PEWARNAAN 

MIKROORGANISME

1. AZIZAH AMELIA MUFIDAH 1941420092
2. HARIS FIRMANSYAH 1941420066
3. SAFIRA FERESTE 1941420104
q PEWARNAAN MIKROORGANISME

1.Mikoorganisme yang ada di alam ini mempunyai 
morfologi, struktur dan sifat-sifat yang khas,semisal 
bakteri. 
2.Morfologi adalah adalah ilmu yang mempelajari 
tentang bentuk organisme, terutaman hewan  dan 
tumbuhan yang mencakup bagian-bagiannya.
Gambar Morfologi Bakteri
Gambar Morfologi Kapang
Tujuan pewarnaan terhadap mikroorganisme :

 1. Mempermudah melihat bentuk jasad, baik            
bakteri, ragi, maupun fungi.
 2. Memperjelas ukuran dan bentuk jasad
 3. Melihat struktur luar dan kalau memungkinkan       
struktur dalam jasad.
 4. Melihat reaksi jasad terhadap pewarna yang 
diberikan sehingga sifat-sifat fisik dan kimia  dapat 
diketahui.
PEMBUATAN PREPARAT UNTUK PEWARNAAN

• 1.Buatlah pulasan di atas kaca objek, keringkan pada suhu kamar 
dan kemudian dipanaskan di atas nyala api (fiksasi) 3-4 kali lalu 
didinginkan
• 2.Letakkan pulasan di atas rak pewarnaan
• 3.Tuangkan larutan methylene blue hingga menutup 
pulasan,diamkan selama 1 menit
• 4.Buanglah larutan dengan mencuci hingga warna hilang,kemudian 
keringkan
• 5.Lihat di bawah mikroskop dengan pembahasan 100kali 
menggunakan minyak imersi 
Teknik pewarnaan bakteri dapat dikategorikan 
sebagai berikut :

1.Pewarnaan
Sederhana 2.Pewarnaan Differensial

3.Pewarnaan Khusus 4.Pewarnaan Negatif

• . 1.   Pewarnaan sederhana

Pewarnaan sederhana ini dibagi lagi menjadi dua jenis 
pewarnaan:
a.  Pewarnaan Asam
Zat warna yang dipakai dalam pewarnaan positif 
adalah metilen biru dan air furksin.
b.  Pewarnaan Basa
Teknik ini berguna untuk menentukan morfologi dan 
ukuran sel. Metode ini menggunakan cat nigrosin atau 
tinta cina.
2.Pewarnaan Differensial dibagi menjadi dua :

Pewarnaan Differensial adalah proses pewarnaan yang 
menggunakan lebih dari satu pewarna kimia

1.Pewarnaan Gram

2.Pewarnaan Tahan
Asam
1.Pewarnaan Gram 
• Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah suatu metode untuk 
membedakan  spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, yakni 
gram-positif dan gram-negatif
• Perbedaan  dasar  antara  bakteri  gram  positif  dan  negatif  adalah 
pada komponen dinding selnya.
• Bakteri  gram  positif  memiliki  membran  tunggal  yang  dilapisi 
peptidoglikan  yang  tebal  (25-50nm)  sedangkan  bakteri  negative 
lapisan peptidoglikogennya tipis (1-3 nm).
Video Teknik Pewarnaan Gram
Persiapan Preparat Untuk Media Padat
Ciri-ciri bakteri gram negatif yaitu:
 • Struktur dinding selnya tipis, sekitar 10 – 15 mm, berlapis tiga atau 
multilayer.
• Dinding selnya mengandung lemak lebih banyak (11-22%), peptidoglikan 
terdapat didalam lapisan kaku, sebelah dalam dengan jumlah sedikit ± 
10% dari berat kering, tidak mengandung           asam tekoat         
• Kurang rentan terhadap senyawa penisilin.
• Pertumbuhannya tidak begitu dihambat oleh zat warna dasar misalnya 
kristal violet.
• Komposisi nutrisi yang dibutuhkan relatif sederhana.
• Tidak resisten terhadap gangguan fisik.
• Resistensi terhadap alkali (1% KOH) lebih pekat
• Peka terhadap streptomisin
• Toksin yang dibentuk Endotoksin
 Ciri-ciri bakteri gram positif yaitu:
• Struktur dinding selnya tebal, sekitar 15-80 nm, 
berlapis tunggal atau monolayer. Contoh Gambar
• Dinding selnya mengandung lipid yang lebih 
normal (1-4%), peptidoglikan ada yang sebagai 
lapisan tunggal. Komponen utama merupakan 
lebih dari 50% berat ringan. Mengandung asam 
tekoat.
• Bersifat lebih rentan terhadap penisilin.
• Pertumbuhan dihambat secara nyata oleh zat-
zat warna seperti ungu kristal.
• Komposisi nutrisi yang dibutuhkan lebih rumit.
• Lebih resisten terhadap gangguan fisik.
• Resistensi terhadap alkali (1% KOH) larut
• Tidak peka terhadap streptomisin
• Toksin yang dibentuk Eksotoksin Endotoksin
Gram positif dan gram negatif
 Perbedaan Gram Positif dan Gram Negatif
Gram Positif Gram Negatif
Dinding sel homogen dan tebal (20-80 nm)  terdiri lapisan membran luar dan 
sebagian besar tersusun dari  membran dalam, diantaranya 
peptidoglikan  sebagian lagi terdiri  terdapat lapisan peptidoglikan 
dari polisakarida lain dan asam  setebal 2-7 nm, tebal membran luar 
teikoat. 7-8 nm tersusun dari polisakarida, 
lipid, dan protein.

