Laporan Praktikum Kultur In vitro/2016/ kelompok 1
Variasi NAA dan Kinetin terhadap Pertumbuhan
Embriogenesis Somatik Daun Kelor (Moringa
oleifera L.) Secara In - Vitro
C.E.S Himayani (1513100013)
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail: putrichesa@yahoo.com
Abstrak, Kultur jaringan atau Kultur in vitro merupakan salah
satu metode perbanyakan tanaman secara vegetatif modern.
Pada praktikum ini digunakan eksplan dari daun kelor
(Moringa oleifera L.) yang ditumbuhkan pada medium
MSO, MS + NAA 0,5ppm + Kinetin 1ppm, MS + NAA 1ppm +
Kinetin 0,5ppm, dan MS + NAA 1ppm + Kinetin 1. Tujuan dari
praktikum ini adalah untuk mengatahui pengaruh variasi NAA
dan Kinetin terhadap pertumbuhan embriogenesis somatik
daun kelor (Moringa oleifera L.) dalam kondisi kultur In vitro.
Kata kunci –
I. PENDAHULUAN
ELOR (Moringa oleifera L.) merupakan tumbuhan dari
K suku Moringaceae. Daunnya berbentuk bulat lonjung
dan ukurannya yang kecil tersusun rapi pada sebuah
tangkai, biasanya dimasak sebagai sayur, untuk pengobatan
dan untuk menjaga kesehatan. Dapat digunakan untuk
menjaga kesehatan karena daun kelor mengandung potasium
tiga kali lipat dari pada pisang, mengandung kalsium emapat
kali lipat lebih banyak daripada susu, memiliki vitamin C
tujuh kali lipat daripada jeruk, mengandung vitamin A empat
kali lipat daripada wortel dan memiliki protein 2 kali lipat
daripada susu [1]. Oleh karena itu daun kelor bermanfaat
untuk mengobati alergi, herpes, sakit mata dan flek di wajah.
Dengan segudang manfaat yang telah diketahui masyarakat,
maka kebutuhan tanaman kelor meningkat, namun disisi lain
ada beberapa kendala yaitu rentannya hama penyakit yang
menyerang tanaman kelor, yang paling umum adalah hama
serangga dan jamur. Serangga menggigit dan mengunyah
bagian tanaman, menyebabkan kerusakan daun, tunas,
bunga, buah dan gangguan aliran getah. Serangan serangga
sering terjadi pada awal musim kering ketika serangga tidak
dapat menemukan sumber makanan. Sedangkan jamur dapat
menimbulkan muculnya bintik – bintik coklat pada daun dan
kemudian menyebar menutupi permukaan daun sepenuhnya
dan dapat menyebabkan daun mati
Salah satu alternatif untuk mengatasi kendala
tersebut adalah dengan melakukan perbanyakan tanaman
secara vegetatif modern yaitu teknik Kultur In Vitro [2].
Tahap perkembangan praktikum Kultur In-Vitro ini akan
diamati sampai pertumbuhan Embriogenesis somatik,
dimana embriogenesis somatik merupakan suatu proses
1
dimana sel – sel soma berkembang menjadi embrio melalui
tahap – tahap morfologi yang khas tanpa melalui fusi gamet
[3]. Embrio somatik yang berasal dari kultur sel, jaringan,
atau organ dapat terbentuk secara langsung dan tidak
langsung. Embrio somatik yang terbentuk secara langsung
meliputi pembentukan embrio dari sel tunggal atau
kelompok sel yang menyusun jaringan eksplan tanpa melalui
pembentukan kalus, sedangkan embrio yang terbentuk
secara tidak langsung adalah pembentukan embrio melalui
fase kalus [4]. Embriogenesis somatik memiliki beberapa
kelebihan diantaranya adalah waktu yang dibutuhkan untuk
menghasilkan planlet singkat dalam areal yang kecil,
menekan adanya hama penyakit yang menyerang tanaman,
tidak tergantung pada musim dan memungkinkan manipulasi
genetik [5]. Pembentukan kalus pada Embriogenesis somatik
dapt berasal dari akar, tangkai daun, tangkai bunga, daun,
dan batang [6].
