Medios de Cultivos

ELEARNING TOTAL Curos de Control microbiológico del agua– Unidad 3
Medios de cultivo
Es aquel sustrato que contiene todas las condiciones necesarias para el correcto
desarrollo de determinado microorganismo, en condiciones de laboratorio.
Requerimientos para el crecimiento microbiano
 Físicos:
 Temperatura: la mayoría de los microorganismos crece dentro de un margen
limitado de temperaturas. Cada especie tiene una temperatura óptima con
temperaturas mínimas y máximas de tolerancia. Según estos rangos se dividen en
tres grandes grupos:
 Psicrófilos: crecimiento optimo entre 5°C y 30°C
 Mesófilos: crecimiento optimo entre 25°C y 40°C
 Termófilos: crecimiento optimo entre 50°C y 60°C
 Ph: la mayoría de las bacterias crece mejor en un rango de pH entre 6,5 y 7,5. Los
hongos tienen un rango de tolerancia mayor que las bacterias.
 Osmolaridad: el medio en el que crecen debe poseer una osmolaridad igual a la
del citoplasma.
 Hidratación: es fundamental para el crecimiento bacteriano. Casi todos los
nutrientes que estos utilizan están disueltos en un medio acuoso.
 Ambiente gaseoso: en este aspecto los requerimientos varían según el mecanismo
respiratorio del microorganismo en cuestión. Estos pueden ser:
 Aerobios: crecen en presencia de oxígeno.
 Anaerobios: crecen en ausencia de oxígeno. Para estos microorganismos el
oxígeno resulta tóxico.
 Anaerobios facultativos: crecen en medios con oxígeno y sin él.
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 Químicos:
 Carbono: El carbono como el agua son indispensables para la supervivencia en los
microorganismos. Es la base estructural de las células vivas para: la síntesis de
azucares, la estructura de la pared celular, membrana, enzimas, etc.
 N,S,P: importantes para la síntesis de proteínas, ácidos nucleicos, ATP, etc.
 Metales: Ca, Mg, K, etc. Son necesarios como cofactores de enzimas
 Oligoelementos: Fe, Cu, Zn son necesarios en trazas
 Factores de crecimiento: Vitaminas, algunos aminoácidos, purinas y pirimidinas.
Son compuestos orgánicos esenciales que el microorganismo no puede sintetizar.
Clasificación de medios de cultivo
Según su estado físico:

 Líquidos: 99,8% de agua. Se los denomina comúnmente caldos. Ejemplo caldo
TSB.
 Solidos: se agrega agar-agar (2%) al caldo base. Este agar presenta la propiedad de
fundir a 80°C y solidificar a 45°C. Se los denomina Agares
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Según su composición
 Simples: contienen los nutrientes necesarios para el desarrollo de
microorganismos.
 Enriquecidos: son medios líquidos o sólidos a los cuales se agregan proteínas
nativas o nutrientes extra al medio base, como suero, sangre, yema de huevo, etc.
 Selectivos: son medios líquidos o sólidos con el agregado de uno o más
inhibidores. El agente selectivo facilita el aislamiento de un determinado
microorganismo inhibiendo otros no deseados.
 Diferenciales: permite diferenciar microorganismos con una determinada
propiedad bioquímica o metabólica de otros que no la poseen. Presentan un
sustrato utilizable (por ejemplo: un hidrato de carbono, aminoácidos azufrados) y
un revelador (por ejemplo: un indicador de pH). El indicador de pH permite
diferenciar lo microorganismos que fermentan un determinado hidrato de
carbono.
Medios de cultivos utilizados para el control microbiológico del agua
Tripteina soja caldo

Es un medio adecuado para el desarrollo de microorganismos exigentes.
Fundamento
La tripteina de soja y la peptona de soja aportan nutrientes ricos en péptidos,

aminoácidos libres, bases púricas y pirimídicas, minerales y vitaminas. La peptona de
soja contiene alta cantidad de hidratos de carbono que estimulan el crecimiento de
una amplia variedad de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico. El fosfato dipotásico otorga capacidad buffer y la glucosa es la fuente de
energía.
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Interpretación de resultados
La presencia de turbidez en el medio evidencia el crecimiento microbiano.
Mac Conkey caldo

Este es un medio de cultivo selectivo, y se utiliza para la investigación presuntiva de
microorganismos coliformes.
Fundamento
La peptona es la fuente de aminoácidos y de otros factores de crecimiento, la lactosa

es el hidrato de carbono fermentable, la bilis de buey estimula el crecimiento de las
bacterias coliformes e inhibe una gran parte de la flora grampositiva, y el purpura de
bromocresol es el indicador de pH.
Los microorganismos coliformes fermentan la lactosa con gran producción de ácido y

gas. Al acidificar el medio se produce un viraje de color a partir del indicador de pH.
Positivo: medio de cultivo de color amarillo con producción de gas.
Negativo: ausencia de color amarillo Y/o ausencia de producción de gas.
Recuento en placa agar (PCA)

Este medio de cultivo se utiliza para el recuento de bacterias aerobias.
Fundamento
El alto contenido nutricional de este medio permite el crecimiento de las bacterias

presentes en la muestra.
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Características del medio
Medio de cultivo color ámbar claro ligeramente opalescente.
Efectuar el recuento de las colonias.
Levine E.M.B agar (con eosina y azul de metileno

