ACCION DE LA BROMELINA (EN LA PIÑA)

INTRODUCCIÓN:
LAS REACCIONES QUÍMICAS QUE SE DAN EN LOS SERES VIVOS NO PODRÍAN TENER LUGAR SIN LA PRESENCIA
DE LOS ENZIMAS. ESTAS MACROMOLÉCULAS, QUE GENERALMENTE SON PROTEÍNAS, CATALIZAN LAS
REACCIONES BIOQUÍMICAS, PERMITIENDO QUE LOS SUSTRATOS SE CONVIERTAN EN LOS PRODUCTOS QUE
NECESITA LA CÉLULA. COMO TODO CATALIZADOR, LOS ENZIMAS NO SE CONSUMEN EN LAS REACCIONES QUE
CATALIZAN, PERO A DIFERENCIA DE OTROS CATALIZADORES DE NATURALEZA INORGÁNICA, LAS REACCIONES
QUE CATALIZAN SON MUY ESPECÍFICAS: SÓLO INTERACCIONAN CON DETERMINADOS SUSTRATOS, Y SÓLO
FACILITAN EL CURSO DE DETERMINADAS REACCIONES.
UN ENZIMA QUE PODEMOS ENCONTRAR EN TODOS LOS SERES VIVOS ES LA CATALASA, NECESARIA PARA
DESCOMPONER EL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO, UN COMPUESTO TÓXICO, QUE SE PRODUCE DURANTE EL
METABOLISMO CELULAR

POR SU NATURALEZA PROTEICA LAS ENZIMAS SON COMPUESTOS TAMBIEN CONOCIDOS COMO
ACTIVADORES DE ALGUNAS REACCIONES ESPECIFICAS, SU TERMINACIÓN ES ASA DEPENDIENDO DEL
SUSTRATO SOBRE EL CUAL ACTUAN.

 QUÍMICAMENTE, LAS ENZIMAS ESTAN FORMADAS POR MOLÉCULAS PROTEICAS A LAS QUE SE
LES AÑADE UN GRUPO MAS PEQUEÑO NO PROTEICO, LLAMADO GRUPO PROSTETICO.
 LAS ENZIMAS DISUELTAS EN AGUA FORMAN UNA SOLUCION COLOIDAL, SIENDO SOLO
ACTIVOS CUANDO ESTAN EN SOLUCION.
 LAS ENZIMAS POSEEN UNA ACCION CATALIZADORA MUCHO MAS EFICAZ QUE LA DE LOS
CATALIZADORES QUÍMICOS.

LA BROMELINA ES UNA ENZIMA PROTEOLITICA (DIGIERE LAS PROTEINAS) QUE EXISTEN EN LA PIÑA. LA
ENZIMA ES ACTIVA EN LA PIÑA FRESCA, PERO EL CALOR DEL PROCESO DE ENVASADO INACTIVA LA ENZIMA.
LA ENZIMA PERMANECERA ACTIVA EN PIÑA CONGELADA A NO SERE QUE HAYA SIDO TRATADA POR EL CALOR
ANTES DE LA CONGELACIÓN.

EXISTEN OTRAS ENZIMAS PROTEOLITICAS PARECIDAS, COMO SON LA FICINA DE LOS HIGOS Y LA PAPAINA DE
LA PAPAYA. ESTA ULTIMA SE EXTRAE Y SE UTILIZA COMO ABLANDADOR DE CARNE.
MATERIAL REACTIVOS

VASOS DE PRECIPITADO GELATINA

MECHERO/TRIPIE/TELA DE ASBESTO ZUMO FRESCO DE PIÑA

TUBOS DE EBULLICIÓN ZUMO ENLATADO DE PIÑA

TAPONES PARA TUBO GRENETINA

GRAPAS (PARA SUJETAR) SOLVENTE DE BUTANOL:

