Tujuan utama pemberian melalui rute non invasive untuk kebutuhan injeksi harian tunggal /

ganda, yang memberikan tekanan besar pada kepatuhan pasien dan hasil terapi yang diinginkan .
selain jumlah mukosa yang dihasilkan lebih sedikit efektif daripada pengiriman parenteral karena
berbagai alasan termasuk permeasi mukosa terbatas, serta penyerapan metabolisme situs .
Namun, vaskularisasi tinggi dan adanya enzim proteolitik lebih sedikit di mukosa bukal
dibandingkan dengan mukosa saluran pencernaan (GIT) mempromosikan pengiriman bukal
sebagai situs potensial untuk protein danpengiriman peptida. Keterbatasan pengiriman protein
bukal meliputi: berat molekul besar dan hidrofilisitas menyebabkan difusivitas rendah;
ketidakstabilan, metabolisme yang cepat, adsorpsi, agregasi dan kemungkinan imunogenisitas .
Dengan demikian faktor-faktor yang mempengaruhi penyerapan obat peptida termasuk struktur
(berat / ukuran molekul, konformasi, stereo-spesifisitas, imunogenisitas, dan muatan
elektrostatik); sifat fisikokimia (kelarutan, hidrofilik, koefisien partisi , agregasi, agregasi diri
dan ikatan hidrogen); sifat mukosa bukal (struc- masa depan dan biokimia); lingkungan biologis
(sensitivitas enzim dan metabolisme intraseluler) dan tersedia mekanisme transportasi harus
dipertimbangkan selama pengembangan formulasi bukal

Strategi seperti modifikasi kimia oleh derivatisasi, atau pendekatan prodrug dapat meningkatkan
peptida stabilitas dan lipofilisitas, dan dapat mencegah degradasi oleh enzim proteolitik pada
permukaan mukosa . Lain strategi yang menghasilkan pembentukan kompleks non-kovalen
antara protein dan gugus hidrofilik telah dilaporkan memberikan sedikit pembalikan yang
terbentang ke molekul peptida, yang mengarah ke peningkatan protein fleksibilitas dan
lipofilisitas . Ini meningkatkan difusi transelular pasif dan meningkatkan permeabilitas protein,
dan merupakan prinsip di balik penggunaan pasangan ion untuk meningkatkan permeasi obat.
Sepasang ion terbentuk ketika sepasang ion yang bermuatan berlawanan (counter) disatukan
tanpa pembentukan ikatan kovalen; membentuk netral molekul dengan lipofilisitas yang lebih
tinggi, yang dapat mempartisi ke dalam membran sel lebih mudah daripada senyawa induknya .
Sebagian besar agen pasangan ion seperti surfaktan anorganik dan pelarut bersama
membutuhkan volume tinggi, menghasilkan tinggi toksisitas / alergi dan memiliki aplikasi
terbatas dalam sediaan farmasi 4-6. Baru-baru ini, penggunaan amino asam sebagai pasangan ion
untuk meningkatkan kelarutan / permeabilitas molekul kecil telah diselidiki sebagai
biodegradable, toksisitas rendah / mengiritasi dan alternatif stabilitas tinggi . Selain itu,
ketersediaan transportasi asam amino melintasi sel dapat meningkatkan kemudahan transportasi
kompleks asam obat-amino (setelah pembentukan pasangan ion), yang mengarah ke peningkatan
permeasi . Berbagai penelitian telah menyelidiki penggunaan asam amino sebagai pasangan ion
untuk meningkatkan kelarutan / perme kemampuan molekul kecil . Namun penggunaan asam
amino sebagai pasangan ion untuk meningkatkan kelarutan / permeabilitas belum banyak
dilaporkan untuk protein dan makromolekul. Biasanya, dengan molekul kecil, rasio molar ion
counter digunakan lebih dari 5, tetapi rasio molar tidak dapat digunakan untuk makromolekul
karena ini akan membutuhkan sejumlah kecil asam amino yang pada gilirannya akan
menghasilkan perbaikan yang dapat diabaikan. Juga ukuran besar, sifat amfifilik, dan adanya
beberapa situs terionisasi pada protein semakin memperumit harapan menghasilkan in vitro.

Untuk menetapkan peran pasangan ion dalam formulasi biologis, pekerjaan yang diusulkan
dibangun di atas insulin sebagai senyawa model. Insulin memiliki kelarutan tinggi (tergantung
pada pH larutan) dan permeabilitas rendah, sebagian besar karena berat molekulnya yang besar,
lipofilisitas rendah dan degradasi dengan adanya protease . Itu insulin monomer terdiri dari enam
kelompok dasar dan enam kelompok asam yang terionisasi tergantung pada larutan pH 13.
Pekerjaan saat ini didasarkan pada dua hipotesis. Pertama, molekul insulin terionisasi dapat
membentuk pasangan ion dengan muatan berlawanan yang disediakan oleh asam amino basa dan
asam untuk membentuk kompleks netral asam insulin-amino dengan lipofilisitas yang
ditingkatkan, yang kemudian dapat menembus membran bukal melalui difusi pasif transelular.
Kedua, kompleksasi insulin dengan asam amino mungkin dapat memicu transportasi alternatif
yang difasilitasi mekanisme kompleks asam insulin-amino melintasi membran bukal. Jadi tujuan
dari pekerjaan ini adalah untuk menyelidiki efek pasangan ion asam amino basa dan asam
terhadap kelarutan, permeabilitas, mekanisme dan transportasi rute insulin melintasi lapisan sel
bukal TR146.