Sel somatik atau eksplan yang digunakan pada
praktikum ini adalah bagian daun dari tanaman kelor
(Moringa oleifera L.) dan eksplan yang digunakan adalah
jaringan yang masih muda. Jaringan muda ini tersusun atas
sel-sel yang masih muda dan aktif membelah sehingga
diharapkan bisa menghasilkan tanaman yang sempurna [7].
Untuk menginduksi pertumbuhan Eksplan dalam
embriogenesis somatik diperlukan medium yang
mengandung garam mineral, vitamin, hormon (Zat Pengatur
Tumbuh), agar dan gula. Zat pengatur tumbuh merupakan
salah satu faktor yang menentukan keberhasilan
embriogenesis somatik, seperti auksin dan sitokinin [8].
Peran auksin dalam embriogenesis somatik antara lain untuk
inisiasi embriogenesis somatik, induksi kalus embriogenik
[9], prolifersai kalus embriogenik, induksi embrio somatik
[10].
Zat Pengatur tumbuh yang digunakan pada
praktikum ini adalah Auksin golongan NAA dan Kinetin
dengan konsentrasi yang berbeda – beda yaitu MS + NAA
0,5ppm + Kinetin 1ppm, MS + NAA 1ppm + Kinetin 0,5ppm,
dan MS + NAA 1ppm + Kinetin 1 . NAA berfungsi untuk
merangsang pembesaran sel, pertumbuhan akar dan
pertumbuhan aksis longitudinal pada tanaman. Sedangkan
kinetin berfungsi untuk merangsang pembelahan sel yang
disintesis pada ujung akar, dan untuk merangsang
Laporan Praktikum Kultur In vitro/2016/ kelompok 1
pertumbuhan tunas pada kultur jaringan. Dengan fungsi dari
masing – masing Zat Pengatur Tumbuh tadi dapat membantu
pertumuhan eksplan.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui
pengaruh variasi NAA dan Kinetin terhadap pertumbuhan
embriogenesis somatik daun kelor (Moringa oleifera L.)
dalam kondisi kultur In vitro.
II. METODOLOGI
2.1 Waktu dan Tempat
Praktikum ini dimulai pada tanggal 3 Maret 2016 di
laboratorium kultur jaringan, Jurusan Biologi, Fakultas
Matematika dan Ilmu Pegetahuan Alam Institut Teknologi
Sepuluh Nopember, Surabaya.
2.2 Alat dan Bahan
a. Pembuatan Larutan Stok
Alat yang digunakan dalam pembuatan larutan stok
ini adalah Magnetic Stirrer, Timbangan analitik, tabung
erlenmeyer, gelas ukur, gelas kimia, pipet makro, pipet
mikro, pipet tetes, pengaduk, pH meter, MS dengan unsur
makro, MS dengan unsur mikro, besi, vitamin, ZPT (Kinetin
dan NAA).
b. Pembuatan Medium
Alat yang digunakan dalam pembuatan medium ini
adalah Timbangan analitik, Tabung erlenmeyer, kaca arloji,
pengaduk, kompor listrik, botol kultur, plastik tahan panas,
karet pentil dan pipet tetes. Sedangkan bahan yang
digunakan adalah makronutrien (NH4NO3, CaCl2.2H2O,
MgSO4.7H2O, KNO3, KH2PO4), mikronutrien (MnSO4.H2O,
ZnSO4.4H2O, H3O3, KI, NaMO4.2H2O, CuSO4.5H2O,
CoCl2.6H2O), zat besi (FeSO4.7H2O dan Fe-EDTA), vitamin
( Glycine, Nicotinic acid, Pyridoxine, HCl dan Thiamine
HCl), Myo-inositol, agar-agar, sukrosa, akuades, KOH atau
NaOH 1M, HCL 1M, ZPT (Kinetin, IAA),
c. Sterilisasi Lingkungan Kerja
Alat dan bahan yang digunakan untuk sterilisasi
lingkungan kerja ini diantaranya adalah Laminar Air Flow,
sprayer, Alkohol 70% dan tissue.
d. Sterilisasi Alat dan Media
Alat dan bahan yang digunakan untuk sterilisasi
Alat dan media adalah Autoclave, peralatan kaca (botol
kultur, erlenmeyer, Petridish, gelas piala), peralatan tanam
(pinset, scalpel), aluminium foil, karet gelang, plastik tahan
panas, aquades).
