BAB I

PENDAHULUAN

Spektroskopi adalah ilmu yang mempelajari materi dan atributnya berdasarkan cahaya,
suara atau partikel yang dipancarkan, diserap atau dipantulkan oleh materi tersebut.
Spektroskopi juga dapat didefinisikan sebagai ilmu yang mempelajari interaksi antara cahaya
dan materi . Dalam masa modern, definisi spektroskopi berkembang seiring teknik-teknik baru
yang dikembangkan untuk memanfaatkan tidak hanya cahaya tampak, tetapi juga bentuk lain
dari radiasi elektromagnetik dan non-elektromagnetik seperti gelombang mikro, gelombang
radio, elektron, fonon,gelombang suara, sinar x dan lain sebagainya.
Spektroskopi umumnya digunakan dalam kimia fisik dan kimia analisis untuk
mengidentifikasi suatu substansi melalui spektrum yang dipancarkan atau yang diserap. Alat
untuk merekam spektrum disebut spektrometer. Spektroskopi juga digunakan secara intensif
dalam astronomi dan penginderaan jarak jauh. Kebanyakan teleskop-teleskop besar
mempunyai spektrograf yang digunakan untuk mengukur komposisi kimia dan atribut fisik
lainnya dari suatu objek astronomi atau untuk mengukur kecepatan objek astronomi
berdasarkanpergeseran Doppler garis-garis spektral.
Analisis Spektroskopi didasarkan pada interaksi radiasi dengan spesies kimia.
Berprinsip pada penggunaan cahaya/tenaga magnet atau listrik untuk mempengaruhi senyawa
kimia sehingga menimbulkan tanggapan. Tanggapan tersebut dapat diukur untuk menetukan
jumlah atau jenis senyawa. Cara interaksi dengan suatu sampel dapat dengan absorpsi,
pemendaran (luminenscence) emisi, dan penghamburan (scattering) tergantung pada sifat
materi. Teknik spektroskopi meliputi spektroskopi Uv-Vis, spektroskopi serapan atom,
spektroskopi infra merah, spektroskopi fluorensi, spektroskopi NMR, spektroskopi massa.
Spektrometri merupakan suatu metode analisis kuantitatif yang pengukurannya
berdasarkan banyaknya radiasi yang dihasilkan atau yang diserap oleh spesi atom atau molekul
analit. Suatu metode analisis yang berdasarkan pada pengukuran serapan sinar monokromatis
oleh suatu lajur larutan berwarna pada panjang gelombang yang spesifik dengan menggunakan
monokromator prisma atau kisi difraksi dan detector vacum phototube atau tabung foton
hampa. Dengan menggantikan mata manusia dengan detektor-detektor radiasi lain,
dimungkinkan studi absorbsi (serapan) diluar daerah spektrum tampak, dan seringkali
eksperimen spektrofotometri dilakukan secara automatik.
Dalam penggunaan dewasa ini, istilah spektrometri menyiratkan pengukuran jauhnya
penyerapan energi cahaya oleh suatu sistem kimia itu sebagai fungsi dari panjang gelombang
radiasi, demikian pula pengukuran penyerapan yang menyendiri pada suatu panjang
gelombang tertentu. Alat yang digunakan adalah spektrofotometer, yaitu suatu alat yang
digunakan untuk menentukan suatu senyawa baik secara kuantitatif maupun kualitatif dengan
mengukur transmitan ataupun absorban dari suatu cuplikan sebagai fungsi dari konsentrasi.
Salah satu bagian dari spektrometri ialah Spektrometri Serapan Atom (SSA), merupakan
metode analisis unsur secara kuantitatif yang pengukurannya berdasarkan penyerapan cahaya
dengan panjang gelombang tertentu oleh atom logam dalam keadaan bebas.
 BAB II
PEMBAHASAN

