Pembentukan Inhibitor Faktor VIII Sehubungan

dengan Polmorfisme Gen IL10 pada Pasien Pediatrik

Hemofilia A di Mesir

ABSTRAK
Latar Belakang: Pembentukan inhibitor Faktor VIII (FVIII) pada pasien hemofilia A adalah
komplikasi terapi yang serius. Banyak sitokin, termasuk interleukin-10 (IL10), dapat
mempengaruhi pembentukan inhibitor; namun, data literatur tidak cukup untuk membuktikan
hubungan ini. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki hubungan antara Pembentukan
inhibitor FVIII dan polimorfisme IL10-1082A / G di antara orang Mesir penderita hemofilia.
Metode: Pasien diskrining untuk inhibitor FVIII menggunakan metode Bethesda. Polimorfisme
IL10-1082A / G terdeteksi oleh reaksi polymerase chain reaction-restriction fragment length
polymorphism. Hasil: Enam pasien (12%) membentuk inhibitor. Tidak ditemukan perbedaan
statistik secara signifikan antara inhibitor positif dan negatif pasien mengenai genotipe IL10-
1082A / G, tingkat keparahan penyakit, atau variabel terkait pengobatan (jenis FVIII yang
diterima, regimen pengobatan, usia saat pertama kali terpapar FVIII, dan frekuensi terapi
penggantian). Kesimpulan: Pembentukan inhibitor FVIII dalam kelompok orang Mesir dengan
hemofilia tidak berkorelasi dengan polimorfisme IL10-1082A / G, tingkat keparahan penyakit,
atau salah satu dari variabel pengobatan.

PENDAHULUAN
Hemofilia A adalah penyakit hematologi terkait-X yang disebabkan oleh defisiensi Faktor
VIII (FVIII). Pasien dengan hemofilia A menerima FVIII turunan plasma atau rekombinan sebagai
pengobatan standar untuk episode perdarahan. Pembentukan alloantibody terhadap infus FVIII
merupakan komplikasi utama terapi penggantian yang memengaruhi kualitas hidup pasien dan
membutuhkan manajemen yang mahal. Pembentukan inhibitor terjadi di 20-30% pasien dengan
hemofilia parah (aktivitas FVIII <1%). Faktor-faktor yang mempengaruhi pembentukan inhibitor
FVIII dapat ditentukan secara genetik (misalnya Ras, HLA genotipe, keparahan hemofilia A, dan
jenis mutasi FVIII), atau yang terkait dengan terapi, seperti usia saat paparan pertama terhadap
FVIII, jenis FVIII yang ditransfusikan, regimen pengobatan, baik profilaksis atau pada kebutuhan,
dan frekuensi transfusi FVIII. Polimorfisme pada gen yang mengatur kekebalan tubuh, seperti
interleukin-10 (IL10), tumor necrosis factor-α (TNF-α), dan limfosit T sitotoksik antigen-4
(CTLA4), dijelaskan terkait dengan pembentukan inhibitor FVIII. Studi polimorfisme IL10
sebagai faktor risiko untuk pembentukan inhibitor FVIII sampai pada kesimpulan [4, 7-9]. Faktor
risiko untuk pembentukan inhibitor FVIII sebelumnya telah dipelajari di antara pasien hemofilia
A dari berbagai etnis. Sepengetahuan kami, disana tidak ada data tentang hubungan antara
pembentukan inhibitor FVIII dan faktor risiko itu dapat mempengaruhinya pada pasien hemofilia
A di Mesir. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki terjadinya pembentukan inhibitor
FVIII dalam kaitannya dengan polimorfisme IL10-1082A / G dan variabel klinis seperti tingkat
keparahan defisiensi FVIII dan faktor terkait terapi (tipe FVIII yang ditransfusikan, regimen
pengobatan, usia pada paparan pertama terhadap FVIII, dan frekuensi transfusi FVIII) dalam
kelompok anak-anak Mesir dengan hemofilia A.