e. Sterilisasi Bahan tanam
Alat dan bahan yang digunakan untuk sterilisasi
bahan tanam ini adalah botol kultur, pengaduk, Bunsen,
Pisau, gunting, tissue, larutan antifungal 2mg/l, larutan
NaOCl 5,25%, larutal alkohol 70%, alkohol 96%, dan
aquades steril, daun kelor (Moringa oleifera L.).
f. Inokuasi Eksplan
Alat dan abahan yang digunakan untuk Inokulasi
eksolan adalah botol kultur berisi medium yang telah di
1
autoclave, petridish, Laminar Air Flow, Buncen, scalpel,
pinset, alkohol 70%, tissue, plastik tahan panas, karet gelang
yang telah disterilisasi dan wrap.
2.3 Cara Kerja
a. Sterilisasi Lingkungan Kerja dan Alat
Pada Sterilisasi Lingkungan Kerja dan Alat yang
dilakukan adalah disiapkan Alkohol 70% dan dimasukkan
ke dalam spayer. Alkohol disemprotkan pada tangan terlebih
dahulu dan disemprotkan pada meja kerja yang ada di dalam
Laminar Air Flow. Lampu UV dinyalakan selama 2 Jam.
Setelah selesai, lampu UV dimatikan dan diganti dengan
lampu neon serta blower dinyalakan untuk sirkulasi udara di
dalam Laminar Air Flow. Ruang kerja siap digunakan.
Selanjutnya Semua peralatan yang akan digunakan dicuci
kemudian dikeringkan. Peralatan seperti pinset, scalpel,
cawan petri, dll dibungkus dengan kertas paying, untuk botol
kultur dimasukkan kedalam plastik tahan panas dan di kedua
ujungnya ditali menggunakan karet kemudian semua
peralatan dimasukkan ke dalam autoklaf pada suhu 121 oC
tekanan 1 atm selama 15 menit. Setelah selesai, semua
peralatan dikeluarkan dan disimpan dalam Laminar Air
Flow.
b. Pembuatan Larutan Stok
Larutan stok yang dibuat adalah Larutan stok A
(Larutan hara makro), Larutan stok B (Larutan hara mikro),
Larutan stok C (FeSO4 + 7H2O+ Na-EDTA),Larutan stok D
(Larutan Vitamin), Larutan Stok E (Larutan Mio-inositol)
dan Larutan Stok F (Larutan ZPT). Larutan Stok A dibuat 10
kali dilarutkan dalam 100ml Aquades, larutan Stok B dibuat
100 kali dilarutkan dalam 100 ml aquades, larutan stok C
dibuat 100 kali dilarutkan dalam 1 L aquades, larutan stok D
dibuat 100 kali kedalam 100 ml aquades, larutan stok E
dibuat 100 kali dilarutkan dalam 100 ml aquades, dan larutan
stok F dibuat 100 kali dilarutkan kedalam 100 ml aquades.
Pembuatan Larutan Stok ZPT NAA dan
Kinetin. Pembuatan NAA 100 ppm dilakukan dengan
penimbangan bahan dengan 100 kali konsentrasi. Padatan
NAA dilarutkan dengan KOH 1 N sambil di aduk sampai
larut lalu ditambahkan 250 ml aquades steril kedalam
erlenmeyer 500ml [4]. Setelah larutan homogen larutan
ditambhakan aquades kembali hingga volumenya mencapai
500ml. Pembuatan larutan stok Kinetin 100 ppm yaitu bahan
ditimbang bahan dengan 100 kali konsentrasi dan
ditambahkan HCL 1N lalu ditambahkan 250ml aquades
steril kedalam erlenmeyer 500ml. Setelah bahan larut
(homogen) larutan ditambahkan aquades steril sampai
500ml. Stok zatpengatur tumbuh disimpan dalam erlenmeyer
500ml dan permukaan botol ditutup dengan aluminium foil
serta diberi label. Semua larutan stok ZPT disimpan dalam
lemari pendingin.
