO O
ALCALOIDES cloroformo; metanol (9:1) NARANJA)
CUMARINAS tolueno; acetato de etilo (9:1) UV 254 Y 365 nm (AMARILLO-VERDE)
acetato de etilo; n-hexano (1:9) y
(9:1)
FLAVONOIDES UV 254 Y 365 nm (NARANJA-AMARILLO)
n-butanol; ácido acético y agua
(BAW) (7:1,5:1,5)
cloroformo; metanol (9:1)
ANTRAQUINONAS UV 365nm (ROJA)
n-hexano; cloroformo (8:2)
LACTONAS 1% vainillina y 10% ácido fosfórico
TERPENICAS cloroformo ; acetona (9:1) (NARANJA)
anisaldehido-acidosulfurico (azul-violeta-
morado)
cloroformo; metanol; ácido acético;
SAPONINAS ácido sulfúrico (coloraciones diferentes
agua (5: 2,5: 1,5: 1)
dependiendo del tipo de glúcido-
amarillo-café)

COEFICIENTE DE RETENCIÓN
Se define como la distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación
hasta el frente del solvente, Este movimiento es constante y característico para cada
sustancia en un sistema cromatográfico determinado y a una Temperatura
determinada. El Rf, al ser un cociente, nos permite medir el desplazamiento de cada
sustancia, con un valor independiente del tiempo o las dimensiones de la placa o
distancia de desarrollo. De la definición resulta que el valor de Rf va de 0 a 1, siendo
0.5 un valor medio. A menor Rf la sustancia queda más retenida en la FE, a mayor
Rf la sustancia no está unida con fuerza a la FE y es arrastrada por la FM. Se
establece como parámetros de Rf aceptable, entre 0.2 y 0.8 para extractos
vegetales.