PASIEN DAN METODE

Pasien

Penelitian ini melibatkan 50 anak yang menderita hemofilia A sedang sampai berat. Pasien
dipilih di antara pasien hemofilia A yang dirujuk ke klinik hematologi rawat jalan National Blood
Transfusion Center and Pediatric Hospital, Faculty of Medicine, Cairo University, Kairo, Mesir.
Semua peserta memberikan persetujuan sebelum terlibat dalam penelitian. Protokol penelitian
telah disetujui oleh Research Ethics Committee of the Department of Clinical and Chemical
Pathology, Cairo University, Kairo, Mesir, dan dilakukan sesuai dengan Deklarasi Helsinki.
Diagnosis hemofilia A didasarkan pada riwayat kecenderungan perdarahan, aktivasi yang
berkepanjangan waktu tromboplastin parsial (aPTT), waktu protrombin normal (PT), jumlah
trombosit normal, dan pengurangan aktual aktivitas FVIII di bawah 50% (dikonfirmasi oleh Lab
Pusat dari Kementerian Kesehatan dan Kependudukan). Menurut aktivitas FVIII, 18 pasien
didiagnosis sebagai hemofilia A sedang (aktivitas FVIII 1-5%) dan 32 pasien dengan hemofilia A
berat (Aktivitas FVIII <1%).
Semua pasien ditransfusikan dengan terapi penggantian FVIII (konsentrat FVIII
rekombinan atau FVIII turunan plasma) lebih dari 50 hari paparan; beberapa dari mereka
menerima sebagai terapi profilaksis dan lainnya sesuai kebutuhan.
Pasien dewasa yang baru didiagnosis memiliki penyakit yang dimediasi kekebalan atau
didiagnosis sebagai hemofilia didapat dikeluarkan dari penelitian ini. Ulasan grafik retrospektif
dilakukan untuk mengevaluasi data demografis terkait dengan hemofilia, termasuk jenis FVIII
yang diterima, regimen pengobatan, usia pada paparan pertama terhadap FVIII dan frekuensi
paparan.
Pasien diklasifikasikan mengenai usia pada paparan pertama FVIII dalam awal: ≤ 6 bulan,
dan terlambat: ≥ 6 bulan. Mereka juga diklasifikasikan dengan mempertimbangkan frekuensi
terapi penggantian menjadi dua kelompok; menengah rendah:> 10 hari interval transfusi, dan
tinggi: 10 hari interval transfusi.

Metode

Aktivitas FVIII diketahui dengan menggunakan uji pembekuan berbasis satu tahap
(modifikasi aPTT) menggunakan STAcompact analyzer otomatis dengan STA-Deficient VIII
(Diagnostica, Stago, Prancis). Pasien diskrining untuk inhibitor FVIII dalam plasma mereka
menggunakan metode Bethesda.

Deteksi polimorfisme IL10-1082A / G

Genomik DNA diekstraksi menggunakan Gene JET Whole Blood Genomic DNA
Purification Mini Kit seperti yang dijelaskan oleh pabrikan. Polimorfisme IL10-1082A / G
terdeteksi oleh metode polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism
(PCR-RFLP) seperti yang dijelaskan sebelumnya. Urutan primer yang digunakan adalah primer
forward: 5’ –CTC GCT GCA ACC CAACTG GC-3’, dan primer reverse: 5’-TCT TAC CTA TCC
CTA CTT CC-3’. Kondisi siklus: denaturasi awal pada 94 ° C selama 5 menit diikuti oleh 35 siklus
amplifikasi; denaturasi pada 94 ° C selama 30 detik, dikuatkan pada 58 ° C selama 45 detik, dan
ekstensi pada 72 ° C selama 60 detik. Dalam siklus terakhir, ekstensi diperpanjang hingga 8 menit
pada 72 ° C. Produk PCR yang diamplifikasi (139 bp) dicerna menggunakan enzim restriksi
endonuklease MnlI. Produk PCR terbatas dielektroforesis melalui pewarnaan etidium bromida
2,5% agarosa gel, dan divisualisasikan oleh sinar ultraviolet. Pada genotipe tipe wild (A / A),
heterozygous (A / G), dan homozygous (G / G), satu pita (139 bp), tiga pita (139, 106, dan 33 bp),
dan dua pita (106 dan 33 bp) diamati masing-masing setelah elektroforesis.

Metode statistik

Data dianalisis menggunakan paket statistik SPSS Window versi 21. Data numerik
dinyatakan sebagai rentang dan median. Data kualitatif dinyatakan dalam frekuensi dan persentase
dan dibandingkan dengan uji Chi-square atau uji eksak Fisher, yang sesuai; p <0,05 dianggap
signifikan.

HASIL
Lima puluh anak laki-laki dengan hemofilia A sedang dan berat terlibat dalam penelitian.
Usia mereka berkisar antara 2 dan 17 tahun dengan usia rata-rata 8 tahun. Rincian variabel terkait
terapi penggantian FVIII ditunjukkan pada Tabel 1.

Tabel 1. Variabel terkait terapi penggantian FVIII.

Menggunakan uji Bethesda, enam pasien (12%) ditemukan memiliki inhibitor terhadap
FVIII. Genotipe polimorfisme IL10-1082A / G pada pasien yang diteliti ditunjukkan pada Tabel
2. Frekuensi alel liar adalah 51%, dan frekuensi alel mutan adalah 49%.

Tabel 2. Polimorfisme Genotip IL10-1082A / G Di Antara Pasien yang Diteliti

 Membandingkan pasien inhibitor positif dan negatif mengungkapkan bahwa tidak ada
perbedaan statistik yang signifikan antara kedua kelompok mengenai tingkat keparahan penyakit
(p = 0,399), jenis FVIII yang diterima (p = 0,369), regimen pengobatan (p = 1.000), usia pada
paparan pertama terhadap FVIII (p = 1.000), frekuensi terapi penggantian (p = 1.000), dan genotipe
IL10-1082A / G (p = 1.000) (Tabel 3).