Kelarutan insulin dalam air., kelarutan insulin ditentukan oleh pH larutan, dan kedekatannya
dengan titik isoelektrik insulin . Menggambarkan kelarutan protein sebagai parameter
termodinamika kelarutan ini terutama tergantung pada faktor intrinsik seperti karakteristik asam
amino penyusunnya, juga sebagai faktor ekstrinsik seperti suhu, pH, kekuatan ionik dan aditif
pelarut . Hasil kami menunjukkan insulin itu tetap hanya sedikit larut dalam air deionisasi (<3 μg
/ mL) (pH 6.64). Monomer insulin terdiri dari enam kelompok dasar (dua kelompok amino N-
terminal, dua histidin, satu lisin, dan satu arginin) dan enam kelompok asam (dua C-terminal
karboksilat dan empat glutamat) . Oleh karena itu pada nilai pH di sekitar nya titik isoelektrik
5,35, muatan pada monomer menyeimbangkan menyediakan molekul netral, menghasilkan
insulin praktis tidak larut dalam air . Pada pH asam, gugus asam pada insulin menjadi
terprotonasi, dan hasilnya muatan pada (NH3 +), sehingga insulin memiliki muatan positif dalam
media asam.

Kelarutan insulin dalam HBSS. Kelarutan insulin dalam HBSS ditentukan karena diharapkan
pada pH 7,4 protein akan larut. HBSS juga memungkinkan penghindaran potensi toksisitas
terkait dengan pelarutan insulin pada 0,01N HCl. Asam amino basa, arginin dan lisin mampu
meningkatkan pH larutan dari 7,4 menjadi 9,2 pada konsentrasi di atas 100 μ g / mL, sedangkan
histidin tidak menyebabkan perubahan dalam larutan pH (pKa dari rantai samping histidin (6,04)
menyebabkan bertindak netral atau sedikit basa pada pH netral dan dengan demikian tidak dapat
mempengaruhi pH larutan). Namun, hanya lisin yang bisa untuk secara signifikan meningkatkan
kelarutan insulin dalam HBSS dari konsentrasi 200 μ g / mL ke atas. Perbedaan ini dalam
peningkatan kelarutan untuk asam amino basa berhubungan dengan titik isoelektrik dari asam
amino ini dan kebasaan dari rantai samping mereka yang terionisasi.. Di hadapan asam amino
asam, penurunan pH larutan diamati pada konsentrasi asam amino trasi di atas 200 μ g / mL
(karena kapasitas buffering HBSS); dan pengurangan kelarutan berikutnya adalah diamati pada
konsentrasi ini (pembentukan larutan keruh pada pemeriksaan visual) yang dekat dengan titik
isoelektrik dari insulin .
Efek asam amino pada kelarutan insulin dibandingkan dengan sodium deoxycholate (Na deoxy-
cholate), garam empedu hidrofobik yang telah banyak dipelajari sebagai penambah permeasi. Ini
adalah surfaktan yang meningkatkan permeabilitas membran biologis dengan melarutkan lipid
membran sehingga mengganggu fluiditas dan integritas membran . Sebagai deterjen, Na
deoxycholate bertindak sebagai amfifilik dan memiliki keduanya sifat polar dan non-polar dan
mampu meningkatkan emulsifikasi zat yang tidak larut dengan mengurangi tegangan permukaan
antarmuka . Na deoxycholate (pKa 6.58) tidak berpengaruh pada pH larutan bahkan pada
konsentrasi tertinggi. Namun, pengurangan yang signifikan dalam kelarutan insulin diamati pada
100 μg / mL Na deoxycholate. Ini karena garam empedu telah terbukti memberikan
hidrofobisitas yang bergantung pada konsentrasi pada protein seperti insulin, dengan demikian
meningkatkan lipofilisitasnya, yang akan mengurangi kelarutan dalam air. Oleh karena itu, dapat
disimpulkan bahwa gugus amino dari asam amino basa dan gugus karboksil dari asam amino
asam memiliki kapasitas untuk ionisasi, dan mempengaruhi kelarutan insulin karena kemudahan
pembentukan pasangan ion dan kompleks terlarut dengan adanya ion counter yang disediakan
oleh situs yang dapat diionisasi pada bagian insulin. Efek ini tergantung pada pH sistem yang
dihasilkan, pKa dari asam amino dan perbedaan di antaranya nilai dan titik isoelektrik dari
insulin dan asam amino .

Kesimpulan
Hasil studi ini menunjukkan “berbentuk lonceng” berdampak pada permeabilitas insulin pada
peningkatan konsentrasi ion kontra asam amino, dan menyarankan bahwa konsentrasi ion kontra
membutuhkan optimasi untuk memberikan keseimbangan antara disosiasi insulin dan
perembesan. Menariknya, menyelidiki anism mech- dan rute dari perembesan insulin
menggunakan peningkatan konsentrasi insulin pada suhu optimal, berbalik arah transportasi dan
confocal microscopy mengungkapkan bahwa insulin diangkut oleh proses transelular pasif dan
aktif yang disediakan oleh kehadiran reseptor insulin dan pengangkut nutrisi asam amino pada
membran sel. Oleh karena itu, asam amino didirikan sebagai aman, efektif dan novel peningkat
penetrasi, daripada surfaktan Na deoksikolat umum digunakan, untuk insulin menggunakan
mekanisme pasangan-ion.