Anda di halaman 1dari 8

Pemeriksaan Coomb’st test adalah pemeriksaan yang digunakan untuk mendeteksi adanya

antibodi pada permukaan eritrosit dan anti-antibodi eritrosit dalam serum. Antibodi ini
menyelimuti permukaan sel eritrosit yang meyebabkan umur eritrosit menjadi lebih
pendek dan sering menyebabkan reaksi inkompetibel pada transfusi darah. Tes Coombs
atau juga dikenal sebagai Anti Human Globulin Tes (AHG) diperkenalkan pada tahun 1945. Direct
Antiglobulin Test (DAT) diperkenalkan oleh Coombs dan rekan-rekan penulis pada tahun 1946
yang menjelaskan tentang penggunaan AHG untuk mendeteksi kesensitivan RBC bayi yang
menderita penyakit hemolitik ketika baru lahir (HDN) secara in vivo. Pemeriksaan Coomb’s test
dibagi 2 yaitu, Direk dan Indirek (Mishra, 2014).

Direct Antoglobulin Test (DAT) merupakan suatu test yang digunakan untuk mencari
adanya globulin manusia pada permukaan sel-sel yang telah disensitasi. Sel yang tersensitasi
merupakan sel yang diselubungi oleh antibodi tetapi bukan teraglutinasi. Antibodi IgG tidak
mengakibatkan aglutinasi sel-sel darah merah yang mempunyai antigen pasangannya bila berada
dalam larutan fisiologis NaCl . akan tetapi hanya mampu menyelubungi atau mensensitasi. Masa
hidup immunoglobulin IgG sekitar 60-70 hari. DAT (Direct Antiglobulin Test) digunakan untuk
mendeteksi antibodi atau komplemen yang menyelubungi pada sel darah merah invivo dengan
menggunakan AHG terutama IgG dan C3d. Setelah sel darah merah dicuci dengan saline
kemudian ditambahkan dengan reagen AHG. Anti Human Globulin (Bovine Albumin22%)
digunakan sebagai reagen untuk mereaksikan kelompok darah yang secara spesifik bereaksi
dengan globulin manusia. Bila AHG bereaksi dengan globulin bebas dalam serum maka tidak
menimbulkan aglutinasi eritrosit. Perlu proses pencucian eritrosit untuk menghilangkan globulin
bebas. Antiglobulin test mampu mendeteksi 150 sampai 500 molekul IgG tiap sel darah merah.
Aglutinasi lengkap terjadi bila sel tersensitisasi oleh 1000 molekul IgG. Pada DAT deteksi
globulin sampai terikat, komponen darah yang diuji adalah eritrosit, sensitisasi terjadi didalam in-
vivo, inkubasi dengan suspensi eritrosit menghasilkan nilai negatif, hasil positif ditunjukkan
dengan aglutinasi. Sedangkan, Indirect Antiglobulin Test (IAT) mengacu pada penggunaan AHG
dalam mendeteksi sensitisasi RBC secara in vitro sebagai teknik dengan dua tahapan. Kesepakatan
penelitian yang terbaru terkait dengan evaluasi DAT dan IAT di semua kasus imunohematologis
dengan memperhatikan sejarah medis masa lalu dan sekarang dan presentasi (Mishra, 2014).
Pemeriksaan ini berguna untuk mendeteksi misalnya penyakit Auto Immune Hemolytic
Anemia (AIHA),drug induced hemolysis, allo imun reaksi oleh karena reaksi tranfusi. Jenis reagen
yang digunakan dalam pemeriksaan ini adalah polyspesifik AHG yang mengandung antibodi
terhadap IgG manusia dan anti komplemen C3d dari komplemen manusia .Selain mengandung
anti-IgG dan anti-C4d.Anti bodi yang mempunyai arti klinis yang terpenting adalah dari AHG
yang mendeteksi adanya IgG. Reagen ini disiapkan dan distandarisasi untuk mendeteksi berbagai
macam IgG antibodi. Aktivitas Anti-C3d sangat penting artinya untuk pemeriksaan DCT pada
pemeriksaan AIHA karena kemungkinan C3d merupakan globulin satu-satunya yang dapat
dideteksi pada sel darah merah penderita AIHA.

