Agar LIA (Lisina Hierro) - Fundamento, Preparación y Usos - Lifeder

11/26/2019 Agar LIA (Lisina Hierro): fundamento, preparación y usos - Lifeder
Agar LIA (Lisina Hierro): fundamento,

preparación y usos
Por Marielsa Gil
El agar LIA (Lisina Hierro) es una prueba bioquímica utilizada para la identificación de
bacterias de la familia Enterobacteriaceae. Este medio fue creado por Edwards y Fife,
basados en la fórmula de Falkow.
Originalmente esta prueba era un caldo que contenía peptonas, extracto de levadura,
glucosa, L-lisina, púrpura de bromocresol y agua destilada. Edwards y Fife le agregaron
agar-agar, citrato férrico de amonio y tiosulfato sódico.
Prueba positiva y negativa de la descarboxilación de la lisina. Fuente: Foto y esquema propiedad de la

autora MSc. Marielsa Gil
La prueba consiste básicamente en demostrar la presencia de la enzima lisina

descarboxilasa, capaz de reaccionar con el grupo carboxilo del aminoácido L-
lisina. También puede ocurrir una desaminación del aminoácido por la presencia de la
enzima lisina desaminasa.
Adicionalmente, la composición del medio permite evidenciar la capacidad de algunos

géneros bacterianos de producir sulfuro de hidrógeno. Finalmente, también es posible
observar
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https://www.lifeder.com/agar-lia/ 1/7
1 Fundamento
1.1 Peptonas y extracto de levadura
1.2 Glucosa
1.3 L-lisina
1.4 Indicador de pH (púrpura de bromocresol)
1.5 Citrato férrico de amonio y tiosulfato sódico
2 Interpretación de la prueba
2.1 Descarboxilación de la lisina
2.2 Desaminación de la lisina
2.3 Producción de sulfuro de hidrógeno (H2S)
3 Registro de los resultados
4 Preparación
5 Usos
6 Referencias
Fundamento
Peptonas y extracto de levadura

Como la mayoría de los medios de cultivos, el agar hierro lisina contiene componentes
que proporcionan la fuente de nutrientes necesarias para el crecimiento bacteriano.
Estos componentes están representados por las peptonas y el extracto de levadura.
Glucosa
Así mismo, este agar contiene como carbohidrato fermentable la glucosa. Se sabe que
todas las bacterias de la familia Enterobacteriaceae fermentan la glucosa.
Este paso es crucial, porque se encargará de acidificar el medio, condición indispensable

para que la enzima lisina descarboxilasa -si está presente- actúe sobre su sustrato.
En algunos géneros bacterianos se puede observar la producción de gas debido a la

fermentación de la glucosa.
El gas se evidencia cuando ocurre un desplazamiento del agar en el tubo, quedando un

espacio vacío en el fondo del mismo, o por fractura del medio en dos o más porciones.
L-lisina
Una vez descarboxilada la lisina, se forma una diamina (cadaverina) y anhídrido
carbónico.
La descarboxilación se da en presencia de la coenzima fosfato de piridoxal. Esta reacción

es irreversible.
Indicador de pH (púrpura de bromocresol)

Todos los cambios de pH ocurridos en el medio por las diversas reacciones, son
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En este sentido, cuando hay acidificación el medio se torna amarillo, y cuando hay
alcalinización el medio regresa al color morado o púrpura original.
Cuando ocurre desaminación de la lisina por la presencia de la enzima lisina desaminasa,

se forma un color rojizo en la superficie, típico en los géneros Proteus, Providencia y
algunas especies de Morganella.
Esto se debe a que durante el proceso de desaminación se forma el ácido alfa-ceto-

carbónico, que reacciona con el citrato de amonio en presencia de oxígeno, lo que
origina el color mencionado.
Citrato férrico de amonio y tiosulfato sódico

Por otra parte, las bacterias que producen sulfuro de hidrógeno quedarán en evidencia
por la presencia del tiosulfato sódico (fuente de sulfuro) y del citrato férrico de amonio,
que es el revelador del H2S.
Las bacterias que posean la enzima tiosulfato reductasa tienen la capacidad de actuar
reduciendo el tiosulfato de sodio presente, formando sulfito y sulfuro de hidrógeno
(H2S).
Este último es un gas incoloro, pero al reaccionar con la sal de hierro forma sulfuro
ferroso metálico, que es un compuesto insoluble (precipitado negro visible).
Sin embargo, la capacidad de formación de H2S con este medio no es muy confiable,
debido a que algunas bacterias lisina descarboxilasa negativas capaces de producir H2S
no formarán el precipitado negro, pues la acidez del medio interfiere. Por ello se
recomienda corroborar con otros medios que contengan hierro.
Interpretación de la prueba
Descarboxilación de la lisina
Los tubos deben leerse después de culminadas las 24 horas de incubación, de lo
contrario se corre el riesgo de malinterpretar la reacción, reportando falsos negativos.
Hay que recordar que la primera reacción que ocurrirá será la fermentación de la
glucosa, por tanto todos los tubos al cabo de 10 a 12 horas virarán a color amarillo.
Si al finalizar el tiempo de incubación (24 horas) se observa un fondo amarillo con una
superficie morada o púrpura, la reacción es negativa. El color púrpura de la superficie
corresponde a la alcalinización del medio por el uso de las peptonas.
Una reacción positiva es aquella en donde el fondo y la superficie del tubo son
completamente púrpuras, es decir, vuelve al color original.
Por tanto, quien determina la positividad de la prueba es la base o fondo del medio. Si se
tiene duda sobre el color se puede comparar con un tubo de LIA no inoculado.
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Desaminación de la lisina
Ok
Un tubo que evidencia la desaminación de la lisina tendrá una superficie color rojiza
granate y un fondo amarillo (ácido), o todo el tubo color rojizo granate.
Esta reacción se interpreta como negativa para la descarboxilación de la lisina, pero

positiva para desaminación de la lisina.
Esta reacción se define e interpreta en el bisel.
Producción de sulfuro de hidrógeno (H2S)