Bentuk sel  bulat, batang atau filamen. bulat, oval, batang lurus atau 

melingkar seperti koma, heliks atau 
flamen
Reproduksi  pembelahan biner pembelahan biner, kadang 
pertunasan.

Metabilosme kemoorganoheterotrof. fototrof, kemolitoaotutrof, 

kemoorganoheterotrof.

Alat gerak kebanyakan nonmitil, bila memiliki  motil dan non motil, bentuk flagela 

motil maka tipe falgelanya adalah  bervariasi, polar, iopotrikus dan 
petritrikus. petritrikus.
 Perbedaan relatif sifat bakteri gram positif 
dan gram negatif
Sifat Bakteri garam (+) Bakteri gram negatif(-)

Komposisi dinding sel Kandungan lipid rendah (1-4%) Kandungan lipid tinggi

.

Ketahanan terhadap penisilin Lebih sensitif Lebih tahan

Penghambatan  oleh  pewarna  Lebih dihambat Kurang dihambat

basa (VK)

Kebutuhan nutrisi Kebanyakan spesies relatif kompleks Relatif sederhana

Ketahanaa terhadap Lebih tahan Kurang tahan

perlakuan fisik
2.Pewarnaan Tahan Asam

Pewarnaan ini ditujukan terhadap bakteri yang mengandung lemak dalam 
konsentrasi tinggi sehingga sukar menyerap zat warna, 
namun jika bakteri diberi zat warna khusus misalnya karbolfukhsin melalui 
proses pemanasan, maka akan menyerap zat warna dan akan tahan diikat 
tanpa mampu dilunturkan oleh peluntur yang kuat sekalipun seperti asam-
alkohol. Karena itu bakteri ini disebut bakteri tahan asam (BTA).
 

Keterangan
Bakteri tahan 
asam (pink) 
dan bakteri 
tidak tahan 
asam (biru)
4.Pewarnaan Khusus dibagi menjadi 3 :

1.Pewarnaan Spora 2.Pewarnaan flagel

 
3.Pewarnaan kapsul
 
1.Pewarnaan Spora

-Endospora sulit diwarnai dengan metode Gram.
-Untuk pewarnaan endospora,perlu dilakukan 
pemanasan supaya cat malachite hijau  bisa masuk 
ke dalam spora.
-Endospora merupakan sebuah fase yang dilakukan 
oleh beberapa bakteri, seperti Bacillus dan 
Clostridium memproduksi bentuk pertahanan hidup 
pada kondisi yang tidak menguntungkan.

 
Gambar Pewarnaan Spora
2.Pewarnaan flagel

• Pewarnaan flagel dengan memberi suspense 
koloid garam asam tanat yang tidak stabil, 
sehingga terbentuk presipitat tebal pada 
dinding sel dan flagel.
• Flagelum (jamak flagela) adalah alat gerak 
(motile organ) berbentuk cambuk pada 
sejumlah organisme bersel satu. Contohnya 
adalah alga bersel satu Euglena viridis dan 
bakteri Escherichia coli
Bentuk-bentuk flagel
3.Pewarnaan kapsul

• Pewarnaan ini menggunakan larutan Kristal violet 
panas, lalu larutan tembaga sulfat sebagai 
pembilasan menghasilkan warna biru pucat pada 
kapsul, karena jika pembilasan dengan air dapat 
melarutkan kapsul. Garam tembaga juga memberi 
warna pada latar belakang. Yang berwana biru 
gelap.
Gambar Pewarnaan Kapsul
4.Pewarnaan Negatif
• Pewarnaan negatif atau pengecetan 
negatif adalah pewarnaan yang 
dilakukan bukan pada mikrobanya 
melainkan pewarnaan tersebut 
ditunjukan pada latar belakang dari sel-
sel mikroba. Pewarnaan negatif 
memerlukan pewarna asam seperti 
eosin atau negrosin.
BAKTERI NEGATIF
SESI PERTANYAAN
KELOMPOK 1

Apa keunggulan dari teknik pewarnaan differensial

daripada teknik pewarnaan yang lain?