DAT adalah metode yang digunakan untuk mendeteksi imunoglobulin atau melengkapi
terikat in vivo untuk sel darah merah, menggunakan reagen anti-manusia. Ada 3 Reagen yang
berbeda yang dapat digunakan: monospesifik reagen untuk mendeteksi baik imunoglobulin terikat
G (IgG) atau terikat komplemen (C3) dan polispesifik reagen yang secara bersamaan dapat
mendeteksi IgG dan / atau C3. Dalam pemutaran sel darah merah untuk kehadiran globulin terikat
dan / atau C3, banyak laboratorium dapat memilih untuk menggunakan polispesifik reagen
awalnya (yaitu, sebagai layar untuk setiap IgG terikat dan / atau melengkapi) dan, jika positif,
kemudian menggunakan monospeci fi c reagen untuk secara khusus membedakan apa yang terikat
ke permukaan RBC. Spesimen yang tepat untuk DAT adalah salah satu yang anticoagulated
dengan ethylenediaminetetraacetic asam (EDTA). EDTA diperlukan untuk khelat kalsium
(komponen yang diperlukan aktivasi C3) sehingga fiksasi in vitro C3 tidak akan terjadi. Dalam
versi pengujian tabung klasik dari DAT, sel darah merah yang akan diuji harus dicuci dengan
saline untuk membuang kelebihan, IgG terikat atau melengkapi hadir dalam serum yang istimewa
bisa mengikat dan menghambat reaktivitas reagen ditambahkan. Setelah mencuci, penting untuk
melanjutkan sesegera mungkin untuk pengujian sebelum antibodi terikat memiliki reagen
pelengkap digunakan, dan jika paket insert produsen reagen ini izin, mungkin ada inkubasi kedua
untuk memungkinkan peningkatan reaksi lemah anti-melengkapi. Tabung reaksi kemudian dapat
diperiksa secara visual untuk aglutinasi dan dinilai dari 0 sampai 4 +, dengan 4 + mewakili visual
untuk aglutinasi (Fung M, 2014).

Sebuah DAT dapat mendeteksi immunotargeting sel darah merah yang ditransfusikan
sebelum hemolisis jelas secara klinis, atau dapat mengonfirmasikan kehadiran alloantibody di
diduga reaksi transfusi hemolitik. Dalam darah perbankan, salah satu penggunaan yang paling
umum dari DAT adalah dalam menyelidiki aloimun-dimediasi reaksi tertunda serologi transfusi
(DSTR) dan tertunda Reaksi hemolitik transfusi (DHTRs) dalam pengaturan ketidakcocokan
transfusi terkait. Sebuah DSTR hadir ketika post tranfusi spesimen memiliki hasil DAT positif
dengan kehadiran baru ditemukan alloantibody spesifisitas, sementara DHTR adalah DSTR yang
meliputi bukti klinis atau laboratorium hemolisis. Bahkan, untuk pasien dengan riwayat klinis atau
laboratorium hemolisis. Bahkan, untuk pasien dengan riwayat klinis atau laboratorium hemolisis.
Bahkan, untuk pasien dengan riwayat transfusi, hasil DAT positif mungkin pertama indikasi
bahwa pasien telah mengembangkan alloantibody. Alloantibodies dapat dideteksi secepat 2
sampai 3 hari di respon sekunder atau anamnestic berikut RBC transfuse (Dolatkhah R,2013).

