UNIVERSIDAD NACIONAL DE BARRANCA

(Creada por Ley Nro 29553)

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGRÓNOMA

EXTRACCIÓN DE ADN

Facultad:
Ingeniería Agrónoma
Curso:
Bioquímica Vegetal
Docente:
Dr. Nélida Vicente Vicente
Estudiante:
Rosales Gala, Jesús Elián
Sánchez Rosales Jazmín
Rodas Castillo José
BARRANCA – PERÚ
2019
1. INTRODUCCION

El ADN (ácido desoxirribonucleico) es la sustancia química donde se almacenan las

instrucciones que dirigen el desarrollo de un huevo hasta formar un organismo adulto,
mantienen su funcionamiento y permite la herencia. Los organismos vivos formados por
células que tienen núcleos por una membrana donde bien diferenciada, se denomina
eucariotas. El ADN es una molécula formada por agregaciones de tres tipos de
moléculas: desoxirribosas, el ácido fosfórico y las bases nitrogenadas, adenina, guanina,
la timina y citosina.

Su extracción se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas
negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Se
empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente, vaciándose su contenido
molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. Las proteínas
asociadas al ADN, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separadas de él por
acción del detergente. Sólo queda extraer el ADN de esa mezcla con alcohol isoamílico.

2. MARCO TEORICO

“El ADN es la macromolécula base de la herencia, es un ácido nucleico que contiene la

información de las características hereditarias de cada ser vivo y las secuencias para la
creación de aminoácidos que generarán las proteínas vitales para el funcionamiento de
los organismos” (Salud, 2017).

El ADN es el constituyente de los genes y por ello el portador de la información

genética. Con la replicación del ADN en el proceso celular los caracteres genéticos pasan
a las células descendientes que reproducen cadenas de ADN con una estructura
complementaria de las originales, lo que permite la obtención de dobles cadenas de ADN
en las células hijas, idénticas a las parentales de la célula original. Algunos virus utilizan
ARN como material genético, aunque no es lo habitual. En estos casos el ARN forma
una única cadena (Cervantes lllana, 2014)
3. OBJETIVOS

Lograr la extracción de ADN de algún organismo vegetal con base a las propiedades
físicas y químicas del ADN.

4. MATERIALES
4.1 MATERIAL PROPORCIONADO POR EL ALUMNO
 Muestra vegetal la que el alumno elija (Aprox. 1 tza): puede ser, tomate,
cebolla, o ajos, o hoja de espinaca fresca, o fresas, etc. Cada grupo trabajará con
solo una muestra.
 03 choros recién cogidos, muy frescos por mesa de cada grupo
 1 Licuadora
 Sal de mesa (10 gr por grupo)
 Bicarbonato de sodio (un sobre de 10 gr)
 Ablandador de carne (comprar en supermercado Metro o Plaza Vea)
 Gasa estéril o colador muy fino
 Guantes descartables
 1 sobre de jabón líquido (40 mL) Ariel Sobre pequeño del volumen indicado)
 Alcohol etílico, a 0°C colocado a helar la noche anterior a la práctica, dejar en
la mañana con la profesora para guardarlo en refrigeración hasta la hora que se
use.
4.2 MATERIAL PROPORCIADO POR EL LABORATORIO
 250 ml Agua destilada fría (02 picetas por mesa)
 Embudos (2 por grupo)
 Gradillas para tubo
 2 Vasos de precipitados de 300 mL para cada grupo
 4 tubos de ensayo grandes para cada grupo
 Una vagueta o varilla de vidrio para cada grupo
 Alcohol etílico helado
 Mortero
 Pipetas Pasteur
5. METODOLOGIA
1. Colocar los siguientes ingredientes en una licuadora:

a) 250 ml de agua destilada fría, NO usar agua del grifo.

b) 1.5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.

c) 5 g de bicarbonato sódico.

2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que el alumno
elija (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.
3. Colocar la muestra vegetal en la licuadora y producir su trituración accionando las
cuchillas a impulsos de 10 segundos, realizar durante 30 s. Así se romperán muchas
células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.
4. Separar después los restos vegetales más grandes del caldo molecular filtrándolo
colador lo más fino posible o gasa. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 3000 rpm
por 5 minutos y después retirar el sobrenadante para usarlo.
5. Agregar de 5 a 10 ml de jabón líquido a la mezcla y revolver bien. Dejar reposar 10
min.
6. Pasar la mezcla a tubos de ensayo de vidrio y llenar hasta aprox. 1/3 del tubo.
7. Colocar los tubos en una gradilla para poder adicionar una pizca de ablandador de
carne a cada tubo de ensayo y agitar suavemente para no romper el ADN.
8. Añadir con pipeta 10 ml de alcohol etílico 96% frío 0ºC. Se debe dejar escurrir
lentamente el alcohol por la cara interna del tubo cuidando de mantener el tubo
inclinado durante la adición del alcohol. Se formaran 3 fases: el alcohol quedará en
la parte superior, en la intermedia el ADN precipitado y en la inferior los restos de la
solución.
9. Introducir la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el
alcohol y el tampón.
10. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los
fragmentos de mayor tamaño de ADN.
11. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN
quedará adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.
6. OBSERVACIONES
En cada una de las muestras (cebolla, tomate y choro) una vez que estas estuvieron
molidas ya que así podemos separar el ADN, se les coloco alcohol, se vio una masa
blanca que se juntaba, esto era el ADN que se podía ver a simple vista, como unos
filamentos delgados.
7. RESULTADOS
 El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que,
entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se
realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que
se unan al ADN.
 Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato
de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de
la misma manera en el proceso de extracción de ADN en el choro, en el tomate y
en la cebolla, separando las grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las
membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas se han
roto, el ADN es liberado de la célula.
 La solución ablandadora de carne actúa como una enzima en el choro, el tomate
y la cebolla, también actúa como una enzima, que contribuye a eliminar las
proteínas que puedan contaminar el ADN.
 Se pasó a separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se
encuentran en las células, evitando que el ADN se desnature (que se rompa).

8. CONCLUSIONES
 Al realizar el procedimiento, resulta que las fibrillas de ADN comenzaron a salir,
de un color blanco precipitado. Se comenzó a sacar del tubo de ensayo el ADN.
9. DISCUSIONES

10. CUESTIONARIO
1. ¿Qué es el ADN?

El ADN es una molécula de ácido desoxi-ribonucleico, esto significa que está

conformada por las bases nitrogenadas adenina, timina, citocina y guanina.
2. ¿Qué importancia tiene en un organismo vivo?

Su importancia se debe a que es la encargada de mantener, a través del código

genético, la información genética necesaria para crear un ser vivo similar a aquel del
que proviene (a excepción de casos de mutaciones).

3. Explicar porque se requieren varias etapas para la extracción del ADN

(detalladamente cual es la acción de los reactivos que se usaron).
4. Representar estructuralmente la unión de las bases G C y A T.
11. REFERENCIAS

Cervantes lllana, J. (2014). Historia de la quimica. Real sociedad Española de Quimica, 3, 234-
240.

Salud, C. y. (19 de Junio de 2017). Significados. Recuperado el Sabado de Junio de 2019, de

Significados: https://www.significados.com/adn/