Perhitungan volume lkarutan stok ZPT yang dicari
menggunakan rumus dibawah ini :
V1.M1 = V2.M2
Keterangan :
V1 = volume larutan stok yang dicari
M1 = konsentrasi larutan stok yang tersedia
Laporan Praktikum Kultur In vitro/2016/ kelompok 1
V2 = volume larutan stok yang akan dibuat
M2 = konsentrasi larutan stok yang akan dibuat [11]
Pembuatan larutan stok B (larutan hara mikro),
yang pertama dilakukan adalah ditimbang bahan penyusun
larutan hara mikro satu persatu dengan 1000 kali konsentrasi,
yaitu MnSO . H O (22,3 g/l), ZnSO4.7H2O (8,6 g/l), H BO
47 2 3 3
(6,2 g/l), KI (0,83 g/l), CuSO4.H2O (0,025 g/l),
Na2MoO4.2H2O (0,25 g/l), CoCl2.6H2O (0,025 g/l).
Masing – masing padatan dilarutkan dalam aquades secara
terpisah. Setelah padatan larut, larutan disatukan dalam
Erlenmeyer kemudian ditambahkan aquades hingga 100ml.
Kemudian larutan dikocok dan dipindahkan pada botol
dengan label stok Mikronutrien. Setelah itu, larutan stok
disimpan dalam lemari es.
Pembuatan larutan stok A (larutan hara
makro), yang pertama dilakukan adalah ditimbang bahan
penyusun hara makro satu persatu dengan 1000 kali
konsentrasi, yaitu NH4NO3, CaCl2.2H2O, MgSO4.7H2O,
KNO3, KH2PO4. Masing – masing padatan dilarutkan dalam
aquades secara terpisah. Setelah padatan larut, larutan
disatukan dalam Erlenmeyer kemudian ditambahkan
aquades hingga 100ml. Kemudian larutan dikocok dan
dipindahkan pada botol dengan label stok Makronutrien.
Setelah itu, larutan stok disimpan dalam lemari es.
Pembuatan Larutan stok FeSO4.7H2O dan
Na2EDTA, Padatan FeSO . H O ditimbang sebanyak 2,78
47 2
g/l kemudian dilarutkan dalam aquades sedikit demi sedikit.
Setelah padatan larut, larutan dimasukkan ke dalam
Erlenmeyer dengan ukuran 100 mL. larutan ditambah
aquades hingga mecapai batas 1 L dalam Erlenmeyer.
Larutan dikocok lalu dipindah dalam botol dengan di beri
label stok FeSO . H O dan dismpan dalam lemari es.
47 2
Pembuatan larutan stok Na EDTA dilakukan dengan
2 medium dan diaduk secara terus menerus sampai tidak
menimbang padatan Na EDTA ditimbang sebanyak 3,73 g/l
2
kemudian dilarutkan dalam aquades sedikit demi sedikit.
Setelah padatan larut, larutan dimasukkan ke dalam
Erlenmeyer dengan ukuran 100 mL. larutan ditambah
aquades hingga mecapai batas 1 L dalam Erlenmeyer.
Larutan dikocok lalu dipindah dalam botol dengan di beri
label stok Na EDTA dan dismpan dalam lemari es.
2
c. Pembuatan dan Sterilisasi Medium Kultur In – Vitro
Pada praktikum ini digunakan 4 medium yang
berbeda, yaitu MSO (500 ml) , MS + NAA 0,5ppm + Kinetin
1ppm (500 ml) , MS + NAA 1ppm + Kinetin 0,5ppm (250
ml) , dan MS + IAA 1ppm + Kinetin 1ppm (250 ml).
Pembuatan medium MSO disiapkan erlenmeyer
500 ml, diisi dengan larutan Stok A (NH4NO3) + Stok B
(KNO3) sebanyak 10 ml, Stok C (CaCl2.2H2O) + Stok D
(MgSO4) sebanyak 5 ml, Stok E (FeSO4.7H2O dan Fe-
EDTA) + Stok F (ZnSO4.4H2O) sebanyak 2,5 ml,
ditambahkan Stok Myoinositol sebanyak 5 ml, Stok Vitamin
sebanyak 0,5 ml, ditambhakan gula 15 gram yang telah
dilarutkan menggunakan aquades, ditambahkan aquades
sebanyak 200 ml diaduk semua larutan, ditambahkan
aquades sampai 500 ml dan ditambahkan agar sebanyak 4
1
gram, diaduk semua larutan supaya homogen, dipanaskan
medium dan diaduk secara terus menerus sampai tidak
terdapat partikel yang ada di medium, Dalam keadaan masih
cair, media dibagi kedalam 30 botol kultur yang telah
disterilisasi dengan tinggi 2 – 3 cm/ botol.