2.1 Definisi
Spektroskopi Nuclear Magnetic Resonance (NMR) adalah teknik kimia analitik
yang digunakan dalam quality control, penentuan konten penelitan dan kemurnian
sampel serta struktur molekulnya. Definisi lain dari Spektroskopi NMR berupa metode
eksperimental utama untuk analisis simultan dari kedua struktur dan dinamika
biomolekul pada resolusi atom. Instrumen NMR memungkinkan struktur molekul suatu
bahan dianalisis dengan mengamati dan mengukur interaksi putaran nuklir ketika
ditempatkan dalam medan magnet yang kuat. Batas ukuran tradisional dari larutan dasar
NMR spektroskopi, biasanya ditempatkan di bawah 30 kDa, diatasi oleh Transverse
Relaxation-Optimized SpectroscopY (TROSY). Untuk analisis struktur molekul pada
tingkat atom, mikroskop elektron dan instrumen difraksi sinar-X juga dapat digunakan,
tetapi keuntungan dari NMR adalah bahwa pengukuran sampel tidak merusak dan
persiapan sampel diperlukan lebih sedikit. Sebagai contoh pemanfaatan spektroskopo
NMR yaitu secara kuantitatif menganalisis campuran yang mengandung senyawa yang
diketahui. Untuk senyawa yang tidak diketahui, NMR dapat digunakan untuk
mencocokkan dengan sumber pustaka atau untuk menyimpulkan struktur dasar secara
langsung. Setelah struktur dasar diketahui, NMR dapat digunakan untuk menentukan
konformasi (penentuan bentuk) molekul dalam larutan serta mempelajari sifat-sifat
fisik pada tingkat molekuler seperti pertukaran konformasi, perubahan fase, kelarutan,
dan difusi.
2.2 Sejarah NMR
Pada tahun 1938, I. I. Rabi dari Universitas Columbia berhasil membuat
pengukuran akurat momen magnetik nuklir menggunakan penyerapan resonansi
magnetik dari berkas molekul (dan dianugerahi Hadiah Nobel Fisika pada tahun 1944
untuk karyanya). Pada tahun 1946, F. Block dan E. M. Purcell berhasil menunjukkan
resonansi magnetik nuklir (NMR) untuk materi terkondensasi (dan berbagi Hadiah
Nobel dalam Fisika pada tahun 1952), menandai dimulainya NMR.
Pada tahun 1950, ditemukan bahwa ada sedikit perubahan dalam frekuensi inti
atom Larmor karena ikatan kimia atom (pergeseran kimia dan kopling spin). Ini
mengarah pada gagasan untuk menggunakan resonansi magnetik nuklir sebagai alat
untuk menganalisis dan mengidentifikasi bahan, menandai awal spektroskopi NMR.
 Pada tahun 1956, instrumen JNM-1 NMR pertama kali dirilis oleh JEOL (pada
waktu itu, Japan Electron Optics Laboratory Co. Ltd.). Frekuensi resonansi 1H dari
sistem NMR CW tidak dapat dipilih di antara 4, 12 dan 32 MHz. Spektrum ditampilkan
pada osiloskop, dan perekam strip chart (merekam pada pita kertas) digunakan untuk
mencetak hasilnya. Tiga sinyal 1H terpisah dari etil alkohol diamati pada 32 MHz
(7.680 gauss).
2.3 Instrumen NMR

2.4 Prinsip Kerja

Prinsip kerja pengoprasian NMR adalah bahwa banyak inti memiliki putaran
dan semua inti bermuatan listrik. Jika medan magnet eksternal dipergunakan , transfer
energi dimungkinkan antara energi dasar ke tingkat energi yang lebih tinggi (umumnya
celah energi tunggal). Transfer energi berlangsung pada panjang gelombang yang
sesuai dengan frekuensi gelombang radio dan ketika putaran kembali ke level dasarnya,
energi dipancarkan pada frekuensi yang sama. Sinyal yang cocok dengan transfer ini
diukur dalam banyak cara dan diproses untuk menghasilkan spektrum NMR untuk inti
yang bersangkutan. Bidang aplikasi termasuk biological , makanan, dan kimia, serta
bidang baru seperti battery films and organic EL, yang meningkat dan berkembang
dengan kecepatan luar biasa. NMR telah menjadi alat analisis yang sangat diperlukan
dalam bidang sains dan teknologi mutakhir.
 Gambar 1. Dasar dari NMR
Prinsipnya ketika sebuah nukleus yang memiliki momen magnet (seperti
nukleus hidrogen 1H, atau nukleus karbon 13C) ditempatkan dalam medan magnet
yang kuat, ia akan mulai memproses, seperti gasing yang berputar. Secara mudah di
dijelaskan pada gambar dibawah.

