MODUL 5 Teknik Pemurnian Bakteri

POKOK BAHASAN :
1. Pemurnian koloni bakteri hasil kultivasi
2. Preservasi dan pemeliharaan kultur isolat murni

TUJUAN PRAKTIKUM :
1. Memahami teknik pemurnian bakteri dengan menggunakan metode 4 ways streak,
2. Memahami teknik preservasi dan pemeliharaan isolat murni di dalam agar miring (agar slants).

TINJAUAN PUSTAKA :
Pemurnian koloni bakteri merupakan teknik untuk mendapatkan koloni/isolat murni dari kultur campur
yang didapat dari hasil kultivasi awal. Tujuan dari kegiatan ini adalah untuk mendapatkan koloni tunggal
yang berisi hanya satu jenis bakteri saja.
Teknik pemisahan koloni merupakan metode paling umum yang digunakan pada kegiatan pemurnian
bakteri. Koloni-koloni dipisahkan berdasarkan pada berbedaan morfologi koloni yang nampak, seperti :
warna, ukuran, bentuk koloni, bentuk permukaan/ elevasi, dan bentuk tepian/ margin (Gambar V-1).

Gambar V-1 : Bentuk, Elevasi, dan Margin

Koloni Bakteri

Praktikum Mikrobiologi Laut [M10B207] TA 2018-2019 21

Koloni-koloni dengan karakteristik morfologi berbeda dipindahkan ke medium agar baru dengan teknik
pemisahan yang dikenal dengan Teknik 4 ways streak. Pada teknik ini, permukaan medium agar dibagi ke
dalam 4 (empat) kuadran yang merepresentasikan 4 (empat) kali pengenceran koloni menggunakan metode
gores (streak). Setelah diinkubasi, maka akan didapatkan koloni terpisah (Gambar V-2). Proses pemisahan ini
dapat dilakukan berkali-kali hingga didapatkan koloni tunggal (single colony) yang murni.

Gambar V-2 : Koloni Bakteri yang Tumbuh dari Hasil

4 Ways Streak

Koloni tunggal yang didapat merupakan isolat murni yang dapat menjadi koleksi laboratorium dan harus
dipreservasi dengan baik. Teknik pemeliharaan koloni tunggal yang umum dilakukan adalah dengan
menggunakan teknik agar miring (Gambar V-3), dimana koloni tunggal disimpan pada medium padat yang
ditempatkan di dalam tabung biakan. Salah satu tujuan penggunaan agar miring adalah untuk meminimalisir
kontaminasi pada saat preservasi.

Gambar V-2 : Pemeliharaan koloni tunggal dengan

agar miring (agar slants)

Praktikum Mikrobiologi Laut [M10B207] TA 2018-2019 22

PROSEDUR PELAKSANAAN PRAKTIKUM :
1. TEKNIK PEMURNIAN DENGAN 4 WAYS STREAK
Alat : Bahan :
 Cawan Petri  Agar plate hasil kultivasi (spread plate dan pour
 Jarum Ose plate)
 Busen  Medium NA
 Spiritus
 Alkohol 70%
Prosedur :
1. Persiapkan agar plate hasil kultivasi (spread plate dan pour plate) yang telah ditumbuhi bakteri,
2. Pilihlah satu koloni yang memperlihatkan perbedaan morfologi dengan koloni yang lain (dilihat
dari : warna, ukuran, bentuk koloni, bentuk permukaan/ elevasi, dan bentuk tepian/margin),
kemudian tandai,
3. Persiapkan agar plate yang baru, buatlah 4 (empat) kuadran dengan menggunakan spidol dan
penggaris pada kaca di bawah agar,

1 2

4 3

4. Dengan menggunakan Jarum Ose steril, pindahkan koloni terpilih ke dalam medium agar baru
dengan menggoreskan zigzag (4-5 baris) pada area kuadran 1, perhatikan ujung terakhir baris yang
dibentuk (bisa ditandai), kemudian panaskan kembali jarum Ose di atas bunsen hingga berpijar
merah, dinginkan, kemudian tempelkan jarum Ose pada ujung akhir baris zigzag di kuadran 1 yang
telah ditandai, kemudian pindahkan ke area kuadran 2, buatlah goresan zigzag kembali (4-5 baris)
seperti yang dilakukan pada kuadran 1, perhatikan juga ujung terakhir baris yang dibentuk,
kemudian kembali pijarkan jarum Ose di atas bunsen, lakukan hal yang sama untuk kuadaran 3
dan 4 (Gambar V-3).

Praktikum Mikrobiologi Laut [M10B207] TA 2018-2019 23

 Gambar V-3 : Teknik Pemisahan Koloni Bakteri dengan 4 Ways Streak

5. Inkubasi biakan di dalam inkubator (37 0C) selama 24 jam, kemudian amati koloni yang terbentuk
disepanjang garis zigzag di keempat kuadran.
6. Lakukan semua prosedur di atas secara aseptis.

2. PEMBUATAN DAN PEMELIHARAAN KOLONI TUNGGAL DALAM AGAR MIRING

Alat : Bahan :
 Tabung biakan  Koloni tunggal
 Jarum Ose  Medium NA
 Bunsen  Spiritus
 Batang Pengganjal  Kapas steril
 Alkohol 70%

Prosedur :
A. Pembuatan Agar Miring (Agar Slants)
1. Tuangkan Medium Nutrient Agar (NA) yang telah mencair (dipanaskan/ dicairkan terlebih dahulu
di atas Hot Plate) sebanyak 6 mL ke dalam tabung biakan steril, kemudian tutup dengan kapas
steril,
2. Dengan bantuan batang pengganjal, letakkan tabung biakan dengan posisi miring di atas batang
pengganjal,
3. Diamkan dan biarkan memadat di dekat bunsen.

Praktikum Mikrobiologi Laut [M10B207] TA 2018-2019 24

 B. Inokulasi Koloni Tunggal pada Agar Miring
1. Dengan menggunakan jarum Ose steril, ambil satu koloni tunggal yang murni,
2. Dengan hati-hati, goreskan secara zigzag koloni tersebut di atas agar miring (agar slants) yang telah
padat, mulai dari ujung atas secara kontinue turun sampai ujung bawah agar,
3. Tutup kembali kapas penutup,
4. Inkubasi biakan di dalam inkubator (37 0C) selama 24 jam, kemudian amati koloni yang terbentuk
disepanjang garis zigzag,
5. Lakukan semua prosedur di atas secara aseptis.

PARAMATER YANG DIAMATI :

1. Teknik Pemurnian Dengan 4 Ways Streak
Morfologi Koloni Terpilih Jumlah Koloni
No Terhitung pada
Warna Bentuk Koloni Bentuk Permukaan (Elevasi) Bentuk Tepian (Margin)
Kuadran 4

Praktikum Mikrobiologi Laut [M10B207] TA 2018-2019 25

 2. Pembuatan dan Pemeliharaan Koloni Tunggal dalam Agar Miring
No Volume Agar Koloni (Tumbuh/ Tidak)

Praktikum Mikrobiologi Laut [M10B207] TA 2018-2019 26