Sementara sampai 3 hari di respon sekunder atau anamnestic berikut RBC transfusi. 11
Sementara sampai 3 hari di respon sekunder atau anamnestic berikut RBC transfusi. Sementara
DSTR bisa jinak secara klinis, DHTR mungkin memiliki gejala sisa yang serius, terutama jika itu
adalah belum diakui dan lebih banyak darah yang tidak kompatibel ditransfusikan untuk
mengkompensasi itu yang kalah hemolisis. Dalam kompatibel ditransfusikan untuk
mengkompensasi itu yang kalah hemolisis. Dalam kompatibel ditransfusikan untuk
mengkompensasi itu yang kalah hemolisis. 12 Dalam beberapa kasus DHTR dapat menyebabkan
hilangnya beredar sel darah merah di luar itu yang akan diharapkan jika hanya sel darah merah
yang ditransfusikan tidak sesuai yang imunologis ditargetkan (Popovsky M, 2017).

Sementara DAT tidak dianjurkan sebagai tes skrining untuk HDFN karena nilai prediksi
positif yang buruk, situasi kritis yang membutuhkan DAT nilai prediksi positif yang buruk, situasi
kritis yang membutuhkan DAT nilai prediksi positif yang buruk, situasi kritis yang membutuhkan
DAT adalah ketika ada kecurigaan dari HDFN karena hemolisis terbukti secara klinis atau
hiperbilirubinemia pada neonatus. Dalam kasus ini, bahkan klinis atau hiperbilirubinemia pada
neonatus. Dalam kasus ini, bahkan klinis atau hiperbilirubinemia pada neonatus. Dalam kasus ini,
bahkan dengan layar antibodi ibu negatif, DAT harus diperiksa pada janin karena kemungkinan
antigen lowfrequency yang mungkin tidak hadir pada sel skrining. Beberapa rumah sakit juga akan
menggunakan DAT sebagai tes skrining untuk HDFN dalam kondisi selektif seperti golongan
darah O ibu, layar antibodi ibu positif karena antibodi HDFN-mediasi, kehamilan sebelumnya
dengan HDFN, dan dalam kasus di mana pengetahuan kurang karena prenatal yang tidak memadai
penyaringan. kinerja DAT darah tali rutin tidak lagi direkomendasikan di Rh (D) ibu -negatif
karena jumlah besar hasil DAT positif yang akan timbul dari penggunaan rutin antenatal
profilaksis anti-RhD (Judd W,2017).

Sedangkan nilai prediktif positif dari DAT rendah, nilai prediktif negatif yang tinggi dan
dengan demikian bahkan dalam kasus bayi baru lahir ABO-yang tidak kompatibel dengan
signifikan penyakit kuning, hasil DAT negatif harus mengarah pada mencari penyebab
nonisoimmunization. Hal ini penting untuk dicatat bahwa pada mencari penyebab
nonisoimmunization. Hal ini penting untuk dicatat bahwa pada mencari penyebab
nonisoimmunization. Hal ini penting untuk dicatat bahwa darah tali terkontaminasi oleh Wharton
jelly dapat menyebabkan tidak spesifik aglutinasi dan dapat menyebabkan hasil DAT klinis positif
palsu. Pada pasien dengan bukti klinis dan / atau laboratorium hemolisis dan dengan tidak adanya
suatu peristiwa menghasut jelas (misalnya, transfusi), kehadiran anemia hemolitik autoimun
(AIHA) harus dipertimbangkan. Hal ini dalam pengaturan ini bahwa hasil dari DAT dapat sangat
membantu tidak hanya dalam menegakkan diagnosis, tetapi juga dalam membantu untuk
mengklasifikasikan jenis kekebalan anemia hemolitik (Herschel M,2017).

Dalam 5% sampai 10% dari pasien dengan IHA hasil DAT mungkin negatif. Ada 3
mekanisme potensial diyakini terlibat untuk menghasilkan DAT-negatif AIHAs:

1. Molekul IgG terikat pada membran RBC dengan kepadatan yang berada di bawah
ambang DAT,
2. Hemolisis dimediasi oleh IgA atau autoantibodi IgM hangat, atau
3. Autoantibodi rendah-afinitas.