ACIDO ACETICO: AGUA 4:1:1

PAPEL FILTRO GRANDE TROCITOS DE CLARA DE HUEVO

GRADILLA BUTANOL: ACIDO ACETICO

TIJERAS GLACIAL: AGUA 4:1:1

SOPORTE/PINZAS *(EL ACIDO ACETICO GLACIAL

PARRILLA QUEMA LA PIEL Y LOS VAPORES

TUBOS DE ENSAYO DE BUTANOL SON PELIGROSOS)

VARILLA DE VIDRIO NINHIDRINA

1. ACCION DELA BROMELINA SOBRE LA GELATINA Y GRENETINA

DISOLVER 4 GR DE GELATINA (GRENETINA) EN 20 ML DE AGUA CALIENTE. DIVIDA EN DOS PARTES Y PONGA
EN VASOS DE PRECIPITADO DE 100 ML. AÑADA A UNO 20 ML DE ZUMO FRESCO DE PIÑA Y AL OTRO 2 ML DE
ZUMO ENLATADO DE PIÑA (O HERVIDO). DEJE EN REPOSO Y ANOTE DESPUÉS DE UNA HORA
APROXIMADAMENTE LAS DIFERENCIAS QUE PRESENTA CADA TUBO.
 2. DEMOSTRACIÓN DE QUE LA BROMELINA ES UNA PROTEINA (DIGESTIÓN DE PROTEINAS HASTA DEJAR
AMINOÁCIDOS LIBRES)

IDENTIFICAR DOS TUBOS DE ENSAYO 1 Y 2

TUBO 1. DOS TROCITOS DE 2 MM DE GROSOR DE CLARA DE HUEVO (COCIDO) Y 10 ML DE ZUMO FRESCO DE

PIÑA.

TUBO 2. DOS TROCITOS DE 2 MM DE GROSOR DE CLARA DE HUEVO (COCIDO) Y 10 ML DE ZUMO DE PIÑA

ENLATADO.

TAPAR CADA TUBO Y MANTENERLOS A LA TEMPERATURA DE LA HABITACIÓN. ESTAS MEZCLAS SE DEBEN DE

REALIZAR 48 HRS. ANTES DE CONTINUAR CON LA SIGUIENTE EXPERIENCIA.

INVESTIGACIÓN DE LAS MEZCLAS. SE UTILIZA LA TÉCNICA DE CROMATOGRAFÍA.

 CORTAR UN TROZO DE PAPEL FILTRO DE MANERA QUE SE ADAPTE A UN TUBO DE ENSAYO .

EL PAPEL NO DEBE OCAR EL TUBO. SE FIJA CON UN TAPON MEDIANTE UNA GRAPA O
SUJETADOR. EL PAPEL DEBE MANEJARSE CON PINZAS O GUANTES DE POLIETILENO, DEBIDO A
QUE EXISTEN AMINOÁCIDOS EN LOS DEDOS.
 DIBUJAR CON UN ROTULADOR UNA LINEA ALREDEDOR DEL TUBO, DE CÓMO EL NIVEL QUE
DEBE ALCANZAR EL SOLVENTE Y AJUSTAR LA LONGITUD DE LA TIRA DE PAPEL.
 COLOCAR LA TIRA DE PAPEL SOBRE UNA HOJA DE PAPEL LIMPIA Y SEÑALAR EL PUNTO DE
APLICACION DE LA MEZCLA CON UNA LIGERA SEÑAL DE LAPIZ. DEPOSITAR 2 PEQUEÑAS GOTAS
DE LA MEZCLA UNA SOFRE LA SEÑAL CON AYUDA DE UN TUBO CAPILAR, DEJANDO SECAR EL
PAPEL.
 PONER EL SOLVENTE EN EL TUBO DE ENSAYO (BUTANOL:ACIDO ACETICO:AGUA) DEJAR EL
TUBO EN LA GRADILLA.
 BAJAR LA TIRA DE PAPEL CUIDADOSAMENTE EN EL INTERIOR DEL TUBO, DEJANDO ESTE EN LA
GRADILLA.
 EL SOLVENTE ASCIENDE LENTAMENTE POR EL PAPEL. CUANDO LLEGA A 2 CM DE LA PARTE
SUPERIOR, SE SACA EL PAPEL DEL TUBO Y SE DEJA SECAR.
 EFECTUAR LAS MISMAS OPERACIONES PARA LA MEZCLA 2.