Jika sampel ditempatkan

dimedan magnet ini
diiradiasi dengan frekuensi
radio sebagai frekuensi
presesi, spektrrum NMR
dapat diperoleh

Gambar 2. Orinsip berfikir penggunaan NMR

2.5 Apa saja yang kita dapat pelajari dari NMR
 Pergeseran kimia: Informasi tentang komposisi kelompok atom dalam
molekul.
 Konstanta kopling spin-spin: Informasi tentang atom yang berdekatan.
 Waktu relaksasi: Informasi tentang dinamika molekul.
 Intensitas sinyal: Informasi kuantitatif, mis. rasio atom dalam molekul yang
dapat membantu dalam menentukan struktur molekul, dan proporsi senyawa
yang berbeda dalam suatu campuran

2.6 Bidang amplikasi

 Analisis Struktur Molekul dan Identifikasi Zat Kimia Tidak Diketahui
Beragam aplikasi termasuk Kimia Organik, Kimia Anorganik, Biokimia,
Analisis Farmasi, Bahan Baru, Petrokimia, dll.
 Analysis of Mixtures
Food Chemistry, Biochemistry, Physiology
 Waktu Relaksasi (mobilitas molekul, jarak interatomik)
Kimia Organik, Kimia Polimer
 Analisis kuantitatif
Kimia Polimer, Kontrol Kualitas Bahan Kimia Sintetis, Kimia Makanan
 Dinamika (kecepatan reaksi kimia, identifikasi situs pengikatan,
interaksi)
Kimia Organik, Kimia Anorganik, Biokimia
 Koefisien difusi (berat molekul, konformasi polimer)
Kimia Organik, Kimia Polimer

2.7 Pembahasan
Sejauh ini penggunaan spektroskopi NMR yang paling umum digunakan pada
studi cairan, termasuk sampel yang dilarutkan dalam pelarut, dapat mencapai data
resolusi tinggi yang terdefinisi dengan baik. Pada Padatan NMR, sebaliknya harus
memperhitungkan variasi sinyal karena orientasi molekul sehubungan dengan baseline
medan magnet NMR. Dalam cairan, penurunan cepat molekul rata-rata dari komponen
anisotropik (tergantung arah) ini menjadi nol. Sebagai hasilnya, solusi dasar
Spektroskopi NMR menyediakan garis spektral sempit dengan multiplet yang jelas,
 mengungkapkan detail interaksi yang baik antara inti dan elektron. (Efek ini kadang-
kadang ditiru solid-state NMR dengan memutar sampel dengan cepat pada sudut
tertentu, yang disebut magic angle)
Rangakaian denyut
Lihat NMR 101 untuk garis besar umum percobaan NMR cair satu dimensi.
Waktu, frekuensi, dan intensitas pulsa RF dalam percobaan NMR menentukan inti
mana yang terpengaruh, dan aspek lingkungan apa yang dapat diamati. Komponen
penting yang terungkap dalam eksperimen NMR cair meliputi:
A. Interaksi Elektron:
Sebagai partikel bermuatan yang bergerak, elektron yang di dekatnya memengaruhi
medan magnet lokal yang dialami oleh atom nuelci. Ini muncul dalam spectrum
NMR sebagai pergeseran dalam frekuensi resonansi, relatif terhadap standar untuk
inti itu. Kita sebut Pergeseran kimia ini adalah efek kecil, dinyatakan dalam bagian
per juta. Molekul yang lebih kecil, termasuk banyak organik, dapat diidentifikasi
dengan pola pergeseran kimianya dalam spektrum 1H NMR.
B. Interaksi Nuklir
Inti magnetik saling mempengaruhi satu sama lain dalam sebuah fenomena
yang disebut dipole coupling atau spin-spin coupling. Pada spektrum NMR, coupling
spin membagi puncak tunggal menjadi dua atau lebih sub-puncak. Kopling langsung,
melalui interaksi medan magnet yang dihasilkan nuklei ini, memberikan informasi
tentang jarak antara nuclei dan geometri molekuler. Kopling tidak langsung, yang
disebut kopling-J, terjadi melalui efek dari masing-masing inti magnetik pada elektron
dalam molekul, yang pada gilirannya mempengaruhi lingkungan magnetik dari inti
lainnya. Kopling-J terjadi secara ketat antara inti yang dihubungkan melalui sejumlah
kecil ikatan, termasuk ikatan hidrogen. J-coupling antara kelompok proton dalam 1H
NMR menghasilkan set beberapa, puncak jarak dekat yang disebut multiplets, yang
dapat diamati hanya dalam NMR cair berkat resolusi tinggi.