Una reacción positiva se observa por la aparición de un precipitado negro en todo el
medio o parte de él. Generalmente entre el límite del bisel y la base.
Si el precipitado se da en todo el tubo no dejará ver las otras reacciones que ocurren en
el medio.
Registro de los resultados

Al interpretar la prueba los resultados se registran de la siguiente manera:
Primero se lee el bisel, luego el fondo o taco, después la producción de H2S, y finalmente
la producción de gas.
Ejemplo: K/A + (-). Esto significa:
K: Bisel alcalino (color morado)

A: Fondo ácido (amarillo), es decir, reacción de descarboxilación negativa y
desaminación negativa.
+: Producción de sulfuro de hidrógeno
(-): Sin gas.
Preparación
Pese 35 gr del medio lisina agar hierro deshidratado y disuelva en un litro de agua
destilada.
Caliente hasta disolver completamente el agar, para ello deje hervir por un minuto
agitando frecuentemente. Distribuir 4 ml del medio en tubos de ensayo 13/100 con tapa
de algodón.
Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos. Sacar del autoclave y dejar reposar de
forma inclinada, de tal manera que quedey una
uso. Información base
cambio profunda y un bisel corto.
de configuración
Ok
Almacenar en nevera 2-8°C. Dejar atemperar antes de sembrar la cepa bacteriana.
El color del medio deshidratado es beige y del medio preparado color púrpura rojizo.
El pH final del medio preparado es 6,7 ± 0.2
El medio se torna amarillo con pH igual o menor a 5,2, y es morado a pH 6,5 para
arriba.
Usos
Esta prueba, junto a otras pruebas bioquímicas, se utiliza para la identificación de bacilos
de la familia Enterobacteriaceae.
El medio se siembra con un ansa recta o aguja, se realizan una o dos punciones hasta el
fondo del tubo, y luego se estría la superficie del medio en zigzag.
Se incuba por 24 horas a 35-37°C en aerobiosis. Si es necesario se deja incubando por

24 horas más.
Es principalmente útil para diferenciar especies de Citrobacter lactosa negativos de

Salmonellas sp.
Ok
Fuente: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico

Microbiológico. 5ta ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
Referencias
1. Mac Faddin J. (2003). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de
importancia clínica. 3era ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico Microbiológico de Bailey & Scott.
12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico
Microbiológico. 5ta ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
4. Laboratorios Britania. Lisina hierro agar. 2015. Disponible en: britanialab.com
5. Laboratorios BD. BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Disponible en: bd.com
6. Laboratorios Valtek. Medio L.I.A. 2009. Disponible en: andinamedica.com
Marielsa
uso. Información Gil
y cambio de configuración
Ok
Bioanalista/Microbióloga, Especialista en Docencia para la Educación Superior y Magíster en Tecnología

Educativa. Docente en la Escuela de Medicina de la Universidad de Carabobo, Venezuela. Miembro de la
Sociedad Venezolana de Microbiología.
 
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Agar LIA (Lisina Hierro): fundamento,

Prueba positiva y negativa de la descarboxilación de la lisina. Fuente: Foto y esquema propiedad de la

La prueba consiste básicamente en demostrar la presencia de la enzima lisina

Adicionalmente, la composición del medio permite evidenciar la capacidad de algunos

Peptonas y extracto de levadura

Este paso es crucial, porque se encargará de acidificar el medio, condición indispensable

En algunos géneros bacterianos se puede observar la producción de gas debido a la

El gas se evidencia cuando ocurre un desplazamiento del agar en el tubo, quedando un

La descarboxilación se da en presencia de la coenzima fosfato de piridoxal. Esta reacción

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Cuando ocurre desaminación de la lisina por la presencia de la enzima lisina desaminasa,

Esto se debe a que durante el proceso de desaminación se forma el ácido alfa-ceto-

Citrato férrico de amonio y tiosulfato sódico

Esta reacción se interpreta como negativa para la descarboxilación de la lisina, pero

Esta reacción se define e interpreta en el bisel.

Producción de sulfuro de hidrógeno (H2S)

Registro de los resultados

Ejemplo: K/A + (-). Esto significa:

K: Bisel alcalino (color morado)

Almacenar en nevera 2-8°C. Dejar atemperar antes de sembrar la cepa bacteriana.

El pH final del medio preparado es 6,7 ± 0.2

Se incuba por 24 horas a 35-37°C en aerobiosis. Si es necesario se deja incubando por

Es principalmente útil para diferenciar especies de Citrobacter lactosa negativos de

Fuente: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico

Bioanalista/Microbióloga, Especialista en Docencia para la Educación Superior y Magíster en Tecnología

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