PARA REVELAR LA TIRA DE PAPEL.

EL CROMATOGRAMA UNA VEZ SECO ES INCOLORO, SE NECESITA TANTO EL CORCHO AL QUE ESTABA UNIDO.
PULVERIZAR EL PAPEL CON REACTIVO DE NINHIDRINA MEDIANTE UN FRADCO PULVERIZADOR. DEJARLO
SECAR. *DEBE TENERSE CUIDADO AL PULVERIZR LA NINHIDRINA, YA QUE SE TRATA DE UNA SUSTANCIA
TOXICA. UTILIZARLA SOLAMENTE BAJO CAMPANA.*

PARA REVELAR EL COLOR, MANTENER EL PAPEL SITUADO SOBRE UN PLACA ELECTRICA (CUIDANDO NO
QUEMAR EL PAPEL)

COMPARAR LOS CROMATORGRAMAS QUE SE HAN FORMADO CON LAS MEZCLAS 1 Y 2.

.
MATERIAL Y RECURSOS NECESARIOS:

●RECURSOS DE LABORATORIO:
●VASOS DE PRECIPITADOS
●TUBOS DE ENSAYO
●EMBUDOS DE VIDRIO
●AGUA OXIGENADA
●AGUA DESTILADA
●FUENTE DE CATALASA: PATATA
●CRONÓMETRO (PUEDE UTILIZARSE EL DEL TELÉFONO MÓVIL.

PROCEDIMIENTO:
1.- CORTAR LA PATATA EN CINCO TROZOS DE IGUAL TAMAÑO (1G APROXIMADAMENTE).
2. ROTULAR CINCO VASOS DE PRECIPITADOS CON LOS NÚMEROS 1,2,3,4 Y 5
3. REALIZAR CINCO DISOLUCIONES DE AGUA OXIGENADA (0, 25, 50, 75 Y 100 %)
4. INTRODUCIR UN TROZO DE PATATA EN CADA VASO, A CONTINUACIÓN LA DISOLUCIÓN DE
AGUA OXIGENADA CORRESPONDIENTE Y CUBRIENDO LA PATATA COLOCAR EL EMBUDO EN
POSICIÓN INVERTIDA. EL EXTREMO DEL EMBUDO DEBE QUEDAR POR DEBAJO DE LA SUPERFICIE DE LA
DISOLUCIÓN. COMPROBAR QUE EL AGUA ENTRA CON FACILIDAD ENTRO DEL EMBUDO, EN CASO CONTRARIO
COLOCAR DEBAJO DEL EMBUDO ALGO QUE LO LEVANTE UNOS MILÍMETROS.
5. LLENAR LOS TUBOS DE ENSAYO CON LA DISOLUCIÓN CORRESPONDIENTE Y CON MUCHO
CUIDADO PARA QUE NO ENTRE AIRE INTRODUCIRLOS POR LA PARTE ESTRECHA DEL EMBUDO.
6. CUANDO TRANSCURRAN 20 MINUTOS MARCAR CON UN ROTULADOR LA CANTIDAD DE OXÍGENO
ACUMULADO EN EL EXTREMO DE CADA TUBO.
7. A CONTINUACIÓN MEDIR EL VOLÚMEN DE OXÍGENO, LLENANDO EL TUBO DE ENSAYO CON AGUA HASTA
LA MARCA REALIZADA, CON AYUDA DE UNA PIPETA DE 10 ML.
8. REPETIR EL EXPERIMENTO PERO SIN PATATA, ESTO SERVIR Á DE CONTROL.
9. REALIZAR TRES RÉPLICAS DEL EXPERIMENTO Y SACAR LA MEDIA.