PROTOKOLMCF

ARL
ANDSTANDARDUNTUKPENGUKURANBI
OFI
LM

Tuj
uan
Menentukan hubungan j
uml ah bakt
eriy
ang t
erbe
ntuk dal
am bi
ofi
lm dan ni
lai
opt
icaldens
ity(
OD)y angter
ukur

Pe
ndahul
uan
Pe ngukur ans t andar dy angdi gunakandal am mi krobiologidal am pe ngukur an
inoc ulum t urbiditasbakt er i
.St andar dy angbi as anyadi gunakanadal ah mi nimum
inhi bi
t oryc onc entr at i
on( MI C)y ai
tupe ngukuranpe nurunanbakt erite r
hadapobat
ant imikr oba( Har risone tal.,2010) .Pe ngukur ant ersebuthany abi sadilakukanunt uk
kondi sibakt er iyangpl ankt oni c
.Dal am kondi sibakt e r
iy angbi of i
lm,c ukups uli
t
me ne nt ukans uspe ns ibakte ri
.
Se l
amape mbe ntukanbi ofil
m,bakt eri-
bakt eriakanme ngeluarkans i
nyalunt uk
ber kumpuldanbe r sama- samame mpr oduksibe nang- benangmat riksy angdi sebut
extr acellularpol ymers ubs tanc es(EPS)( Otto,2008) .Dal am pr osesinic ukups uli
t
me nggunakanMI Ckar enabi of il
m me mpr oduksie nzim β- lact
am at aue f
fluxpump
yangbe rfungs isebagaidi ff
us ionbar r
ier( St
ewar t&Wi lli
am Cos t
e rt
on,2001) .Secara
visual,s ulitme nent ukans e lbakt erididal am bi ofilm.Unt uki tudi berikans tandard
unt ukme nghit ungt urbidit
ass uspensibi ofi
lm.
Pe ngukur anbi omas sbi ofilm dalam s uspens idapatdi l
akukande nganbe r
bagai
caray aitude nganc al
orime tricme nggunakans pec t
rome termaupunhe t
erot r
ophic
platec ounty aitupe nghi tungankol onibi ofi
lm.

Al
atdanBahan
Al
at Bahan
Microplat
er eader Cawanpetri TSBs te
ril+2%s ucros
e(w/v)
96we llmicroplat
e Micr
opi
pet LarutanTSA( hangat )
Tabungr eaksi Ti
ppipet Larutan 0,9% NaCl
Time r Vort
exShaker (fi
siol
ogis)
Incubator AgarMi ringBakt e
ri

Pr
ose
dur
Kultur bakte r
idapat di buat dengan s atu ose dar iagar mi ri
ng bakt er
i
dic
ampur kankedal am l arutanTSBs ter
ildandi di
amkandii nc ubatorsel
amami n2
jam ( s
ampaigumpal anbakt eritercampurr atadalam l arutan,( c
atat
an:J ikas uli
t
lar
utdapatdi diamkan l ebihlama) ).Larutan kult
urt e r
sebutdi t
ambahkan 2mL
sucrose(w/ v)dandi ratakande nganme nggunakanv orte
xs hake r.Kult
urdi diamkan
minimal±90me ni tdalam i ncubatorsampait erbent
ukmat rik.Matrikte rbentuk
dapatdi t
andaide nganbe ntuklarutanterli
hatagakke ntal.Kultur50μLdi mas ukkan
kedal am mi croplatedandi ukurkedal am mi cr
oplat
er eaderunt ukme ne ntukan
opti
c alde ns
ity(OD) .Blanks potunt ukkal ibr
asiditentukan de ngan TSB+s ukrosa
ster
il
.Kul
turpadawaktutersebutdi
ambil1mL(ber
gant
ungjumlahlar
utanfi
si
ologi
s)
-
kedalam 9mLlarut
anf i
si
ologis
)danshakerunt
ukmendapat
kanpengence
ranke10
1
jumlahkol
onisepe
rtipadaGambar1.

Gambar1.Pe
nge
nce
ranbakt
eri

Lakukanhalt ers
ebutde nganv ariasiwakt udi am i nc ubasiminimal30me nit,
(pali
ngbai kdi lakukandal am j angkawakt upe rjam unt ukme mbe ri
kanni laikoloni
dalam be ntukCF U/mLy angbai k).Se telahdi l
akukanpe nge nceran,diambi llar
ut an
pengenc eran t ersebutde ngan mi cropipe t
tede ngan v olumeambi lte r
tentu,mi s al
50μLkedal am c awanpe tr
i.L arutanTSAs terildi t
uangkankedal am cawanpe tri
terse
but .Catat an:te mperaturl arutanTSAt idakt e r
lalupanas .Tunggu24j am unt uk
dihit
ungj uml ahkol onite
r sebutdal am ODy angdi ukurt adi.
-
n
Pene ntuanni lai10 j uml ahkol onibe r gantungbe sarnilaiODy angdi peroleh
daripengukur ande nganme nggunakanmi cropl ate.Semaki nbe sarODmakas emaki n
banyak di lakukan pe ngenc eran ke -n.Mi sal ,jika nilaiOD595nm=0. 5 maka dapat
dil
akukanpe nge nceranke -4.J umlahkol oniy angdapatdi hitunghany aki saran30-
300kol oni,jikal ebih/kurangdar ikisarandi anggapt i
dakv ali
d.

Pe
nghi
tungan
Penghi
tunganCFU/ mL( KSA-SM-07,2010).
Diket
ahui:
Volumeambi l=Vplate
Jumlahpengencean10-n=f
r .pengenceran
Jumlahkoloni=koloni

Mis
al,vol
ume ambi
l50μL dan pe
nge
nce
ran ke 10-4,j
uml
ah kol
oni46 maka
pe
nghit
ungan:
Namunhar
usber
upalogari
tmaunt
ukpe
rhi
tungans
elanj
utny
a
LogCF
U/mL=l
og9,2=0,96

Pe
rbandi
ngan l
og CFU/mL te
rhadap ni
laiOD untuk me
ndapatkan ni
laimode
l
pe
nghit
unganyangi
dealdal
am penent
uankonv
ers
i.Cont
ohsepe
rtipadaberi
kut
:

Re
fer
ens
i

Harris
on,J .J.,St
remic k,C.a,Turne r
,R.J.
,Allan,N.D. ,Olson,M.E. ,&Ce ri
,H.( 2010).
Mi cr
ot i
tersusceptibil
it
yt est
ingofmi crobesgr owingonpe gli
ds :ami ni aturi
zed
biofi
lm mode lf
orhi gh- t
hroughputscreening.Natur eProtocols,5( 7),1236–1254.
https:
/ /doi.
org/10.1038/ nprot.
2010.71
KSA-SM- 07.( 2010).Thel ogr educti
on( LR)meas ur eofdi sinfectantef fi
cac y.MSU
Centerf orBiofi
lm Engi neeri
ng.
Otto,M.( 2008).St aphy l
oc occ
albi of
ilms.Cur rentTopi csi n Mi c robiology and
Immunol ogy,322,207–228.ht t
ps:/
/doi.org/10.1007/978- 3-540- 75418- 3_10
St
ewar t,P.S. ,& Wi l
liam Cos ter
ton,J.(2001) .Ant i
bioti
cr esis
tanc eofbac teri
ai n
biofi
lms .The L ancet,358( 9276),135–138.ht tps:/
/ doi.
org/ 10. 1016/ S0140-
6736( 01)05321-1