Pembuatan medium MS + NAA 0,5ppm + Kinetin
1ppm dengan stock 100ppm disiapkan erlenmeyer 500 ml,
diisi dengan larutan Stok A (NH4NO3) + Stok B (KNO3)
sebanyak 10 ml, Stok C (CaCl2.2H2O) + Stok D (MgSO4)
sebanyak 5 ml, Stok E (FeSO4.7H2O dan Fe-EDTA) + Stok
F (ZnSO4.4H2O) sebanyak 2,5 ml, ditambahkan Stok
Myoinositol sebanyak 5 ml, Stok Vitamin sebanyak 0,5 ml,
ditambhakan gula 15 gram yang telah dilarutkan
menggunakan aquades, ditambahkan aquades sebanyak 200
ml diaduk semua larutan, ditambahkan NAA sebanyak 2,5
ml dan Kinetin sebanyak 5ml, diaduk hingga tercapur,
ditambahkan aquades sampai 500 ml dan ditambahkan agar
sebanyak 4 gram, diaduk semua larutan supaya homogen,
dipanaskan medium dan diaduk secara terus menerus sampai
tidak terdapat partikel yang ada dimedium, Dalam keadaan
masih cair, media dibagi kedalam 30 botol kultur yang telah
disterilisasi dengan tinggi 2 – 3 cm/ botol.
Pembuatan medium MS + NAA 1ppm + Kinetin
0,5ppm dengan stock 10ppm disiapkan erlenmeyer 250 ml,
diisi larutan Stok A (NH4NO3) + Stok B (KNO3) sebanyak 5
ml, Stok C (CaCl2.2H2O) + Stok D (MgSO4) sebanyak 2,5
ml, Stok E (FeSO4.7H2O dan Fe-EDTA) + Stok F
(ZnSO4.4H2O) sebanyak 1,25 ml, ditambahkan Stok
Myoinositol sebanyak 2,5 ml, Stok Vitamin sebanyak 0,25
ml, ditambahkan gula 7,5 gram yang telah dilartkan
menggunakanaquades, ditambahkan aquades sebanyak 150
ml diaduk semua larutan, ditambahkan NAA 25 ml dan
Kinetin 12,5 ml, diaduk hingga tercapur, ditambahkan
aquades hingga 250 ml dan ditambahkan Agar sebanyak 2
gram, diaduk semua larutan supaya omogen, dipanaskan
terdapat partikel yang ada di medium, dalam keadaan masih
cair, media dibagi kedalam 15 botol kultur yang telah
disterilisasi dengan tinggi 2 – 3 cm/botol.
Pembuatan medium MS + NAA 1ppm + Kinetin 1
ppm dengan stock 100ppm disiapkan erlenmeyer 250 ml,
diisi larutan Stok A (NH4NO3) + Stok B (KNO3) sebanyak 5
ml, Stok C (CaCl2.2H2O) + Stok D (MgSO4) sebanyak 2,5
ml, Stok E (FeSO4.7H2O dan Fe-EDTA) + Stok F
(ZnSO4.4H2O) sebanyak 1,25 ml, ditambahkan Stok
Myoinositol sebanyak 2,5 ml, Stok Vitamin sebanyak 0,25
ml, ditambahkan gula 7,5 gram yang telah dilartkan
menggunakanaquades, ditambahkan aquades sebanyak 150
ml diaduk semua larutan, ditambahkan IAA 2,5 ml dan
Kinetin 2,5 ml, diaduk hingga tercapur, ditambahkan
aquades hingga 250 ml dan ditambahkan Agar sebanyak 2
gram, diaduk semua larutan supaya homogen, dipanaskan
medium dan diaduk secara terus menerus sampai tidak
terdapat partikel yang ada di medium, dalam keadaan masih
cair, media dibagi kedalam 15 botol kultur yang telah
disterilisasi dengan tinggi 2 – 3 cm/botol.
Setelah medium diletakkan didalam botol kultur,
ditutup botol kultur menggunakan plastik tahan panas yang
diikat dengan karet. Diberi label pada botol kultur sesuai
dengan nama medium dan tanggal pembuatan medium.