Setiap jenis percobaan NMR menggunakan satu atau lebih rangkaian denyut untuk
menyelidiki informasi spesifik tentang inti targetnya.
Hydrogen NMR
Memberikan sensitivitas tinggi dan sinyal yang tajam, Proton (1H) NMR adalah jenis
percobaan NMR yang paling umum. Sampel untuk 1H NMR biasanya harus dilarutkan
dalam pelarut yang dideuterasi untuk mengurangi background signal.
Spektrum 1H NMR untuk etanol, menunjukkan spin coupling (sinyal H hijau dibagi
menjadi sub-puncak). (Gambar oleh T.vanschaik (Pekerjaan sendiri) [GFDL atau CC
BY-SA 3.0], melalui Wikimedia Commons.)

Karbon 13 dan Unsur Lainnya

13C NMR jauh lebih tidak sensitif daripada 1H NMR, tetapi memiliki
pergeseran kimia yang lebih besar, membuatnya lebih fleksibel untuk molekul yang
lebih besar di mana puncak 1H mungkin tumpang tindih. Eksperimen 13C khas
membandingkan pergeseran kimia dengan yang dari bagian yang diharapkan.
Pada prinsipnya, NMR dapat menangkap sinyal dari setiap inti magnetik, termasuk
isotop dari hampir setiap elemen atom. Respons dari elemen yang lebih berat
membutuhkan waktu lebih lama - sekitar delapan detik untuk peluruhan induksi-bebas
13C - sehingga akuisisi data dengan pengulangan yang cukup untuk sinyal-ke-noise
yang baik dapat berlangsung beberapa menit hingga berjam-jam.
 Spektrum 13C NMR untuk etanol, menunjukkan pergeseran kimia (PPM) dari inti karbon.
(Gambar oleh Chris Evans [CC0], via Wikimedia Commons.)
Multi-dimensional NMR
Untuk molekul besar seperti protein dan asam nukleat, spektrum akuisisi tunggal menjadi
penuh dengan sinyal yang tumpang tindih dari banyak inti. Eksperimen NMR multidimensi
menangani masalah ini dengan memeriksa korelasi dalam hasil dari dua atau lebih sekuens
nadi, masing-masing menargetkan tipe nukleus yang sama (homonuklear) - sering 1H - atau
yang berbeda (heteronuklear) - misalnya, 1H dan 13C.
Ada banyak variasi pada multi-dimensi NMR,yang mengambil keuntungan dari interaksi
yang berbeda antara inti magnetik dan lingkungan elektronik mereka. Eksperimen NMR 2D
khas akan menjalankan dua, urutan pulsa 1D secara seri dengan periode penundaan yang sesuai
di antara mereka, kemudian menganalisis korelasi antara keduanya. Eksperimen dengan tiga
dimensi dan lebih dapat menguji hubungan antara beberapa spesies untuk menempatkan inti
spesifik dalam struktur molekul.
 Structural Studies
Eksperimen NMR multi-dimensi memungkinkan untuk menentukan struktur 3D untuk
biomolekul besar, dan untuk mempelajari hubungan struktur-aktivitas. Sebagai contoh, triple-
resonance NMR dapat digunakan untuk membandingkan konformasi protein sebelum dan
setelah paparan terhadap kandidat obat. Dalam skenario ini, urutan pulsa menargetkan 1H,
13C, dan 15N mengidentifikasi dan membangun hubungan antara atom-atom spesifik dalam
protein untuk mengungkapkan struktur dan konformasi. Demikian pula, serangkaian percobaan
1D, 2D dan 3D NMR dapat dijalankan untuk menentukan struktur karbohidrat atau asam
nukleat.
Secara umum biomolekul diberi label dengan 13C dan 15N untuk studi NMR. Meskipun
secara alami lebih berlimpah, 12C bukanlah NMR-aktif, sedangkan inti 14N menghadirkan
respons NMR yang kompleks karena momen magnetik quadrupole-nya.
Dynamic NMR
Teknik NMR untuk mempelajari reaksi kimia dari waktu ke waktu bervariasi dengan skala
waktu. Untuk reaksi lambat, dalam urutan detik hingga menit, NMR dapat digunakan untuk
memantau perubahan konsentrasi produk reaksi dari waktu ke waktu. Submillisecond
memproses rata-rata selama waktu akuisisi NMR yang lama, dan peristiwa kimia yang terjadi
dalam milidetik hingga detik akan menyebabkan perluasan garis NMR. Dalam kasus-kasus ini,
kesetimbangan reaksi dan konstanta laju seringkali dapat dihilangkan dengan membandingkan
spektra NMR sebagai fungsi temperatur.
 BAB III
PENUTUP