Este medio es adecuado para la búsqueda y diferenciación de bacilos entéricos.
Fundamento
Es un medio selectivo diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias.}

En el medio de cultivo, la peptona es la fuente nutritiva y la lactosa es el hidrato de
carbono fermentable. La combinación utilizada de eosina y azul de metileno, inhibe
el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas
fastidiosas, y también, permite diferenciar bacterias fermentadoras y no
fermentadoras de lactosa.
Los microorganismos fermentadores de lactosa, originan colonias de color azulado-
negro, con brillo metálico o mucosas. Las colonias producidas por microorganismos
no fermentadores de lactosa son incoloras.
Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes,
En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y
Shigella.
Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias de color negro azulado o

amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico.
Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio,

incoloras.
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Cetrimide agar
Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa y
otras especies del género.
Fundamento
Su fórmula permite el crecimiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa y estimula

la formación de pigmentos. Este medio es muy semejante al King A, en el cual la
peptona de gelatina aporta los nutrientes para el desarrollo bacteriano. El cloruro de
magnesio y sulfato de potasio promueven la formación de piocianina, pioverdina,
piomelanina y fluoresceína de P. aeruginosa. La cetrimida es un detergente catiónico
que actúa como agente inhibidor de la flora acompañante.
Se observa crecimiento microbiano, características de las colonias y la producción de

pigmentos.
La presencia de un color verde-azulado corresponde a la producción de piocianina,

mientras que un color verde corresponde a la producción de pioverdina y un color
rosa claro, rojizo o marrón oscuro corresponde de a la producción de piorrubina.
Examinar la placa bajo la luz ultravioleta, ya que la producción de fluoresceína de

observa un color amarillo verdoso brillante que difunde en el agar a partir del
crecimiento microbiano.
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Pseudomonas agar P (PP o King A)

Este medio se utiliza para el aislamiento, la detección y diferenciación de especies de
Pseudomonas en base a la producción de piocianina. Conocido también como medio
King A.
Fundamento
La peptona de gelatina aporta nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la

glicerina favorece la producción de pigmentos, las sales de magnesio y potasio
estimulan la producción de piocianina y piorrubina e inhiben la producción de
fluoresceína.
Un resultado positivo es por observación de pigmentos piocianina y/o piorrubina.
La producción de piocianina se observa una zona color azul, azul-verdoso que rodea
la colonia, o que se extiende en todo el medio de cultivo debido a la difusión del
pigmento.
La producción de piorrubina se observa como una zona de color rojo alrededor de la

colonia o que se extiende en todo el medio de cultivo debido a la difusión del
pigmento.
Pseudomona agar F (PF o King B)

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento, detección y diferenciación de especies
de Pseudomonas en base a la producción de fluoresceína. Conocido también como
medio King B.
Fundamento
En este medio la tripteina y la peptona de carne aportan los nutrientes necesarios

para el desarrollo bacteriano, la glicerina favorece la producción de pigentos, la
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concentración de fosfato dipotásico estimula la producción de fluoresceína e inhibe

la producción de piocianina y piorrubina. El sulfato de magnesio provee los cationes
necesarios que incrementan la producción de fluoresceína.
Se deben examinar las colonias bajo luz UV.
Se considera un resultado positiva la observación de fluoresceína, que es un

pigmento color amarillo verdoso fluorescente que rodea la colonia o que se extiende
por todo el medio de cultivo.

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Requerimientos para el crecimiento microbiano

Clasificación de medios de cultivo

Según su estado físico:

Medios de cultivos utilizados para el control microbiológico del agua

Tripteina soja caldo

La tripteina de soja y la peptona de soja aportan nutrientes ricos en péptidos,

La presencia de turbidez en el medio evidencia el crecimiento microbiano.

Mac Conkey caldo

La peptona es la fuente de aminoácidos y de otros factores de crecimiento, la lactosa

Los microorganismos coliformes fermentan la lactosa con gran producción de ácido y

Positivo: medio de cultivo de color amarillo con producción de gas.

Negativo: ausencia de color amarillo Y/o ausencia de producción de gas.

Recuento en placa agar (PCA)

El alto contenido nutricional de este medio permite el crecimiento de las bacterias

Características del medio

Medio de cultivo color ámbar claro ligeramente opalescente.

Efectuar el recuento de las colonias.

Levine E.M.B agar (con eosina y azul de metileno

Es un medio selectivo diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias.}

Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias de color negro azulado o

Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio,

Su fórmula permite el crecimiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa y estimula

Se observa crecimiento microbiano, características de las colonias y la producción de

La presencia de un color verde-azulado corresponde a la producción de piocianina,

Examinar la placa bajo la luz ultravioleta, ya que la producción de fluoresceína de

Pseudomonas agar P (PP o King A)

La peptona de gelatina aporta nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la

Un resultado positivo es por observación de pigmentos piocianina y/o piorrubina.

La producción de piorrubina se observa como una zona de color rojo alrededor de la

Pseudomona agar F (PF o King B)

En este medio la tripteina y la peptona de carne aportan los nutrientes necesarios

concentración de fosfato dipotásico estimula la producción de fluoresceína e inhibe

Se deben examinar las colonias bajo luz UV.

Se considera un resultado positiva la observación de fluoresceína, que es un

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