Hasil DAT menjadi negative palsu. Dalam beberapa kasus ini dapat diatasi dengan mencuci
dengan garam dingin atau mencuci dengan rendah garam kekuatan ion. Sejak menggunakan reagen
dingin dan mencuci (00 C- 40 C) dapat membangkitkan klinis tidak signifikan autoantibodi dingin,
hal ini berguna untuk menjalankan tes ini dengan albumin kontrol negatif 10%, secara paralel,
untuk mengecualikan ini autoagglutinins dingin sebagai sumber potensial dari hasil DAT positif
klinis (Green GA, 2017).

Studi menggunakan DAT hasil dari donor darah yang sehat telah menemukan bahwa
hingga 0,1% dari orang yang sehat memiliki DAT positif tanpa bukti hemolysis. Dari jumlah
tersebut, sekitar dua pertiga positif dengan IgG dan sepertiga, dengan pelengkap. Garratty 34
menyatakan bahwa semua individu memiliki beberapa molekul IgG pada permukaan RBC mereka,
tapi sebagian besar di bawah batas deteksi, mungkin kurang dari 50 molekul IgG per sel (batas
deteksi ¼ 100 molekul IgG per sel). Dalam penyakit-penyakit akut persentase individu dengan
hasil DAT positif lebih tinggi, dengan penelitian yang menunjukkan kejadian 1% sampai 15% dari
DAT perintisan positif pada pasien rawat inap yang tidak memiliki tanda-tanda yang jelas dari
hemolisis atau etiologi jelas (Freedman J, 2017).

Studi-studi ini menunjukkan derajat variabel dari kedua IgG dan C3 sensitisasi. Spesifik
negara penyakit yang menunjukkan peningkatan kadar terikat IgG pada membran RBC termasuk
sindrom thalassemia dan penyakit sel sabit termasuk sifat sel sabit. Dalam keadaan ini, meningkat
lapisan imunoglobulin dapat berkorelasi dengan peningkatan penyerapan. Pasien rawat inap juga
lebih cenderung memiliki faktor lain yang berhubungan dengan hasil DAT positif, termasuk kadar
serum imunoglobulin meningkat, rouleaux karena konsentrasi tinggi protein, antibodi cardiolipin,
infeksi, retikulositosis, dan penggunaan obat-obatan. Pasien dengan retikulositosis, dan
penggunaan obat-obatan. Pasien dengan hipergammaglobulinemia mungkin juga memiliki tidak
spesifik adsorpsi pasif IgG ke sel darah merah mereka. Administrasi persiapan komersial immune
globulin intravena juga dapat menyebabkan hasil DAT positif karena kehadiran kontaminan
RBCspeci antibody. Antibodi antifosfolipid diketahui bereaksi silang dengan RBC epitop
fosfolipid membran dan ditemukan untuk menghasilkan temuan DAT positif dalam 16% pasien
dengan sindrom antifosfolipid dan 4,3% dari pasien dengan lupus eritematosus; hasil positif juga
diamati di donor sehat dengan antibodi antifosfolipid ditinggikan. Hasil positif DAT telah
dilaporkan pada pasien dengan beberapa penyakit infeksi termasuk malaria akut dan immune
defisiensi virus (DeAngelis V, 2017).

DAT biasanya dilakukan dengan teknik tabung konvensional, gel microcolumn DAT,
afinitas mikrokolom DAT. Ada beberapa DAT yang "ditingkatkan" (mis. 4 ° C Pencucian salin
berkekuatan ionik rendah atau polybrene) yang dapat dilakukan. Uji imunoradiometrik (IRMA),
The Complement Fixation Antobody Consumption Test (ELAT), serta enzyme-linked
immunosorbent assay (ELISA) yang merupakan metode representatif untuk mendeteksi RBC-IgG
secara kuantitatif. Flow cytometric DAT dan gel microcolumn DAT adalah metode
semiquantitatif. Flowcytometry adalah metode yang tepat, andal, dan sensitif untuk mendeteksi
RBC yang terikat dengan antibodi. Flowcytometry DAT merupakan tes pelengkap untuk
mendiagnosis AIHA (Lin, 2018).