§ Keunggulan pewarnaan differensial dari pada yang lain:Jika 
pewarnaan sederhana hanya bisa melihat bentuk sel, berbeda 
dengan pewarnaan differensial yang bisa melihat struktur sel 
berdasarkan dinding selnya
 KELOMPOK 2

Apa yang dimaksud dengan peptidoglikan?

Peptidoglikan merupakan suatu bahan 
yang terkandung didalam dinding sel 
bakteri. Peptidoglikan tersebut 
terdiri  dari polimer modifikasi gula-gula 
yang diikatsilangkan dengan polipeptida 
pendek yang berbeda dari satu spesies 
ke spesies lain.
KELOMPOK 3
Dalam pewarnaan sederhana di pewarnaan basa menggunakan cat 
nigrosin. Mengapa memakai cat nigrosin? Apa sajakah zat yang 
terkandung dalam cat nigrosin, segingga kompatibel terhadap metode 
pewarnaan ini?

Tinta cina atau nigosin merupakan jenis pewarna asam dan 
bermuatan negati. Tinta cina tidak akan bisa berkaitan dengan 
dinding sel dan bakteri karena sama-sama bermuatan 
negatif,sehingga tinta cina hanya akan mewarnai permukaan 
preparat atau dengan kata lain membuat gelap latar belakang dari 
bakteri.
KELOMPOK 4
Berikan alasan mengapa pewarnaan gram dibagi 
menjadi pewarnaan gram positif dan pewarnaan 
gram negatif

Karena di dasarkan dari jenis bakteri, yaitu bakteri 
gram positif dan bakteri gram negatif. Sedangkan 
dasar perebedaan bakteri gram positif dan negatif 
didasarkan pada perbedaan komposisi dinding sel 
bakteri yaitu peptidoglikan
KELOMPOK 6
Mengapa endospora sulit diwarna menggunakan 
pewarnaan gram?

Endspora sulit diwarnai dengan metode gram, 
karena Endospora adalah struktur yang sangat 
tahan dan tidak aktif yang dibentuk sebagai 
tanggapan terhadap kondisi lingkungan yang 
tidak menguntungkan.untuk pewarnaan 
endspores perlu di lakukan pemanasan supaya 
cat melachite hijau bisa masuk kedalam Spora
KELOMPOK 7
Apa fungsi dari perwarnaan gram dan perwarnaan tahan 
asam?

Berguna untuk    
  -mengetahui bentuk morfologi dari suatau mikroorganisme 
-dapat mengetahui jenis gram pada suatu bakteri -
membedakanbakteri-bakteri karena reaksinya dengan sel 
bakteri akan memberikan warna berbeda.Perbedaan inilah 
yang digunakan sebagai dasar pewarnaan bakteri.Fungsi 
pewarnaan tahan asam selain untuk mengetahui bentuk 
dan susunan sel bakteri juga untuk mengetahui sifat-sifat 
dari bakteri/physiologis dari bakteri (reaksi dinding sel 
bakteri).
KELOMPOK 8
Mengapa pengecatan gram hanya bisa dilakukan oleh 
mikroorganisme yang memiliki dinding sel saja?

Karena seperti halnya bakteri tahan asam,yaitu genus Mycobacterium 
diketahui memiliki sejumlah besar zat lipodial(berlemak) di dalam 
dinding selnya relatif tidak permeabel terhadap zat-zat warna yang 
umum sehingga sel bakteri tersebut tidak di terwarnai oleh metode 
pewarnaan biasa seperti pewarnaan sederhana atau gram
KELOMPOK 9
Apa fungsi dari minyak imersi pada 
pembuatan preparat untuk pewarnaan?

Minyak imersi adalah minyak yang dipakai 
untuk olesan pada mikroskop. Fungsinya untuk 
memperjelas obyek. Minyak imersi memiliki 
indeks refraksi yang tinggi dibandingkan dengan 
air atau udara sehingga objek yang kita amati 
dapat terlihat lebih jelas dibandingkan dengan 
tanpa minyak imersi