Laporan Praktikum Kultur In vitro/2016/ kelompok 1
Medium disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 oC
tekanan 1,2 atm selama 15 menit. Selanjutnya diambil
medium dari autoklaf dan dikencangkan ikatan karet yang
ada di botol, diletakkan ditempat yang sudah disemprot
alkohol dan saat pemindahan kultur dari autoklaf ke tempat
penyimpanan pada bagian atas botol kultur disemprot
dengan alkohol dan Selanjutnya disimpan medium pada
ruang penyimpanan
d. Sterilisasi dan inokulasi Eksplan
Pada sterilisasi eksplan yang dilakukan pertama
adalah disediakan alat (gunting, pinset, petridisck, botol
bersih, media, botol kosong, buncen, beker glass, alkohol)
yang telah disterilkan didalam Laminar Air Flow.
Disediakan eksplan daun kelor (Moringa oleifera L.) dari
lapang. Selnajutnya dicuci eksplan daun kelor (Moringa
oleifera L.) dengan menggunakan air mengalir selama 10
menit, direndam dalam larutan air sabun selama 10 menit,
dicuci eksplan dengan air mengalir selama 5 menit.
kemudian direndam eksplan dalam larutan antifungal hingga
terendam selama 10 menit, selanjutnya direndam larutan
NaOCl 3% selama 3 menit, selanjutnya direndam eksplan
dengan alkohol 96% selama 3 menit, dan dicuci dengan
aquades selama 2 x 3 menit di dalam Laminar Air Flow.
Diambil eksplan dari dalam aquades, di potong kecil,
dimasukkan kedalam botol kultur, dipanaskan mulut botol
sebelum dimasukkan eksplan dan sebelum ditutup, disimpan
dalam ruang penumbuh dan diamati tiap harinya.
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1 Fungsi Perlakuan
Perlakuan yang paling penting pada praktikum ini
adalah proses sterilisasi. Hal ini dikarenakan dalam
melakukan kultur diperlukan kondisi yang aseptik, baik dari
peralatan yang digunakan, bahan tanaman, medium, maupun
lingkungan [11]. Sehingga perlu dilakukan sterilisasi agar
tidak terjadi kontaminasi. Sterilisasi alat dan medium dengan
cara memasukkan ke dalam autoklaf pada tekanan 1,2 atm
dengan suhu 121 oC selama 15 menit. Ada beberapa alat yang
sterilisasinya menggunakan pemijaran (dengan api
langsung) seperti jarum inokulum, pinset, scalpel. Untuk
sterilisasi lingkungan kerja menggunakan penyinaran
dengan UV, sinar ultra violet berfungsi untuk membunuh
mikroba yang menempel pada permukaan interior Safety
Cabinet [13].
Pada sterilisasi eksplan yang pertama dilakukan
adalah dicuci eksplan daun kelor (Moringa oleifera L.)
dengan menggunakan air mengalir selama 10 menit,
bertujuan untuk membuang bagian – bagian yang kotor dan
mati. Selanjutnya direndam dalam air sabun selama 10
menit, dicuci eksplan dengan air mengalir selama 5 menit.
Hal ini bertujuan untuk memecah koloni konyaminan yang
masih menempel dipermukaan agar koloni tersebut lebih
respon terhadap bahan – bahan sterilisasi, selain itu juga
berfungsi untuk mengurangi dan menghilangkan senyawa
fenol, terutama pada tanaman yang kandungan fenoliknya
tinggi. kemudian direndam eksplan dalam larutan antifungal
hingga terendam selama 10 menit, selanjutnya direndam
larutan NaOCl 3% selama 3 menit, selanjutnya direndam
eksplan dengan alkohol 96% selama 3 menit, dan dicuci
1
dengan aquades selama 2 x 3 menit di dalam Laminar Air
Flow. Pembilasan dengan menggunakan air mengalir berkali
– kali dan pembilasan menggunakan aquades bertujuan
untuk menghilangkan sisa – sisa bahan aktif yang masih
menempel dipermukaan bahan tanaman [14].