Kebanyakan DAT secara rutin dilakukan dengan teknik tabung konvensional dengan
pereaksi polispesifik yang mampu mendeteksi IgG dan C3d. Konsentrasi antibodi IgG pada sel
darah merah yang diperlukan untuk menghasilkan DAT yang positif cukup bervariasi. Hughes-
Jones dkk. telah mengamati aglutinasi minimal yang dapat dideteksi dengan tes antiglobulin
dengan konsentrasi IgG mulai dari 100 hingga 500 molekul per RBC. DAT dengan tabung yang
memiliki kelemahan yaitu sensitivitas rendah (Lin, 2018).

DAT bisa positif pada pasien tanpa AIHA. Alasa terjadinya reaksi positif palsu dapat
menjadi sebagai berikut: (1) sampel yang tidak tepat (sel bergumpal), (2) aglutinasi sel darah
merah spontan, (3) peningkatan serum imunoglobulin, (4) pemberian imun globulin intravena, (5)
level globulin serum dan nitrogen urea darah meningkat, (6) sentrifugasi terlalu lama atau over
centrifugation. Ada korelasi yang signifikan antara hasil DAT positif dan konsentrasi IgG serum,
yaitu semakin tinggi IgG serum, semakin sering positif hasil DAT yang teramati. Penyebab DAT
negatif palsu meliputi: (1) pencucian sel yang tidak benar, (2) keterlambatan dalam menambahkan
reagen antiglobulin setelah langkah pencucian, (3) reagen antiglobulin yang tidak aktif, (4) agitasi
specimen ketika waktu interpretasi hasil (Lin, 2018).

DAT positif dapat ditemukan dalam 1 dalam 1.000 – 1 : 14.000 donor darah yang sehat tanpa
hemolisis. Signifikansi dari temuan ini tidak jelas, tetapi beberapa individu mungkin memiliki
anemia hemolitik autoimun (AIHA) atau kanker yang terus berkembang. DAT positif sebanyak 7-
8% dari pasien yang dirawat di rumah sakit dan hingga 15% dari spesimen pasien yang dirawat di
rumah sakit. Oleh karena itu, signifikansi sebuah DAT membutuhkan korelasi klinis (Zantek,
Koepsell, Jr, & Cohn, 2012).

Pada jurnal penelitian dari Mishra et al tahun 2014 yang melakukan uji DAT dijelaskan
bagaimana cara uji dilakukan. Dijelaskan disana cara uji DAT yang dilakukan adalah 1-2 tetes sel
darah merah pasien dengan antikoagulan EDTA dicuci tiga kali dengan saline isotonik dalam
tabung reaksi. Setelah mendekantasikan atau membuang supernatan sepenuhnya kemudian diikuti
dengan pencucian sebanyak 3 kali, kemudian Polyspecific AHG ditambahkan dan diinkubasi
dalam suhu kamar selama 5 menit. Tabung disentrifugasi pada 1000rpm selama 1 menit. Segera
setelah dilakukan resuspensi dari aglutinasi, dilakukan pemeriksaan makroskopis dengan
menggunakan lampu untuk melihat aglutinasi. Ketika hasilnya negatif, mereka memeriksa
aglutinasi di bawah mikroskop. Untuk hasil negatif ditafsirkan secara mikroskopis, satu tetes
Coombs Control Cell yang dilapisi Ig G ditambahkan ke tabung dan disentrifugasi ringan selama
1 menit pada 1.000 rpm. Sel darah merah kemudian segera diresuspensikan dan segera diperiksa
secara makroskopik untuk reaksi aglutinasinya. Jika hasilnya negatif setelah penambahan Coombs
sel kontrol yang dilapisi Ig G, tes ini dilaporkan tidak valid dan tes kemudian diulang kembali
(Mishra, 2014). Cara pengerjaan Coomb’s tes yang telah dilakukan pada praktikum hampir sama
dengan apa yang dilakukan oleh Mishra et al yang dijelaskan di dalam jurnalnya.

