Judul TRANSFORMATION OF OIL PALM CALLI USING

CRISPR/CAS9 SYSTEM:
TOWARD GENOME EDITING OF OIL PALM
Jurnal International Biotechnology Conference On Estate Crops
Volume dan Halaman 10.1088/1755-1315/183/1/012003
Tahun 2018
Penulis Asmini Budiani1*, R A Putranto1, I
Riyadi1, Sumaryono1, H Minarsih1 and R
Faizah2
Reviewer Afifah Yasmin (20170210026)
Tanggal 9 Desember 2019

Tujuan Penelitian untuk memperoleh teknik untuk

memperkenalkan modul CRISPR / Cas9 yang mengandung
sgRNA ke dalam jaringan kelapa sawit
Metode Penelitian 1. Induksi kalus dari eksplan daun muda kelapa sawit
2. Konstruksi sistem CRISPR / Cas9 dengan gen model
yang ditargetkan pada kelapa sawitReal-time PCR
3. Pembuatan metode transformasi menggunakan
Agrobacterium tumefaciens yang membawa CRISPR
Hasil Penelitian A.Tumefaciens dan E. Coli menggambarkan elektroforesis
produk koloni PCR dari E. Coli dan A. Tumefaciens
ditransformasikan menggunakan konstruksi CRISPR-MT dan
CRISPR-IFR. Hasil ini menunjukkan bahwa kedua konstruksi
telah dimasukkan ke dalam A. tumefaciens dan dikloning ke E.
coli . A.tumefaciens yang mengandung konstruksi CRISPR
dengan sgRNA gen MT dan IFR kemudian digunakan dalam
transformasi kalus kelapa sawit untuk mengedit MT dan IFR
gen.
Pengembangan kalus kelapa sawit yang ditransformasikan
dengan konstruksi CRISPR / Cas9 menjadi embrio somatik
bahwa pada media yang mengandung hygromycin sebagai
penanda terpilih, kalus ditransformasikan dengan konstruksi
CRISPR berkembang menjadi embrio somatik Sebaliknya, kalus
yang tidak ditransformasi tidak berkembang dan cenderung
berwarna kecoklatan. Hasil ini, diikuti oleh analisis PCR
menggunakan gen spesifik (IFR dan MT) dan primer
hygromycin membuktikan bahwa kedua konstruk tersebut telah
dimasukkan ke dalam genom kelapa sawit.
Untuk mengidentifikasi terjadinya mutasi pada wilayah DNA
yang ditargetkan sgRNA, urutan DNA dari produk PCR ini
selaras dengan kontrol dari DNA yang tidak ditransformasi
bahwa pengenalan konstruksi CRISPR-IFR2 (A1-A6)
menginduksi mutasi InDels yang menyebabkan perubahan
sekuens asam amino yang dapat mengubah fungsi proteinnya.
Penjajaran DNA dari wilayah target sgRNA dari kalus kelapa
sawit yang ditransformasi
menggunakan konstruksi CRISPR-MT menunjukkan bahwa
pengenalan konstruksi CRISPR-MT menginduksi mutasi pada
wilayah sgRNA yang dapat menyebabkan protein MT tidak lagi
 berfungsi. Penjajaran DNA dilakukan antara kalus yang tidak
ditransformasi (NT-MT) dan kalus yang mengalami transformasi
(B1, 7, 9, dan 10) yang dapat dianggap sebagai strain baru.
Kekuatan Jurnal ini menjadi acuan pembelajaran untuk banyak orang
karena masih sangat minim jurnal yang membahas CRISPR.
Kelemahan Banyak pembaca yang masih sangat awam dengan penyampaian
bahasa yang disampaikan, sehingga masi banyak pembaca yang
kurang paham.