Tabel 3. Perbandingan Antara Pasien dengan Inhibitor Positif dan Negatif sebagai Variabel
Terkait Pengobatan dan Genotipe IL10-1082A / G

DISKUSI

Pembentukan FVIII Inhibitor adalah komplikasi utama terapi penggantian FVIII pada
pasien dengan hemofilia A. Dalam penelitian ini, 12% pasien telah membentuk inhibitor; sebagian
besar dari mereka menderita penyakit pada tingkat yang berat. Studi sebelumnya telah
menunjukkan bahwa prevalensi inhibitor pada pasien dengan hemofilia berat (aktivitas FVIII
<1%) berkisar antara 8,2% dan 40%. Risiko pembentukan inhibitor bervariasi sesuai dengan etnis.
Pasien hemofilia Afrika-Amerika dan pasien dari warisan Hispanik memiliki peningkatan risiko
pembentukan inhibitor. Mekanisme pasti di balik variasi rasial ini tidak diketahui tetapi mungkin
disebabkan oleh subtipe HLA dan perbedaan dalam respon inflamasi. Respon imun pasien
terhadap infus FVIII mungkin dipengaruhi oleh polimorfisme pada gen imun-modulator seperti
gen yang mengkode IL10 dan TNF-α. Kami menyelidiki hubungan antara polimorfisme IL10-
1082A / G dan pembentukan inhibitor pada pasien hemofilia A, dan tidak menemukan hubungan
yang signifikan antara polimorfisme ini dan adanya inhibitor. Data tentang hubungan antara
polimorfisme IL10 dan pembentukan inhibitor saling bertentangan. Sesuai dengan hasil kami,
kekurangan hubungan antara polimorfisme IL10 dan pembentukan inhibitor ditunjukkan pada
pasien hemofilia A Italia dan Kaukasia. Sebagai kontrasnya, Malmo¨ International Brother Study
Group mendemonstrasikan bahwa polimorfisme IL10 dikaitkan dengan peningkatan risiko
pembentukan inhibitor dalam kelompok 164 pasien dengan hemofilia A. Penelitian lebih lanjut
mengungkapkan bahwa alel G polimorfisme IL10-1082A / G dikaitkan dengan pembentukan
inhibitor dalam dua kohort lain pasien dengan hemofilia A.
Data literature yang tidak konsisten ini mungkin disebabkan oleh interaksi genetik yang
berbeda dalam populasi yang diteliti.
Beberapa faktor non-genetik, seperti keparahan penyakit, dan faktor-faktor terkait terapi
telah disarankan sebagai faktor risiko untuk pembentukan inhibitor. Dalam penelitian ini, kami
tidak menemukan hubungan signifikan antara pembentukan inhibitor dan tingkat keparahan
penyakit atau variabel terkait pengobatan. Pentingnya faktor yang berhubungan dengan terapi
dalam pembentukan inhibitor adalah masalah yang sudah lama diperdebatkan. Faktor risiko terkait
pengobatan yang telah disampaikan termasuk paparan pertama FVIII pada usia kurang dari 6
bulan, intensitas paparan pertama, adanya peringatan sinyal seperti imunisasi atau infeksi parah,
pendekatan pengobatan profilaksis, dan jenis produk FVIII (rekombinan atau turunan plasma).
Kurnik dan rekannya menyarankan memulai penggantian FVIII secara profilaksis pada usia muda
dalam dosis rendah sekali seminggu dan dalam tidak adanya sinyal peringatan dapat mengurangi
risiko inhibitor. Namun, temuan ini tidak dikonfirmasi dalam kohort lain. Hingga saat ini, belum
ada faktor terkait pengobatan dikonfirmasi sebagai faktor risiko untuk pembentukan inhibitor
FVIII. Diperlukan studi lebih lanjut yang mengevaluasi pentingnya faktor-faktor terkait terapi
yang mempengaruhi pembentukan inhibitor.

SIMPULAN
Studi ini menunjukkan bahwa pembentukan inhibitor di antara kelompok hemofilia Mesir
ini tidak terkait dengan polimorfisme IL10-1082A / G, tingkat keparahan penyakit, atau variabel
pengobatan. Penelitian ini dibatasi oleh ukuran sampel kecil dan desain retrospektifnya. Studi
prospektif, termasuk polimorfisme pada gen pengatur imun lainnya, direkomendasikan pada
pasien yang baru didiagnosis untuk menentukan frekuensi pembentukan inhibitor dan faktor risiko
yang terkait dengan pengembangan mereka.

DEKLARASI KEPENTINGAN

Penulis melaporkan tidak ada konflik kepentingan. Penulis sendiri bertanggung jawab atas
konten dan penulisan artikel.