3.2 Hasil dan pembahasan
Hasil pengamatan terhadap eksplan membentuk
kalus menunjukkan bahwa kalus terinduksi pada medium
MS + NAA 0,5ppm + Kinetin 1ppm (gambar 1b), sedangkan
dari medium MSO sebagai kontol (gambar 1a), medium MS
+ NAA 1ppm + Kinetin 0,5ppm (gambar 1c) dan medium
MS + NAA 1ppm + Kinetin 1 ppm (gambar 1d) tidak
menunjukkan kalus yang terinduksi. Dapat dilihat pada
gambar dibawah ini :
(a) (b) (c) (d)
Gambar 1a : Eksplan pada medium MSO, 1b: Eksplan pada medium
MS + NAA 0,5ppm + Kinetin 1ppm, 1c: Eksplan pada medium MS
+ NAA 1ppm + Kinetin 0,5ppm, 1d : Eksplan pada medium MS +
NAA 1ppm + Kinetin 1 ppm. (foto pribadi,2016)
DAFTAR PUSTAKA
[1] WHO
[2] Wetherel, D.F. “Propagasi Tanaman Secara In Vitro”.New
Jersey: Avery Publishing Group Inc.(2008).
[3] Toonen MAJ,de Vries SC.”initiation of somatic embryos from
single cells”. Dalam Wang TU, “Cumming A (ed).
Embryogenesis the generation of a plant”. United Kigdom: Bios
Scientific Publishers.Ltd.(1996).
[4] Dixon, R.A. “Plant Tissue Culture”. New York: A Practical
Approach Series. Academic Press Inc.(1985).
[5] Yusnita, “Kultur Jaringan Cara Memperbanyak Tanaman Secara
Efisien”. Jakarta: Agromedia Pustaka (2004).
[6] Chawla, H.S. “Introduction to Plant Biotechnology”.USA:
Science Publishers Inc.(2000).
[7] Purwanto, A.W. “Sansievera Flora Cantik Penyerap
Racun”.Yogyakarta : Kanisius (2008).
[8] Chen, J.T. and W.C. Chang. Effect of Auxin and Cytokinins on
Direct Somatic Embryogenesis on Leaf Explant of
Oncidium’’Gower Ramsey’’ Plant Growth Regulation. 34:
229-232.(2001)
[9] Chithra, M., K.P. Martin, C. Sunandakumari, and P.V.
Madhusoodanan. Somatic Embryogenesis, Encapsulation, and
Plant Regeneration of Rotula aquatica., A Rare Rhoeophytic
Woody Medical Plant. In Vitro Cellular & Developmental
Biology. 41 : 28-31.(2005)
[10] Huan, L.V.T., T. Takamura, and M. Tanaka.Callus Formation
and Plant Regeneration from Callus Through Somatic Embryo
Structures in Cymbidium orchid. Plant Science. 166: 1443-
1449.(2004).
[11] Hendaryono, D. P.” Teknik Kultur Jaringan (Pengenalan dan
Petunjuk Perbanyakan Tanaman Secara Vegetatif-
Modern)”.Yogyakarta : kasinus (1994).
[12] Dodds, Y. and L.W. Robert. “Experiment in Plant Tissue
Culture”. London: Cambridge University Press.( 1982).
[13] Barker, Kathy. “At The Bench, A Laboratory Navigator”. New
York: Cold Spring Harbor Laboratory Press (1998).
Laporan Praktikum Kultur In vitro/2016/ kelompok 1 1

[14] Gunawan, L.W. “Teknik Kultur Jaringan Tumbuhan”.

Bogor:Institut Pertanian Bogor (1992).
[15] Hartman,H.T.,D.E. Kester dan F.T. Davies Jr. “Plant
Propagation principles and practices”.Englewood Clifts. New
Jersey: Prentice-Hall International,Inc.(1990).
[16] Lizawati. Induksi Kalus Embriogenik Dari Eksplan Tunas
Apikal Tanaman Jarak Pagar (Jatropha curcas L.) Dengan
Penggunaan 2,4 D Dan TDZ. “Jurnal Biologi”. Jambi:
Universitas Jambi. Vol 1 No.2: ISSN:2302-6472.(2012).
[17] Wattimena, G.A dan N.A. Mattjik. “Pemulihan tanaman secara
In Vitro. Dalam Tim Laboratorium Klutur Jaringan (Ed.).
Bogor: Bioteknologi Tanaman. PAU Bioteknologi, Institut
Pertanian Bogor (1992).
[18] Pierik, R.L.M. “In Vitro culture of hinger plant”. Netherlands:
Martinus Nijhoft Publisher (1986).