Plant Cell, Tissue dan Budaya Organ 33: 221-226, 1993.

© 1993 Kluwer Publishers Akademik. Dicetak di Belanda.

bagian khusus pada penembakan partikel

The Biolistic®PDS - 1000 / H edevice

Julie Russell Kikkert

Cornell University, Stasiun Percobaan New York State Agricultural, Departemen Ilmu Hortikultura,
Geneva, NY 14456, USA

Kata kunci: gun gen, transformasi genetik, pemboman mikroproyektil, review

Abstrak

Makalah ini menjelaskan desain, operasi, dan kinerja Biolistic® PDS-1000 / Dia perangkat, yang digunakan untuk
mengubah organisme hidup dengan DNA asing. DNA dikirim ke sel-sel dalam hubungan dengan partikel logam
mikroskopis, yang disebut microcarriers, yang mendorong pada kecepatan tinggi menuju jaringan target. The
microcarriers dipercepat pada silinder plastik, yang disebut macrocarrier sebuah, yang didorong oleh gelombang kejut
dari gas helium. Efektivitas PDS-1000 / Dia perangkat diuji dengan membombardir kultur suspensi sel tembakau
dengan microcarriers yang dilapisi dengan DNA plasmid yang mengandung B-glucuronidase (GUS) dan neomycin
phosphotransferase II (NPTII) gen. Dua hari setelah membombardir-ment, ada 6835 - 594 kelompok sel per piring
petri yang mengungkapkan gen GUS.

pengantar diperoleh. Model saat ini, PDS-1000 / Dia, yang

The Biolistic® perangkat PDS-1000 adalah satu-
satunya sistem pengiriman partikel com-mercially
tersedia untuk transfer gen. Pertama PDS-1000
perangkat dipasarkan oleh Perusahaan DuPont,
didasarkan pada desain Sanford et al. (1987).
Perangkat yang digunakan biaya mesiu untuk
menggerakkan partikel tungsten mikroskopis, yang
disebut microcarriers, di muka silinder plastik, yang
disebut macrocarrier a. Desain senjata-bubuk terbukti
berhasil untuk transformasi genetik spesies tanaman
yang beragam di laboratorium numer-ous (Sanford
1990), namun, kurangnya kontrol atas kekuatan
pemboman serta kerusakan besar ke sel target
membatasi jumlah transforman yang stabil yang bisa
jadi
sekarang dipasarkan oleh Bio-Rad Laboratories,
merupakan perbaikan teknis yang signifikan atas
perangkat mesiu. Desain dasar dikembangkan oleh
Sanford et al. (1991). PDS-1000 / Dia perangkat ini
didukung oleh ledakan gas helium yang mempercepat
suatu macrocarrier, di mana jutaan microcarriers DNA
dilapisi telah dikeringkan. Dibandingkan dengan
perangkat mesiu, PDS-1000 / Dia lebih bersih dan
lebih aman, memungkinkan kontrol yang lebih baik
atas kekuasaan pemboman, mendistribusikan
microcarriers lebih seragam lebih sel target, lebih
lembut untuk sel target, lebih konsisten dari
pemboman pemboman, dan hasil 4 -300 kali lipat lebih
transforman dalam spesies yang diuji (Sanford et al.
1991).

Biolistic adalah merek dagang terdaftar dari EI du Pont de Nemours and Company. Teknologi Biolistic secara eksklusif lisensi untuk Bio-Rad
Laboratories. Hal ini ditutupi oleh nomor paten 161.807, 670.771, 877.619, 074.652, IP-0844, 07/303/503, 07/529989, 437.848, 4.945.050,
5.036.006, 5.100.792, dan 621.561 bersama-sama dengan semua lanjutan, divisionals, dan keberlanjutan-in aplikasi bagian, setiap paten yang
mengeluarkan pada aplikasi tersebut, dan reissues daripadanya. The Biolistic PDS-1000 / Dia instrumen yang tersedia untuk dijual atau sewa
sesuai.
222

deskripsi teknis

The Biolistic® PDS-1000 / Dia perangkat ditunjukkan

pada Gambar. 1 dan 2. Sebuah ruang tekanan tinggi
kecil di dalam tabung percepatan gas diisi dengan gas
helium untuk tekanan yang dipilih antara 450 dan
2200psi (3103-15,169kPa). ruang ini telah disegel
sementara oleh disk pecah yang terbuat dari membran
Kapton (DuPont) yang dapat dilaminasi untuk
menciptakan tekanan ledakan yang diinginkan.
Pecahnya disk disegel terhadap dasar tabung
percepatan gas dengan topi mempertahankan sekrup-
on. gas helium disuplai oleh helium tangki tekanan
tinggi dengan tekanan tinggi reg-ulator dan tabung
logam koneksi. Helium lebih disukai daripada gas
kemasan konvensional lainnya karena mengembang
lebih cepat dan, dengan demikian, im-bagian
kecepatan yang lebih tinggi untuk microcarriers.
Ketika tekanan kritis untuk disk pecah tercapai,
semburan dan melepaskan gelombang kejut gas kuat.

Gambar. 2. Komponen
Biolistic®PDS-1000 Dia perangkat /;
(a) mekanisme percepatan dan ruang utama, dan (b) diperbesar dan
dipotong-jauh pandangan perakitan microcarrier peluncuran seperti
yang muncul sebelum perangkat dipecat.

peluncuran perakitan (Gbr. 2b), di mana energi

Gambar. I. The Biolistic® PDS-1000 / Dia perangkat. Photo courtesy
Bio-Rad Laboratories.
gelombang kejut ditransfer ke microcarriers (mikro-
scopic tungsten atau emas partikel), yang telah kering
di wajah seorang macrocarrier (2 mil atau 51 TXM
tebal membran Kapton). The macrocar-rier
diposisikan di bawah cincin baja (pemegang mac-
rocarrier) dan diadakan di tempat oleh bibir tipis di
sekeliling nya. Setelah penembakan, yang macrocar-
tier memisahkan dari dudukannya dan terbang dampak
UNIM-peded bawah hingga melawan layar berhenti
kaku. Setelah dampak, macrocarrier yang deformasi,
tetapi ditahan oleh layar berhenti. The microcarriers,
bagaimanapun, yang diluncurkan dan terus ke bawah
sampai mereka mempengaruhi dan pene-trate sel
target. Selama operasi perangkat, sebanyak udara di
dalam ruang utama dihapus dengan pompa vakum
seperti praktis seperti bahwa pengukur vakum standar
akan membaca 26-30 inci (660-760 mm) dari merkuri.
Kedua tarik gesekan pada microcarriers, dan suara
keras pro-teknya saat pecah semburan disk, dikurangi
dalam ruang hampa.

Microcarriervelocityandpenetrationinto