Dari penjelasan diatas maka dapat ditarik kesimpulan bahwa tehnik Spektroskopi
Nuclear Magnetic Resonance (NMR) merupakan alat penelitian yang memungkinkan
struktur molekul suatu bahan dianalisis dengan mengamati dan mengukur interaksi
putaran nuklir ketika ditempatkan dalam medan magnet yang kuat. Keuntungan dari
pemanfaatan NMR adalah bahwa pengukuran sampel tidak merusak dan persiapan
sampel diperlukan lebih sedikit. NMR dapat digunakan untuk menentukan struktur
dasar, konformasi (penentuan bentuk) molekul dalam larutan serta mempelajari sifat-
sifat fisik pada tingkat molekuler seperti pertukaran konformasi, perubahan fase,
kelarutan, dan difusi.
 DAFTAR PUSTAKA

Boswell, Z. K. & Latham, M. P. Methyl-based NMR spectroscopy methods for uncovering structural
dynamics in large proteins and protein complexes. Biochemistry 58, 144–155 (2019).

Clark, L. et al. Methyl labeling and TROSY NMR spectroscopy of proteins expressed in the eukaryote
Pichia pastoris. J. Biomol. NMR 62, 239–245 (2015).

Gorman, S. D., Sahu, D., O’Rourke, K. F. & Boehr, D. D. Assigning methyl resonances for protein
solution-state NMR studies. Methods 148, 88–99 (2018).

J. Chem, et all, 2003. NMR Shift DBs Constructing a Free Chemical Information System
Vol. 43, No. 6 Planck-Institute of Chemical Ecology, Jena, Germany.

Pervushin, K., Riek, R., Wider, G. & Wüthrich, K. Attenuated T 2 relaxation by mutual cancellation of
dipole-dipole coupling and chemical shift anisotropy indicates an avenue to NMR structures
of very large biological macromolecules in solution. Proc. Natl Acad. Sci. USA 94, 12366–
12371 (1997)

Pritisanac, I. et al. Automatic assignment of methyl-NMR spectra of supramolecular machines using

graph theory. J. Am. Chem. Soc. 139, 9523–9533 (2017).

Skoog. D. A., Donald M. West, F. James Holler, Stanley R. Crouch, 2000. Fundamentals of
Analytical Chemistry .Hardcover: 992 pages, Publisher: Brooks Cole

Xu, Y. Q. & Matthews, S. MAP-XSII: an improved program for the automatic assignment of methyl
resonances in large proteins. J. Biomol. NMR 55, 179–187 (2013).

Wiesner, S. & Sprangers, R. Methyl groups as NMR probes for biomolecular interactions. Curr. Opin.
Struct. Biol. 35, 60–67 (2015).

Zhang, H. Y. & van Ingen, H. Isotope-labeling strategies for solution NMR studies of macromolecular
assemblies. Curr. Opin. Struct. Biol. 38, 75–82 (2016).
 MAKALAH
SPEKTROFOTOMETER
Nuclear Magnetic Resonance (NMR)
Diajukan sebagaia Tugas untuk Memenuhi Kegiatan Pembelajaran dan
Melengkapi Salah Satu Syarat Menempuh Program Pasca Sarjana UNISSULA

Disusun oleh:
A`an Haries Pranowo
MBK. 19. 14. 01.0148

PROGRAM MAGISTER BIOMEDIK

FAKULTAS KEDOKTERANUNIVERSITAS ISLAM SULTAN AGUNG
SEMARANG
2019