Pada praktikum Direk Coomb’s test ini suspensi darah yang digunakan
adalahsuspensi sel 5%. Dalam pengerjaannya pertama-tama ditambahkan 1 tetes suspensi
darahpasien pada ke-2 tabung reaksi berbeda yang telah disiapkan, selanjutnya darah
pasien (suspensi 5%) dicuci sebanyak 2 kali dengan menggunakan saline. Pencucian ini bertujuan
untuk menghilangkan sisa globulin pada darah, menghindari pengenceran serum coomb’stest
dan agar coomb’s serum dapat bereaksi dengan sempurna. Setelah dicuci, supernatanya dibuang
dan ditambahkan 2 tetes coomb’s serum pada tabung I, dan saline 2 tetes kedalamtabung II.
Setelah itu diputas/dipusingkan pada centrifuge 3000rpm selama 15 detik dan dibaca
hasilnya terhadap aglutinasi.

Hasil DAT negatif palsu akan terjadi dalam kasus tersebut dari DAT-negatif AIHA dan
juga dapat disebabkan oleh kesalahan teknis mencuci sel yang tidak memadai atau keterlambatan
dalam Selain reagen. Negatif palsu hasil DAT juga dapat terjadi dalam kasus hemolisis parah di
mana sel darah merah akan dihapus begitu cepat, dan dalam jumlah yang begitu besar, bahwa ada
beberapa beredar sel darah merah peka tersisa untuk deteksi. Dalam kasus yang menjadi perhatian
klinis yang kuat untuk kehancuran RBC kekebalan-dimediasi, tetapi negatif DAT perintisan,
penggunaan teknik dimodifikasi dan / atau rujukan ke laboratorium rujukan immunohematology.
DAPUS :

DeAngelis V, Biasinutto C, Pradella P, Vaccher E, Spina M, Tirelli U. Clinical significance of


positive direct antiglobulin test in patienst with HIV infection. Infection. 2017;22(2):92–95.

Dolatkhah R, Esfahani A, Torabi SE, et al. Delayed hemolytic transfusion reaction with multiple
alloantibody (anti S, N, K) and a monospecific autoantiJKb in intermediate beta-thalassemia
patient in Tabriz. Asian J Transfus Sci. 2013; 7(2):149–150.

Freedman J. False positive antiglobulin tests in healthy subjects and in hospital patients. J Clin
Pathol. 2017;32(10):1014–1018.

Fung M, Grossman BJ, Hillyer CD, Westhoff CM. The Technical Manual. 18th ed. Bethesda, MD:
AABB; 2014:427.

Green GA. Autologous IgM, IgA, and complement binding to sickle erythrocytes in vivo: evidence
for the existence of dense sickle cell subsets. Blood. 2017;82(3):985–992.

Herschel M, Karrison T, Wen M, Caldarelli L, Baron B. Isoimmunization is unlikely to be the


cause of hemolysis in ABO-incompatible but direct antiglobulin test-negative neonates. Pediatrics.
2017;110(1, pt 1):127–130.

Judd W, Scientific Section Coordinating Committee of the AABB. Practice guidelines on prenatal
and perinatal immunohematology, revisited. Transfusion. 2017;41(11):1445–1452.

Popovsky M. Transfusion Reactions. 2nd ed. Bethesda, MD: AABB; 2017: 6–7.

Lin, J. (2018). Clinical applications of direct antiglobulin test, 2(3), 1–5.


https://doi.org/10.15761/BHC.1000143

Mishra, S. (2014). Role of Coombs ’ Test in analysis of Immunohematological Cases, 1(3), 69–
74.

Zantek, N. D., Koepsell, S. A., Jr, D. R. T., & Cohn, C. S. (2012). AJH Educational Material
Test of the Month The direct antiglobulin test : A critical step in the evaluation of
hemolysis, (April), 707–709. https://doi.org/10.1002/ajh.23218

Anda mungkin juga menyukai